总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.
血清总胆固醇TC测定操作规程
血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
人总胆固醇(TC)ELISA试剂盒说明书
人总胆固醇（TC）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中总胆固醇（TC）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人总胆固醇（TC）水平。
用纯化的人总胆固醇（TC）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总胆固醇（TC），再与HRP标记的总胆固醇（TC）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的总胆固醇（TC）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人总胆固醇（TC）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：54nmol/ml 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
总胆固醇测定试剂盒说明书
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。
TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理：利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：异丙醇50mL（自备）。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂四：液体100μL×1瓶，4℃保存TC标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：1、组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即TC待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。
2. TC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC工作液置于37℃水浴10min。
用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
血清总胆固醇测定标准操作规程
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
总胆固醇检测试剂盒(COD-PAP 双试剂比色法)说明书
主波长/次波长 反应类型 反应方向
500/600nm 终点法
升反应(+)
计算公式：
血清、血浆等液体样本(空白调零)： FC(mmol/L)=A 测定/A 标准×5
血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：
FC(mmol/L)=(A 测定-A 空白)/(A 标准-A 空白)×5 组织样本(空白调零)：
V1=细胞样本取样量（ml）
V2=样本匀浆液总体积（ml）
参考区间： 健康成年人理想范围：<5.2mmol/L(<200mg/dl)
边缘升高：<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)
升高：≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)
备注：TC 标准(5mmol/L)=442.48mg/dl
产品组成：
名称
规格
保存条件
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 双试剂比色法)
100T
4℃
试剂(A):
Good'sBuffer
Good's 溶液
显色剂
2×25ml
4℃
活性剂、稳定剂
试剂(B):
胆固醇氧化酶
COD-POD 溶液 4-氨基安替比林
2×25ml
-20℃避光
CEH、POD
临用前，按 A：B=1：1 混合，即为 COD-PAP 工作液，4℃保存。
FC(mmol/g)=A 测定/A 标准×5×V2/(m×1000) 组织样本(全自动生化分析仪)：
FC(mmol/g)=(A 测定-A 空白)/(A 标准-A 空白)×5×V/(m×1000) 细胞样本(空白调零)：
FC(mmol/L)=A 测定/A 标准×5×V2/V1
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序.
总胆固醇测定试剂盒标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。
2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。
3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。
5. 原理OH ESPAS O H O H O O H 222222244+−−−→−+-+-∆+−−−−→−++−−−→−+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮游离胆固醇脂肪酸游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。
由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）；R2：胆固醇氧化酶、 -氨基安替比林；校准品：胆固醇7.3试剂稳定性：未打开试剂于2℃-8℃避光保存可至失效期。
校准品应密闭保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
格锐思生物科技总胆固醇含量试剂盒说明书
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量试剂盒说明书（货号：G0909F分光法48样）一、产品简介：总胆固醇（TC）包括游离胆固醇和胆固醇酯。
是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC），FC在胆固醇氧化酶作用下被氧化生成4-胆甾烯酮和H2O2；接着与4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在510nm处有特征吸收峰，通过检测510nm处吸光值即可得出TC含量。
二、试剂盒的组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液粉剂μg×1瓶4℃保存临用前加80mL的异丙醇，混匀备用。
试剂一粉剂mg×1支4℃保存用前甩几下使试剂落入底部，再加3.2mL蒸馏水，充分震荡溶解试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三液体12mL×1瓶4℃保存标准品液体1mL×1支4℃保存三、所需的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、异丙醇、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。
四、总胆固醇（TC）含量测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g组织样本加入研钵中，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃或室温离心10min，取上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为1：5~10的比例进行提取。
②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。
③液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程《血清总胆固醇测定操作规程》一、目的本规程旨在规范血清总胆固醇测定的操作步骤，确保测定结果准确可靠。
二、适用范围本规程适用于各医疗机构进行血清总胆固醇测定的操作。
三、仪器与试剂1. 仪器：分光光度计2. 试剂：血清总胆固醇测定试剂盒四、操作步骤1. 准备工作a. 开机预热分光光度计，确保仪器处于工作状态。
b. 取出血清总胆固醇测定试剂盒，检查试剂有效期和存储条件。
c. 准备标准品和样本待测血清。
2. 操作流程a. 取出试剂盒中的标准品，按照说明书稀释成不同浓度。
b. 加标准品和待测血清分别加入试剂管中，混匀后置于恒温水浴中反应一定时间。
c. 反应结束后，使用分光光度计在特定波长下测定吸光值。
3. 结果计算a. 使用标准品的吸光值绘制标准曲线。
b. 读取待测血清的吸光值，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、结果判定根据患者血清总胆固醇的测定值，参照相关标准进行结果判定和医疗建议。
六、注意事项1. 操作人员应熟练掌握仪器和试剂使用方法，严格按照操作规程进行操作。
2. 试剂及仪器的质量控制应在每次实验前进行验证。
3. 操作过程中应注意个人防护，避免污染试剂和样本。
七、记录与保存1. 对每次测定的操作步骤、结果和质控记录进行详细记录，确保测定结果可追溯。
2. 相关记录资料应按规定保存，以备查。
八、附则对于特殊情况的处理和异常结果的分析，应根据实际情况进行相应操作，并记录详细的处理过程。
以上即为《血清总胆固醇测定操作规程》，希望操作人员严格按照规程执行，确保测定结果的准确性和可靠性。
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总胆固醇测定试剂盒标准操作程序
1. 摘要
本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆样本中总胆固醇的含量。
2. 适用范围
程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总胆固醇的含量。
3. 职责
使用AU5811自动生化分析仪进行测定总胆固醇浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的总胆固醇测定试剂盒采用的是氧化酶法。
5. 原理
O
H ESPAS O H O H O O H 222222244+−−−→−+-+-∆+−−−−→−++−−−→−+醌亚胺氨基安替比林胆甾烯酮
游离胆固醇脂肪酸
游离胆固醇总胆固醇过氧化物酶胆固醇氧化酶胆固醇酯酶
ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺
血清中的总胆固醇在胆固醇酯酶的作用下水解成游离胆固醇和脂肪酸,游离胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下,氧化成Δ4-胆甾烯酮和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和ESPAS 反应生成红色化合物醌亚胺。
由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内，550nm 处吸光度的变化值与样本中总胆固醇的含量成正比
6. 仪器
AU5811自动生化分析仪
7. 试剂
7.1 试剂来源：
上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2 试剂瓶内主要成分：
R1：胆固醇酯酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPAS （ADPS ）；
R2：胆固醇氧化酶、4-氨基安替比林；
校准品：胆固醇
7.3 试剂稳定性：
未打开试剂于2℃-8℃避光保存可至失效期。
校准品应密闭保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制
8.1校准程序：
使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：
罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：
按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：
按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：
分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
9.标本
9.1标本要求：
血清及肝素或EDTA抗凝血浆2-8℃保存可稳定7天，或冰冻保存，但不能反复冻融。
9.2标本拒收：
由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。
9.3标本处理：
收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。
10.测定程序：
10.1分析参数：
详见参数表。
10.2操作步骤：
签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
10.3获取结果：
在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。
10.4结果报告：
对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。
可报告的结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。
11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。
无需手工计算，每个标本的结果自动打印。
12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。
13.操作性能：
13.1可报告范围：
0.09-25.85mmol/L范围内线性相关系数r≥0.99，线性相对偏差应在±15%范围内。
13.2特异性/干扰：
样本中Vc≤4g/L，血红蛋白≤5g/L,胆红素≤684 mol/L，甘油三酯≤20mmol/L对测定结果的影响可忽略。
13.3精密度：
批内精密度CV≤6%；
批间相对极差≤6%
13.4准确度：
用质控品做样本，其测定结果应在该批质控品规定的范围内。
14.注意事项：
14.1试剂盒仅用于体外诊断，测定结果仅作为相关疾病的临床辅助诊断依据。
14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器内在测定，其余试剂盖紧
后放回冰箱。
14.3如试剂变浑浊，或以纯化水作空白，试剂在550nm处吸光度值大于0.08A，请勿使
用。
14.4本试剂中含有叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
如不慎接触，应用大量
清水冲洗，如误服，应立即上医院诊治。
15.参考范围：
《全国临床检验操作规程》第三版提出的判断标准：
理想范围：＜5.2mmol/L（＜200mg/dl）
边缘升高：5.23-5.69mmol/L（201-219mg/dl）
升高：≥5.72mmol/L（≥220mg/dl）
各实验室应建立自己的参考值范围。
16.临床意义：
临床上胆固醇浓度受年龄、饮食、遗传和工作状况影响。
高TC血症是冠心病的主要危险因素之一。
高TC有原发和继发两种，包括见于家族性高胆固醇血症、家族性ApoB 缺陷症、多源性高TC、混合性高脂血症以及其它的如肾综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病，肥大性骨关节炎，老年性白内障和牛皮癣等血清胆固醇也会增高。
在恶性贫血，溶血性贫血以及甲状腺机能亢进时，血清胆固醇降低，其他如感染和营养不良等情况下，胆固醇总量常见降低。
17.支持性文件：
17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。
17.2AU5811自动生化分析仪分析参数。
17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。
18.参考文献
1.叶应妩等，全国临床检验操作规程》第三版
2.W.Richmond.Clin.Chem.19:1350(1973).
3.C.Allain.,et al.Clin.Chem.20:470(1974)。