临床微生物SOP-穿刺液涂片标准操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程
临床微生物检验基本技术标准操作规程微生物检验实验室标本处理标准操作规程 (137)微生物检验实验室标本接种标准操作规程 (138)微生物检验实验室细菌鉴定操作规程 (139)微生物检验实验室不染色标本检查法标准操作规程 (140)微生物检验实验室革兰染色标准操作规程 (141)微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程 (142)微生物检验实验室墨汁染色标准操作规程 (144)微生物检验实验室药物敏感试验标准操作规程 (145)取粪便脓血部位标本根据检验申请单要求选择平板，立即接种。
4.6 尿标本接收标本后，立即对标本进行编号、登记，将尿标本混匀，用10ul定量接种环立即接种血琼脂平板、麦康凯平板，分离细菌和菌落计数。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室标本接收标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0563灭菌。
用接种环伸入菌种管内挑取移种之菌落。
伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上蜿蜒划线。
将接种环垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后穿刺线推出接种环。
4.4 穿刺培养法4.4.1 此法用于保存菌种，观察动力及某些生化反应。
4.4.2 以接种环挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种环。
4.5 液体培养基接种法用灭菌接种环挑取菌落或标本。
在试管内壁于液面交界处研磨，使细菌混匀在液体培养基中。
参考文献[1] 周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员批准人：革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。
检验医学SOP文件8--微生物与血库作业指导书
ISO15189质量管理体系范本文件（第八册）微生物与血库作业指导书文件编号：ABCD-3-WS-01~10ABCD-3-WS-01~05第A版编制：审核：批准：生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科目录修订页结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定1 检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2 原理若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长，管中的营养成分和氧气将不断被消耗，MGIT 培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。
一旦培养管内氧气被利用，管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。
BACTEC MGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度，从而判断管内分支杆菌生长情况。
3 标本要求（1）标本类型：深部痰液。
（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。
（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本。
4 容器和添加剂类型使用灭菌器皿盛放标本，不加任何防腐剂。
5 试剂（1）试剂名称：Middlebrook7H9培养肉汤，OADC营养添加剂，抑菌剂PANTA。
（2）试剂生产厂家：美国BD生物技术有限公司（3）包装规格：7X100（4）试剂盒组成：培养肉汤，营养添加剂，抑菌剂6仪器设备：BACTEC MGIT960全自动分支杆菌培养仪；美国BD生物技术有限公司。
酒精灯显微镜、超净工作台、台式离心机7校准程序(送XX市计量质量检测研究所校准)8操作步骤见仪器操作维护规程：BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程；9质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动10 生物参考区间阴性11 患者检验结果的可报告区间阴性/阳性，药敏及菌种鉴定见BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程；12 临床意义：分支杆菌的药敏试验有助于筛选有效的抗结核药物，提示药物所需的治疗剂量，供临床医生和防痨医生参考；同时，还可了解耐药株的流行情况，为抗结核药物的合理应用提供试验依据。
穿刺液标本细菌学检验标准操作规程
穿刺液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围穿刺液标本培养。
3.标本3.1 标本类型胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。
3.2 标本采集采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2ml，注入无菌试管，或抽取穿刺液1-2ml注入多功能液体培养瓶，或抽取穿刺液2-5ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。
如怀疑厌氧菌感染，应做床边接种或接种运送培养基。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本不是无菌留取，容器不符合要求。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不超过2小时。
4.试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查脓性标本直接涂片。
浆液性标本先离心（3000r/min）15分钟，取沉淀物涂片作革兰染色，观察有无细菌，以及细菌的形态。
6.2 分离培养6.2.1 一般细菌培养接种于接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯（或EMB、中国蓝）琼脂平板，置于5%-10%CO2环境中，35°C培养18-24小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断。
6.2.2 增菌-分离培养法将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆盖整个固体面，然后置35°C孵育培养箱（固体面在上，液体在下）。
次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体是否浑浊。
临床微微生物标本的采集注意事项、接种及涂片染色
40
革兰氏染色步骤
①龙胆紫液染10s（染料着染） →水洗
②碘溶液染10s （媒染剂媒染）→水 洗
③丙酮酒精脱色10~20s （脱色剂）→水洗
④稀释的石炭酸复红10s （复染）→水洗
→干燥→镜检。
革兰氏染色注意事项
①革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色
过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性
菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被
30min内清除掉进入人体内的细菌。
可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30
分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗
菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继
续采集2套血培养。
血标本采集间隔时间
可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采 集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴 性，则继续采集2套血培养。
（五）血液及骨髓标本的采集
4、采血间隔：如第一次采集2套（4瓶）血培养 标本，在以后的2-5天不必采血，但除外心内膜 炎和导管相关性败血症。 5、儿童：采血量是总血量的1%。 6、延迟培养瓶处理: 延迟培养瓶不要放冰箱或 孵箱，放常温，尽早送往临床细菌室。 7、皮肤消毒液推荐：建议先用70-80%异丙醇去 脂，再用葡萄糖酸氯乙定消毒。
微生物标本的采集、接种 及涂片染色
湖南省第二人民医院检验科 黄露萍
一、标本采集和运送
标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要 的环节 但由于标本的采集和运送常有护士或医生或 病人自己完成，所以也是最不容易做好的事 情，而且不知道问题所在之处，造成的后果 是：阳性率低、标本污染（临床最不能接受 的问题）
2、尿标本
微生物标准操作规程六
穿刺液标本细菌学检验标准操作规程1．目的规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围穿刺液标本培养。
3．标本3.1 标本类型胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。
3.2 标本采集采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约2 ml，注入无菌试管，或抽取穿刺液1～2m1注入多功能体液培养瓶，或抽取穿刺液2～5 ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。
如怀疑厌氧菌感染，应做床边接种或接种运送培养基。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本不是无菌留取，容器不符合要求。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过2小时。
4．试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2 全自动血培养系统、多功能体液培养瓶、VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPl)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB 板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5．细菌鉴定和药敏质控参见质量管理。
6．检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查脓性标本直接涂片。
浆液性标本先离心(3 000 r／min)15分钟，取沉淀物涂片作革兰染色，观察有无细菌，以及细菌的形态。
6.2 分离培养6.2.1 一般细菌培养接种血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯琼脂平板(或EMB及中国蓝琼脂平板)，5％～10％C02条件下，35℃培养18～24小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断。
穿刺液标本细菌学检验标准操作规程6.2.2 增菌-分离培养法将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆盖整个固体面，然后置35℃孵育箱培养(固体面在上，液体在下)。
临床微生物SOP-鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物涂片标准操作规程
1．目的规范鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物涂片标准操作规程。
2．适用范围鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物。
3．检验步骤3.1 取鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物标本直接涂片，进行革兰染色，镜检。
3.2 镜检与结果报告3.2.1 在镜下若查见革兰阳性或阴性球菌，应报告“查见革兰阳性或阴性球菌”。
3.2.2若查见革兰阳性，呈N、Y、V、T等排列的棒状杆菌，报告为“找到棒状杆菌”。
3.2.3 若查见革兰阴性短小杆菌，报告为“找到革兰阴性细小杆菌，疑似流感嗜血杆菌”。
3.2.4 若查见革兰阴性双球菌，呈肾形存于细胞内外，报告为“找到革兰阴性双球菌，意思脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌”。
3.2.5 如未发现细菌可报告“未查见细菌”。
3.3 真菌涂片检查：参见《真菌涂片标准操作规程》。
3.4 抗酸染色：参见《抗酸染色标准操作规程》。
3.5 质控：每张涂片均做革兰阳性和阴性菌对照。
4．注意事项4.1 多数情况为单份标本而量少的拭子，因此在培养之后再做涂片检查。
4.2 鼻、咽拭子在制作涂片时，可加1滴无菌生理盐水于玻片上，使干燥采样拭子上的细菌或真菌涂抹均匀。
4.3 口咽部也可能出现淋病奈瑟菌，应引起注意。
参考文献[1] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL42医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明．2014.[2] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解，第3版，上海：上海科学技术出版社,2012[3] Versalovic J, Carroll KC, Funke G, et al. Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. Washington: ASM Press, 2011.。
21穿刺液标本细菌学检验标准操作规程
规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
穿刺液标本培养。
3
3.1
3.2
3.3
3.3.1
3.3.2
3.4
3.5
3.5.1
3.5.2
3.5.3
4
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
4.1
4.2
4.2.1
4.2.2
4.2.3
5
6
培养48小时无细菌生长，报告“培养2日无细菌生长”。查见细菌，报告菌名和药敏结果。
大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。
9
涂片发现细菌或培养阳性均需要及时向临床报告结果。
编 写： 审 核： 批 准：
日 期： 年 月 日
77.1Leabharlann 7.27.38
各个部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）的细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重要的诊断价值。正常穿刺液是无菌的，若从病人穿刺液中查见致病菌或条件致病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见，其次是金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌
穿刺液标本的细菌学检验SOP微-005
单位及实验室名称 项 目汉源县人民医院检验科 穿刺液标本的细菌学检验操作编号：LAB/SOP/HY/微-005日期：2010年5月3日版本：第一版，第0次修订第1页，共2页一、【标本采集】各种穿刺液标本，原则上应该请临床医师以无菌穿刺术抽取心包液和关节液1-1.5ml，胸腔积液和腹腔积液抽取量约5-10ml。
标本抽取后，以无菌操作方法将其注入无菌试管立即送检，如怀疑厌氧菌感染，应做床旁接种。
二、【检验方法】1.涂片检查（1）一般细菌涂片检查：将标本经3000r/min，离心30min，弃去上清液，取脓样或非脓样沉渣涂成均匀的薄膜。
若穿刺液呈红色，应加等量无菌蒸馏水破坏红细胞后再离心沉淀，取沉渣涂片，革兰染色镜检。
可根据所检细菌形态学和染色情况，做出初步报告：“找到革兰×性×菌，形似××菌”。
（2）结核杆菌涂片检查，做抗酸染色。
2.细菌培养（1）一般细菌培养：脓性标本可直接划线接种血平板上，置35℃培养18-24h观察结果，如为非脓性标本，由于含菌少，应先接种肉汤培养基进行增菌后，再移种血平板进行分离培养。
若有细菌生长时，应仔细观察，挑选可疑菌落，并作涂片，行革兰染色镜检，得出初步印象，然后再根据其特点进一步鉴定，若符合某细菌的鉴定依据各点则可发出报告：“有××菌生长”，若培养48h仍无细菌生长时，则可报告：“经48h培养无细菌生长”。
（2）结核杆菌培养：离心取沉淀物接种罗氏培养基，35℃下培养3-4W，观察有无细菌生长。
（3）厌氧菌培养：床旁接种或从厌氧菌运送培养基转种后，立即置厌氧环境中35℃培养24-48h，挑取可疑菌落做耐氧试验，确定为厌氧菌，按厌氧菌鉴定程序进行。
三、【检验程序】穿刺也————————————————————————————↓ ↓ ↓需氧培养 直接涂片 厌氧培养—————————— ↓ ↓↓ ↓ 革兰、抗酸染色 厌氧血平板、血平板、巧克力平板 35℃18-24h ↓ 厌氧肉汤中国蓝或麦康凯平板 肉汤增菌 镜检 ↓↓ ↓ 35℃48h 35℃24h ↓ ↓纯培养、鉴定药敏试验→ 报告结果 ←作者：肖德慧时间：2010-5-3。
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1．目的
规范穿刺液标本涂片标准操作规程。
2．适用范围
穿刺液标本，包括胸腔积液、腹水及胆汁等。
3．检验步骤
3.1 胸腔积液、腹水及胆汁：将标本经3000 r/min离心10min后取沉淀物涂片。
涂片自然干燥或烘片机烘干后进行革兰染色或抗酸染色。
3.2 镜检与结果报告：标本涂片经革兰染色，根据染色特性、形态排列，初步
报告“找到革兰阴性或革兰阳性球菌或杆菌”。
3.2.1 在镜下找到革兰阳（阴）性球菌，可报告“找到革兰阳（阴）性球菌”。
3.2.2在镜下找到革兰阳（阴）性杆菌，可报告“找到革兰阳（阴）性杆菌”。
3.2.3 如镜检未找到细菌可报告“未查见细菌”。
3.3 真菌涂片检查：参见《真菌涂片标准操作规程》、《墨汁染色标准操作规程》。
3.4 抗酸染色：参见《抗酸染色标准操作规程》。
3.5 质控：每张涂片均做革兰阳性和阴性菌对照。
4．注意事项
胸腔积液、腹水及胆汁标本涂片可以为单一菌种，也可为混合菌种。
5．危急值
无菌体液查见细菌或真菌均需按危急值报告，并记录。
参考文献
[1] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS-GL42医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明．2014.
[2] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解，第3版，上海：上海科学技术出版社,2012
[3] Versalovic J, Carroll KC, Funke G, et al. Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. Washington: ASM Press, 2011.。