生物钟基因与骨免疫研究进展

㊃综述㊃基金项目：国家自然科学基金（８１５０３６６２）∗通信作者：马文彬，Ｅｍａｉｌ：８１９７５４７２５＠ｑｑ．ｃｏｍ生物钟基因与骨免疫研究进展景中坤㊀吴晓㊀马文彬∗成都中医药大学，四川成都６１００７５中图分类号：Ｒ３３６㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀文章编号：１００６⁃７１０８（２０１８）１０⁃１３６９⁃０６摘要：昼夜节律是生命体为适应自然环境而产生的一种生物特性，生物钟基因调节着生命体的节律，Ｂｍａｌ１㊁Ｃｌｏｃｋ㊁ＰＥＲｓ㊁ＣＲＹｓ㊁Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα等生物钟基因及下游的钟控基因发挥了重要作用㊂免疫细胞与骨细胞之间通过共同的细胞因子和信号通路相互作用，调节骨代谢平衡，免疫紊乱会导致骨代谢异常㊂骨免疫学的诞生有利于深入研究骨骼系统与免疫系统的相互作用，骨免疫参与了许多骨科疾病和免疫性疾病的发生和进展㊂生理状态下，生物钟基因通过调控骨骼系统与免疫系统的生物节律，在维持骨免疫的平衡状态中发挥着重要作用㊂病理状态下，生物钟基因功能异常不但导致骨骼系统和免疫系统的节律紊乱，进一步导致骨量丢失和免疫炎症反应，而且通过ＩＬ－１㊁ＩＬ⁃６㊁ＴＮＦ⁃α㊁ＲＡＮＫＬ等骨免疫因子对骨代谢产生作用㊂反过来，免疫炎症反应也会对生物钟基因正常功能产生影响，进而影响骨代谢㊂根据生物钟基因和骨代谢自身的特点，认识生理病理状态下生物钟基因与骨免疫的相互作用，对骨骼系统疾病和免疫系统疾病的防治有一定的指导意义㊂关键词：生物钟基因；骨免疫；骨代谢；免疫细胞因子ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓａｎｄｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙＪＩＮＧＺｈｏｎｇｋｕｎ，ＷＵＸｉａｏ，ＭＡＷｅｎｂｉｎ∗ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＭ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７５，Ｃｈｉｎａ∗Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＭＡＷｅｎｂｉｎ，Ｅｍａｉｌ：８１９７５４７２５＠ｑｑ．ｃｏｍＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｉｓａｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｌｉｖｉｎｇｏｒｇａｎｉｓｍｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｄａｐｔｔｏｔｈｅｎａｔｕｒａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＴｈｅｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｓｕｃｈａｓＢｍａｌ１，Ｃｌｏｃｋ，ＰＥＲｓ，ＣＲＹｓ，Ｒｅｖ⁃ｅｒｂαａｎｄｃｌｏｃｋｃｏｎｔｒｏｌｇｅｎｅｓｅｘｅｒｔｖｉｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓａｎｄｂｏｎｅｃｅｌｌｓｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｃｏｍｍｏｎｃｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ，ａｎｄｉｍｍｕｎｅｄｉｓｏｒｄｅｒｓｃｏｕｌｄｃａｕｓｅａｂｎｏｒｍａｌｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｔｈｅｂｉｒｔｈｏｆｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｉｓｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｔｏｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｓｋｅｌｅｔａｌｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ，ａｎｄｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｎｙｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｎｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｔｅ，ｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｔｅ，ｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｍａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃａｕｓｅｓｔｈｅｄｉｓｏｒｄｅｒｓｏｆｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｏｆｔｈｅｓｋｅｌｅｔａｌｓｙｓｔｅｍａｎｄｔｈｅｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ，ｉｔｆｕｒｔｈｅｒｌｅａｄｓｔｏｌｏｓｓｏｆｂｏｎｅｍａｓｓａｎｄｉｍｍｕｎｏ⁃ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅａｃｔｉｏｎｓ．ＩｔａｌｓｏｅｘｅｒｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｈｒｏｕｇｈｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｒｅｌａｔｅｄｆａｃｔｏｒｓｓｕｃｈａｓＩＬ⁃１，ＩＬ⁃６，ＴＮＦ⁃αａｎｄＲＡＮＫＬ．Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏ⁃ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅａｃｔｉｏｎｓａｌｓｏａｆｆｅｃｔｔｈｅｎｏｒｍａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓ，ｗｈｉｃｈｉｎｔｕｒｎａｆｆｅｃｔｓｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓａｎｄｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓａｎｄｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｕｎｄｅｒｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｉｌｌｈａｖｅｃｅｒｔａｉｎｇｕｉｄｉｎｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｓｙｓｔｅｍｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄｉｍｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓ；ｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ｂｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｙｔｏｋｉｎｅｓ㊀㊀生物体的生命活动受到生物钟的调控，包括睡眠⁃觉醒周期㊁体温㊁心率㊁血压㊁激素水平和认知的变化等㊂哺乳动物生物钟的中枢起搏器位于下丘脑视交叉上核，外周的器官㊁组织㊁细胞的生物钟同步于中枢生物钟节律㊂生物钟的形成需要钟基因的参与㊂首先，Ｂｍａｌ１（ｂｒａｉｎａｎｄｍｕｓｃｌｅＡＲＮＴ⁃ｌｉｋｅ⁃１，Ｂｍａｌ１）基因与Ｃｌｏｃｋ基因形成异二聚体，与周期基因（Ｐｅｒｉｏｄ，ｐｅｒ１⁃３）和隐花色素基因（Ｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ，ｃｒｙ１⁃２）启动子的Ｅ⁃ｂｏｘ结合，驱动ＰＥＲｓ和ＣＲＹｓ基因的表达，同时形成ＰＥＲ／ＣＲＹ蛋白复合物㊂ＰＥＲ／９６３１中国骨质疏松杂志㊀２０１８年１０月第２４卷第１０期㊀ＣｈｉｎＪＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１８，Ｖｏｌ２４，Ｎｏ．１０Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｏｎｌｉｎｅｗｗｗ．ｗａｎｆａｎｇｄａｔｅ．ｃｏｍ．ｃｎ㊀ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃７１０８ ２０１８ １０ ０２１ＣＲＹ蛋白复合物先聚集在细胞质中，随后磷酸化迁移到细胞核中，抑制Ｃｌｏｃｋ⁃Ｂｍａｌ１的活性，关闭ＰＥＲ／ＣＲＹ转录㊂这个反馈环路由核受体Ｒｅｖ⁃Ｅｒｂα通过抑制Ｂｍａｌ１的转录调节实现［１］㊂当细胞核中的ＰＥＲ／ＣＲＹ复合物降解后，ＰＥＲ／ＣＲＹ蛋白复合物对Ｃｌｏｃｋ⁃Ｂｍａｌ１的抑制消除，开始新的昼夜循环㊂迄今人们已经发现１０多种核心生物钟基因，主要包括Ｂｍａｌ１㊁Ｃｌｏｃｋ㊁ＰＥＲｓ㊁ＣＲＹｓ㊁Ｃｓｎｋ１㊁Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα㊁ＲＯＲγｔ等以及转录翻译后的产物㊂外界光㊁摄食等信号输入中枢节律起搏器后，通过生物钟基因转录㊁翻译，然后与输出系统构成一个完整的负反馈节律通路㊂Ｂｍａｌ１和Ｃｌｏｃｋ是生物钟的主要正向调控元件，Ｃｒｙ１㊁Ｃｒｙ２㊁Ｐｅｒ１和Ｐｅｒ２则是主要的负向调控元件㊂生物钟基因参与了细胞生长㊁能量代谢㊁免疫调节㊁肿瘤形成等众多的生理过程，生物钟基因异常会直接导致生命体昼夜节律紊乱，还会使心血管疾病㊁代谢性疾病㊁免疫系统疾病和肿瘤等疾病的发生风险增大㊂１㊀骨代谢的自身调控特点人体骨骼是一个不断更新的动态过程，成年人每年约有１０％的骨骼会发生骨重塑，以维持骨骼的内稳态㊂骨吸收和骨形成的动态平衡在骨稳态中发挥着关键作用，成骨细胞（ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ，ＯＢ）和破骨细胞（ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ，ＯＣ）介导了这一过程㊂ＯＣ起源于单核⁃巨噬细胞产生的多核巨细胞㊂核因子⁃κＢ受体活化因子配体（ｒｅｃｅｐｔｏｒｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆＮＦ⁃κＢｌｉｇａｎｄ，ＲＡＮＫＬ）是ＯＣ的分化成熟的重要因子㊂ＯＢ㊁软骨细胞㊁Ｔ细胞㊁Ｂ细胞等均表达ＲＡＮＫＬ㊂在肿瘤坏死因子受体相关因子⁃６存在时，ＲＡＮＫＬ与其受体核因子κＢ受体活化因子（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＲＡＮＫ）结合并激活核转录因子⁃κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦ⁃κＢ），上调ｃ⁃ｆｏｓ基因㊁活化Ｔ细胞核因子ｃ（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＴｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｃ，ＮＦＡＴｃ）活性，促进ＯＣ分化㊂ＲＡＮＫＬ活性同样受到骨保护素（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｇｅｔｅｒｉｎ，ＯＰＧ）调控，ＯＢ和基质细胞分泌的ＯＰＧ可作为诱饵受体通过结合ＲＡＮＫＬ而阻止ＲＡＮＫＬ与ＲＡＮＫ结合，在体外阻断ＯＣ分化成熟㊂所以，ＯＰＧ／ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ系统是调节骨代谢的重要反应器㊂许多细胞因子能对ＯＣ的活性产生作用，如白介素⁃１（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１，ＩＬ⁃１）㊁白介素⁃６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃６，ＩＬ⁃６）㊁白介素⁃１７（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃１７，ＩＬ⁃１７）㊁肿瘤坏死因子⁃α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ⁃α，ＴＮＦ⁃α）㊁１，２５二羟基维生素Ｄ３［１，２５ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎＤ３，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］㊁ＲＡＮＫＬ等诱导ＯＣ分化；白介素⁃４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃，ＩＬ⁃４）㊁白介素⁃１０（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃１０，ＩＬ⁃１０）㊁干扰素⁃γ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ⁃γ，ＩＦＮ⁃γ）㊁转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ⁃β，ＴＧＦ⁃β）㊁ＯＰＧ等对ＯＣ的活性产生负向调控；ＩＬ⁃６和ＴＧＦ⁃β因ＯＣ分化的阶段产生不同影响㊂不同的基因㊁生长因子㊁细胞因子等通过ＮＦ⁃κＢ㊁ＢＭＰ／Ｓｍａｄｓ㊁Ｗｎｔ／β⁃ｃａｔｅｎｉｎ及ＯＰＧ／ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ等信号通路对骨代谢结局产生不同影响㊂２㊀免疫系统对骨代谢的调节作用免疫与骨代谢关系复杂多样，为了从细胞分子水平研究两者的相互作用和机制，诞生了骨免疫学㊂骨细胞和免疫细胞均从骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）分化而来，巨噬细胞㊁髓样树突细胞与ＯＣ共同来源于髓系前体细胞，ＯＢ㊁血液细胞和免疫细胞均来源于骨髓中的造血干细胞㊂生理条件下，Ｔ细胞通过ＣＤ４０配体与ＣＤ４０结合可促进Ｂ细胞产生ＯＰＧ，骨髓中４５％的ＯＰＧ来源于成熟Ｂ细胞㊂Ｂ细胞可直接参与ＯＣ的生成，也可通过ＲＡＮＫＬ介导ＯＣ分化［２］㊂Ｂ细胞敲除的小鼠出现骨质疏松症和骨髓ＯＰＧ缺陷，Ｔ细胞缺陷的老鼠同样如此，导致骨吸收增强［３］㊂但活化的Ｔ细胞和Ｂ细胞分泌促进ＯＣ的生成因子，包括促进骨丢失的ＲＡＮＫＬ㊁ＩＬ⁃１７Ａ和ＴＮＦ⁃α等炎症因子，骨吸收作用增强㊂Ｔ细胞分泌的细胞因子中，ＲＡＮＫＬ㊁ＴＮＦ⁃α㊁ＩＬ⁃６等促进骨吸收，ＴＧＦ⁃β㊁ＩＬ⁃４㊁ＩＬ⁃１０和ＩＦＮ⁃γ等阻碍骨吸收㊂Ｔ细胞活化后激活ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ信号通路，对骨吸收产生正向调控㊂源自ＣＤ４＋Ｔ细胞中的ＴＮＦ⁃α㊁ＲＡＮＫＬ可诱导ＯＣ的形成增加，ＴＮＦ⁃α是炎症中产生ＯＣ最有效的因子之一，在存在正常水平的ＲＡＮＫＬ的情况下，ＴＮＦ⁃α直接刺激巨噬细胞和ＯＣ的分化［４］㊂ＩＬ⁃６被认为是炎症反应中生物效应的放大因子，是ＲＡＮＫＬ表达的受体激活剂㊂滑膜细胞产生的ＩＬ⁃６可以作为ＲＡＮＫＬ表达的受体激活剂，激活粘附分子，将白细胞募集到骨关节处，破坏细胞外基质㊂ＲＡＮＫＬ可以使基质金属蛋白酶９㊁组织蛋白酶Ｋ㊁酒石酸盐酸性磷酸酶㊁碳酸酐酶ＩＩ对ＩＬ⁃１产生反应，共同上调ＮＦＡＴｃ１的表达，诱导滑膜细胞增殖和ＯＣ分化［５］㊂研究表明［６］，ＴＮＦ／ＩＬ⁃６复合物可以通过ＩＬ⁃６Ｒ㊁ＮＦＡＴｃ１㊁ＤＮＡＸ活化蛋白１２和细胞增殖途径，诱导ＯＣ在ＲＡＮＫ敲除小鼠的骨髓和滑膜培养物中产生㊂同时，ＩＬ⁃６㊁白血病抑制因子㊁制瘤素Ｍ在炎症性关节炎的滑膜中表达增加㊂说明ＴＮＦ与ＩＬ⁃６类细胞因子可以通过非ＲＡＮＫＬ依赖性途径诱导的ＯＣ产生，导致骨破坏㊂Ｗｎｔ信号与成骨密切相关，ＩＬ⁃６与ＴＮＦ⁃α可以一起抑制滑膜细胞和ＯＢ中Ｗｎｔ信号的激活㊂而ｓｈＲＮＡ介导的ＩＬ⁃６基因敲除的小鼠可以在炎症环境中促进骨形态发生蛋白异源二聚体的表达，诱导ＯＢ的发生［７］㊂用重组小鼠ＩＬ⁃６和ＩＬ⁃６Ｒ处理骨样细胞ＭＬＯ⁃Ｙ４并与ＯＣ前体细胞共培养，发现ＩＬ⁃６和ＩＬ⁃６受体在骨样细胞ＭＬＯ⁃Ｙ４的ｍＲＮＡ和蛋白水平上增强了ＲＡＮＫＬ的表达和ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ表达比㊂但使用ＪＡＫ２抑制剂后发现ＯＣ分化能力下降㊂这表明ＩＬ⁃６也可通过激活ＪＡＫ２和ＲＡＮＫＬ介导ＯＣ分化［８］㊂对比健康人群与类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）患者发现［９］，ＲＡ患者更容易发生骨质疏松，这与ＲＡ患者体内的免疫细胞因子水平升高相关㊂同时，ＲＡ患者的Ｉ型胶原羧基端交联肽（Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎａｌｔｅｌｏｐｅｐｔｉｄｅｓｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣＴＸ）水平升高，Ⅰ型前胶原Ｎ端前肽（Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎａｌｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅｏｆｔｙｐｅ１ｐｒｅｃｏｌｌａｇｅｎ，Ｐ１ＮＰ）水平降低，这也增加了骨质疏松发生的几率㊂３㊀生物钟基因参与骨节律和骨代谢３ １㊀生物钟基因调节骨组织的节律骨组织具有自己的生物钟，受到Ｂｍａｌ１㊁Ｃｌｏｃｋ㊁ＰＥＲｓ等时钟基因的调控㊂将离体小鼠的软骨细胞置于三维海绵上培养后，通过分析胞浆㊁胞核和细胞骨架的１２０００多种基因的微点阵，均能发现节律钟基因Ｃｌｏｃｋ㊁Ｐｅｒ１和Ｐｅｒ２在软骨细胞上的表达，并呈现明显的节律性［１０］㊂在３ ９周龄小鼠的股骨中发现［１１］，Ｐｅｒ２基因转录的节律明显，并且对由于外界影响导致的节律紊乱具有可逆性，表明在骨组织具有相对稳定的生物钟㊂将小鼠进行光暗周期处理，从松质骨提取ｍＲＮＡ并分析ＯＣ相关基因和时钟基因，ＯＣ相关基因显示出与时钟基因Ｐｅｒ１㊁Ｐｅｒ２和Ｂｍａｌ１同步的节律性㊂研究表明［１２］，ＯＣ上Ｂｍａｌ１基因和酪氨酸激酶家族相互作用进而与ＮＦＡＴｃ１启动子结合控制骨吸收㊂时钟基因Ｂｍａｌｌ的功能蛋白与ＮＦＡＴｃ１启动子上的Ｅ⁃ｂｏｘ结合，上调钙调神经磷酸酶的活性，使ＮＦＡＴｃ去磷酸化，激活ＣＮ／ＮＦＡＴｃ信号通路㊂许多骨转换标志物在血浆或尿液中表现出昼夜变化㊂研究通过每间隔２ｈ测量１０名健康男性血清中的硬骨素㊁ＣＴＸ和Ｐ１ＮＰ，ＣＴＸ存在明显的昼夜节律，并且在５：３０达到峰值［１３］㊂研究人员通过对志愿者进行３周的睡眠限制，对比了２０ ２７岁的年轻人与５５ ６５岁的老年人之间４种骨生物标志物，包括ＣＴＸ㊁Ｐ１ＮＰ㊁硬骨素和成纤维细胞生长因子２３㊂发现年轻人Ｐ１ＮＰ的下降幅度比老年人更大，骨形成减少但骨吸收不变，表明昼夜节律紊乱可能在成年早期对骨代谢影响更大［１４］㊂３ ２㊀生物钟基因破坏对骨代谢的影响时钟基因功能异常会影响骨量㊂研究发现Ｐｅｒ２基因突变和Ｃｒｙ２基因敲除的小鼠在１２周龄时骨量显著增加，骨转换率增高㊂并且Ｃｒｙ２和Ｐｅｒ２通过不同的途径调节骨体积，Ｃｒｙ２主要影响ＯＣ，而Ｐｅｒ２作用于ＯＢ［１５］㊂从妊娠４ ５ｄ的Ｐｅｒ２转基因大鼠分离子宫内膜间质细胞，Ｐｅｒ２⁃ｄＬｕｃ生物发光活性显著下降㊂用Ｂｍａｌ１特异性ｓｉＲＮＡ转染的子宫内膜间质细胞发现，Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα表达下调，骨形态发生蛋白（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＢＭＰｓ）中ＢＭＰ２㊁ＢＭＰ４和ＢＭＰ６上调，其中Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα在ＢＭＰｓ基因转录沉默中起重要作用㊂表明ＢＭＰｓ基因通过生物钟基因的衰减而上调，有利于向软骨组织和骨组织分化［１６］㊂研究者通过转录组测序在小鼠椎间盘中发现６０７个基因的表达在生理状态中具有节律性㊂敲除Ｂｍａｌ１的小鼠表现出与年龄正相关的椎间盘退变，说明了生物钟基因的破坏可能会影响椎间盘生理病理［１７］㊂随着机体的衰老，老化的ＢＭＳＣｓ会减弱向骨细胞分化增殖的能力，导致骨骼衰老㊂当Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα过表达时，会促使ＢＭＳＣｓ提前衰老，细胞增殖能力下降，进而导致骨形成减少，表明Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα与机体衰老有一定关系［１８］㊂在Ｂｍａｌ１过表达的小鼠胚胎成纤维细胞中，Ｂｍａｌ１蛋白水平与ＢＭＳＣｓ增殖活性之间呈正相关㊂这可能是由于Ｂｍａｌ１的过表达激活了经典Ｗｎｔ途径中β⁃ｃａｔｅｎｉｎ因子，使其表达增加［１９］㊂另外，研究者通过敲低Ｃｌｏｃｋ和Ｐｅｒ２两个主要时钟基因，观察到ＢＭＳＣｓ分化成脂肪细胞的能力受到显著抑制，而ＯＢ分化能力没有改变［２０］㊂１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＣ和ＯＢ形成均有调节作用㊂在Ｂｍａｌ１缺陷型骨细胞中，１，２５（ＯＨ）２Ｄ３可以诱导ＲＡＮＫＬ的活性增强，导致骨破坏，而Ｂｍａｌ１／Ｃｌｏｃｋ的过表达则可以在ＯＢ中抑制这种情况［２１］㊂Ｃｌｏｃｋ基因作为重要的节律调控基因，也可以控制１，２５（ＯＨ）２Ｄ３的受体 蛋白质二硫键异构酶Ａ３的转录，调节骨的形成㊂蛋白二硫键异构酶Ａ３也被证明是一种钟控基因，受上游节律钟基因的控制㊂而Ｃｌｏｃｋ基因突变导致小鼠细胞凋亡增加，骨密度明显降低［２２］㊂４㊀免疫与生物钟基因相互作用影响骨免疫４ １㊀生物钟基因调控免疫系统的节律生理状态下，免疫系统具有昼夜节律，免疫功能一定程度上受到生物钟基因的调控㊂巨噬细胞㊁ＮＫ细胞㊁肥大细胞㊁Ｔ细胞和Ｂ细胞等细胞的昼夜节律受时钟基因的调节，并且ＴＮＦ⁃α㊁ＩＬ⁃６㊁ＩＬ⁃１３㊁ＩＦＮ⁃γ等细胞因子分泌的节律同样受到生物钟基因的调控㊂在健康人的ＣＤ４＋Ｔ细胞中发现时钟基因Ｅ４ｂｐ４㊁Ｐｅｒ２㊁Ｐｅｒ３㊁Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα和Ｒｏｒα的ｍＲＮＡ表达，在时钟基因的刺激下，ＩＬ⁃２㊁ＩＬ⁃４和ＩＦＮ⁃γ的表达具有稳定的节律性［２３］㊂ＩＬ⁃１７是连接Ｔ细胞活化和ＯＣ的Ｔｈ细胞亚群，主要由辅助性Ｔ细胞１７（Ｔｈｅｌｐｃｅｌｌ１７，Ｔｈ１７）产生㊂在野生小鼠小肠固有层中发现，Ｔｈ１７细胞的节律受到Ｃｌｏｃｋ基因的调节［２４］㊂时钟基因Ｅ４ｂｐ４参与了Ｔｈ１７细胞的发育㊂Ｅ４ｂｐ４通过与ＲＯＲγｔ结合会抑制Ｔｈ１７细胞的发育，但Ｅ４ｂｐ４可以通过Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα将Ｔｈ１７细胞发育与生物钟网络相连接［２５⁃２６］㊂４ ２㊀抑制生物钟基因能够促进免疫炎症反应Ｃｒｙ１过度表达则抑制昼夜节律紊乱导致的血管炎症，这与ＮＦ⁃κＢ信号通路和ｃＡＭＰ／ＰＫＡ途径激活有关［２７］㊂时钟基因Ｃｒｙ１和Ｃｒｙ２的缺失会引起蛋白激酶Ａ活化，介导ｐ６５磷酸化，诱导ＮＦ⁃κＢ活化和ＩＬ⁃６㊁ＴＮＦ⁃α的表达［２８］㊂Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα是具有改变时钟功能的核激素受体之一，主要参与脂质代谢㊁脂肪形成和炎症反应㊂Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα可在炎症状态下直接抑制Ｃｃｌ２启动子中的Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα结合区域，抑制Ｃｃｌ２下游的ＭＡＰＫ／ＥＲＫ和ｐ３８ＭＡＰＫ信号介导的炎症反应，调节巨噬细胞的炎症浸润，Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα缺损的小鼠巨噬细胞中Ｃｃｌ２表达增加证实了Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα的作用［２９］㊂脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）能够刺激ＴＮＦ⁃α㊁ＩＬ⁃２和ＩＦＮ⁃γ等细胞因子的表达，导致炎症反应㊂实验表明［３０］，Ｐｅｒ２是ＮＫ细胞节律功能的重要调节因子㊂用ＬＰＳ攻击Ｐｅｒ２缺陷小鼠，与野生型小鼠相比，Ｐｅｒ２缺陷小鼠血清中促炎细胞因子ＩＦＮ⁃γ和ＩＬ⁃１β的水平明显降低，而ＴＮＦ⁃α㊁ＩＬ⁃６和ＩＬ⁃１０大致正常㊂肝癌骨质疏松发病率明显升高，且发病率随肝功能损害的逐渐加重而逐渐升高㊂在Ｐｅｒ２突变的肝癌小鼠模型上发现［３１］，肝脏ＩＬ⁃６蛋白浓度的失常，肝脏增殖基因包括ｃ⁃Ｍｙｃ㊁Ｗｅｅ１㊁Ｃｃｎｂ１和Ｋ⁃ｒａｓｍＲＮＡ的表达失调，同时炎症反应增强㊂在ＲＡ缺氧的关节腔内，Ｃｌｏｃｋ可诱导血管氧化损伤㊁炎症反应和骨质破坏㊂进一步研究发现这是通过上调ＩＬ⁃１β㊁ＩＬ⁃６㊁ＴＮＦ⁃α㊁细胞间粘附分子１的表达水平，随后激活ＮＦ⁃κＢ信号，对ＯＣ产生调控，导致骨吸收增强［３２］㊂４ ３㊀免疫炎症反应使生物钟基因功能障碍进而影响骨代谢免疫反应也能通过影响生物钟基因对骨代谢产生影响㊂成纤维样滑膜细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ⁃ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ，ＦＬＳ）是人类和动物ＲＡ模型中的炎症介质之一㊂在炎症环境中ＦＬＳｓ被激活，导致其表观遗传修饰，侵袭性增强，释放多种细胞因子和生长因子，破坏软骨和骨［３３］㊂在ＲＡ小鼠模型上发现［３４］，黑暗条件下两个负性调控的时钟基因ＣＲＹ１和ＣＲＹ２抑制了ＦＬＳｓ介导的炎症反应㊂在ＲＡ和骨关节炎患者身上发现［３５］，炎症刺激扰乱了ＦＬＳｓ的节律，并且在生物钟重置之后ＩＬ⁃６和ＩＬ⁃１β分泌的昼夜节律破坏，而ＡＲＮＴＬ２和ＮＰＡＳ２似乎是炎症条件下受影响最大的时钟基因㊂其中，ＴＮＦ⁃α能直接干扰ＦＬＳｓ的时钟基因表达［３６］㊂表明炎症状态使时钟基因功能障碍，影响正常的生物节律㊂在ＲＡ滑膜细胞中进一步发现，ＴＮＦ⁃α还增强Ｂｍａｌ１和Ｃｒｙ１的ｍＲＮＡ表达，但不影响Ｃｌｏｃｋ㊁Ｐｅｒ１和Ｃｒｙ２的表达［３７］㊂另外，ＴＮＦ⁃α在滑膜成纤维细胞中以ＮＦ⁃κＢ依赖性方式在ｍＲＮＡ和蛋白质水平上刺激钟控基因ＤＥＣ２的表达［３８］㊂但在钙信号存在时，ＴＮＦ⁃α与ＴＮＦＲ１相互作用导致Ｄｂｐ表达快速下调，时钟基因Ｐｅｒ１㊁Ｃｒｙ１上调，同时使分化型胚胎软骨发育基因１表达增强，有利于向软骨细胞分化［３９］㊂研究显示，ＴＮＦ和ＩＬ⁃１β可以抑制Ｐｅｒ１⁃３㊁Ｃｒｙ１⁃２㊁ＰＡＲ⁃ｂＺｉｐ等多种时钟基因以及钟控基因的表达［４０］㊂这是由于ＴＮＦ导致Ｔｗｉｓｔ１的过表达与ＣＬＯＣＫ竞争性结合ＰＥＲｓ和Ｄｂｐ的Ｅ⁃ｂｏｘ，导致时钟基因转录受阻［４１］㊂在衰老小鼠ＯＡ模型中，Ｐｅｒ２转录的昼夜节律性在软骨组织中显著降低［４２］㊂除了年龄的影响，还由于炎症状态下，ＩＬ⁃１β消除Ｃｒｙ１转录和Ｐｅｒ２转录表达的昼夜节律，而ＮＦ⁃κＢ信号通过干扰Ｃｌｏｃｋ／Ｂｍａｌ１复合物的功能参与了这一过程［４３］㊂５　结语免疫系统与骨骼系统有复杂的关系，免疫系统对骨代谢结局有双向作用，细胞因子的种类起着关键作用㊂生物钟基因既能调节免疫系统和骨骼系统的生物节律，也可以直接对骨免疫产生影响，还可以通过骨免疫相关的细胞因子对骨量产生不同作用㊂免疫反应也能抑制或增强生物钟基因的功能，从而影响骨代谢㊂但由于生物钟基因众多，目前的研究对生物钟基因的功能尚不能完全解释㊂同时，骨免疫过程生理机制复杂多变，免疫系统的细胞因子与骨细胞的关系需更多研究阐明，生物钟基因如何影响骨免疫来调节骨细胞功能的机制需深入研究㊂ʌ参考文献ɔ［１］㊀ＹａｍａｊｕｋｕＤ，ＳｈｉｂａｔａＹ，ＫｉｔａｚａｗａＭ，ｅｔａｌ．ＣｅｌｌｕｌａｒＤＢＰａｎｄＥ４ＢＰ４ｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｃｒｉｔｉｃａｌｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｐｅｒｉｏｄｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｏｓｃｉｌｌａｔｏｒ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｔ，２０１１，５８５（１４）：２２１７⁃２２２２．［２］㊀ＬｉＹ，ＴｏｒａｌｄｏＧ，ＬｉＡ，ｅｔａｌ．ＢｃｅｌｌｓａｎｄＴｃｅｌｌｓａｒｅｃｒｉｔｉｃａｌｆｏｒｔｈｅｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｂｏｎｅｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓａｎｄａｔｔａｉｎｍｅｎｔｏｆｐｅａｋｂｏｎｅｍａｓｓｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００７，１０９（９）：３８３９⁃３８４８．［３］㊀ＭａｎａｂｅＮ，ＫａｗａｇｕｃｈｉＨ，ＣｈｉｋｕｄａＨ，ｅｔａｌ．ＣｏｎｎｅｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌ，２００１，１６７（５）：２６２５⁃２６３１．［４］㊀ＳａｋａｉＥ，ＡｏｋｉＹ，ＹｏｓｈｉｍａｔｓｕＭ，ｅｔａｌ．ＳａｎｇｕｉｉｎＨ⁃６，ａｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｏｆＲｕｂｕｓｐａｒｖｉｆｏｌｉｕｓＬ，ｉｎｈｉｂｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ⁃κＢｌｉｇａｎｄ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｂｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｓｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ⁃α⁃ｉｎｄｕｃｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，２３（８）：８２８⁃８３７．［５］㊀ＪｕｌｅｓＪ，ＺｈａｎｇＰ，ＡｓｈｌｅｙＪＷ，ｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｆｏｒｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１⁃ｍｅｄｉａｔｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１２，２８７（１９）：１５７２８⁃１５７３８．［６］㊀Ｏ＇ＢｒｉｅｎＷ，ＦｉｓｓｅｌＢＭ，ＭａｅｄａＹ，ｅｔａｌ．ＲＡＮＫ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｂｏｎｅｅｒｏｓｉｏｎｉｎｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１６，６８（１２）：２８８９⁃２９００．［７］㊀ＭａｌｙｓｈｅｖａＫ，ＤｅＲＫ，ＬｏｗｉｋＣＷ，ｅｔａｌ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６／Ｗｎｔｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６ｉｎｈｉｂｉｔｓＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＣｒｏａｔＭｅｄＪ，２０１６，５７（２）：８９⁃９８．［８］㊀ＷｕＱ，ＺｈｏｕＸ，ＨｕａｎｇＤ，ｅｔａｌ．ＩＬ⁃６ｅｎｈａｎｃｅｓｏｓｔｅｏｃｙｔｅ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇＪＡＫ２ａｎｄＲＡＮＫＬａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ，２０１７，４１（４）：１３６０⁃１３６９．［９］㊀徐慧敏，黄传兵，毛古燧，等．类风湿关节炎患者血清骨代谢标志物水平及炎症因子变化研究［Ｊ］．中国骨质疏松杂志，２０１８，２４（２）：１５２⁃１５５，１６９．［１０］㊀ＭｃＤｅａｒｍｏｎＥＬ，ＰａｔｅｌＫＮ，ＫｏＣＨ，ｅｔａｌ．ＤｉｓｓｅｃｔｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｃｌｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎＢＭＡＬ１ｂｙｔｉｓｓｕｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｓｃｕｅｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３１４（５８０３）：１３０４⁃１３０８．［１１］㊀ＮａｏｋｉＯ，ＹｏｉｃｈｉＭ，ＨｉｒｏｙｏｓｈｉＦ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｉｎｍｏｕｓｅｅｘｖｉｖｏｂｏｎｅｃｕｌｔｕｒｅｒｅｖｅａｌｅｄｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｃｉｒｃａｄｉａｎｒｈｙｔｈｍｓｉｎａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅｓａｎｄｇｒｏｗｔｈｐｌａｔｅｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８（１１）：ｅ７８３０６．［１２］㊀ＸｕＣ，ＯｃｈｉＨ，ＦｕｋｕｄａＴ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｒｅｇｕｌａｔｅｓｂｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＪＢｏｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ，２０１６，３１（７）：１３４４⁃１３５５．［１３］㊀ＳｗａｎｓｏｎＣ，ＳｈｅａＳＡ，ＷｏｌｆｅＰ，ｅｔａｌ．２４⁃ｈｏｕｒｐｒｏｆｉｌｅｏｆｓｅｒｕｍｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎａｎｄｉｔｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｂｏｎｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｉｎｍｅｎ［Ｊ］．ＯｓｔｅｏｐｏｒｏｓＩｎｔ，２０１７，２８（１１）：３２０５⁃３２１３．［１４］㊀ＳｗａｎｓｏｎＣＭ，ＳｈｅａＳＡ，ＷｏｌｆｅＰ，ｅｔａｌ．Ｂｏｎｅｔｕｒｎｏｖｅｒｍａｒｋｅｒｓａｆｔｅｒｓｌｅｅｐｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎａｎｄｃｉｒｃａｄｉａｎｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ：Ａｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｓｌｅｅｐ⁃ｒｅｌａｔｅｄｂｏｎｅｌｏｓｓｉｎｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌＭｅｔａｂ，２０１７，１０２（１０）：３７２２⁃３７３０．［１５］㊀ＭａｒｏｎｄｅＥ，ＳｃｈｉｌｌｉｎｇＡＦ，ＳｅｉｔｚＳ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｐｅｒｉｏｄ２ａｎｄｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ２ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｂａｌａｎｃｅｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１０，５（７）：ｅ１１５２７．［１６］㊀ＴａｓａｋｉＨ，ＺｈａｏＬ，ＩｓａｙａｍａＫ，ｅｔａｌ．ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｒｏｌｅｏｆＲＥＶ⁃ＥＲＢαｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎｒａｔｕｔｅｒｕｓｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１５，３０８（７）：５２８⁃５３８．［１７］㊀ＤｕｄｅｋＭ，ＹａｎｇＮ，ＲｕｃｋｓｈａｎｔｈｉＪＰ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｃｏｎｔａｉｎｓｉｎｔｒｉｎｓｉｃｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｓｔｈａｔａｒｅｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙａｇｅａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄｌｉｎｋｅｄｔｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ，２０１７，７６（３）：５７６⁃５８４．［１８］㊀ＨｅＹ，ＬｉｎＦ，ＣｈｅｎＹ，ｅｔａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅｒｅｖ⁃ｅｒｂαａｆｆｅｃｔｓｍｕｒｉｎｅｂｏｎｅｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＤｅｖ，２０１５，２４（１０）：１１９４⁃１２０４．［１９］㊀ＬｉｎＦ，ＣｈｅｎＹ，ＬｉＸ，ｅｔａｌ．Ｏｖｅｒ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅＢｍａｌ１ａｆｆｅｃｔｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｃａｎｏｎｉｃａｌＷｎｔｐａｔｈｗａｙｉｎＮＩＨ⁃３Ｔ３ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍＦｕｎｃｔ，２０１３，３１（２）：１６６⁃１７２．［２０］㊀ＢｏｕｃｈｅｒＨ，ＶａｎｎｅａｕｘＶ，ＤｏｍｅｔＴ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｍｏｄｕｌａｔｅｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ＭｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１６，１１（１）：ｅ０１４６６７４．［２１］㊀ＴａｋａｒａｄａＴ，ＸｕＣ，ＯｃｈｉＨ，ｅｔａｌ．Ｂｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｉｎｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＪＢｏｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ，２０１７，３２（４）：８７２⁃８８１．［２２］㊀ＹｕａｎＧ，ＨｕａＢ，ＹａｎｇＹ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｇｅｎｅｃｌｏｃｋｒｅｇｕｌａｔｅｓｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｖｉａＰＤＩＡ３［Ｊ］．ＪＢｏｎｅＭｉｎｅｒＲｅｓ，２０１７，３２（４）：８６１⁃８７１．［２３］㊀ＢｏｌｌｉｎｇｅｒＴ，ＬｅｕｔｚＡ，ＬｅｌｉａｖｓｋｉＡ，ｅｔａｌ．ＣｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｓｉｎｍｏｕｓｅａｎｄｈｕｍａｎＣＤ４＋ＴＣｅｌｌｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１１，６（１２）：ｅ２９８０１．［２４］㊀ＴｈｕＬｅＨＰ，ＮａｋａｍｕｒａＹ，Ｏｈ⁃ＯｋａＫ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆＴｈ１７ｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅｅｘｈｉｂｉｔｓａｄａｙ⁃ｎｉｇｈｔｖａｒｉａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２０１７，４９０（２）：２９０⁃２９５．［２５］㊀ＹｕＸ，ＲｏｌｌｉｎｓＤ，ＲｕｈｎＫＡ，ｅｔａｌ．ＴＨ１７ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４２（６１５９）：７２７⁃７３０．［２６］㊀ＳｋｅｐｎｅｒＪ，ＴｒｏｃｈａＭ，ＲａｍｅｓｈＲ，ｅｔａｌ．ＩｎｖｉｖｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＴｈｅｌｐｅｒｔｙｐｅ１７ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂｙＲＯＲγｔｉｎｖｅｒｓｅａｇｏｎｉｓｔｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１４５（３）：３４７⁃３５６．［２７］㊀ＱｉｎＢ，ＤｅｎｇＹ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ（ＣＲＹ）１ａｌｌｅｖｉａｔｅｓｓｌｅｅｐｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｖａｓｃｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ，２０１５，１６３（１）：７６⁃８３．［２８］㊀ＮａｒａｓｉｍａｍｕｒｔｈｙＲ，ＨａｔｏｒｉＭ，ＮａｙａｋＳＫ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２０１２，１０９（３１）：１２６６２⁃１２６６７．［２９］㊀ＳａｔｏＳ，ＳａｋｕｒａｉＴ，ＯｇａｓａｗａｒａＪ，ｅｔａｌ．Ａｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅ，Ｒｅｖ⁃ｅｒｂα，ｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣｃｌ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌ，２０１４，１９２（１）：４０７⁃４１７．［３０］㊀ＬｉｕＪ，ＭａｌｋａｎｉＧ，ＳｈｉＸ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋＰｅｒｉｏｄ２ｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｇａｍｍａｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＮＫｃｅｌｌｓｉｎｈｏｓｔｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｅｎｄｏｔｏｘｉｃｓｈｏｃｋ［Ｊ］．ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ，２００６，７４（８）：４７５０⁃４７５６．［３１］㊀ＡｌｉＭｔｅｙｒｅｋ，ＥｌｉｓａｂｅｔｈＦｉｌｉｐｓｋｉ，ＣａｔｈｅｒｉｎｅＧｕｅｔｔｉｅｒ，ｅｔａｌ．ＣｌｏｃｋｇｅｎｅＰｅｒ２ａｓａｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒｏｆｌｉｖｅｒｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１６，７（５２）：８５８３２⁃８５８４７．［３２］㊀ＴａｎｇＸ，ＧｕｏＤ，ＬｉｎＣ，ｅｔａｌ．ｈＣＬＯＣＫｉｎｄｕｃｔｉｏｎｂｙｈｙｐｏｘｉａｐｒｏｍｏｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｔｈｅＮＦ⁃κＢｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＭｏｌＭｅｄＲｅｐ，２０１７，１５（３）：１４０１⁃１４０６．［３３］㊀ＢｏｔｔｉｎｉＮ，ＦｉｒｅｓｔｅｉｎＧＳ．Ｄｕａｌｉｔｙｏｆｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ⁃ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓｉｎＲＡ：ｐａｓｓｉｖｅｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓａｎｄｉｍｐｒｉｎｔｅｄａｇｇｒｅｓｓｏｒｓ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１３，９（１）：２４⁃３３．［３４］㊀ＬａｕｒａＥＨ，ＴｈｏｍａｓＷＨ，ＳｕｚａｎｎａＨＤ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｒｅｇｕｌａｔｅｓｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ，２０１６，３０（１１）：３７５９⁃３７７０．［３５］㊀ＫｏｕｒｉＶＰ，ＯｌｋｋｏｎｅｎＪ，ＫａｉｖｏｓｏｊａＥ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃａｄｉａｎｔｉｍｅｋｅｅｐｉｎｇｉｓｄｉｓｔｕｒｂｅｄｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓａｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８（１）：ｅ５４０４９．［３６］㊀ＢｅｃｋｅｒＴ，Ｔｏｈｉｄａｓｔ⁃ＡｋｒａｄＭ，ＨｕｍｐｅｌｅｒＳ，ｅｔａｌ．Ｃｌｏｃｋｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｙｎｏｖｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＨｉｓｔｏｃｈｅｍ，２０１４，１１６（７）：１１９９⁃１２０７．［３７］㊀ＹｏｓｈｉｄａＫ，ＨａｓｈｉｒａｍｏｔｏＡ，ＯｋａｎｏＴ，ｅｔａｌ．ＴＮＦ⁃αｍｏｄｕｌａｔｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｇｅｎｅＰｅｒ２ｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄｓｙｎｏｖｉａｌｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＳｃａｎｄＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１３，４２（４）：２７６⁃２８０．［３８］㊀ＯｌｋｋｏｎｅｎＪ，ＫｏｕｒｉＶＰ，ＨｙｎｎｉｎｅｎＪ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ２（ＤＥＣ２）ｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＬ⁃１βａｎｄｉｓａｂｕｎｄａｎｔｌｙｐｒｅｓｅｎｔｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（１２）：ｅ０１４５２７９．［３９］㊀ＰｅｔｒｚｉｌｋａＳ，ＴａｒａｂｏｒｒｅｌｌｉＣ，ＣａｖａｄｉｎｉＧ，ｅｔａｌ．ＣｌｏｃｋｇｅｎｅｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｂｙＴＮＦ⁃ａｌｐｈａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｃａｌｃｉｕｍａｎｄｐ３８ＭＡＰｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＲｈｙｔｈｍｓ，２００９，２４（４）：２８３⁃２９４．［４０］㊀ＣａｖａｄｉｎｉＧ，ＰｅｔｒｚｉｌｋａＳ，ＫｏｈｌｅｒＰ，ｅｔａｌ．ＴＮＦ⁃ａｌｐｈａｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｏｃｋｇｅｎｅｓｂｙｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇｗｉｔｈＥ⁃ｂｏｘ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００７，１０４（３１）：１２８４３⁃１２８４８．［４１］㊀ＤａｎｉｅｌＭｅｉｅｒ，ＭａｒｔｉｎＬｏｐｅｚ，ＰａｕｌＦｒａｎｋｅｎ，ｅｔａｌ．Ｔｗｉｓｔ１ＩｓａＴＮＦ⁃ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｃｌｏｃｋｍｅｄｉａｔｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｅｒｉｏｄｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（９）：ｅ０１３７２２９．［４２］㊀ＧｏｓｓａｎＮ，ＺｅｅｆＬ，ＨｅｎｓｍａｎＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋｉｎｍｕｒｉｎｅｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｓｇｅｎｅｓｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｋｅｙａｓｐｅｃｔｓｏｆｃａｒｔｉｌａｇｅｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ，２０１３，６５（９）：２３３４⁃２３４５．［４３］㊀ＧｕｏＢ，ＹａｎｇＮ，ＢｏｒｙｓｉｅｗｉｃｚＥ，ｅｔａｌ．Ｃａｔａｂｏｌｉｃｃｙｔｏｋｉｎｅｓｄｉｓｒｕｐｔｔｈｅｃｉｒｃａｄｉａｎｃｌｏｃｋａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌｏｃｋ⁃ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｇｅｎｅｓｉｎｃａｒｔｉｌａｇｅｖｉａａｎＮＦкＢ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＳｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＣａｒｔｉｌａｇｅ，２０１５，２３（１１）：１９８１⁃１９８８．（收稿日期：２０１８⁃０２⁃０５；修回日期：２０１８⁃０３⁃３０）（上接第１３４０页）［１０］㊀ＤｉｎｇＹ，ＺｅｎｇＪＣ，ＹｉｎＦ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｓｔｕｄｙｏｎｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆａｃｕｔｅ⁃ｐｈａｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｆｔｅｒｉｎｆｕｓｉｏｎｏｆｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄ５ｍｇｉｎＣｈｉｎｅｓｅｗｏｍｅｎｗｉｔｈｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ［Ｊ］．ＯｒｔｈｏｐＳｕｒｇ，２０１７，９（３）：２８４⁃２８９．［１１］㊀ＤｅＳａｎｔｉｓＭ，ＣａｖａｃｉｏｃｃｈｉＦ，ＣｅｒｉｂｅｌｌｉＡ，ｅｔａｌ．Ｇａｍｍａ⁃ｄｅｌｔａＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄ２５⁃ｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎＤｌｅｖｅｌｓａｓｋｅｙｆａｃｔｏｒｓｉｎａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｔｈｅｃａｓｅｏｆｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄ⁃ｉｎｄｕｃｅｄａｃｕｔｅｐｈａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｌｕｐｕｓ，２０１５，２４（４⁃５）：４４２⁃４４７．［１２］㊀ＢｅｋｔａｓＡ，ＳｃｈｕｒｍａｎＳＨ，ＳｅｎＲ，ｅｔａｌ．ＨｕｍａｎＴｃｅｌｌｉｍｍｕｎｏｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎａｇｉｎｇ［Ｊ］．ＪＬｅｕｋｏｃＢｉｏｌ，２０１７，１０２（４）：９７７⁃９８８．［１３］㊀ＤｈｉｌｌｏｎＳ．Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃａｃｉｄ（Ｒｅｃｌａｓｔ®，Ａｃｌａｓｔａ®）：Ａｒｅｖｉｅｗｉｎｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｄｒｕｇｓ，２０１６，７６（１７）：１６８３⁃１６９７．（收稿日期：２０１８⁃０４⁃０５；修回日期：２０１８⁃０４⁃２５）。