植物组织培养
植物组织培养
1.植物组织培养（离体培养）：是指在无菌条件下，将植物体的任何一部分，培养在人工配制的培养基上，并给予合适的培养条件，使之发育形成完整植物体的过程。
2、植物组织培养的类型（1）根据培养基的类型分为:固体培养液体培养半液半固体培养（2）根据培养材料（外植体类型）分为：植株培养器官培养组织培养原生质体培养胚胎培养细胞培养（3）按培养过程分：初代培养继代培养生根培养3、植物组织培养的一般工作流程1.准备阶段：（1）查阅资料，制定培养方案；（2）清洗组培用器皿、工具；（3）配制所需试剂和培养基；（4）试剂、培养基及器皿、工具的灭菌。
2.外植体的选择与消毒；3.初代培养；4.继代培养；5.生根培养；6.炼苗移栽4、植物细胞的全能性概念：指植物体的每个活细胞都携带有该物种的全套遗传信息，在适宜条件下，离体细胞都具有发育为一个完整植株的潜在能力。
注意：（1）活细胞（2）离体细胞（3）细胞全能性表达的难易程度取决于细胞的分化程度5、细胞全能性的强弱表现：（1）植物细胞全能性根据细胞的性质不同由强到弱：营养生长中心＞形成层＞薄壁细胞＞厚壁细胞（木质化细胞）＞特化细胞（导管等）（2）植物细胞全能性根据所处的组织不同由强到弱：顶端分生组织＞侧生分生组织＞居间分生组织＞薄壁组织＞厚角组织＞输导组织＞厚壁组织6、植物组织培养中全能性表达的条件：1.无菌条件；2.离体条件；3.一定的营养物质；4.植物生长调节物质；5.适宜的外界条件。
7、胚性细胞的特点：未分化状态；细胞具有旺盛分裂能力；具有两极性8、脱分化：指在一定条件下，已分化成熟的细胞、组织或器官恢复到未分化的分生状态，并进行细胞分裂形成未分化的细胞团，如愈伤组织的形成过程。
9、愈伤组织形成的三个时期：（1）诱导期又称启动期（最难）。
（2）分裂期（3）分化期10、优良愈伤组织的特征：（1）具有旺盛的增殖能力；（2）容易散碎；（3）具有高度的胚性或再分化能力，便于植株再生；（4）经过长期的继代保存而不丧失胚性。
植物的组织培养方法
植物的组织培养方法植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。
这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。
以下是植物组织培养的一般步骤和方法：1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。
收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。
对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。
培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。
根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。
然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。
在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。
常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。
通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。
在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
8. 培养环境的控制：为了使植物组织正常生长和分化，需要控制培养环境的参数。
例如，可以调节培养基的pH值、光照强度、温度和湿度等因素。
9. 组织转化：经过培养，植物组织中可以引入外源基因，使其具有某种特定的性状，这被称为转基因。
植物组织培养
植物组织培养的含义：将植物的离体材料（器官、组织、细胞、原生质体等）无菌培养，使其生长、分化、繁殖，再生出完整植株或生产次生代谢物质的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性：指一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，在适宜条件下具有发育成完整植株的能力。
外植体：在植物组织培养中，在活体植物上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。
外植体选择的原则：①、再生能力强；②、遗传稳定性好；③、来源丰富；④、灭菌容易。
植物组织培养的类型：根据培养材料（即外植体）的不同，可将植物组织培养划分为植株、胚胎、器官、组织、细胞和原生质体五个水平上的培养类型。
愈伤组织：原指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养中，则指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
植物组织培养的特点：①、培养材料经济；②、培养条件可以人为控制；③、生长周期短，繁殖率高；④、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。
White（1943）撰写的《植物组织培养》是第一部有关植物组织培养的专著。
PH值最适5.6，高温、高压灭菌后PH值会降低，配制时一般为5.7~5.8，若PH值偏高，培养基会偏硬，会不利于植物材料吸取营养；PH值偏低，培养基凝固不好，不利于植物材料的固定。
MS培养基特点：①、无机盐成分很高，硝酸盐、NH+、K+含量高；②、元素平衡较好；③、缓冲性能也比较好；④、微量元素、有机成分丰富、齐全。
无机盐母液适度冷藏保存。
维生素等有机营养元素在—20℃保存，使用前用温水溶解。
MS培养基母液的成分：大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。
CuSO4、CuCl2取25mg溶于10mL，制成2.5mg/mL溶液，配制50mL微量元素母液，吸取该溶液0.05mL。
灭菌的条件：培养基的成分：1、水分2、无机盐①、大量元素：指植物生长发育所需浓度大于0.5mmol/L的营养元素。
植物组织培养
（3）肌醇 又叫环己六醇，在糖类的相互转 化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L。 作用：适当使用肌醇，能促进愈 伤组织的生长以及胚状体和芽的形 成。对组织和细胞的繁殖、分化有 促进作用，对细胞壁的形成也有作 用。
（4）氨基酸 (almino acide） 作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化 合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、 谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等 半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水 解乳蛋白）等。
（11）再分化 经脱分化的组织或细胞在一定 的培养条件下可又转变为各种 不同细胞类型的能力。 （12） 分化培养 经过脱分化阶段的外植体（形 成愈伤组织），转移到另一培 养基上分化出芽（或小球茎） 或胚时，则称为分化培养，所 用的培养基为分化培养基。
（13） 增殖培养 已分化芽、小球茎或无性幼胚再继续进行增殖，即
1. 培养条件可人为控制，周年生产
植物组织培养中的植物材料完全是在人为提供的 培养基及小气候环境下生长的，摆脱了大自然中 四季、昼夜气温频繁变化及灾害性气候等外界不 利因素的影响，且条件均一、对植物生长极为有 利。因此植物组织培养不受气候和季节的限制， 可周年进行生产。
2. 生长周期短，繁殖速度快
植物组织培养可根据不同植物、不同器官、不同 组织的不同要求而提供不同的培养条件，满足其 快速生长的要求，缩短培养周期。一般20~30d就 完成一个繁殖周期.每一繁殖周期可增殖几倍到几 十倍,甚至上百倍,植物材料以几何级数增加。
3. 管理方便，可实现工厂化生产
植物组织培养是在人为的提供一定温度、光照、 湿度、营养和植物生长调节剂等条件下进行的， 不受自然界中病、虫、杂草等有害生物危害，生 产微型化、精细化、高度集约化，重复性强，便 于标准化管理和自动化控制，真正实现了种苗的 工厂化生产。与田间栽培、盆栽等相比，省去了 中耕除草、浇水施肥、病虫防治等一系列繁杂劳 动，可大大节省人力、物力及田间种植所需要的 土地。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
植物组织培养(1)
0.1.3 植物组织培养的研究类型和任务
• 组织培养：分生组织、形成层组织、薄壁组织、韧皮部组 织等。
• 器官培养：根、茎、叶、花、果实、种子。 • 胚胎培养：幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房等。 • 细胞培养：单细胞或较小细胞团，如性细胞、叶肉细胞、
1. Thimann和Wickson
• 1958年，他们发现腋芽（当顶芽存在时为休眠状态） 的生长，可以通过外源细胞分裂素的应用而启动。这 样，将茎段培养在含有细胞分裂素的培养基上，就可 以在一个具有完整顶芽的生长中的茎上诱导侧芽的形 成。这将消除顶端优势，得到大量不定芽。
Thimann
2. Morel－脱毒、快繁商业化
• 1922 年 ， 植 物 离 体 组 织 培 养 取 得 了 一 些 进 展 。 德 国 人 Kotte和美国人Robbins两人同时分别独立地将分生组织作 为外植体。Kotte研究切下的根尖，如豌豆、玉米根尖， 将它们放在含有Knop溶液盐成分、葡萄糖、含氮化合物 如天冬酰氨酸、丙氨酸以及肉汁的各种营养液中。Kotte 观察到根尖生长持续了2周，但他没有进行继代培养。另 一方面Robbins通过继代，将玉米根尖离体培养了更长的 时间，但随着时间延长，生长量减少，最后消失。
• 1952年， Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技 术，通过分离已被病毒感染的大丽花个体的根尖，并将其 离体培养，重新获得了无病毒的大丽花。
• 1960年，Morel利用兰花茎尖培养，实现了脱毒和快速繁殖 （rapid clone propagation）的两个目的。这一技术导致欧 洲、美洲和东南亚许多国家“兰花工业”的兴起。
0.2 植物组织培养的形成和发展
植物组织培养(全)
胚培养是器官培养的一种。选用的外植体是成熟或未成熟的胚进行离体无菌培养。其具体方法是将取出放在液体或固体培养基上培养，由于胚包含在胚珠和子房里，因而进行胚胎培养时，常常是将胚珠和子房放在培养基上培养。
胚培养用途：1.拯救胚2.研究胚的发育营养研究3.一些特殊的领域的研究。
(4)细胞和原生质体培养
二是要给予它们适当的刺激，即给予它们一定的营养物质，并使它们受到一定的激素的作用。
全能性体现的两个过程
一个已分化的细胞要表现它的全能性，必须经历两个过程，即首先要经历脱分化过程，然后再经历再分化过程。
再分化的过程有两种方式：
一是器官发生方式 二是胚胎发生方式
2.激素（植物生长调节剂）调控
后来证明，激素可调控器官发生的概念对于多数物种都可适用，只是由于在不同组织中这些激素的内生水平不同，因而对于某一具体的形态发生过程来说，它们所要求的外源激素的水平也会有所不同。
⑤1958年，Wickson和Thimann指出，应用外源细胞分裂素可促成在顶芽存在的情况下处于休眠状态的腋芽的生长。
当把茎尖接种在含有细胞分裂素的培养基上以后，将可使侧芽解除休眠状态，而且，能够从顶端优势下解脱出来的不只是那些既存于原来茎尖上的腋芽，此外，还有由原来的茎尖在培养中长成的侧枝上的腋芽，结果就会形成一个郁郁葱葱的结构，里面包含了数目很多的小枝条，其中每个小枝条又可取出来重复上述过程，于是在相当短的时间内，就可以得到成千上万的小枝条。当把这些小枝条转够到另外一种培养基上诱导生根以后，即可移植于土壤中。
奠基阶段（从20世纪30年代中至20世纪50年代末）
30年代中期，植物组织培养领域两个重要的发现，其一是认识了B族维生素对植物生长的重要意义；二是发现了生长素--一种天然的生长调节物质。
高考生物知识点：植物组织培养
高考生物知识点：植物组织培养
植物组织培养是一种利用植物的细胞、组织、器官等进行无菌培养和繁殖的技术。
以
下是高考生物中与植物组织培养相关的知识点。
1. 组织培养的目的和应用：组织培养可以用于大规模繁殖植物，繁育优良植株，获得
大量无菌基质，研究植物生长发育、激素生物学等。
2. 组织培养的基本原理：组织培养利用植物细胞的无性繁殖能力，在无菌条件下培养
植物细胞、组织和器官，提供适当的养分和激素，创造适宜的生长环境，使其生长和
分化。
3. 组织培养的种类：包括无子繁殖、离体培养、植株再生等。
4. 无子繁殖：将植物的无性结构，如幼苗、叶片、叶柄、茎段、芽鳞等放入适宜的培
养基中，通过刺激其分裂增生和分化形成新的植株。
5. 离体培养：将植物的组织或器官，在无菌条件下切割并放入含有适宜养分和激素的
培养基中，促使其生长和分化成完整的植株。
6. 植株再生：通过植物体的某些部位（如气生根、愈伤组织等）培养和再生整个植株。
7. 组织培养的条件：无菌环境、适宜的培养基、适宜的温度、光照和湿度。
8. 组织培养中的植物激素：植物激素如生长素、赤霉素、细胞分裂素等，对植物的生
长和分化起到重要的调节作用。
9. 组织培养的影响因素：培养基的组成、激素浓度、光照条件、温度等都会对组织培养结果产生影响。
10. 组织培养的优点：可以大规模快速繁殖优良植株、修复植物、研究植物生理生化过程等，是种植业和植物繁育研究中的重要技术手段之一。
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试卷1《植物组织培养技术》试题(一)一、填空题(每空1分,共20分，)1、一般培养室控制的温度是__20-30℃____，培养基常选用的pH 值是__5.6-5.8___。
2、在组织培养中，培养基常用___高压蒸汽____法灭菌，不耐热物质用_过滤____法灭菌。
3、非洲菊的叶片__丛生___,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用__花蕾外植体____法繁殖。
4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了_MS__培养基，其特点是_无机盐__浓度较高，且为较稳定的__溶液__。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历__脱分化、_分裂_和＿再分化＿期。
6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时__诱导芽形成____，比值低时___诱导根形成____。
7、脱毒苗培养的常用两种方法是_茎尖培养脱毒__和_愈伤组织培养脱毒__。
8、菊花在生产实践中常用_脚芽扦插__法繁殖，在组织培养可用_茎尖、花蕾__作为外植体进行培养。
.9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而提高产量和质量。
二、判断题（每题2分,共10分，）（×）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。
（×）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。
？P53 （×）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程称为脱分化。
（×）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（×）5、受精卵和体细胞都具有全能性。
?（动物体细胞的核）三、名词解释（每题2分，共10分）1、细胞全能性答：每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件合适的情况下能够发挥该物种的各种功能和有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
2、灭菌答：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。
3、玻璃化现象答：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象成为玻璃化，玻璃化是试管苗的一种生理失调症状。
4、指示植物答：指示植物即接种某种病毒后表现特有症状的植物。
主要植物种类有：苋色藜、昆诺阿藜、大灰藜、巴西牵牛和千日红等。
5、驯化答：植物组织经长期培养，会发生一些变化。
开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象成为驯化。
四、选择题（每题1分,共10分）（D）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶A纤维素酶B半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶（）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素A：维生素B2、B：维生素B1、C：维生素B6、D：维生素C（C）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径C胚状体发育途径D花粉均等分裂途径（③）4、下列哪种激素不属于生长素类①IAA②IBA③6-BA④NAA（）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化（B）6 、适于花粉培养的最佳时期是＿＿A双核期B单核期C多核期D无核期（A）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A硫酸镁B硫酸亚铁C硫酸锌D硫酸铜（D）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物A氨基酸B肌醇C维生素D琼脂（C）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③（A）10、和组织培养相似的代名词是A克隆B有性生殖C孤雌生殖D单性生殖五、简答题（共50分）1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分)细胞分裂素类激素是腺嘌呤的衍生物，常见的有6-BA、KT、ZT、2-ip等。
其活性强弱为2-ip > ZT > 6-BA > KT。
作用：在植物组织培养中，细胞分裂素的主要作用是抑制顶端优势，促进侧芽的生长。
当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，有利于诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；促进细胞分裂与扩大，延缓衰老；抑制根的分化。
因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖。
由于6-BA具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点,因而被广泛采用,并且是组织培养者最喜爱的细胞分裂素。
BA的主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。
可用于提高茶叶、烟草的质量及产量；蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育，明显提高果品及叶片的品质。
2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)在植物组织培养中经常要用到活性炭。
活性炭加入培养基中的目的1）主是利用其吸附能力，减少一些有害物质、生长抑制剂的影响，2)活性炭使培养基变黑，给培养物创造了暗环境，有利于某些植物生根3）对形态发生和器官形成有良好的效应，但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5%。
3.什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)花粉看护培养：是将诱导频率较高的一种植物裂开的花药接种在培养基上作为看护组织，再将另一种植物或同种植物的单花粉粒接种在花药里进行滋养培养，或在花药上放一小片滤纸，再让花粉粒接种在滤纸上培养，或将一种植物的愈伤组织作为看护组织，再接花粉粒培养。
由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
4.茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。
这是因为病毒运转速度慢，加上茎尖分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。
剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和保肥的特点，且容易灭菌处理，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。
为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。
配制混合基质时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。
也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。
此外，要根据不同植物的栽培习性来进行配制，这样才能获得满意的栽培效果。
移栽驯化香石竹时就可按上述比例选用和搭配基质进行筛选，选出最适合的基质。
6.接种室有哪些技术要求？(6分)接种室：接种室又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间，实际上是扩大的接种箱。
在构造和设置上要求如下：①接种室应分里外两间，里面为接种间，面积5~6m2；外间为缓冲间，约2~3m2。
两间门不宜对开，出入口要求装上推拉门，以减少开关门时的空气扰动。
高度均为2~2.5m。
接种室不宜过大，不易保持无菌状态。
②房间里的地板、墙壁、天花板要平整、光滑，以便擦洗消毒。
③门窗要紧密，关闭后与外界空气隔绝。
④接种室的主要设备及用具有(1)接种箱(2)超净台(3)解剖镜(4)无菌操作用的器具如酒精灯、常用接种工具。
⑤工作台上方和缓冲间天花板上安装能任意升降的紫外线杀菌灯和日光灯。
因接种室面积大，所以紫外线消毒的时间需30min左右。
为提高接种成功率，进入接种室要穿戴经过消毒的衣、帽。
菌种制作大多采用接种箱操作。
7.用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
培养基用高压灭菌。
打开锅盖，加水至水位线。
把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。
然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”，后关闭放气阀。
当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。
当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。
灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。
8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。
这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法，鉴别草莓是否含病毒常用的是小叶嫁接法。
具体方法是取被鉴定草莓生长成不久的新叶，除去两边小叶，中央小叶带1～1.5厘米长的叶柄，削成锲形做成接穗，指示植物（林丛草莓、深红草莓）则除去中间的小叶，在叶柄一侧用刀切入1～1.5厘米，接入接穗，用毛线包扎好，涂上少量的白色凡士林以防干燥。
若带有病毒，嫁接后1～2个月在新展开的二叶片、匍匐茎或老叶上，会出现病斑，若无则说明被鉴定苗是无病毒苗。
试卷2一、填空题(每空1分,共20分)1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定渗透稳定剂，其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂。
2、花药是植物的生殖器官，用其进行组织培养可培养出完整单倍体植物。
3、选用驯化基质主要考虑透气性和保湿性问题4、组织培养的特点包括培养材料经济、培养条件人为控制，周年生产和生长周期短，繁殖率高三个方面。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历启动期（诱导期）、分裂期和分化期。
6、非洲菊的叶片_丛生______故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用__？___法繁殖。
7、脱毒培养的常用两种方法是热处理脱毒和微茎尖培养脱毒。
8、6-BA /NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时诱导愈伤组织或器官分化出不定芽，比值低时诱导根分化。
9、草莓属于蔷薇科植物，组织培养草莓主要使其____？_____。
10、矮牵牛属于十字花科植物，组织培养中常用花药或花粉作外植体。
二、判断题：（）1、非洲菊常用茎尖作为外植体接种（）2、湿热灭菌时灭菌时间与培养容器的关系是：容器越大灭菌时间应越长。
（）3、愈伤组织就是由伤口处产生的愈合组织（）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（）5、升汞靠氯气灭菌，次氯酸钙靠汞离子来灭菌。
1、错（花托是非洲菊组织培养中较为合适的外植体材料）2、错3、错4、错5、错三、名词解释1、细胞全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。
3、White培养基：由White为培养番茄根尖而设计，无机盐量较低，但提高了MgSO4的浓度和增加了硼素，使用广泛，适合生根培养、胚胎培养等的一种培养基。
4、指示植物：一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。