细胞膜流动性的荧光检测方法
高中生物-细胞的基本结构专题强化训练(解析版)
高中生物-细胞的基本结构专题强化训练学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．下列关于真核细胞结构的叙述，正确的是（）A．细胞膜是所有活细胞的“边界”B．真核细胞都有核膜、核仁和染色质C．内质网因其分布广泛而成为细胞中的交通“枢纽”D．与动物细胞相比，植物细胞特有胞间连丝、高尔基体等结构2．组成生物膜系统的生物膜是指()A．在结构上直接相连的细胞器B．细胞内所有的生物膜C．具有单层膜结构的细胞器D．具有双层膜结构的细胞器3．下列关于细胞结构和功能的叙述中，正确的是（）A．人的成熟红细胞具有细胞核B．细胞膜结构的电镜照片是数学模型C．核酸是生命活动的主要承担者D．被溶酶体分解后的产物可被细胞再利用4．叶绿体与线粒体在分布、结构和功能上的相同点是（）①具有双层膜②进行能量转换③产生氧气④含有DNA⑤动、植物细胞都具有A．①②④B．①②③C．②④⑤D．①④⑤5．关于用高倍显微镜观察黑藻叶片细胞，说法正确的是A．在新鲜黑藻小叶装片中可进行叶绿体形态观察和计数B．叶绿体在细胞内不是固定不动的C．叶绿体在细胞内是均匀分布的D．显微镜下观察到细胞质的流动方向为逆时针，实际上为顺时针6．对生物膜结构的探索经历了漫长的过程，下列说法正确的是（）A．罗伯特森在电镜下看到生物膜是由的“脂质-蛋白质-脂质”构成的静态结构模型B．人鼠细胞融合实验运用了荧光标记法证实细胞膜具有选择透过性C．生物膜在细胞与外界进行物质运输、能量转换和信息传递过程中起决定性作用D．生物膜具有选择透过性的基础是磷脂分子具有特异性7．模型是人们为了某种特定目的而对认识所作的一种简化的概括性的描述。
下列关于模型的叙述，错误的是（）A．罗伯特森拍摄的细胞膜的电镜照片，能直观地表达认识对象的特征，属于物理模型B．数学模型可以用公式、图表等表示C．设计并用电脑制作的细胞核三维动画模型属于物理模型D．画概念图是构建概念模型的一种方法，可以梳理所学知识，建立良好的知识结构8．如图为关于细胞的生物膜系统的概念图，下列相关叙述错误的是A．图中a、b、c分别是指细胞膜、细胞器膜和核膜B．图中m是指叶绿体的类囊体薄膜C．图中p是指线粒体的内膜D．图中的f和h分别是指内质网膜和高尔基体膜9．下列关于细胞膜结构探索历程的叙述，错误的是（）A．脂溶性物质更易通过细胞膜说明细胞膜是由脂质组成的B．细胞的表面张力明显低于油——水界面的表面张力，推测细胞膜中可能还附有蛋白质C．电镜下细胞膜呈清晰的暗—亮—暗三层结构，推测细胞膜由脂质—蛋白质—脂质三层结构构成D．提取人红细胞的脂质铺成单分子层的面积是细胞表面积的2倍，说明细胞膜中的磷脂分子排列成两层10．下列关于细胞的结构与功能，错误的是（）A．分离各种细胞器常用的方法是差速离心法B．植物细胞壁成分主要是纤维素和果胶，其作用是将细胞与外界环境隔开C．RNA聚合酶在核糖体上合成后，可通过核孔进入细胞核D．细胞膜上蛋白质的种类和数量决定细胞膜功能的复杂程度二、多选题11．下面是几种细胞器的亚显微结构模式简图，相关叙述错误的是（）A．①是线粒体B．②是高尔基体C．③是叶绿体D．④是核糖体12．下列叙述能够说明细胞（或生物）代谢旺盛的有（）①体内的自由水含量比结合水多②线粒体的数量多③细胞核的核孔数量多④细胞膜上的蛋白质含量多A．①B．②C．③D．④13．荧光漂白恢复技术在细胞生物学中具有重要的应用，包括三个步骤：绿色荧光染料与膜上的蛋白质结合，细胞膜上呈现一定强度的绿色；激光照射淬灭（漂白）膜上部分绿色荧光；检测淬灭部位荧光再现速率。
证明膜蛋白流动性的经典实验
证明膜蛋白流动性的经典实验免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后，即刻引起发光；停止能量供给，发光亦瞬即停止。
荧光素是一种可吸收激发光的光便能产生荧光，并能作为染料使用的有机化合物，亦称荧光色素。
发生原理---基态 激发态产生特点：激发---即刻产生停止激发---瞬间消失种类---光致荧光，化学荧光，X线荧光，阴极射线荧光该技术的主要优缺点主要优点：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂免疫荧光技术- 基本原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。
如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。
细胞膜流动性的荧光检测方法
产品号 BB-4104 BB-4105 BB-4106 BB-4107 BB-4108 BB-4112 BB-4123 BB-4137 BB-4132
-3-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
1、 染色工作液的配制： 用稀释液稀释 TMA-DPH 探针 1000 倍-10000 倍，配制成 TMA-DPH 染色工作液。 【注】：推荐该探针加载浓度在 1000-5000 倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行 优化。使用前做预实验在推荐浓度范围内测试选定最佳浓度。
2、 用染色工作液重悬细胞，在 37℃孵育 15-30 分钟。 3、 用 pH7.4 HBSS 或 20mM HEPES 或 PBS 洗涤细胞 1 次。用 pH7.4 HBSS 或 20mM HEPES
传统的 DPH 探针可以进入细胞内，贝博试剂盒膜示踪荧光探针 TMA-DPH 不能进入细 胞内，因此 TMA-DPH 探针较 DPH 探针能更准确的反应膜脂流动性，本探针的最大激发波 长为 355nm，最大发射波长为 430nm。
试剂盒以外自备试剂和仪器 ● Hanks balanced salt solution（HBSS）或HEPES或PBS ● 移液器及吸头 ● 荧光分光光度计加偏振装置
生物膜适宜的流动性是体现生物膜正常功能的必要条件，在一定范围内，膜流动性增加， 有利于膜中酶分子的扩散和旋转运动，使酶活性增加。一些载体蛋白分子的运动性也取决于 膜中脂类分子的流动性。研究发现肿瘤对化疗药物产生的耐药性主要与细胞膜 P 糖蛋白过 度表达谷胱甘肽及其相关酶系活性改变有关，也有许多研究表明耐药细胞膜流动性较亲代敏
红细胞膜流动性测定方法
悬浮后，红细胞膜蛋白定量，用考马斯亮蓝法三、材料、试剂与器具（一）试剂1、染色液：取考马斯亮蓝G-250（红褐色） 100mg溶于50ml 95%乙醇中，加100ml 85%磷酸，加水稀释至1升。
该染色液可保存数月，若不加水可长期保存，用前稀释。
2、标准蛋白溶液：0.5mg/ml牛血清白蛋白。
3、未知浓度的蛋白质溶液用酪蛋白配制，浓度控制在10—30mg/ml（二）器具1、试管及试管架2、移液管（1ml,5ml）3、可见光分光光度计四、操作步骤（一）标准曲线的制作1、取7支试管，按下表加入试剂2、将试管摇匀，放置20分钟。
3、用分光光度计比色测定吸光值A595nm。
4、以A595nm为纵坐标，标准蛋白色质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定1、取一支试管，加入未知浓度的蛋白质溶液0.2ml，蒸馏水0.8ml考马斯亮蓝试剂5ml.2、将试管摇匀，放置20分钟。
3、比色测定吸光值A595nm，对照标准曲线求得蛋白质的浓度。
调整蛋白浓度为200~800ug/ml荧光偏振法DPH溶液：将0.464mgDPH溶于1ml四氢呋喃中配制储备液，浓度为2×10^-3mol/l，剧烈振摇3~5min,f放在棕色瓶中，避光保存于-20℃冰箱。
临用前从冰箱取出，在室温下融化，每次试验前再用PBS(0.01mmol/l，ph=7.4)）稀释成2×10^-6mol/l的工作液。
稀释时必须猛烈摇晃2~3min,红细胞膜的荧光标记：将洗净的红细胞与2×10^-6mol/lDPH在25℃条件下温育30分钟。
加入肝素抗凝的新鲜血液3000r/min离心5min,加PBS缓冲液,洗涤三次，去除上清在红细胞沉淀中加入8ml的10mmol/l ph=7.4的 HCL溶液，同时加入适量的蛋白酶抑制剂对甲苯磺酰氟，4℃溶血过夜，使红细胞膜破膜，使红细胞溶液以1200r/min，4℃离心30min,弃上清液，10mmol/l PH=7.4Tris-HCL溶液同样转数离心洗涤三次，辞去白色沉淀物，最后1:1悬浮在等体积的ph=7.4的PBS溶液中。
细胞膜毒性检测方法概括
首先，可进行细胞的毒性检测，通过台盼蓝拒染法检测细胞存活率变化，MTT或WST法检测细胞的活力。
其次，细胞功能的正常有赖于膜结构的完整及膜特性的保持，所以通过以下方法检测某种物质对细胞膜的毒性1.细胞膜通透性的变化：乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于生物细胞内，是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。
当细胞受损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可泄漏至细胞外介质中。
泄漏出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I 变成还原型辅酶I，通过测定NADH在340 nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力，从而得到细胞膜是否损伤的结果。
国外有通过试剂盒检测腺苷酸激酶的释放以及通过共聚焦激光扫描显微镜检测碘化丙啶的吸收量。
检测膜胆固醇采用邻苯二甲醛比色法。
测定波长为510 nm，按照试剂盒说明检测。
2.可通过透射电镜观察细胞膜结构及以PI为荧光染料检测核膜完整性，现在更有利用原子力学显微镜（AFM）观察细胞的形态结构及比较细胞表面粘弹力的变化，比较药物对细胞膜作用前后的膜表面结构变化。
利用AFM的力曲线得到能表明机械性能参数的粘弹力来分析比较未作用药和作用药后的细胞，一般，作用药组细胞其弹性小于未作用药细胞。
3.细胞膜表面整合素的变化：整合素是一类广泛存在于细胞表面的糖蛋白，由α和β两个亚基以非共价键连接的异二聚体，目前发现由19种α亚基和8种β亚基以不同方式组合形成24种整合素亚型。
用流式细胞仪检测细胞表面整合素(integrinpl)的表达(平均荧光强度）4.Western blot检测细胞骨架蛋白F-actin和Tubulin-β细胞骨架是由蛋白质纤维构成的胞内网络，相当于细胞的骨骼，支持着整个细胞，它紧贴在细胞膜下，赋予细胞一定的形状,对细胞及细胞器的运动也起着至关重要的作用。
应用流式细胞仪检测细胞内F-actin和tubulin-β蛋白表达的情况（通过平均荧光强度来体现）。
翟中和第四版细胞生物学1-9章习题及答案
二、选择题
1、在真核细胞和原核细胞中共同存在的细胞器是（ D ）
A. 中心粒
B. 叶绿体
C. 溶酶体
D. 核
糖体
2、在病毒与细胞起源的关系上，下面的哪种观点越来越有说服
力（ C ）
A. 生物大分子→病毒→细胞
B. 生物大分子→细胞
和病毒
C. 生物大分子→细胞→病毒
D. 都不对
3、 原核细胞与真核细胞相比较，原核细胞具有（ C ）
程度上影响宿主 DNA 复制与转录；病毒 DNA 复制之后表达晚期蛋白， 晚期蛋白是病毒包装过程中所需要的蛋白。
②RNA 病毒：一般在细胞质内复制，RNA(+)病毒的 RNA 本身就 可以作为模板，利用宿主的代谢系统翻译出病毒的早期蛋白，而 RNA(-)病毒必须以本身 RNA 为模板，利用病毒本身携带的 RNA 聚合 酶合成病毒的 mRNA；早期蛋白抑制宿主 DNA 的复制与转录，催化病 毒基因组 RNA 的合成；病毒 mRNA 与宿主的核糖体相结合翻译出病 毒的结构蛋白的等晚期蛋白；新复制的 RNA 与病毒蛋白组装。
③反转录病毒：在宿主细胞核中复制，以病毒的 RNA 为模板在病 毒自身携带的逆转录酶作用下合成病毒 DNA 分子，整合到宿主 DNA， 以 次 段 整 合 DNA 为 模 板 ， 合 成 新 的 病 毒 基 因 组 RNA 和 mRNA，后者与核糖体相结合，翻译出各种病毒蛋白，其中包括病毒 的反转录酶，最后装配子代病毒。
细胞克隆 ：用单细胞克隆培养或通过药物筛选的方法 从某一细胞系中分离出单个细胞，并由此增殖形成的，具有 基本相同的遗传性状的细胞群体。 细胞系 ：原代细胞传 40~50 代次，并且仍保持原来染色体的二倍 体数量及接触抑制的行为，这种传代细胞称作细胞系。 细胞株 ：有特殊的遗传标记或性质，这样的细胞系可以成为细 胞株。 原代细胞 ：从有机体取出后立即培养的细胞 传代细胞：进行传代培养后的细胞 单克隆抗体 ：产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合
细胞膜流动性实验报告
细胞膜流动性实验报告细胞膜流动性实验报告细胞是生命的基本单位，而细胞膜则是细胞的外层包裹物，起着保护细胞内部结构和调控物质进出的重要作用。
细胞膜的流动性是指细胞膜中脂质分子的自由运动，这一现象对于细胞的正常功能至关重要。
本实验旨在通过观察细胞膜的流动性，了解细胞膜的结构与功能之间的关系。
实验材料和方法：实验所需材料包括细胞培养物、荧光标记的脂质分子、显微镜和图像记录设备。
实验步骤如下：1. 准备细胞培养物：选择合适的细胞系进行培养，确保细胞生长状态良好。
2. 标记脂质分子：将荧光标记的脂质分子添加到培养物中，使其与细胞膜结合。
3. 观察细胞膜流动性：将培养物置于显微镜下，调节焦距和放大倍数，观察细胞膜上的荧光信号，并记录图像。
实验结果：在观察过程中，我们发现细胞膜上的荧光信号呈现出一定的流动性。
这表明细胞膜中的脂质分子具有一定的自由运动能力。
不同区域的荧光信号强度也存在差异，这可能与细胞膜上的蛋白质分布和细胞内外环境的差异有关。
进一步观察发现，细胞膜上的荧光信号在不同时间段内也发生了变化。
有时信号呈现出较为稳定的分布，而有时则出现了明显的聚集和分散现象。
这表明细胞膜的流动性可能受到多种因素的影响，如细胞内信号传导、外界刺激等。
讨论与结论：细胞膜的流动性是细胞功能的重要基础，它能够调节细胞内外物质的交换和信号传导。
本实验通过观察细胞膜上的荧光信号，初步了解了细胞膜的流动性特点。
细胞膜的流动性受到多种因素的调控。
首先，细胞膜上的磷脂分子和蛋白质分子相互作用，形成了复杂的结构。
这些结构能够限制脂质分子的自由运动，从而影响细胞膜的流动性。
其次，细胞内外的环境因素也会对细胞膜的流动性产生影响。
例如，细胞外环境的温度和离子浓度变化可以改变细胞膜的流动性。
此外，细胞膜的流动性还与细胞功能密切相关。
一些研究表明，细胞膜上的流动性与细胞的增殖、分化和迁移等过程有关。
因此，研究细胞膜的流动性对于深入了解细胞功能和疾病机制具有重要意义。
证明膜蛋白流动性的经典实验
证明膜蛋白流动性的经典实验免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后，即刻引起发光；停止能量供给，发光亦瞬即停止。
荧光素是一种可吸收激发光的光便能产生荧光，并能作为染料使用的有机化合物，亦称荧光色素。
发生原理---基态激发态产生特点：激发---即刻产生停止激发---瞬间消失种类---光致荧光，化学荧光，X线荧光，阴极射线荧光该技术的主要优缺点主要优点：特异性强、敏感性高、速度快。
主要缺点：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂免疫荧光技术- 基本原理免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。
由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。
免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。
如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。
技术分类1 荧光抗体技术(荧光显微镜技术)抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。
2 免疫荧光测定技术抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法荧光物质1、荧光色素：许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
产品说明书
相关产品：
产品 Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 Annexin V-EGFP/PI 凋亡试剂盒 MTT 细胞增殖及毒性检测试剂盒 CCK-8 细胞增殖毒性检测试剂盒 WST-1 细胞增殖毒性检测试剂盒 MTS 细胞增殖与毒性检测试剂盒 Hoechst33342/PI 双染试剂盒 DAPI 染色试剂盒 细胞存活率检测试剂盒
-1-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
感细胞明显增加。另有实验研究发现腹水癌细胞的恶性程度随着膜流动性的增加而增加，白 血病及转移的肿瘤细胞的膜流动性远远高于非转移细胞。因此，对敏感及耐药的肿瘤细胞膜 流动性的监测有着重要的意义。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。 ● 染色液为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸 头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头 内壁产生损耗。 ● 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
产品说明书
细胞膜流动性 TMA-DPH 荧光偏振检测试剂盒
产品组成：
产品编号 规格
TMA-DPH 染色液 稀释液
BB-48111-1 20 -200T 100ul 25ml
BB-48111-2 50 -500T 250ul 100ml
储存条件： 2-8℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。
有效期： 一年。
产品号 BB-4104 BB-4105 BB-4106 BB-4107 BB-4108 BB-4112 BB-4123 BB-4137 BB-4132
-3-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
或 PBS 重悬细胞 4、 用该细胞进行检测。激发波长 355nm，发射波长 430nm。
按下列公式计算荧光偏振度 P： P=（IVV-GIVHIHV）/(IVV+GIVH) 其中校正因子 G=IHV/IHH 式中 IVV:起偏和检偏器光轴同为垂直方向时测得的荧光强度;
IVH:起偏和检偏器光轴分别为垂直和水平方向时测得的荧光强度。 IHV:起偏和检偏器光轴分别为水平和垂直方向时测得的荧光强度;
使用方法：
使用注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液
体洒落。 ● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。 ● 染色后立即进行分析。 ● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确
定最佳条件。以下方法仅供参考。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
-2-
咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
IHH:起偏和检偏器光轴同为水平方向时测得的荧光强度。 P 值越大 ,流动性越小；P 值越小，流动性越大。
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
膜流动性的测定方法主要有荧光探针标记，电子自旋共振以及差示扫描量热法，x 线衍 射，棱碰共振等。
贝博 TMA-DPH 试剂盒是利用 TMA-DPH 测定膜流动性的荧光探针法，它在脂蛋白及 其类似系统的单分子层动力学研究中特别有用。DPH 及其衍生物（例如 TMA-DPH）都呈 圆柱形，会发生基于按长分子轴线平行排列而产生发射荧光向偶极跃迁。例如，它们对由于 周围脂类相互作用而导致的再定位非常敏感。它们广泛地被用于旋转运动研究中的荧光偏振 分析。
产品简介： 膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状
态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转 及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影 响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分 子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度 下，不易于凝集，此外，脂肪酸烃链围绕 C- C 键由全反式构型到歪扭(CAUCHE)的旋转异 构运动，也可使流动性加大。
1、 染色工作液的配制： 用稀释液稀释 TMA-DPH 探针 1000 倍-10000 倍，配制成 TMA-DPH 染色工作液。 【注】：推荐该探针加载浓度在 1000-5000 倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行 优化。使用前做预实验在推荐浓度范围内测试选定最佳浓度。
2、 用染色工作液重悬细胞，在 37℃孵育 15-30 分钟。 3、 用 pH7.4 HBSS 或 20mM HEPES 或 PBS 洗涤细胞 1 次。用 pH7.4 HBSS 或 20mM HEPES
传统的 DPH 探针可以进入细胞内，贝博试剂盒膜示踪荧光探针 TMA-DPH 不能进入细 胞内，因此 TMA-DPH 探针较 DPH 探针能更准确的反应膜脂流动性，本探针的最大激发波 长为 355nm，最大发射波长为 430nm。
试剂盒以外自备试剂和仪器 ● Hanks balanced salt solution（HBSS）或HEPES或PBS ● 移液器及吸头 ● 荧光分光光度计加偏振装置