超高效液相色谱–质谱法测定动物源食品中硝 基呋喃类代谢物残留量的方法验证
液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定
0引言测量不确定度是指表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数［1］。
《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》（RB/T214—2017）中要求检验检测机构应建立相应的数学模型，给出相应检测能力评定测量不确定度的案例［2］。
硝基呋喃类药物是一类广谱抗生素，广泛应用于水产养殖［3］。
硝基呋喃类药物具有遗传毒性，有可能导致基因变异，我国已于2002年颁布禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令。
硝基呋喃类药物原型药在动物体内虽代谢迅速，但代谢物会与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物。
一般判定动物源性食品中硝基呋喃类药物的残留状况都是以其硝基呋喃类代谢产物的含量作为检测依据，硝基呋喃类药物主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，其对应的代谢物分别为3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）。
液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、定性定量准确，成为目前硝基呋喃类代谢物主要的检测方法。
陈茹等［4］、吕燕［5］、蒙丽琼等［6］、林功师［7］、郭丽娜等［8］、李绪鹏等［9］、邢丽红等［10］都对液相色谱-串联质谱法测定硝基呋喃类代谢物的不确定度进行评定，但在对内标物引入的不确定度的分量上，未充分考虑内标法的特点，即内标物引入不确定度来自内标添加量的重复性。
本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012）对《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度进行评定，分析不确定度的主要来源，保证检测结果准确可靠。
1材料与方法1.1仪器与设备液相色谱-串联质谱联用仪（Xevo TQ-XS型号，配有电喷雾ESI离子源，美国Waters公司生产）；电子液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定*吴祥庆，杨姝丽，吴明媛，黄鸾玉，谢宗升，蒙源，庞燕飞（广西壮族自治区水产科学研究院，广西南宁530021）摘要：文章根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），探讨采用《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱－串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度，建立相应数学模型，评估不确定度的测定结果。
硝基呋喃类检测方法及标准
硝基呋喃类检测方法及标准硝基呋喃简介：硝基呋喃类（Nitrofurans）抗菌剂是一种广效性抗生素，因价格较低廉且疗效佳，广泛用于畜禽及水产养殖鱼类，用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎，养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等，于饲料中添加或养殖药浴使用。
硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因。
危害性：长时间或大剂量应用硝基呋喃类药物均能对动物体产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大。
兽医临床上经常出现有关畜禽类呋喃西林、呋喃唑酮中毒的事件,呋喃它酮为强致癌性药物，呋喃唑酮可诱导鱼的肝脏发生肿瘤。
硝基呋喃类药物在动物体内的半衰期短，代谢速度非常快，但其代谢产物能够与组织蛋白质紧密结合,以结合态形式在体内残留较长时间，且毒性更强，是硝基呋喃类药物的标记残留物，若水产品体内有大量的呋喃药物残留，会使人产生耐药性，在临床中降低此类药物的治疗效果，并且此类药物残留对人体也有致癌、致畸胎等副作用。
国内外对之重视程度：1995年起欧盟（EuropeanUnion）禁止硝基呋喃类抗菌剂在食用之畜禽及水产动物使用，并严格执行对输入之食用鱼、虾及禽类进行硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦起而效尤；1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物；我国农业部文件:农牧发[2002]1号规定食品性动物中呋喃唑酮为不得检出。
呋喃唑酮、呋喃妥因也在1995年被禁用。
科标生物检测中心拥有国际先进的检测仪器和雄厚的技术力量，可以依据多种检测标准，提供硝基呋喃类相关检测服务。
现有检测方法及标准：检测方法参考标准动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法GB/T 21311-2007高效液相色谱/串联质谱法水产品中呋喃唑酮残留量的测定SC/T 3022-2004 高效液相色谱法畜禽肉和水产品中呋喃唑酮的测定SB/T 10387-2004 高效液相色谱法水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定农业部1077号公告-2-2008高效液相色谱法水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮代谢物的快速测定DB33/T 744-2009 酶联免疫法动物源性食品中呋喃唑酮残留标示物残留检测农业部1025号公告-17-2008酶联免疫法。
动物源食品中呋喃酮残留检测方法——高效液相色谱法
４ ３ ３ 旋 转 蒸 发 仪 ．．
４． ４ 旋 涡 混 合 器 ３．
４ ３ ５ 真 空 泵 ．．
４． ． ３６ 研 杖
４４ ８ 结 果计算 和 表述 按 下 式计 算 供 试组 织 中 ．．
呋喃唑酮 的残 留量 ：
３ ０ ｍ ×１ｍｍ （． ． ， 端 ０ｒ ａ ５ ｉｄ ） 下
４． ６ 甲 醇 ２．
４ ２７ Ｃｔ １ｖ －４ ￣，使 用前分 别 用二倍 体 积 ． ８ ０ ｍ－ ０ｍ ， 的 正 己烷 、 乙酸 乙酯 和 甲醇 依次 冲 洗 ， 抽 气至 干 ， 并
晾 ］后待 用 。 二 ４ ２ ８ ０ ０ ５ ｏ／ ． ． １ ｍ ｌＬ磷酸 溶液
农 业部 于 ２ ０ 年 １ ０１ １月 １日发 布 农 牧发 ［ ０ １ ３ ２ ０ ］ ８号 文， 布 ｌ 发 ０种 动物 源 食 品 中兽 药 残 留检测 方 法。 疗法之 一 ： 动物 源食 品中唛 喃唑 酮残 留检测 方 法一 高效液相 色谱 法 ， 全文 如下 ：
ห้องสมุดไป่ตู้
动物源食品中呋 喃唑 酮残 留检测方法一 高效液相色谱法
ｌ 范 围 正 己烷 冲洗 ， 真空 抽 干后 ， 乙酸 乙酯 洗脱 ， 用 洗脱 液
本 标准 规 定 ｒ动物 源 食 品中呋 喃唑酮 残 留量的
检 测的制 样 和 高效液相 色谱 测 定方法 。
减压浓缩 至于后 用流动相 溶 解 ， 氧化 铝小柱 后 ， 过 用
高 效液相 色谱 测 定。
４２９ 呋 喃哇 酮标 准溶 液 称 取 呋 哺 唑 酮对 照 品 ．．
约 １ｒｇ １ ５ 二 ４ ， 密称 定， ５ ｍｌ 色量 瓶 ０ ．０＂ 燥 ｈ 精 ａ Ｃ１ 置 ０ 棕
硝基呋喃类药物的残留检测(下)
模式检 测、三离子原则 、外标法定量 。
定 量 限 （ Ｌ Ｑ ５ 甲基 吗 啉 －３ 氯 Ｏ ） － － 基 一２ 烷 基 酮 （ 唑 ＡＭ０Ｚ 、一 氯 基 － － ）３ ２ 唑 烷 基 酮 （ ＡＯ ） 为 Ｏ １ ／ ， 氨 Ｚ均 ． ｍｇ ｇ 基 脲 （ Ｅ ） 一 氯 基 一 乙 内 酰 Ｓ Ｍ 、ｌ 脲 （ ＡＨＤ） 均 为 ０ ５ ｇ ｇ 检 测 限 ．ｎ ／ ； （０ Ａ Ｉ Ｄ） Ｍ０Ｚ Ａ 、 ＯＺ 均 为 ０ ０ｎ ／ ．５ ｇ ｇ， Ｓ Ｍ 、ＡＨＤ 均 为 ０ １ｇ ｇ 在 添 加 浓 Ｅ ． ／。 ｎ 度 ０ ５ ～ １ｎ ／ ． ０ ｇ ｇ范 围 内 ＡＭＯＺ 回
与用 ＡＰ Ｉ ＴＳ 分 析 硝 基呋喃 代谢 Ｃ和 １
物 相 比 ，Ｅ Ｉ 敏 度 更高 ，且 不 易造 成 Ｓ灵
四极 杆 串联质谱 仪定性 ， 用同 位素 内
标 法 定 量。 检 出 限 均 为 ０ ３ ｇ ｌ 。 ． ／
在 ０ ３ １０和 ５ ０“ ／ ｇ ．、 ． ． ｇ ｋ ３个 浓 度
司红彬 ，梁 军
华 南农 业 大 学 ．广 东 广 ＇ ５０ ４ ｉ ｔ 、 ｔ６ ２ 【
（ 二）高效 液相色谱一 串联质谱法 由于 液相 色谱 一紫外法 、液 相 色谱 一
质谱 法 灵敏 度 较 差 ，液 相 色 谱 一串 联
为 ６ ． ％ ～ ８ ． ％ ，ＡＯ ３９ ９４ Ｚ回收 率 为
维普资讯
鞘 璃 暴 豢药
ｉ
。｜ 《 ｌ
誓 一； 。 ｉ： 誊 一 残 乙醚溶 剂提取 ， 动物 源性样 品 中呋 使 喃 唑 酮、呋 喃 西林 、呋 喃 它酮、呋 喃 妥 因等 ４种 硝基呋 喃类 游离态 代谢 物 进 入提 取液 ， 而结 合态 代谢物 保 留在 残 渣 中。在酸 性 条件下 用 ２一硝 基苯 甲醛分 别衍生游离态和结 合态代谢物 ， 经乙酸乙酯提取浓缩后 ， 用液相色谱 一
高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物
２６ 混合 型 阳离 子交 换柱 ： ． 规格 为 ６ ｍ 。 ０ ｇ ２７ 微孔滤 膜 ： 格 为 ０２ ｍ。 ． 规 ．１ ｘ ２８ 呋喃西 林 （ ｉｏｕａｏ ｅ ： ． Ｎ ￣ ｆｒ ｎ ） 纯度 Ｉ９ ％。 ｚ ＞ ９ ２９ 呋喃妥 因（ ｉｏｕ ｎｉｎ ： 度 Ｉ９ ％。 ． Ｎ ｔ ｆａ ｔ ）纯 ＞ ９ ｒ ｏ ２１ 呋 喃它酮 （ ｕＭ ａ ｏ ｅ ： 度 ＞９ ％。 ． ０ Ｆ ｒ ｔｄ ｎ ）纯 １ ９ ２１ 呋 喃唑酮 （ ｕａｏｉｏ ｅ ： 度 Ｉ９ ％。 ．１ Ｆ ｒｚｌ ｎ ）纯 ＞ ９ ｄ ２１ ２ ． ２ ％甲酸 溶液 ： 甲酸＋ ＝ ＋ ８ 水 ２９。 ２１ ｌ ．３ ％氨水 溶液 ：５ ３ ％氨水＋ ＝ ＋ ９ 水 １９ 。 ２１ 固相 萃取 柱洗脱 液 ：％氨水＋ ． ４ ｌ 甲醇＝ ０ ７ 。 ３ ＋０ ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准 贮 备 液 （０ ｍ￣ ． ５ １０ ｍＬ ： 称 取 ４ 种 硝 基 呋 喃 类 药 物 （． ，． ， ） ２８ ２９ ２１ ，．１ 各 １ ０ （ 确 到 ００ ０ ｇ 于 １ｍＬ容 ． ２１ ） ０ ． ｇ精 ０ ． １） ０ ０ 量瓶 中 。 乙腈溶 解定 容 。一 ０ 用 ２ ℃保存 ６个月 。 ２１ 硝 基 呋 喃 类 药 物 混 合 标 准贮 备 液 （０ １ ／ ．６ ２ ０ｘ ｇ
中 的硝 基 呋 喃 类 药 物 。 缩 近 干 ， ２ 甲酸 溶 解 ， 混 合 浓 用 ％ 经
除非 另有 说 明 ． 分 析 中仅使 用 确 认 为分 析 在 纯 的试 剂 和 Ｇ ／ ６ ２ ２ ０ （ 析实 验室 用水 规 ＢＴ ６ ８ — ０ ８ 分 格 和试 验方 法》 中规定 的二级 水 。
一、 食品中可能违法添加的非食用物质名单(卫生部公布)
一、食品中可能违法添加的非食用物质名单（卫生部公布）二、食品中可能滥用的食品添加剂品种名单（卫生部公布）注：滥用食品添加剂的行为包括超量使用或超范围使用食品添加剂的行为三、禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录（农业部公布）一、肾上腺素受体激动剂1．盐酸克仑特罗（Clenbuterol Hydrochloride）：中华人民共和国药典（以下简称药典）2000年二部P605。
β2肾上腺素受体激动药。
2．沙丁胺醇（Salbutamol）：药典2000年二部P316。
β2肾上腺素受体激动药。
3．硫酸沙丁胺醇（SalbutamolSulfate）：药典2000年二部P870。
β2肾上腺素受体激动药。
4．莱克多巴胺（Ractopamine）：一种β兴奋剂，美国食品和药物管理局（FDA）已批准，中国未批准。
5．盐酸多巴胺（Dopamine Hydrochloride）：药典2000年二部P591。
多巴胺受体激动药。
6．西马特罗（Cimaterol）：美国氰胺公司开发的产品，一种β兴奋剂，FDA 未批准。
7．硫酸特布他林（Terbutaline Sulfate）：药典2000年二部P890。
β2肾上腺受体激动药。
二、性激素8．己烯雌酚（Diethylstibestrol）：药典2000年二部P42。
雌激素类药。
9．雌二醇（Estradiol）：药典2000年二部P1005。
雌激素类药。
10．戊酸雌二醇（EstradiolValerate）：药典2000年二部P124。
雌激素类药。
11．苯甲酸雌二醇（EstradiolBenzoate）：药典2000年二部P369。
雌激素类药。
中华人民共和国兽药典（以下简称兽药典）2000年版一部P109。
雌激素类药。
用于发情不明显动物的催情及胎衣滞留、死胎的排除。
12．氯烯雌醚（Chlorotrianisene）药典2000年二部P919。
13．炔诺醇(Ethinylestradiol)药典2000年二部P422。
高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中硝基呋喃类代谢物残留
［ 要］ 摘 采用 同位素 内标稀释技 术建立 了动 物性食 品中呋喃唑酮 、呋喃 它酮 、呋喃 西林 、呋 喃妥 英代 谢 物 的测 定 方法 ，在 酸 性条 件 下 水解 ，２ 邻硝 基 苯 甲醛 溶 液 （一 一 ２ ＮＡ Ｂ １进行衍 生化 ， 乙酸 乙酯提取 ， 固相萃取柱 Ｏ ｓ Ｌ ａ ｓ Ｂ富集净化 ，三级 四极 串联 电 ｉＨ 喷 雾质谱 正 离子模 式 测定 ，同位 素 内标 定量 。本 方 法检 出限 ０１ ｇ ｇ ． ／ ，加 标 回收 率 ｋ ６ ．％ ３７ ５３ ８ ．％，相对 标准偏 差 ３１ １ ． ．％ ２６ ％。该方 法灵敏度 高、重现 性好 、定性准确 可 靠 。通 过对 实际样 品 的检 测 ，证 明可 用于动 物 源性食 品 中四种 硝基呋 喃代谢 物残 留的
衍 生物 、 内标物 用 甲醇溶解 ，Ｓ Ｍ 及其相应衍 生 Ｅ
测定 。
［ 关健词］ 硝基 呋 喃 类 代 谢 物 ； 液质 联 用 ； 残 留
硝 基呋 喃类 药 物是 人工 合成 的具 有 ５ 硝 基 １ １ 仪 器和 试 剂 一 ．
｝ Ａ Ｉ０ ０三 级 四极杆 质 谱 仪 Ｐ４ ０
基本 结构 的广 谱抗 菌药 物ｌ １ ＇ 一类 具 有潜在致 ，是
品净 化 效率 又 得 到稳 定 回 收率 ，最低 检 测 限 为 用 盐 酸 调 节 ｐ 值 ６３并 定 容 １０ ０ｍ） Ｈ ． ０ １。
０１ ． ｋ ｇ。
标准储 备液 ：Ａ Ｚ Ｍ Ｚ ＨＤ及其 相应 Ｏ 、Ａ Ｏ 、Ａ
１ 试 验 方 法 与 过 程
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量
液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量广东省珠海市斗门区动物卫生监督所 孟轩 梁可昌【摘 要】本文介绍液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类药物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）代谢物残留方法。
试样中加入2-硝基苯甲醛溶液，在酸性条件下衍生，乙酸乙酯提取，涡旋离心提取，以乙酸胺和甲醇溶液进行梯度洗脱。
在浓度0.5～20.0纳克/毫升范围内，4种硝基呋喃类代谢物呈良好线性关系，相关系数均不小于0.995，检出限为0.5微克/千克。
在0.5微克/千克,1.0微克/千克,5.0 微克/千克添加水平下，目标分析物的加标回收率为82.0%～103%，相对标准偏差为0.996%～4.46%。
该方法具有操作简单、快捷、灵敏度高等特点，可用于水产品中硝基呋喃类等药物残留的批量检测。
【关键词】水产品；液相色谱-串联质谱法；硝基呋喃类硝基呋喃类药物是通过影响细菌体内的氧化还原酶体系，干扰细菌正常代谢的一类广谱抗生素，曾普遍应用于水产、畜牧业养殖等行业中疾病的预防和治疗。
后续学者陆续研究发现，该类药物对对人体具有致畸胎作用，可能诱发癌症等重大疾病。
为此，2019年12月农业农村部发布的第250号公告中将其归类为食品动物中禁止使用的药物。
硝基呋喃类常用的有４种：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。
硝基呋喃类药物进入鱼体后的代谢产物分别为：3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、氨基脲（SEM），由于这些代谢产物与蛋白质结合而相当稳定，所以目前主要通过检测代谢物的残留量，反映硝基呋喃类药物的残留状况。
目前检测兽药残留常见的方法主要有：高效液相色谱－串联质谱法、液相色谱法、常规理化检测法、酶联免疫法、毛细管电泳法等。
本研究基于《国家标准GB31656.13-2021食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》，结合实验室设备及当地检测需求，建立了准确、高效、快速的硝基呋喃代谢残留量检测方法。
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DP (volts) 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000 80.000
EP (volts) 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000 10.000
Keywords
Ultra High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, Animal Derived Food, Nitrofuran Metabolites, Method Validation
超高效液相色谱–质谱法测定动物源食品中硝 基呋喃类代谢物残留量的方法验证
母昌立 等
摘要
为提高检测能力，本实验室验证了农业部781号公告-4-2006《动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的测 定，高效液相色谱法–串联质谱法》的适用性。本方法验证主要从适用范围、标准曲线、线性、灵敏度、 精密度及回收率进行，通过试验发现，本实验室的适用范围标准曲线、线性、灵敏度、精密度及回收率 均满足该标准的要求，可以利用该标准对外开展检测业务。
3.2. 检测方法
色谱柱：C18，50 mm × 2.1 mm，3 µm；流动相：0.1%甲酸水溶液(A) + 0.1%甲酸乙腈溶液(B)，梯度 洗脱，梯度见表 1；.3 柱温：40℃；进样量：5 µL；离子源：电喷雾 ESI，正离子；扫描方式：多反应监 测 MRM；气帘气：30.0；离子源温度：650℃；Gas 1：60.0；Gas 2：55.0；监测离子对及对应质谱参数， 见表 2。
Method Validation of Determination of Nitrofuran Metabolites in Animal Derived Food by Ultra High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
Changli Mu, Bei Wang, Zhijuan Chi, Jiao Wang, Yizheng Zhou, Chunchun Wang
Q1 Mass (Da) 212.100 240.100 252.200 340.400 209.200 209.200 236.100 236.100 249.200 249.200 335.200 335.200
Q3 Mass (Da) 168.000 134.000 134.000 296.200 166.200 192.100 133.900 103.900 134.100 104.100 291.100 262.200
Open Access
1. 引言
标准方法是一种经过全面研究的方法，清楚而严密地说明所需条件和操作程序，用于对物质一种或 多种特性值进行测量。CNAS-CL01:2018《检测和校准实验室能力认可准则》[1] 7.2.1.4 条款规定：“当 客户未指定所用的方法时，实验室应选择适当的方法并通知客户。推荐使用以国际标准、区域标准或国 家标准发布的方法，或由知名技术组织或有关科技文献或期刊中公布的方法，或设备制造商规定的方法。 实验室制定或修改的方法也可使用。”在 7.2.1.5 条款中规定：“实验室在引入方法前，应验证能够正确 地运用该方法，以确保实现所需的方法性能。”2018 版《检验检测机构资质认定评审准则》[2] 4.5.14 条 款规定：“检验检测方法包括标准方法、非标准方法(含自制方法)。应优先使用标准方法，并确保使用标 准的有效版本。在使用标准前，应进行证实。”因此，实验室在使用标准方法前，需要对实验室使用标 准方法的技术能力是否达标进行验证。
Abstract
To improve detection capability, the laboratory verified the applicability of Ministry of Agriculture Notice No. 781-4-2006 Determination of nitrofuran metabolites in animal derived food by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. This method is mainly verified from the test coverage, standard curve, linearity, sensitivity, precision and recovery rate. Through the test, it is found that the standard curve, linearity, sensitivity, precision and recovery rate of the applicable range meet the requirements of the standard. The standard can be used to conduct external testing operations.
A (%)
B (%)
0
0.3
95
5ห้องสมุดไป่ตู้
5
0.3
65
35
8
0.3
65
35
8.1
0.3
95
5
DOI: 10.12677/aac.2019.93021
162
分析化学进展
母昌立 等
Table 2. The acquisition parameters of UPLC-MS/MS for analysis of nitrofuran metabolites and their isotopic labels 表 2. 硝基呋喃类代谢物及其同位素标记物的主要质谱参数
2.2. 试剂与耗材
AOZ、AMOZ、AHD、SEM 浓度均为 100 mg/L，农业部环境保护科研监测研究所；AOZ-D4 (>99.0%)、 AMOZ-D5 (>99.0%)、AHD-13C3 (>99.0%)、SEM-13C15N2 (>99.0%)，德国 Witega 公司；二甲基亚砜 (>99.0%)、2-硝基苯甲醛(>99.0%)，日本东京化成工业株式会社；乙酸铵(色谱纯)，美国 fisher 公司；GHP 微孔滤器(0.22 μm)，美国 waters 公司。
关键词
超高效液相色谱–质谱法，动物源食品，硝基呋喃类代谢物，方法验证
Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). /licenses/by/4.0/
取 10,000 r/min 匀浆 1 min 的试料 2 ± 0.05 g 置离心管中，加 100 ng/mL 的 AOZ-D4，AMOZ-D5， AHD-13C3，SEM·HCl-[1,2-15N2;13C]标准工作液 50 µL，再加 4 mL 1 mol/L 盐酸溶液 0.5 mL，50 mmol/L 2-硝基苯甲醛的二甲亚砜溶液 150 µL，涡旋混匀。37℃避光水域 16 h。
衍生物加 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液 5 mL，用 5 mol/L 氢氧化钠溶液调节 PH7.2-7.4，加乙酸乙酯 5 mL， 涡旋，中速振荡 5 min，2000 r/min 离心 15 min，吸取上清液，加乙酸乙酯 5 mL，重复提取一次，合并上 清液于 50℃氮吹。初始流动相 1.0 mL 溶解残余物，经滤膜，供高效液相色谱–串联质谱法测定。
2.3. 仪器设备
5500 型高效液相色谱–串联质谱仪：美国 AB 公司；XS205 电子天平：瑞士 METTLER TOLEDO 公 司；3-18K 高速离心机：德国 Sigma 公司；涡旋振荡器：德国 IKA 公司；恒温水浴锅(DK-600)，上海冉 绘实业有限公司。
3. 试验方法
3.1. 前处理方法
Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2019, 9(3), 160-167 Published Online August 2019 in Hans. /journal/aac https:///10.12677/aac.2019.93021
The Supervision, Inspection Testing Center of Agricultural Quality Security, Taicang Jiangsu
Received: Jul. 26th, 2019; accepted: Aug. 15th, 2019; published: Aug. 22nd, 2019
Table 1. The mobile phase gradient of liquid chromatography for the separation of nitrofuran metabolites 表 1. 分离硝基呋喃类代谢物的液相色谱流动相洗脱梯度
Time (min)
Flow (mL/min)
DOI: 10.12677/aac.2019.93021
161
分析化学进展
母昌立 等
Figure 1. The Chemical structures of AOZ (a), AMOZ (b), AHD (c) and SEM (d) 图 1. AOZ (a)、AMOZ (b)、AHD (c)和 SEM (d)的化学结构式
母昌立，王 蓓，迟志娟，王 姣，周益政，王淳纯
江苏省太仓市农产品质量监督检验测试中心，江苏 太仓