电穿孔系统
ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介 ...
ECM830多功能型细胞电穿孔细胞转基因活体导入系统简介：ECM830可以满足所有体外和体内电穿孔研究的需要，并可对预处理的动、植物细胞进行融合。
该型号具有精细的电压调节，可监控所有参数，可调整脉冲间隙，这些细节是其优异品质的内在保证。
特别需要指出的是，配合BTX 提供的专用附件，可以轻松进行诸如活体转基因和导入蛋白，多肽及其他药物的研究和治疗。
应用：♦哺乳动物细胞转染♦体外／体内／离体／卵内实验♦核移植♦植物组织和原生质体的转染♦细菌和酵母的转化可靠性：方形波技术保证了更高的效率和哺乳动物细胞存活率。
通用性：利用BTX多种专业电极和新型的BTX MOS多孔板电穿孔仪，可以将仪器运用到各种电穿孔领域。
监控仪选配新的VIP 3000可以允许用户监控和记录下电穿孔过程中的主要电参数。
利用选配的通讯模块，就可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来。
多孔板电穿孔仪新的MOS-多孔优化系统利用BTX-ECM电源发生器可为研究人员提供先进的多孔技术。
ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿系统。
BTX方形波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。
ECM830应用范围广泛，包括了哺乳动物细胞和植物细胞转染，胚胎操作，核转移以及细菌和酵母转化。
ECM830的主要特点包括了：5至3000伏的电压范围；精确的电压调进，10微秒至10秒的脉冲范围，可控制的脉冲间隔，电弧淬灭功能（arc Quenching）可显示真实电压及脉冲波长数字显示屏。
更为客户提供了两年的质量保证。
ECM830主机可和BTX的各种专业及配件结合使用，使分子或药物的体外／体内导入实验更加得心应手。
技术规格操作状态：启动后内部自检界面：数字用户界面输入：110V／220V通用充电时间：最大5sec(没有延迟)电压范围：5－500V电压模式／1V分辨率505－3000V高电压模式／5V分辨率波长范围：10μsec─999μsec低电压模式／1μsec分辨率1msec─999msec低电压模式／1msec分辨率1sec─10sec低电压模式／0.1sec分辨率10μsec─600μsec高电压模式／1μsec分辨率多脉冲：1─99脉冲间隔：100msec─10sec电弧控制：电弧淬灭功能安全：脉冲发生器短路保护特点精密度及性能♦高级方波脉冲外形♦低电压模式1V分辨率及0.5％的精确率♦可监视电压、脉冲持续时间、脉冲间隔及脉冲数目安全性能♦电弧淬灭功能♦脉冲发生器短路保护♦外部安全机架可操作性能♦数字用户界面♦单一旋转数字盘控制♦在线帮助系统♦电压范围5V─3000V♦脉冲持续时间范围10msec─10sec优点♦高级的方形波技术产生更高的存活率及效率。
BIO-RAD电穿孔
与任何电穿孔缓冲液都兼容，包括Bio-Rad的Gene Pulser电穿孔缓冲液
电转化仪
仪器型号：GenePulser II
生产商：USA Bio-Rad工作原理：Gene PulserⅡ电转化仪器可用于原核细胞、酵母和哺乳动物细胞的转化。仪器采用Pulse Trac波形传送系统，能产生最精确的指数衰减的脉冲，可在电转化杯里获得最佳的细胞转化。
同时取100μl感受态加0.01ngpuc18直接电穿孔转化，检测转化效率。
9.次日观察转化子生长情况，并记录。
2．连接产物纯化
1．将连接产物转移至一1.5mlEppendorf管中，加入下列试剂:
10ul of ddH2O
2ul of 3M NaAC（PH5.2）
50ul of无水乙醇
轻轻混匀，稍微离心并将其置于-20℃放置1小时以上；
系统参数：
输入电压220-240V，50-60HZ
输入电流15A
最大输出电压和电流2500V，125A（正常负荷）
电弧时限定值1500A
输出波形Pulse Trac指数衰减，RC时间常数取决于所选的样品和电容器
输出电压调节50-2500V范围（取决于电容器）内，低电压范围（50-500V）和
高电压范围分别具有2V和10V的调节精度。
工作环境温度0-35oC
湿度0-95%，无冷凝
简易操作指南：1：打开电源
2：根据自己的情况设置参数：如电容 c=25F, 电压 v=1.8kV (0.1cm电击杯)，R=200
3:将电击杯两壁水檫干
4：电转：所产生的时间常数一般为4.6—5.0ms
美国伯乐电转化仪使用说明
Gene pulser xcell TM Electroporation system quick guide产品名称: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统产品型号: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统产品展商: 众磊（北京）生物科技发展有限公司驻沪办简单介绍Gene Pulser Xcell 电穿孔系统Gene Pulser Xcell 电穿孔系统的详细介绍【介绍】电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。
通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。
这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA 、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。
电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。
Gene Pulser Xcell 系统的设计，基于Bio-Rad 15 年来在电转化技术上经验积累，它提供指数波和方波波型选择、系统配置选择及友好的用户界面。
主要特点指数波和方波波型确保所有细胞类型（原核及真核）均可获得最佳的电转化效果Bio-Rad 专利的* PulseTrac 电路和电弧保护设计，确保可重复性并保护样品模块化设计可根据研究需要选择系统用户友好的数字化界面，具有直观的编程以控制所有参数，包括附属模块的参数包括人工操作、预设规程、用户规程、一个优化规程及其它先进功能等程序选择指数波或方波脉冲选择Gene Pulser Xcell 系统可产生指数波和方波波型，使你选择最适合你细胞的波型与规程。
指数波和方波均能有效地用于电转化及电融合。
电穿孔波型对不同类型细胞的转化效率有很重要的影响。
左，指数衰变脉冲。
当一个充电至电压为V 0 的电容器放电到细胞，加在细胞上的电压随时间以指数方式下降。
从起始电压下降到V0 / e 所需的时间称为为时间常数τ, 一种方便的脉冲时间表达方式。
右，方波脉冲。
放电到样品后截断电容器脉冲可产生方波脉冲。
电穿孔系统技术参数
电穿孔系统技术参数技术要求和参数：★（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。
（2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。
（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。
500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。
（4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω（6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增，持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔（7）主机：输出波形：指数衰减和方波两种输出波形；输出电压; 200 – 3,000伏；放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节；样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V 档位，最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位，方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增，可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔★实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件；用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。
脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。
（8）原核细胞系统输出波形：指数衰减或方波；输出电压; 200 – 3,000伏；放电容量：10, 25, 50 μF；样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增，1 – 2 次脉冲，5 sec 最小间隔（9）哺乳动物系统:系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。
(优选)电穿孔简介详解.
采用电穿孔的优点
• 本质上属于物理的方法，不采用任何化学试剂， 因此不会对细胞产生损伤
• 操作方便 • 低毒性 • 高的转染效率 • 使用于种类广泛的细胞
电穿孔的主要应用
• 导入标记基因，起到标记、指示的作用
• 导入具体的功能基因进行研究
• 导入药物、蛋白、抗体等其他分子对细胞的结构 和功能进行研究
• 如果样品量很少的话，那么产生的热量会使 得样品蒸发
• 如果由于样品的低电阻而产生电弧，那么 GPX会给出提示，并不能提供脉冲
特点: 模块化设计
系统部件
PC模块 CE模块
主机 ShockPod电击槽
特点: 友好的操作界面
• 图表化的操作界面可以设置所有的实验参数，包括附属模块的参数
特点: 可选择的程序设置
• 脉冲的间隔时间就是指2个脉冲 间的时间
• 脉冲下降是指终止电压和起始 电压值之间的差值
GPX和方波
高电压回路: 一次充电，一次脉冲。在下一次脉冲前，电容器 需要重新充电 最多只能进行2次脉冲，脉冲时间为0.05 – 5msec ，脉冲间隔为5-30sec
低电压回路: 该电路是可调的，因此可一次充电，进行多次的 脉冲 最多可进行10次脉冲，脉冲时间为0.05-100msec ，脉冲间隔为 0.1 – 10 sec
括附属模块的参数 • 提供多种操作模式，包括手动设置、预设模式、用户编
程等多种方式
主要的优点、特点：2种波型
电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化
The Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方 波
Exponential Decay
• 电容器充电到预定的电压(v0)放电后， 即向样品释放脉冲，细胞表面的电压 随时间按指数方式下降的
电穿孔技术在基因编辑中的作用
电穿孔技术在基因编辑中的作用电穿孔技术是一种在基因编辑中起到重要作用的技术。
基因编辑是指通过人为干预改变生物体基因组的特定部分，以实现对遗传特征的调控。
而电穿孔技术可以在基因编辑过程中，帮助将外源DNA 导入到目标细胞中，以实现基因的修改和功能的改变。
电穿孔技术是一种利用电场脉冲作用于细胞膜，使细胞膜发生瞬时孔洞形成的方法。
通过对细胞施加高压短脉冲电场，可以瞬时改变细胞膜的通透性，使得外源DNA能够进入细胞内。
这种技术不需要使用病毒载体或化学试剂，因此避免了可能引起细胞毒性或突变的副作用，具有较高的安全性和有效性。
在基因编辑中，电穿孔技术主要用于导入外源DNA或RNA分子，以实现对细胞基因组的修改和调控。
一种常用的应用是通过电穿孔技术将CRISPR-Cas9系统导入到细胞中，实现高效的基因敲除、插入或修复。
CRISPR-Cas9系统是一种基于细菌天然免疫系统的基因编辑工具，具有高效、精准和可定制化的特点。
通过电穿孔技术将CRISPR-Cas9系统导入到目标细胞中，可以实现对特定基因的靶向编辑，从而改变细胞的功能和特性。
电穿孔技术还可以用于导入其他外源DNA或RNA分子，如荧光标记物、报告基因、siRNA等。
通过电穿孔技术导入这些分子，可以实现对基因表达的调控和监测。
例如，可以将荧光标记物导入到细胞中，实现对特定基因的表达监测；或者将siRNA导入到细胞中，实现对目标基因的沉默和抑制。
电穿孔技术在基因编辑中的应用不仅限于体外细胞，还可以用于体内细胞和组织的基因编辑。
例如，在基因治疗中，可以通过电穿孔技术将修复基因导入到患者体内的靶细胞或组织中，以实现对遗传病的治疗。
这种方法避免了使用病毒载体的风险，同时具有较高的精准性和效率。
电穿孔技术在基因编辑中起到了重要的作用。
通过该技术，可以高效、精准地将外源DNA或RNA导入到目标细胞中，实现对基因组的修改和调控。
电穿孔技术具有安全性高、操作简单、适用范围广等优点，是基因编辑领域中不可或缺的重要工具之一。
Gene Pulser Xcell电穿孔系统 HUVEC内皮细胞转染
电穿孔转染
仪器：Gene Pulser Xcell电穿孔系统，2mm间隙电击杯（装0.1-0.4ml液体）试剂：opti-MEM无血清培养液，压过的PBS，压过的dd水，75%乙醇，质粒/siRNA 细胞：密度1-5x10＾6
步骤：
1.1瓶f12细胞。
1mlPBS洗2次，1ml胰酶消化3分钟，拍打，吹打，加终止液终止消化，加入15ml离心管，800r/5min离心。
吸净上清，用n组x
400ul opti-MEM重悬。
2.将质粒/miRNA加入电击杯，再将400ul细胞悬液加入电击杯，吹匀，注意不要吹出气泡。
或者将质粒/miRNA加入15ml离心管中的细胞悬液中，再转移到电击杯。
3.设置好参数：电压200V，电容800uF，电阻无穷大，间距2mm。
将点击杯放入仪器，点击pulse电击，取出点击杯，室温放置10min。
4.铺板或转移到培养瓶中。
5.24h后，加药处理。
注：如果要拍荧光，注意HEK-293细胞不好固定，PBS洗涤时很容易被冲掉。
电击杯的清洗：自来水冲洗，用刷子刷干净，一定不要有残留，否则影响下一次实验。
在盒子里倒入75乙醇涮一下，随后放在铝盒中，立起来，紫外照射1h，随后盖上盖子保存。
美容电穿孔导入原理
美容电穿孔导入原理
美容电穿孔导入是一种美容技术，也称为微针导入或微针电导。
其原理是利用微针或电穿孔技术，通过微小的通道将美容成分导入
皮肤深层，以提高皮肤吸收能力和促进皮肤再生。
首先，让我们来解释一下微针导入的原理。
微针导入利用微针
刺激皮肤，通过微小的创伤刺激皮肤再生能力，促进胶原蛋白和弹
性蛋白的再生，从而改善皮肤质地和促进皮肤紧致。
同时，微针创
造的微小通道也有利于美容成分的渗透和吸收，增强了后续美容产
品的效果。
其次，电穿孔导入原理是利用微电流技术，通过微电流的作用
使美容成分更好地渗透到皮肤深层。
微电流可以改变皮肤细胞间的
电位，打开细胞通道，增加细胞膜的通透性，从而促进美容成分的
渗透和吸收。
通过电穿孔导入，可以提高皮肤对美容成分的吸收率，使皮肤更好地吸收营养成分，从而达到改善皮肤质地和促进皮肤再
生的效果。
综上所述，美容电穿孔导入原理是通过微针或微电流技术，刺
激皮肤并打开微小通道，促进美容成分的渗透和吸收，从而改善皮
肤质地和促进皮肤再生。
这种技术可以帮助改善皮肤问题，促进皮肤健康，但在使用时需要注意专业操作和术后护理，以确保安全和有效性。
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电穿孔系统
BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。
BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株，能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。
pUC19质粒检测感受态细胞的转化。
1.电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation
cuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。
（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）；
2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或连
接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置电击参数：2.0kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad
GenePulser）。
用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。
完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。
4.取100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的LB平板上，
倒置放于37℃培养箱培养12-18小时。
注意事项：
1.电转杯必须预冷。
感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入DNA后应轻柔
混匀，加入DNA的体积小于细胞体积的1/10。
2.一旦DNA加入到细胞中，电击操作应该立即进行。
3.DNA 应该溶解在水或TE中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需
纯化连接产物。
4.电击时，电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的DNA或转化产物会导致电
弧现象的发生。
5.电击完成后应该立刻加上LB或SOC等复苏培养基，每分钟延迟加入会
导致3倍转化效率的降低。
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14.。