高效液相色谱基础知识总结
高效液相色谱分析复习知识点
高效液相色谱分析复习知识点
1.P66页何为液相色谱法？P67页液相色谱法的适用对象。
2. P67页气相色谱法和液相色谱法的区别。
3. P67页影响液相色谱峰展宽的因素有三个，P69页与气相色谱的速率方程的相同点与不同点。
4. P70页高效液相色谱法的主要类型，其中重点掌握液-液分配色谱法的原理，明确何为正相色谱？何为反向色谱？以及在用上述两类色谱分离极性组分时的出峰顺序。
5. P76页排阻色谱的出峰顺序，与一般的色谱出峰顺序有何不同？
6. P77页液-液色谱和液-固色谱的固定相各是什么？
7. P81页溶剂极性顺序？选用流动相的极性有何基本原则？
8. P84页何为梯度洗脱？何为外梯度？何为内梯度？
9. P86页色谱柱的组成。
10. P86页常用的液相色谱检测器的特点。
11. P93页如何选择液相色谱分离类型（见表3-3）。
作业题：
P109页2、5。
高效液相色谱知识收藏
高效液相色谱知识收藏1. 分离原理：HPLC利用固定在填料中的固定相和流动相（溶剂）之间的相互作用来分离混合物中的化合物。
固定相通常是多孔填料，而流动相则是溶解样品混合物的溶剂。
在流动相的作用下，样品中的化合物会以不同速率通过固定相，从而实现分离。
2. 设备组成：HPLC主要由溶剂输送系统、样品进样器、固定相柱和检测器组成。
溶剂输送系统用于向柱中输送流动相，样品进样器用于将样品注入HPLC系统，固定相柱用于实现化合物的分离，检测器用于检测分离出的化合物。
3. 应用领域：HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、生命科学研究等领域。
它可以用于分离和测定各种化合物，包括药物、天然产物、食品添加剂等。
4. 操作要点：在进行HPLC分析时，需要注意溶剂的选择、固定相柱的条件、检测器的调试等细节。
同时，样品的预处理和进样器的设定也会影响分析结果的准确性和稳定性。
5. 数据分析：HPLC分析通常会生成大量的数据，包括色谱图谱、保留时间、峰面积等。
对这些数据进行分析和解释是HPLC分析的关键步骤，可以借助数据处理软件进行数据分析和处理。
总的来说，HPLC是一种高效、准确的分析技术，可广泛应用于化学、生物和医药领域。
了解HPLC的基本原理和操作要点，可以有效提高样品分析的准确性和效率。
HPLC是一种高效、准确的分析技术，可广泛应用于化学、生物和医药领域。
了解HPLC的基本原理和操作要点，可以有效提高样品分析的准确性和效率。
在HPLC分析中，固定相柱是至关重要的部分，不同的固定相柱适用于不同的样品类型和分离要求。
以下是一些常见的固定相类型：1. 反相色谱柱：反相色谱利用极性差异来进行化合物的分离，通常用于水溶性化合物的分离。
反相色谱柱的填料通常是非极性的，比如碳链分子。
常见的反相色谱柱填料包括C18、C8、C4等，它们的碳链长度不同，可以实现对不同极性化合物的分离。
2. 正相色谱柱：正相色谱是基于化合物在极性填料上的分离，适用于非极性化合物的分离。
关于HPLC的基础知识(中文)
液相色谱知识总结
• :电源电压为220±10V，频率为
50±0.5Hz·最佳配置稳压器(2kw以上)
• 最佳 试验室有专线，同一线路上不可有大
旳用电机械干扰
• 电源为三相电源，接地必须良好(此条非常
主要)，泵，检测器，工作站，电
• 脑接在同一种合格旳接线板上 (温分每台
仪器带一专用接线板)
示差折光检测器
• 示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率
来进行组分检测旳。但凡具有与流动相折射率不 同旳组分，均能够使用这种 检测器。假如流动相 选择合适，能够检测全部旳样品组分。示差折光 检测器旳优点是通用性强，操作简便；缺陷是敏 捷度低，最小检出限约为10-7g/ml，不能做痕量 分析。另外，因为洗脱液构成旳变化会使折射率 变化很大，所以，这种检测器也不合用于梯度洗 脱。
常见问题及处理
• 1 压力 • 2 基线不稳 • 3 谱图重现性不好 • 4 凝胶负峰旳产生
液相色谱知识总结
液相色谱旳工作原理
• 高效液相色谱（high performance liquid
chromatography ）是色谱法旳一种分 支， 分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中旳各组分经过固定相时，因为与 固定相(stationary phase)发生作用（吸附、 分配、离子吸引、排阻、亲和）旳大小、 强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从 而先后从固定相中流出。
荧光检测器
• 在其他条件一定旳情况下，荧光强度与物质旳浓度成正比。
许多有机化合物具有天然荧光活性，另外，有些化合物能 够利用柱后反应法或柱前反应法加入荧光化试剂，使其转 化为具有荧光活性旳衍生物。在紫外光激发下，荧光活性 物质产生荧光，由光电倍增管转变为电信号。荧光检测器 是一种选择性检测器，它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、 维生素、蛋白质等荧光物质旳测定。这种检测器敏捷度非 常高，检出限达10-12—10-13g/ml，比紫外检测器高2—3 个数量级，适合于痕量分析。而且能够用于梯度洗脱。其 缺陷是合用范围有一定旳不足。
(干货)液相色谱基础知识大全
一、基本原理高效液相色谱（HPLC）法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。
高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。
在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。
二、高效液相色谱分析原理（1）、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。
被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。
这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
（2）、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。
分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。
分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。
组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。
若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。
分享高效液相色谱基础知识详解！
分享高效液相色谱基础知识详解！食品实验室服务♚高效液相色谱法概述高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。
色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。
其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。
与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。
在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。
高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高效和高灵敏度的分离测定。
高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。
现在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能齐全的分析工具。
高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。
在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱法知识汇总(全面详细)
高效液相色谱法知识汇总（全面详细）1.与气相色谱相比液相色谱的优点与气相色谱法相比，液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要求把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物，不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物等。
此外，液相色谱的流动相不仅起到使样品沿色谱柱移动的作用，而且与固定相一样，与样品分子发生选择性的相互作用，这就为控制和改善分离条件提供了一个额外的可变因素。
而气相色谱法采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，仅起运载作用。
2.液相色谱特点高压、高速、高效、高灵敏度、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
3.高效液相相色谱仪的组成高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统。
4.流动相使用前必须脱气常用的脱气方法有：低压脱气法(电磁搅拌、水泵抽空，可同时加热或向溶剂吹氮气)、吹氦气脱气法和超声波脱气法等。
5.梯度洗脱用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。
6.高压梯度(内梯度)：特点是先加压后混合，将溶剂用高压泵增压以后输入色谱系统的梯度混合室，加以混合后送入色谱柱。
低压梯度(外梯度)：特点是先混合后加压。
在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱。
7.进样系统要求良好的密封性，最小的死体积，最好的稳定性，进样时对色谱系统压力、流量影响较小。
8.分离系统色谱柱是实现分离的核心部件。
由柱管和固定相组成。
柱管为直型不锈钢管。
一般色谱柱长5~30cm，内径4~5mm，凝胶色谱柱内径3~12mm，而制备色谱柱内径则可达25mm。
一般淋洗溶剂在进入色谱分离柱之前，先通过前置柱。
HPLC 柱的填料颗粒粒径一般约为3~10m，填充常采用匀浆法，色谱柱的发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
9.检测系统用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。
高效液相色谱知识大全
高效液相色谱I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。
也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
高效——可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
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（LC-MS），有效的弥补了色谱法定性分析特征性差的弱 点，成为最重要的分离分析方法之一， LC-MS在选择性、 灵敏度、分子量测定和提供结构信息方面具有明显的优 势，能够同时获得可靠的定性定量结果，因而被广泛应 用于药物的质量控制（杂质、副产物、降解产物等的鉴 定和测定）、药物在生物体内的吸收、分布和代谢研究 （包括代谢物的结构确定及定量）和临床医学研究（如 蛋白异常的研究）。 LC-MS已成为新药研究必不可少的 手段。20世纪70年代，高效液相色谱法崛起克服了
高效液相色谱基础知识总结
二、基本概念和术语
一、色谱图和峰参数 1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器， 所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 2、基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到 平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行 于时间轴。基线反映仪器及操作条件的恒定程度，主要 由流动相中的杂质等因素决定。
键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液 体，通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。
高效液相色谱基础知识总结
采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。若采用 极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非 极性键合相、极性流动相，则称为反相色谱。这种分离 的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子 间作用力的大小。
高效液相色谱基础知识总结
气相色谱法不能直接用于分析难挥发、热不稳定及高分 子化合物等的弱点，大大扩大了色谱法的应用范围，把 色谱法推进到一个新水平。
高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是一种高效、快速的分离分析 技术，具有灵敏度高、选择性好的特点。HPLC具有的同 时分离和分析的功能对于体内药物分析和体内内源性物 质的分析及成分复杂的中药分析尤其重要。 HPLC的分离 功能还广泛用于药物的纯化和制备，如用制备色谱分离
高效液相色谱基础知识总结
天然药物的有效成分，或制备手性药物的单一对应体。 由于使用各种高灵敏度的检测器，如荧光、电化学和化 学发光检测器，再结合许多衍生化技术及样品富集技术， HPLC对许多药物的最低检测限都达到了pg级或更低水平， 非常适合于一些微量成分甚至痕量成分的分析。
由于色谱条件的可控制性及进样技术和在线样品处理 技术的发展，HPLC分析的精密度完全能够满足医药分析 实验室的要求。 HPLC一般在数分钟至数十分钟内即可 完成一个样品分析，而且往往能够实现多组分的同时测
高效液相色谱基础知识总结
定，这一快速分析的特点使HPLC广泛应用于药物合成的 各部反应的监控和临床治疗药物的监测。HPLC的柱切换 技术是通过程序控制的切换阀改变流动相的流向和（或） 流动相系统的技术。这一技术在医药分析中的应用越来 越多，尤其在药物分析中的应用最为广泛。利用柱切换 技术可以实现样品的在线净化与富集、在线衍生化、在 多个色谱柱上进行分离。在复杂样品的分析方面有着巨 大的潜力。
高效液相色谱基础知识总结
正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种： 前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者 少见。 6、拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的 对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称 因子(asymmetry factor)。《中国药典》规定T应为 0.95~1.05。T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。 7、峰底 -基线上峰的起点至终点的距离。
高效液相色谱基础知识总结
高效液相色谱基础知识总结
一、简介
色谱学是现代分离分析的一个重要领域，也是一门 新兴学科，在化学、生物学等领域发挥着越来越重要的 地位。近几十年来，色谱学各分支，如气相色谱、液相 色谱、薄层色谱等研究方法都得到了深入的研究，20世 纪50年代创立了气相色谱法，它的出现把色谱法从分离 技术提高到分离与“在线”分析的新水平，为色谱法成为 现代分离-分析方法奠定了基础，1957年诞生了毛细管 色谱法。20世纪60年代推出了色谱-质谱联用技术
高效液相色谱基础知识总结
3、噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不 良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱 柱被污染所致。 4、漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。主要由于操 作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起， 柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 5、色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号 产生的曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形
大小排阻色谱法的固定相是一类孔径大小有一 定范围的多孔材料。被分离的分子大小不同，它们扩散 渗入多孔材料的容易程度不同。小分子最动
高效液相色谱基础知识总结
相很快流出，保留时间最短。 在以上四种分离方式中，反相键合相色谱应用最广，
因为它采用醇—水或腈—水体系作流动相。纯水易得廉 价，它的紫外吸收极小。在纯水中添加各种物质可改变 流动相选择性。使用最广的反相键合相是十八烷基键合 相，即让十八烷基（C18H37—）键合到硅胶表面。这种 键合相又称ODS （Octadecylsilyl）键合相，如国外的 partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODS，国 产的YWG-C18等。
目前，高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工、
高效液相色谱基础知识总结
业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离 分析技术，是分析化学家和生物化学家手中用以解决他 们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。
液相色谱根据固定相性质可分为离子交换色谱、吸附 色谱、键合相色谱和大小排阻色谱。
离子交换色谱法是流动相中的被分离离子，与作为 固定相的离子交换剂上的平衡离子进行可逆交换时，它 们对交换剂的基体离子亲和力的不同而达到分离的。
高效液相色谱基础知识总结
组分离子对交换剂基体离子亲和力越大，保留时间就越 长。
吸附色谱法是当组分分子流经固定相（吸附剂，如 硅胶或氧化铝）时，不同组分分子、流动相分子就要对 吸附剂表面的活性中心展开竞争。这种竞争能力的大小， 决定了保留值大小，即被活性中心吸附得越牢的分子， 保留值越大。