槐米中芸香苷的提取分离及鉴定
槐米中芸香苷提取分离及检识
芸香苷的水解
将上次实验所得溶液抽滤，在60～70℃烘干，得精制芸香 苷。 取精制芸香苷1g，置250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸80ml，
加几粒沸石，加热回流1h，瓶中浑浊液逐渐变为澄清的棕
黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀（为什么出现如此现 象？）。放冷，抽滤，丢弃滤液（应为澄清无色液体），
沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽
干水分，烘干，称重。得槲皮素。
OH OH
H+
HO
O OH OH O
芸香苷 芸香苷
槲皮素
CH2OH O OH OH OH OH
+
OH CH3
O
OH OH OH
葡萄糖
鼠李糖
O
H C l H O 2
C l + O
O O H
芸香苷的水解
槲皮素
将上次实验所得溶液抽滤，在60～70℃烘干，得精制 芸香苷。 取精制芸香苷1g，置250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸 80ml，加几粒沸石，加热回流1h，瓶中浑浊液逐渐变 为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷， 抽滤，丢弃滤液（应为澄清无色液体），沉淀物为芸 香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分， 烘干，称重。得槲皮素。
ohohoh冷热水中均不溶解不含有糖极性小于芸芸香苷的提取称取槐米粗粉20g压碎置于500ml烧杯中加04硼砂水溶液200ml在搅拌下加入石灰乳调至ph89加热微沸30min随时补充失去的水分和保持ph89趁热用棉花滤过残渣加150ml04硼砂水溶液同法操作再提取20min合并两次滤液用浓盐酸调ph34搅拌静置过夜沉淀下来的是什么
展开剂：乙醇 : 水 : 乙酸乙酯（3:1:0.5）约4ml，上行展开。 展距：6cm。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加止，放冷抽滤 沉淀
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
2、计算槲皮素的得率
3、记录芦丁的检测结果
注意事项
3 ．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香 苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉 法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的， 又可除去槐花 7 米中所含的大量粘液质，但应 严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH 值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～ 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
实验原理
27实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
1.理化鉴别
(1)莫氏(Molish)反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇溶解，再加10%α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。
(2)盐酸----镁粉反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。
教学重点与难点
重点：
1.酸水解操作技术
2.化学方法区别芸香苷与槲皮素的原理及操作技术
3.纸色谱的操作技术并用其鉴别葡萄糖与鼠李糖和芸香苷与槲皮素
教学内容
备注
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
三、实验内容
（二）芦丁的精制
2.减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重______g，计算提取率______
(3)喷1%三氯化铝试液后再观察。
（2）糖的纸色谱鉴定
支持剂：新华层析滤纸
点样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品
展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂（喷后105℃烘10min显色）
画出图谱，计算Rf值。
讨论、练浊现象?
（三）芦丁的水解
1.取精制芦丁2g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸250ml，于直火加热微沸回流1.5小时，放冷
2.减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重______g；滤液保留作糖部分的鉴定。
3.取水解母液约20ml，小心地用BaOH细粉中和至近中性，自然过滤，滤液蒸干，加2～3ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
(3)醋酸镁纸片反应
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
芸香苷的提取、分离和鉴定
2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶
四、鉴定 1.呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加1%三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
3.芸香苷的水解 芸香苷的水解 取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
槐米中芸香苷提讲义取分离及检识-课件PPT(精)
槐米中芸香苷
槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。
2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。
【实验原理】采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。
芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。
【实验材料】设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。
药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁【实验步骤】实验1、芸香苷的提取：称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。
滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。
滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。
实验2、芸香苷的精制：称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。
实验3、芸香苷的水解和鉴定：取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。
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盐酸－镁粉反应
溶液置于试管 中1-2ml，加入 金属镁粉少许 ，浓盐酸2-3滴 ，观察并记录 颜色变化。
三氯化铝反应
取一张滤纸片， 分别滴两滴芸 香苷的乙醇溶 液，然后各加 1%三氯化铝醇 溶液两滴，于 紫外光灯分别滴两滴芸 香苷的乙醇溶 液，然后将滴 有供试液的部 位分别倒扣在 盛有氨水的瓶 口，观察颜色 变化
煎煮法
提取范围：遇 热不易分解， 易溶于水成分 优点：操作简 单，效率较高 缺点：提取液 含糖多，黏稠 难滤过
回流提 取法
提取范围：脂 溶性较强成分 优点：效率高 ，适用范围广 缺点：操作较 繁琐，不适用 于对热不稳定 成分
三种提取方法的提取范围及优缺点
二、槐米中芸香苷的提取分离
提 取
碱 溶
为何使用 硼砂水液 槐米粗粉20g 加约120ml的0.4%硼砂水 溶液，搅拌下加入石灰乳至pH8～9 ，并保持该pH值煮沸20分钟，四层 纱布趁热滤过，反复2次 为何PH不 能小于2
槐米中芸香苷的提取分离及鉴定
天然药物教研室：朱仝飞
Contents
1 2 3 4
槐米中芸香苷的理化性质 槐米中芸香苷的提取分离 芸香苷的化学鉴定 重难点小结
Hot Tip 日常生活中的提取分离?
Hot Tip
槐米
槐花
一、槐米中芸香苷的理化性质
槐米的相关知识
(1)豆科植物槐的干燥花蕾 ★芸香苷的结构特点★
一、槐米中芸香苷的理化性质
性状
溶解性
酸碱性
溶解性及酸碱性为选择提取 分离方法的关键因素
二、槐米中芸香苷的提取分离
以下三种提取方法的名称是什么？
渗漉法
煎煮法
回流提 取法
二、槐米中芸香苷的提取分离
以下哪一种提取方法最适宜提取槐米中的芸香苷？
渗漉法
提取范围：遇 热易分解成分 优点：保持良 好的浓度差 缺点：溶剂消 耗多，时间长
药渣
为何加入石 灰乳，且 PH不能大 于9
分 离
提取液 浓盐酸调pH2～3， 搅拌，静置放冷，滤过。 酸 沉 沉淀 滤液 热水或乙醇重结晶 分离 芸香苷结晶
重结晶
碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图
三、芸香苷的化学鉴定
取少许芸香苷，用5-6ml乙醇（水浴加热）溶解，制 成样品溶液，按下列方法进行试验，观察反应现象。
OH HO O O OH O 芸香糖 OH
(2)有效成分为芸香苷含量 可高达12～20％，花蕾 开放含量降低
(3)临床上用于高血压症的 辅助治疗药
一、槐米中芸香苷的理化性质
2、溶解性 1、性状 淡黄色粉末 可溶于：碱水液、乙醇、 甲醇、丙酮 不溶于：氯仿、乙醚、 苯及、石油醚
理化性质
4、酸性 3、碱性 γ-吡喃酮环上的1 位氧原子 芸香苷的结构中含有4 个酚羟基，显一定酸性，可 与碱液成盐而溶解于水中。 酸性强弱顺序为： 7位 ≈ 4’位> 3’位> 5位
四、重难点小结
实验室使用煎煮 法及碱溶酸沉法 提取分离芸香苷 1 3
石灰乳可调节碱 性，还可以除多 糖类，碱性大 于9会使芸香苷 2 分解 4
浓盐酸调节酸性 小于2，使芸香 苷生成钅羊 盐，降低产率
碱性硼砂水液可 保护邻二酚羟基 不被氧化,避免 钙离子的络合芦 丁
Thank You!