第二章药物分析基础分析方法验证
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量均匀度,溶出度或释放度的测定方法: 除“检测 限”和“定量限”外, 其余均验证
➢ 微量定量分析方法 如杂质的定量测定方法: 除
“检测限”视情况而定外, 其余均验证
2020/8/5
10
八、验证内容的选择
验证内容
准确度
重复性
精密度
中间精密度
专属性 检测限 定量限
线性 范围 2020/8/5 耐用性
鉴别 试验
2.中间精密度
不同时间不同 分析人员用不同 设备测定结果之 间的精密度 批/日间精密度
3.重现性
在不同实验室 不同人员测定结 果之间的精密度
法定标准采用的 分析方法进行
定义
2020/8/5
❖同一均匀供试品多次取样测定所得 结果之间的接近程度
❖标准偏差(s,SD);相对标准偏差(RSD) ❖数据要求同“准确度”
LOD
f
3S空
C样 A样
3S空
5
五、定量限
定量限(limit of quantitation, LOQ )是指试样 中被测物能被定量测定的最低量; 反映方法的灵敏度
2020/8/5
测定结果应具有一定准确度和精密度
杂质和降解产物用定量方法研究时, 应确定LOQ
LOQ的测定方法与LOD相同 相应的系数(倍数)不同, 如信噪比S/N=10
+ + +
分析项目
元素或杂质检查 含量测定及 限度 定量 溶出量测定
+
+
+
+
+
+
+
+
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+
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+
+
+ 11
练习
1．相对标准差表示的应是（ ） A．准确度 B．回收率 C．精密度 D．纯净度 2．药物分析方法的效能指标有（ ）
A．检测限 B．耐用性 C．准确度 D．专属性
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六、线性与范围
2020/8/5
线性系指在设计的“范围”内, 响应值(y)与 被测物浓度(x)直接呈正比关系的程度 y = ax +b
系列(n≥5)供试样品测定,以响应信号作为被测 物浓度的函数作图
用最小二乘法进行线性回归; 或经数学转换后 再进行线性回归
➢ 范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间 ➢ 在试验研究开始前确定验证的范围和方法 ➢ 在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性
(一) 含量测定方法
(三) 数据要求
回收率（%）
测得量 加入量
100（%）
9个测定结果
回收率（%）
测得总量 样品含量 加入量
100（%）
(二) 杂质定量测定
3个不同浓度 (80,100,120％)
2020/8/5
加入已知量杂质进行测试
每个浓度各3份
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二、精密度
1.重复性
同一分析人员 连续测定所得结 果的精密度; 也称批内精密 度或日内精密度
1.目视法
2.信噪比法
2020/8/5
3.标准偏差 法
➢ 适用于可用目视法直接评价结果的 分析方法, 非仪器分析法
➢ 鉴别的显色法;杂质检查的TLC
适用于能直观显示信号与基线噪声 水平的分析方法, 如HPLC法
信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量
适用于不能直观比较信噪比的仪器
分析方法, 如UV-Vis法
药品质量标准分析方法验证
需验证的项目
•鉴别试验 •杂质检查 •含量测定 •防腐剂 •溶出度,释放度
2020/8/5
验证的内容
准确度
精密度
重复性 中间精密度 重现性
专属性
检测限 定量限 线性 范围 耐用性
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一、准确度
定义
❖ 准确度系指用该方法测定的结果与 真实值或参考值接近的程度
❖ 一般用回收率(%)表示
➢ 杂质测定:
限度±20%
如果杂质检查与含量测定同时进行, 杂质限度-20％~含量上限+20%
8
七、耐用性
➢ 耐用性系指在测定条件有小的变动时, 测定
结果不受影响的承受程度; 体现测定条件的
允许变动范围
➢ HPLC法典型因素有: 流动相的组成和pH值
及流速, 不同厂牌或不同批号的同类型色谱
柱, 柱温等
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三、专属性
定义 与应用
❖ 在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能 存在下,方法能正确测定出被测物的特性
❖ 鉴别,杂质检查和含量测定方法
(一) 鉴别反应 空白, 结构相
似物或有关物质呈 负反应
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(三) 含量与杂质测定 含杂质或降解产
物的试样中各峰能 获得分离
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四、检测限
检测限(limit of detection, LOD)是指试样中被 测物能被检测出的最低浓度或量 LOD是一种限度检验效能指标,反映方法灵敏度
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六、线性与范围
涉及定量测定的项目均需对范围进行验证 如: 含量测定, 含量均匀度, 溶出度或释放 度, 特殊元素或特殊杂质的定量检查
2020/8/5
Βιβλιοθήκη Baidu
➢ 原料药/制剂含量测定: 80%~120%
➢ 制剂含量均匀度检查: 70%~130%
➢ 溶出度或释放度检查: 下限-20%~上限+20%
➢ 特殊元素含量测定: 下限-20%~上限+20%
➢ GC法典型因素有: 不同厂牌或批号的色谱柱,
固定相, 不同类型的担体, 柱温, 进样口和检
测器温度等
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八、验证内容的选择
验证内容选择的一般原则: ➢ 非定量分析方法 如鉴别,杂质的限度检查法: 验
证“专属性”,“检测限”和“耐用性”
➢ 定量分析方法 如原料药或制剂的含量测定及含
➢ 微量定量分析方法 如杂质的定量测定方法: 除
“检测限”视情况而定外, 其余均验证
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八、验证内容的选择
验证内容
准确度
重复性
精密度
中间精密度
专属性 检测限 定量限
线性 范围 2020/8/5 耐用性
鉴别 试验
2.中间精密度
不同时间不同 分析人员用不同 设备测定结果之 间的精密度 批/日间精密度
3.重现性
在不同实验室 不同人员测定结 果之间的精密度
法定标准采用的 分析方法进行
定义
2020/8/5
❖同一均匀供试品多次取样测定所得 结果之间的接近程度
❖标准偏差(s,SD);相对标准偏差(RSD) ❖数据要求同“准确度”
LOD
f
3S空
C样 A样
3S空
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五、定量限
定量限(limit of quantitation, LOQ )是指试样 中被测物能被定量测定的最低量; 反映方法的灵敏度
2020/8/5
测定结果应具有一定准确度和精密度
杂质和降解产物用定量方法研究时, 应确定LOQ
LOQ的测定方法与LOD相同 相应的系数(倍数)不同, 如信噪比S/N=10
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分析项目
元素或杂质检查 含量测定及 限度 定量 溶出量测定
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练习
1．相对标准差表示的应是（ ） A．准确度 B．回收率 C．精密度 D．纯净度 2．药物分析方法的效能指标有（ ）
A．检测限 B．耐用性 C．准确度 D．专属性
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六、线性与范围
2020/8/5
线性系指在设计的“范围”内, 响应值(y)与 被测物浓度(x)直接呈正比关系的程度 y = ax +b
系列(n≥5)供试样品测定,以响应信号作为被测 物浓度的函数作图
用最小二乘法进行线性回归; 或经数学转换后 再进行线性回归
➢ 范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间 ➢ 在试验研究开始前确定验证的范围和方法 ➢ 在范围内应能达到一定精密度,准确度和线性
(一) 含量测定方法
(三) 数据要求
回收率（%）
测得量 加入量
100（%）
9个测定结果
回收率（%）
测得总量 样品含量 加入量
100（%）
(二) 杂质定量测定
3个不同浓度 (80,100,120％)
2020/8/5
加入已知量杂质进行测试
每个浓度各3份
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二、精密度
1.重复性
同一分析人员 连续测定所得结 果的精密度; 也称批内精密 度或日内精密度
1.目视法
2.信噪比法
2020/8/5
3.标准偏差 法
➢ 适用于可用目视法直接评价结果的 分析方法, 非仪器分析法
➢ 鉴别的显色法;杂质检查的TLC
适用于能直观显示信号与基线噪声 水平的分析方法, 如HPLC法
信噪比S/N=3(2)时的相应浓度或量
适用于不能直观比较信噪比的仪器
分析方法, 如UV-Vis法
药品质量标准分析方法验证
需验证的项目
•鉴别试验 •杂质检查 •含量测定 •防腐剂 •溶出度,释放度
2020/8/5
验证的内容
准确度
精密度
重复性 中间精密度 重现性
专属性
检测限 定量限 线性 范围 耐用性
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一、准确度
定义
❖ 准确度系指用该方法测定的结果与 真实值或参考值接近的程度
❖ 一般用回收率(%)表示
➢ 杂质测定:
限度±20%
如果杂质检查与含量测定同时进行, 杂质限度-20％~含量上限+20%
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七、耐用性
➢ 耐用性系指在测定条件有小的变动时, 测定
结果不受影响的承受程度; 体现测定条件的
允许变动范围
➢ HPLC法典型因素有: 流动相的组成和pH值
及流速, 不同厂牌或不同批号的同类型色谱
柱, 柱温等
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三、专属性
定义 与应用
❖ 在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能 存在下,方法能正确测定出被测物的特性
❖ 鉴别,杂质检查和含量测定方法
(一) 鉴别反应 空白, 结构相
似物或有关物质呈 负反应
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(三) 含量与杂质测定 含杂质或降解产
物的试样中各峰能 获得分离
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四、检测限
检测限(limit of detection, LOD)是指试样中被 测物能被检测出的最低浓度或量 LOD是一种限度检验效能指标,反映方法灵敏度
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六、线性与范围
涉及定量测定的项目均需对范围进行验证 如: 含量测定, 含量均匀度, 溶出度或释放 度, 特殊元素或特殊杂质的定量检查
2020/8/5
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➢ 原料药/制剂含量测定: 80%~120%
➢ 制剂含量均匀度检查: 70%~130%
➢ 溶出度或释放度检查: 下限-20%~上限+20%
➢ 特殊元素含量测定: 下限-20%~上限+20%
➢ GC法典型因素有: 不同厂牌或批号的色谱柱,
固定相, 不同类型的担体, 柱温, 进样口和检
测器温度等
2020/8/5
9
八、验证内容的选择
验证内容选择的一般原则: ➢ 非定量分析方法 如鉴别,杂质的限度检查法: 验
证“专属性”,“检测限”和“耐用性”
➢ 定量分析方法 如原料药或制剂的含量测定及含