临床微生物标本采集方法-可用
微生物检验标本的正确采集及注意事项
微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。
可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。
为此应正确采集各种细菌学标本。
一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。
（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。
（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。
（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。
2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。
（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。
切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。
（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。
（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。
（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。
（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。
（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。
微生物标本采集
微生物标本采集是一项基础且重要的工作，对于临床诊断、疾病防控以及科学研究都具有至关重要的作用。
本文将详细介绍微生物标本采集的基本原则、采集方法、注意事项以及标本的保存与运送。
一、微生物标本采集的基本原则1.及时性：微生物标本采集应在患者出现症状或怀疑感染微生物时尽快进行，以便获取具有代表性的标本。
2.无菌操作：采集微生物标本时，必须遵循无菌操作原则，避免污染标本，确保检测结果的准确性。
3.适量：采集的微生物标本应足够进行所需检测，同时避免过量采集，减少对患者造成的不适。
4.适宜的标本类型：根据微生物的生长特性、感染部位以及检测目的，选择适宜的标本类型。
5.标本标识：采集的微生物标本应进行清晰、准确的标识，包括患者姓名、标本类型、采集时间等信息。
二、微生物标本采集方法1.皮肤、黏膜表面：使用无菌棉签或无菌注射器，轻轻擦拭或抽取皮肤、黏膜表面的分泌物。
2.血液：采用无菌注射器抽取静脉血，避免皮肤消毒剂污染。
3.呼吸道标本：采用无菌吸痰管或纤维支气管镜采集呼吸道分泌物；咳痰患者应采集清晨第一口痰。
4.尿液：采集清洁中段尿，必要时可采用导尿术。
5.粪便：采集粪便标本时，应避免粪便与尿液混合，采用无菌容器。
6.生殖道分泌物：男性患者采用无菌拭子采集尿道口分泌物；女性患者采集宫颈分泌物。
7.组织标本：在无菌条件下，切取感染部位的组织，放入无菌容器。
三、微生物标本采集注意事项1.采集前准备：了解患者的病情、用药情况以及采集部位，确保采集时机适宜。
2.消毒：采集部位应进行充分消毒，避免污染标本。
3.避免污染：采集过程中，避免触及非无菌部位，确保无菌操作。
4.采集量：根据检测需求，采集适量的标本。
5.标本保存：采集后的微生物标本应尽快送检，无法及时送检的标本应妥善保存。
四、微生物标本保存与运送1.温度：根据微生物的生长特性，选择适宜的保存温度。
一般而言，细菌标本应在4℃保存，病毒标本应在-70℃保存。
2.时间：微生物标本应在采集后尽快送检，如无法及时送检，应按照相关规定保存。
微生物标本的采集与运送
（二）血液标本
对怀疑导管相关血流感染，又需保留导管的患者:
采集2份血液标本
1份通过外周静脉采集 1份通过导管采集。
小结
细菌培养鉴定难, 标本留取是关键, 医护人员齐挑担, 合理用药百姓赞。
3.组织：经穿刺或手术活检获得标本，穿刺组 织可放入1.5ml无菌离心管中；
4.体表伤口可接收细菌培养的条件： 鳞状上皮细胞数<10个/低倍视野，并有多
形核白细胞存在
（二）送检：立即送检，建议不超过1小时送达
（一）导管头: 采用无菌性技术，获取插入患者体内最远端的
导管段约5cm，置于无菌容器送检；不能置于生理 盐水或转运培养基中运送。
采血套数与检出率
J C lin Microbiol.2007;45:3546-3548
需氧瓶
采
血
厌氧瓶
试
管
标本不够时, 先满足需氧瓶
1、 已采集的血培养标本必须立即送检， 2. 如不能立即送检，可室温放置，但不超过2小 时，不可放冰箱。
取后不能及时送, 常温放置忌冰冻。
二、尿液标本的采集
1、中段尿 2、导管尿（不能取尿袋内的尿液） 3.膀胱穿刺尿 常用：中段尿（晨尿或在膀胱内停留4h以上的尿液）
1、抗生素治疗之前
若已使用抗生素者，应在下次用药前或血药浓度
最低时采集标本。 2、患者寒战时
发热要做血培养, 双侧双瓶少漏网；
何时采血要记清, 寒战前后菌量深；
3.发热初期或高峰时
超过发热峰值后，病原菌会逐渐被机体免疫系统 清除，从而减低检出率。
特别提示:
采集前非常关键的一步:
皮肤和瓶子的消毒
临床微生物标本采集方法
一、采样前准备
1、当日术毕，按常规对手术间所有物表 及地面进行湿式清洁和擦拭。
2、检查净化空调系统运作是否正常，当 日完成手术间清洁后，调节空调系统处 于待机状态，次晨打开系统运行30min。 自净后采样。
二、采用平板沉降法 1、采样时间: 在净化空调开启30min进行采样，采样时洁净 手术室大门应保持关闭，以维持手术室正压 状态和洁净度。 2、采样护士准备： 在采样前应洗手（或手消毒）
采样时平板应从科室最靠内的房间放置， 依次向外布放，每个手术间也是从最靠 里的位置放置平板，最后放置最靠门的 采样点。采样点分布均匀，收取平板顺 序相反。
5、布点要求： 百级手术间，手术区（手术台两侧0.9m以内，两 端0.4m内）呈对角线，东南西北中5点，周边区 （距墙1m，每边2个）8点，共需13个培养皿；千 级手术间，手术区（手术台两侧0.6m以内，两端 0.4m以内）呈单角线3点，周边区（距1机，长边 2个，短边1个）6点，共需9个培养皿；万级手术 间:手术区（手术台4边，0.4m以内）呈对角线3点， 周边区（距离1m每边1个）4点，共需7个培养皿。 检测时可做一次空白对照和模拟操作。模拟操作 将一个对照皿打开后立即封盖，两个对照结果必 须为阴性，整个操作过程应符合无菌要求。
将用于革兰染色的标本置于无菌标本杯中
将用于培养的标本置于需氧运送培养基中， 密闭保存
分别标注患者及标本信息，30min内送检，否则置4℃冰 箱冷藏，24h内送检
四、使用中紫外线灯辐照度值测定法
方法：紫外线强度照射指示卡测定法
物品准备：标尺、紫外线强度照射指示卡
放好标尺，开启紫外线灯
开启紫外线灯5min后，将指示卡置于紫外线灯下垂直距离1m处， 有图案一面朝上
临床微生物标本采集方法
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
临床微生物检验标本采集程序
临床微生物检验标本采集程序1 标本采集的基本原则：1.1 严格的无菌操作，避免污染，避免来自寄生菌的污染，应当保证每份样本代表感染过程｡1.2 选择正确的解剖部位、合适时间、合乎规程技术，采集样本。
1.3 选择合适的部位采集用于厌氧菌培养的样本。
1.4 要收集足够量的样本，量少可能导致假阴性结果。
1.5 应尽可能在病人使用抗菌药物前采集样本，如不能停用抗菌药物，应于下次抗菌药物应用前采集。
1.6 血培养样本在病人寒颤和发热初起时为最佳时机。
1.7 导尿留取样本时，不可从尿袋中采集样本。
引流液样本不能直接从引流袋放出，因引流液在袋中潴留时间太长容易滋生细菌。
1.8 各类微生物样本不宜加防腐剂1.9 盛标本的容器须先经灭菌（煮沸、高热、或高压灭菌），但不得用消毒剂或酸类处理。
1.10 有些临床标本还要注意采集的时机和部位，如伤寒沙门菌的阳性检出率，发病的第1～2 周采集血液，第3～4 周采集大便和尿液，阳性率较高。
1.11 样本的运送处理和储存规定1.11.1 样本2h之内送到实验室。
1.11.2 血培养瓶如果不能及时送检，应置室温保存（但不得超过24 小时）。
禁止将不能及时送检的血培养瓶放置冰箱保存。
1.11.3 淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌培养时，样本不能放4℃条件保存，应在30min内送检，并注意保温。
1.11.4 痰培养疑为嗜血杆菌、肺炎链球菌感染时，应立即送检，因为这些细菌在自然环境中极易死亡。
1.11.5 导管样本如不能在规定时间内送检，应在盛装导管的容器中加少量无菌生理盐水，以免导管干燥，病原微生物死亡。
1.11.6 活检组织样本和眼分泌物样本应在30min内送检，如样本较小或不能在规定时间内送检，应在盛装组织的容器中加少量无菌生理盐水，以免样本干燥，病原微生物死亡。
不可用纱布包裹组织样本。
2 常见临床微生物标本的采集方法。
2.1 血液及骨髓样本2.1.1 检验项目：血液及骨髓培养。
2.1.2 适应症病人出现以下临床表现：发热（38℃）或低温（36℃）、寒战、白细胞增多（白细胞数>10×109/L，特别有“核左移”时）、皮肤粘膜出血、昏迷、多器官衰竭、血压降低、C反应蛋白升高及呼吸加快、血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少等临床可疑血流感染时应采集血液样本进行血培养及骨髓培养。
临床微生物标本采集规范
新生儿及对碘过敏的患者，只能用 75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干 燥后穿刺采血。
2.培养瓶消毒程序： （1）用75%酒精（不要用碘液消毒）消毒 血培养瓶橡皮塞，作用60秒。 （2）用无菌纱布或无菌棉签擦去橡皮塞 表面剩余的酒精，然后注入血液。
❖ 2. 有肉眼脓尿或血尿； ❖ 3. 尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性； ❖ 4. 有不明原因的发热，无其他局部症状； ❖ 5. 留置导尿管的患者出现发热； ❖ 6. 膀胱排空功能受损； ❖ 7. 泌尿系统疾病手术前；
（二）尿培养标本采集方法
标本采集应在使用抗生素之前，避免消毒剂污染标本。
❖ 清洁中段尿 留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂 水仔细清洗会阴部，再用清水冲洗尿道口周围；将 前段尿排去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内， 立即加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是 最常用的尿标本收集方法，但是容易受到皮肤细菌 污染。
要求： ✓ 严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按
压静脉，除非带有无菌手套。 ✓ 不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，
采用真空采血装置能降低污染率。
（三）血培养标本采集和运送
1.采集时间
在使用抗菌药物之前
寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养 标本进行病原菌培养的最佳时机。
疑似感染性心内膜炎或导管相关性感染时，患者 呈持续菌血症状态，需要在24小时内多次采集血培 养，以提高检出率
❖ 留置导尿管收集尿液：留置导尿患者应消毒导尿管上端外部 及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器通过导尿管吸取尿 液。注意防止混入消毒剂，不能从尿液收集袋中采集尿液。 长期留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义,应在更换新 导尿管后抽取，导尿管留置时间延长易导致定植菌大量繁殖。
微生物标本采集
采集器材
根据采集部位选择合适的采集器材， 如无菌棉签、咽拭子、尿液收集器等 。
试剂
无菌操作
确保所有采集器材和试剂都是无菌的 ，以避免外源性污染。同时，采集人 员也要进行无菌操作培训，确保采集 过程的规范性。
准备适当的保存液或运输液，以确保 微生物在采集后能够保持活性并避免 污染。
03
微生物标本采集方法
初步处理
根据标本类型进行相应的初步处理，如血液标本需进行抗凝处理，痰 液标本需进行均质化处理等。
分离培养与鉴定方法
分离培养
选择合适的培养基，根据微生物的生长特性和营养需求进行 分离培养。对于不同种类的微生物，需采用不同的培养条件 ，如温度、pH值、气体环境等。
鉴定方法
采用形态学、生理生化反应、免疫学、分子生物学等多种方 法对分离得到的微生物进行鉴定。其中，分子生物学方法具 有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，被广泛应用于微 生物鉴定。
通过咽拭子、鼻咽拭子、痰液或支气管肺泡灌洗 液等采集，用于检测呼吸道感染、肺炎等。
生殖道标本
通过阴道分泌物、宫颈分泌物或前列腺液等采集， 用于检测生殖道感染、性传播疾病等。
伤口与脓液标本
通过无菌棉拭子或组织活检等方式采集，用于检 测伤口感染、脓肿等。
环境与物品表面标本
通过无菌棉拭子或涂抹法等方式采集，用于检测环境微 生物污染情况。
06
质量控制与安全管理
制定完善操作规程和制度
制定微生物标本采集的标准操作 规程（SOP），明确采集方法、 容器选择、保存条件等关键步骤
和要求。
建立标本采集、运输、保存和处 理的全面管理制度，确保标本质
量与安全。
定期对操作规程和制度进行更新 和完善，以适应新的技术和方法
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四、使用中紫外线灯辐照度值测定法
方法：紫外线强度照射指示卡测定法
物品准备：标尺、紫外线强度照射指示卡
放好标尺，开启紫外线灯
开启紫外线灯5min后，将指示卡置于紫外线灯下垂直距离1m处， 有图案一面朝上
照射1min后，关掉紫外线灯，观察指示卡色块的颜色，进行结果 判定。将指示卡色块的颜色与“灯管强度90uW/CM² ”、“灯管 强度70uW/CM² ”标准色块进行比较，判定测定结果
协助者点燃 酒精灯，用 燃烧法消毒 试管管口和 盖子
将注射器内尿液注入试管（避免污染）
协助者再次用燃烧法消毒试管管口和盖子， 随即盖紧试管（标本不得倒置，以免污染）， 熄灭酒精灯，贴好检验单标签
清理好用物，手卫生，尿标本及时送检
注意事 项
1、采集指征：怀疑有尿路感染时，应考虑做尿培养。 2、采集时机：抗菌药物使用之前，留置导尿管者须 夹管30min以上。 3、采样部位：应选择尿管采样口或靠近尿道的导尿 管管壁。 4、采样部位的消毒：使用0.5%碘伏液棉球沿采样点 由内而外消毒，每个棉球只使用一次。 5、无菌物品需检查包装和有效期，确保合格。 6、采样过程中避免污染。
九、卫生手消毒效果采样
医务人员手采样的意义： 1、引起医源性感染的因素很多，医务人员手可以 充当医源性感染的媒介，手的微生物污染是造成 医院感染的最直接的传播途径，由于医务人员的 手传播的细菌而造成的医院感染约占30%。因此 医护人员做好手的清洁消毒是控制医院感染的重 要措施之一。 2.促进医务人员手卫生的依从性。 3.进行流行病学调查。
六、洁净手术室空气沉降菌采样
一、采样前准备 1、当日术毕，按常规对手术间所有物表 及地面进行湿式清洁和擦拭。 2、检查净化空调系统运作是否正常，当 日完成手术间清洁后，调节空调系统处 于待机状态，次晨打开系统运行30min。 自净后采样。
二、采用平板沉降法 1、采样时间: 在净化空调开启30min进行采样，采样时洁净 手术室大门应保持关闭，以维持手术室正压 状态和洁净度。 2、采样护士准备： 在采样前应洗手（或手消毒） 戴口罩，帽子，穿无菌衣。操作时应轻稳， 避免污染培养皿。
6、采样高度： 洁净手术间的手术区采样高度为0.81.2m,周边区在地面或0.8m采样，与 《医院洁净手术部建筑技术规范》要求 高度相符。
7、培养条件： 采样后的培养基按要求送至化验室（细 菌定）在37℃培养箱培养，24h观察结 果。
8、判断结果： （1）百级洁净手术间手术区小于 0.2cfu/30min,周边区小于0.4cfu/30min （2）千级洁净手术间手术区小于 0.75cfu/30min,周边区小于 1.5cfu/30min。 （3）万级洁净手术间手术区小于 2cfu/30min,周边小于4cfu/30min. （4）普通手术间小于5cfu/30min.
操作人员准备：着装规范（卫生手消毒、帽子、口罩、 口罩、）; 患者准备：确认患者（核对姓名、床号、腕带），导尿管已夹住
松开患者导尿管，弃其前段尿液
使用0.5%碘伏溶液棉球消毒导尿管的采样部位
操作者用速干手消毒剂手消毒后戴无菌手套， 使用无菌注射器斜刺入导尿管的采样部位抽 取10-20ml尿液，退出注射器
八、物体表面采样
医院物体表面采样的对象： 一切与医疗活动相关的物体表面均可以作为采 样的对象：治疗台、治疗车、器械车、器械台、 麻醉机、新生儿暖箱、诊疗仪器、床头柜、床 尾桌、监护仪按钮、血压器袖带、听诊器、床 栏、遥控器、门把手、电脑键盘、鼠标、电话 机、病历夹等。
采样时间： 常规：消毒处理后进行采样 暴发流行：未处理表面，随机采样 采样面积：常规:＜100cm² 时，全部表面； ≥100cm²时取100cm² 。 暴发流行：不限，尽可能多采。
田
根据待测房 间面积大小， 按GB15982 要求放置培 养皿
• 暴露时间 • 产房.导管房.新生儿.重症监护室.器官移植 房.血液病病区.烧伤病房:15min • 普通病房:5min
从里到外逐个打开培养皿盖，扣放于平皿旁 （注：手、头等严禁从培养基上方越过）
暴露规定时间后，按打开反方向盖上平皿盖，及时送 检
三、开放性伤口培养标本采集
物品准备
用生理盐水彻底冲洗伤口
用拭子深入伤口基底部或伤口与正常组织边缘处采 集两个标本，分别用于革兰染色和培养
将用于革兰染色的标本置于无菌标本杯中
将用于培养的标本置于需氧运送培养基中， 密闭保存
分别标注患者及标本信息，30min内送检，否则置4℃冰 箱冷藏，24h内送检
再次用酒精灯消毒试管 口
将消毒剂与中和剂振荡 充分混匀
用记号笔在试管壁编写 号码，送检
备注：中和剂的选择： 1、醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和。 2、含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒 剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂。 3、氯与定、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3卵磷脂的中和剂。 4、醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂。 5、含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中 加入吐温-80到0.3%，也可使用经该消毒剂消毒 效果监测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。
剪去棉签手接触部位，两个 棉签投入10ml含相应中和剂 的无菌洗脱液试管内
试管塞用酒精灯烫后塞住试 管口
在试管上标记被检者姓名、 采样时间
填写手卫生消毒效果检测申 请单，及时送检
物品准备
酒精灯外焰烧灼采样试管管口，用无菌棉签 蘸取中和试剂
被检者卫生手消毒后，双手五指并拢，用棉拭子在 一手曲面从指跟到指端往返涂擦2遍，涂擦过程中同 时转动棉拭子；同法采集另一只手
取无菌剪刀，酒精灯外焰烧灼采样试管管口
剪去棉拭子手接触部分投入10ml含相应中和 剂的无菌洗脱液试管内；酒精灯外焰烧灼试 管管口后盖上瓶盖
临床微生物标本采集方法
一
导管尖培养标本采集
物品准备： 无菌试管、 标本标签、 无菌剪刀、 无菌手套
操作者进行卫生消毒，戴帽子、外科口罩
戴无菌手套，将拔除的中央导管用无菌剪刀剪长 约5CM，导管尖端放入无菌试管内。
脱手套，洗手， 标本及时送检
二、留置导尿管患者中段尿培养标本采 集
物品准备：治疗车、 速干手消毒剂、治 疗方盘内有盖培养 试管1支、打火机一 支、无菌手套一副、 0.5%碘伏消毒液棉 球（置换药碗内） 数个、无菌镊子1个、 弯盘1个、酒精灯1 盏（A）
五、消毒剂染菌量采样
用物准备：碘伏、含9ml中和剂试管、无菌注 射器、酒精灯、手消毒剂、记号笔
手消毒：按六步洗手法搓揉至干燥
消毒试管口：将试管放在酒精灯上旋转进行消毒， 此为重要步骤。
无菌取注射器
用无菌注射器抽取使用 中的消毒剂1ml
将抽取的消毒剂注入含 9ml中和剂的试管内，注 意不接触试管口
十、外科手消毒效果采样
物品准备：无菌棉拭子、试 管架、含中和剂的无菌洗脱 液、灭菌剪刀、酒精灯、打 火机、采样单、采样记号笔、 手消毒剂
被检者着装规范，外科手消 毒后保持双手位于胸前并高 于肘部
取无菌棉签2根浸蘸含相应 中和剂的洗脱液
一根棉签，涂擦一手五指曲 面，从指跟开始至指端，每 指跟到指端往返转动涂擦2次， 一个手涂擦面积约30c㎡；另 一只手同样涂擦
3、采样方法： 把琼脂平板放在室内各采样点，采样时 把平板盖打开扣放于平板少许边沿上， 同时培养皿下垫灭菌疗巾，暴露30min 后，盖上平板盖，并作好手术间标志及 平板上注明手术区和周边区，固定培养 皿，放指定容器内。防再次污染。
4、采样顺序： 采样时平板应从科室最靠内的房间放置， 依次向外布放，每个手术间也是从最靠 里的位置放置平板，最后放置最靠门的 采样点。采样点分布均匀，收取平板顺 序相反。
5、布点要求： 百级手术间，手术区（手术台两侧0.9m以内，两 端0.4m内）呈对角线，东南西北中5点，周边区 （距墙1m，每边2个）8点，共需13个培养皿；千 级手术间，手术区（手术台两侧0.6m以内，两端 0.4m以内）呈单角线3点，周边区（距1机，长边 2个，短边1个）6点，共需9个培养皿；万级手术 间:手术区（手术台4边，0.4m以内）呈对角线3点， 周边区（距离1m每边1个）4点，共需7个培养皿。 检测时可做一次空白对照和模拟操作。模拟操作 将一个对照皿打开后立即封盖，两个对照结果必 须为阴性，整个操作过程应符合无菌要求。
百级手术间
千级手术间
万级手术间
十万级手术间
注意事项： 1、平皿的取送与放置方法： 拿取平皿时，大在下，小在上，采样时要大 在上，小在下，大的斜盖在小的平皿上，不 能两个平皿同时向上。 2、在化验单上注明平皿暴露时间。
七、非洁净环境空气沉降菌采样
待测房间准备，静止至少10min
物品准备