拟南芥培养
拟南芥的栽培
拟南芥的栽培拟南芥生长周期短，6∽8周即可完成从种子到种子的整个生活周期。
1.播种腐殖质土：珍珠岩或赭石=2 : 1，播种前土壤混合物进行高压灭菌30 min，以杀死可能混有的害虫。
通常使用培养皿点播拟南芥种子，点播时使用琼脂糖浓度为0.8 %的1/2 MS培养基进行点播种子（因为该琼脂糖浓度有利于在不伤根的情况下取出培养基中的小苗，移植至土壤中）。
直接土壤播种后，将播有种子的容器移至低温条件下（2∽4 ℃）2∽4 d，以破除种子休眠（对新鲜收获的种子尤为重要），在种子发芽期间必须保持土壤高湿度，故容器需要用塑料膜覆盖1周左右揭去。
2.生长发育条件控制光：光强度为120∽150 umol/(m2•s)，光周期为16 h光照，8 h黑暗。
长日照促进拟南芥提前开花，使叶数量减少且降低种子生成，较短日照有利于营养生长。
温度：拟南芥最适生长温度为25 ℃左右（对于迟开花拟南芥生态型来说，幼苗期要给以4 ℃左右几周的春化处理，以破除休眠）。
水分：拟南芥两片真叶开始伸展之前必须避免干旱，但供水过量会引起土表藻类和真菌的生长；当真叶长出后，灌水频率可相应减少（如每周一或两次），至长角果充实阶段必须保证水分供应，以利于种子形成，但当长角果进入成熟阶段时，较低湿度（< 50 %）是有利的。
营养：营养贫瘠的植株叶呈微淡绿色，植株矮、提早开花，且种子着生少；营养充足的健壮植株呈暗绿色。
防止杂交：防止昆虫进入导致杂交，各品系种植之间的距离>20 cm，从而防止不同品系的花相互接触。
3.拟南芥的花浸法注意事项：当拟南芥花序枝刚伸出时，摘除初生花序枝，促进其长出更多的花序枝，并移至长日照（16∽24 h光照/d）下生长，约一周后进行转化。
正常的生长条件下，转化约3周后收获种子以供鉴定。
确认再生植株为转基因植株的方法有：Southern印迹，报告基因的活性测定和组织化学等鉴定。
在取得一系列突变体后，可用功能互补的转化法来鉴定一个基因，即：用某种途径取得的DNA片段去转化一个功能缺失的突变体，如果转化后能够补偿基因功能突变表型的话，那么这个片段即为含目的基因片段。
[转载]拟南芥培养
![[转载]拟南芥培养](https://img.taocdn.com/s3/m/d965915f68eae009581b6bd97f1922791688bed3.png)
[转载]拟南芥培养一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。
MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm 的培养皿用12.5ml。
加培养基时先将凝固的培养基用微波炉高温5分钟左右至全部解冻，然后慢慢冷却至不太烫手时倒板，如要加潮霉素等抗生素也是在此次加，加入后摇匀然后倒板。
倒板后至自然冷却即可铺种，如水分较多或板不够硬，亦可于倒板后将培养皿盖打开晾10分钟左右（此时超净台要关闭）。
种子的杀菌、清洗、铺板等过程在超净工作台上无菌操作，操作者进入超净工作台要用酒精棉球擦拭手、器具、超净台，防止感染细菌、真菌。
二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／LⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
拟南芥培养攻略
拟南芥培养全攻略拟南芥又名阿拉伯芥,属十字花科,为二年生草本植物;具有植株形态小,平铺直径5cm,高30cm ；生长区域小,易于培养；基因组小,只有5条染色体,15700万个碱基对,27000个基因；生长速度快,周期短,一个世代大约只需要6周的时间；可自花授粉,也可以在不同种质系间杂交,种子多,每株每世代可产数千粒种子等特点;因此,拟南芥是植物科学,包括遗传学和植物发育研究中的模式植物之一图1;在2000年,拟南芥成为了第一个基因组被完整测序的植物;尽管拟南芥生长周期短,且易于培养,但根据不同的实验需求,在培养过程中,对光照、水分及湿度等各种条件的控制有所差别,利用PERCIVAL AR 系列拟南芥培养箱可设置不同的生长环境,满足不同的实验需求;一、正常培养简单的拟南芥培养,可用于基因表达、器官发育、基因突变等研究;1、 首先把拟南芥种子放到滤纸上,用70%酒精进行消毒处理,再用无水酒精进行处理也可选择20%漂白剂以及% Triton X-100 非离子表面活性剂做杀菌处理20分钟;用无菌水冲洗5遍,然后将种子点到MS 培养基上,,另加%琼脂以及2%蔗糖;2、 把种子放到4℃黑暗条件下进行春化48h-72h 左右,在长日照或短日照条件下催芽,然后转到PERCIVAL AR 系列培养箱中图2;利用Intellus 控制器,编辑简单的昼夜模式,设定光照时间16小时黑暗8小时或者光照14小时黑暗10小时；选配Q22连AR 系列培养箱 图 1续光强调节装置,设定光照强度为100-150umol/;设定箱体内温度为光照条件下20-22℃,黑暗条件下18-20℃；选配湿度控制系统,设定箱体内相对湿度70%;3、 出苗大约7~10天,然后移入土中培养,采用底部灌溉方式浇水利用土壤的毛细作用;在第一次浇水前,可使土壤完全干燥,以后每隔7~10天浇一次水;4、 土壤可用营养土、蛭石以及珍珠岩比例10:1:1的比例配置,也可直接用堆肥、蛭石以及草炭等进行混合;在生长过程中,可用普通的花肥施肥一次或者不施肥;5、 当植株长到一定高度时,可剪断茎杆,以产生更多的花序,可用于转化研究或者获得更多的种子图3;二、特殊培养为了加快拟南芥生长速度,在移入土壤培养后,可设定长日照,利用Intellus 控制器,编辑程序设定24h 光照,光强100-250umol/,温度持续22-23℃;拟南芥根系处理培养,可减少光照时间为8-12h,提高光照强度为100-350umol/,温度为光照条件下22-23℃,黑暗条件下18-20℃,其余培养条件同正常培养; 图2图3。
拟南芥生活史实验报告
拟南芥生活史实验报告
实验目的：
本实验旨在探究拟南芥(Arabidopsisthaliana)的生长和发育过程，包括种子萌发、幼苗生长、开花结实等。
实验材料：
1.拟南芥种子；
2.培养皿；
3.水；
4.营养液；
5.显微镜。
实验步骤：
1.将拟南芥种子放入培养皿中，加入适量的水，使种子完全浸泡在水中。
2.每天更换一次水，并将培养皿放在光照充足的地方。
3.在第三天左右，观察到一些小根从种子底部长出来，说明拟南芥已经开始了萌发过程。
4.继续观察，当幼苗长到一定高度时，可以将其转移到营养液中进行生长。
5.在营养液中，幼苗会继续生长，直到出现第一对真叶。
6.当幼苗长到一定高度时，可以开始观察其开花结实过程。
7.记录下每个阶段的时间和生长情况，并使用显微镜观察细胞结构和组织发育情况。
实验结果：
通过观察拟南芥的生活史过程，我们发现：
1.拟南芥的种子需要在水中浸泡一段时间后才能萌发。
2.幼苗在营养液中生长，需要不断补充养分和水分。
3.南芥的生长过程中会出现各种形态的叶子和花朵，这些变化与植物激素的作用有关。
4.拟南芥的花粉可以通过风或昆虫传播，实现繁殖。
5.南芥的生长发育受到环境因素的影响，如光照、温度、湿度等。
实验结论：
通过对拟南芥生活史的实验研究，我们了解到了该植物的生长发育过程和影响因素，有助于深入理解植物的生命活动和适应环境的能力。
同时，也为进一步研究植物生长发育机制提供了基础数据和参考依据。
拟南芥培养基配置
1．1 播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种培养基中。
作为栽植的容器，可根据各自条件置于花盆或格状分离的多穴塑料盘中。
常用的混合物有泥炭藓、营养土、蛭石和珍珠岩等，例如珍珠岩∶蛭石∶泥炭藓=1∶1∶1的混合物，表土、堆肥或腐殖质土∶珍珠岩或蛭石=1∶1，1∶2或2∶1的混合物。
如果用于营养研究则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。
栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和昆虫幼虫滋生。
播种前土壤混合物进行高压灭菌处理 30min，以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。
在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。
如果播种量较大，可用浓度为0．1g/100mL琼脂或砂子事先均匀混合后播种。
种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。
[1]将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在 2～4℃下放置 2～4d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥种子尤为必要。
对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的低温处理。
干种子的低温处理往往是无效的。
低温处理后，将盆移至温室或生长室，在22℃ 左右发芽，夜温可比日温低2℃，用 2000lx的荧光灯给予光照，光周期为18h光 /6h暗（也可24h光照[2]），在 5d左右可见拟南芥发芽。
拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。
1．2 生长发育条件的控制[3]拟南芥一般是冬性一年生植物，自然条件下种子在秋天发芽，幼年期度过冬天，花分生组织在春季分化，种子在夏季成熟脱落。
大多数实验室栽植的拟南芥品种在发芽后 4周开花，而在 4～6周后采集种子。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
拟南芥培养Protocol
拟南芥培养Protocol拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。
幼苗期不耐高光强,可适当遮荫.光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯(如荷兰产TLD型Philip豪华直管荧光灯).拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳1.准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿.2.种子消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸).3.播种:用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了,密封盖子,4℃暗处理两天后,移到光照培养箱(22℃,光周期12h),若种子较密,则在光照培养箱中生长1周后即可移苗,否则根长太长后易缠在一起,但太小的苗移栽后,需适当遮荫.最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗.4.移苗:将蛭石与珍珠岩按(3:1)的比例混好,装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压下.移苗结束后,用保鲜膜覆盖3-4天后揭膜.从苗期直至开花,可在塑料周转框中始终保持1-3cm的水层,在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔2-3天浇一次水即可.整个生长期可浇3-4次拟南芥营养液.5.收籽:在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中.附拟南芥营养液配方nutrient solution containing:5mM KNO3, 2.5mM KH2PO4, 2mM MgSO4, 2mM Ca(NO3)2, 50µM Fe-EDTA, 70µM H3BO4,14µM MnCl2, 0.5µM CuSO4, 1µM ZnSO4, 0.2µM Na2MoO4, 10µM NaCl, 0.01µM CoCl2, adjusted to PH 5.7具体配法（药品刚好50L水培液用）:1)大量元素（包括25.25gKNO3，24.65gMgSO4·7H2O ,）：溶解，加水至500ml,配制成100倍母液Ⅰ。
拟南芥种植方法
培养基上点种子：1.种子处理1.1 种子消毒处理在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。
1.2 点样将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。
1.3 春化种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。
土培法：1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。
2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。
（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子）3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。
4.植株生长条件的控制幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。
浇水注意事项：1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿；2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水；3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起；4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。
当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。
开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水；5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来；6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等；7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。
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实验目的：拟南芥无菌培养。
实验仪器：光照培养箱,盆.培养皿,超净台,灭菌锅.
实验试剂：营养土,蛭石,MS培养基
实验步骤：
1、配制MS培养基（一般装在三角瓶里，最好只装最大体积的70％以内），高温灭菌（115
度15分钟）在未固化情况下，（固化的话可以在微波炉里融化再使用）在超净台里倒入培养皿（一般一个培养皿内装25ml左右培养基，培养皿也是要灭菌的，一般用报纸或者牛皮纸包一排，十几个吧），待充分凝固之后平放密封保存（倒好之后最好静置15－20分钟，然后放在塑料袋里，保存在4度）
2、将拟南芥种子用10％消毒水（洗洁精体积分数）浸泡15分钟左右（要保证每粒种子都
浸透），无菌水冲洗3遍，加入适量0.12%的琼脂溶液（要灭菌的）用蓝枪头播在之前准备的灭菌MS固体培养基上(要在超净台中操作)，点种子大概的确有点难以想象，下次你来拿种子和苗的时候我可以给你演示一下；
3、４℃春化2天后转到光照培养间，温度２２℃／１８℃（日／夜），1６ｈ／８ｈ光周期，
白炽灯光照培养，光照强度五千Lx。
（也不用这么严格的，一般22－25度，5000－7000lx，差不多就行了）
4、大约7－10天后，拟南芥根须和芽均已长出，长到3至4片叶后可以移入土中培养（平
板里长太久的话似乎会影响植物以后的生长）。
5、用营养土和蛭石以1：1的比例混合拌匀配制，以保证营养及透气性。
用高温杀菌以杀
死土中的害虫。
（我们现在种得多，土都不灭菌的，注意拔拔杂草就行了）
6、用镊子小心夹住培养皿中的拟南芥茎处，取出放在土上，卷起根须塞入土中。
避免将叶
片带入土里。
放在光照培养间，条件和长平板一样就行了
7、在托盘中浇水，通过毛细作用由底部的孔吸收上去，保证土壤湿润。
刚移植的前两天可
以用基本上透明的盖子盖住盆顶。
MS培养基的配方是对的
单位mg/L
大量元素：NH4NO3 1 650
KNO3 1 900
CaCl２·2H2O 440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 700
微量元素：KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
FeSO4·7H2O（27.8）+Na2-EDTA·2H2O（37.3）
有机成分：肌醇100
烟酸0.5
盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5
盐酸硫胺素（维生素B1）0.5
甘氨酸2
注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。
要加1.2%的琼脂，才能凝固。