微生物实验课 3
实验三微生物的分离纯化与观察ppt课件
实验二 微生物的分离纯化、
接种培养与保藏
福建农林大学生命科学学院
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平板分离的方法主要有：
1、平板划线分离法； 2、稀释涂布平板法。
除能有效分离纯化微生物外 ，还可用于测定样品中活菌 数量。
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土壤中微生物数量众多，在肥沃土壤中固氮 菌数量也很多，自然界中多数氮素养料是由微生 物固氮的结果，固氮菌一般可分为自生固氮菌和 共生固氮菌两类。
精灯等。
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四 方法与步骤
（一）富集培养： • 1、用已灭菌后冷却至50oC左右的阿斯毕培
养基倒成平板。 • 2、用已灭菌的镊子将黄豆粒大的菜园土摆
入已冷凝的平板培养基上。 • 3、正面放置培养箱中培养，28oC培养3~4
天后，在土粒周围有混浊半透明的胶状菌 落出现，有的在后期会产生褐色的色素。
• 1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜 面试管中，28oC培养4天。
• 2、镜检：将斜面菌株进行涂片、染色、镜检。如是粗短 杆状或球状的单一形态的菌体细胞较大，常呈单个或“8” 字排列，在细胞表面有较厚的荚膜者，即为自生固氮菌。 如有杂菌，需要进一步划线纯化。
• 3、将得到纯化菌株，移接到另一阿斯毕培养基斜面管， 28oC培养3~4天，即获得纯培养菌，可冷冻保存，备用。
要分离自生固氮菌，常用阿斯毕无氮培养基 这种选择培养基，控制其适宜环境条件，使它在 培养基上大量繁殖，然后通过稀释法和划线分离 纯化法，使它在培养基上形成单菌落，如分离所 得不纯，需要进一步纯化，直到得到纯种.
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三 实验材料
• 1、培养基：阿斯毕无氮培养基。 • 2、菜园土。 • 3、灭菌培养皿、镊子、剪刀、接种针、酒
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
幼儿园微生物实验课程安排 幼儿园科学
幼儿园微生物实验课程安排随着科学技术的不断进步，科学教育在幼儿园教育中占据了越来越重要的位置。
幼儿园科学课程的设计和实施对幼儿的认知发展和兴趣培养起着重要的作用。
微生物实验作为科学课程的一部分，不仅能够激发幼儿对科学的兴趣，还能够促进幼儿的观察、实验和探究能力的培养。
合理安排幼儿园微生物实验课程显得尤为重要。
一、实验课程的目的和意义幼儿园微生物实验课程旨在引导幼儿了解微生物的基本概念，培养幼儿的观察、实验和思考能力，促进幼儿对科学的兴趣和探究精神。
通过实验探究微生物的特点、生长环境以及与人类生活的关系，让幼儿在实践中学习科学知识，培养幼儿对微生物的正确认识和应对微生物的正确态度。
二、课程设置和内容安排1. 实验课程的内容幼儿园微生物实验课程应围绕着幼儿生活中常见的微生物展开，如酵母菌、乳酸菌等。
通过实验，引导幼儿去观察和认识微生物的外观、特征、生长环境等基本信息，同时加深他们对微生物的认识和了解。
实验课程的内容主要包括以下几个方面：- 微生物基本概念的介绍- 不同种类微生物的观察和比较- 微生物的生长环境和条件- 微生物在日常生活中的应用和意义2. 实验课程的设置幼儿园微生物实验课程的设置应当符合幼儿的认知特点和实际情况，课程设置需要注意以下几点：- 实验内容的选择应当贴近幼儿的生活经验和兴趣爱好，能够引发幼儿的好奇心和探究欲望。
- 实验的安排需要考虑到幼儿的实际操作能力，选用简单易行、容易获取的实验材料和器具，让幼儿能够亲自动手进行实验操作，提高他们的实践能力和操作技能。
- 实验的时间安排需要合理，不能过长或者过于繁琐，以免引起幼儿的疲劳和厌烦。
三、实验课程的实施步骤和方法1. 实验前的准备工作在进行微生物实验课程之前，教师需要进行充分的准备工作，包括实验教具、实验材料和实验环境的准备，还要对实验过程和方法进行反复测试和实践，确保实验的顺利进行和教学效果的达到。
2. 实验课程的实施步骤（1）引入教师可以通过故事、图片、实物等引导幼儿对微生物进行初步的了解，引发他们的好奇心和探索欲望。
幼儿园微生物科学实验教案 幼儿园科学
主题：幼儿园微生物科学实验教案一、教学目标1. 让幼儿了解微生物的存在和作用；2. 引导幼儿培养观察、探索和实验的能力；3. 培养幼儿的科学素养和动手能力。
二、教学准备1. 实验器材：显微镜、玻璃片、盖玻片、移液管、培养皿、琼脂培养基、小瓶、棉签等；2. 教具：微生物模型、幼儿科学图书、幼儿启发问题卡；3. 教师准备：制定实验方案，准备教具及实验器材。
三、实验步骤1. 引入：通过展示微生物模型，跟幼儿简单介绍微生物的概念和形态特征，引发幼儿的好奇心；2. 观察：让幼儿用显微镜观察不同的微生物，包括酵母菌、乳酸菌等，并观察它们在不同环境下的生长状态；3. 实验：通过将不同微生物分别移植到培养皿上，让幼儿观察和记录微生物的生长情况，引导幼儿学会使用移液管和培养皿；4. 总结：带领幼儿讨论实验结果，引导幼儿总结微生物的特点和作用。
四、拓展活动1. 制作微生物手工：让幼儿利用纸板、毛线等材料，制作简单的微生物手工，加深对微生物的了解；2. 游戏互动：设计微生物相关的游戏活动，如“捉微生物”、“微生物大冒险”等，增强幼儿对微生物的兴趣和认识；3. 角色扮演：组织角色扮演活动，让幼儿扮演微生物研究员、微生物警察等角色，激发幼儿的想象力和创造力。
五、教学评价1. 知识水平：通过观察实验结果，看幼儿是否能够正确观察、记录微生物的特点；2. 动手能力：观察幼儿在实验中使用显微镜、移液管等实验器材的操作是否熟练；3. 综合素养：通过互动游戏和角色扮演，看幼儿是否能够积极参与、合作并表达自己的观点。
六、教学反思1. 教学方法：是否能够充分利用幼儿的好奇心，激发他们的学习兴趣；2. 实验器材：是否能够提前准备好所需的实验器材，并保证实验的顺利进行；3. 教学效果：观察幼儿对微生物实验的反应和成果，反思教学方案和方法，如何更好地引导幼儿学习。
七、教学心得通过本次微生物实验教学，让幼儿不仅对微生物有了初步的认识，同时也培养了他们的动手能力、观察能力和合作意识。
医学微生实验 本科实验三细菌致病性及病原性球菌-PPT文档
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛
微生物学实验报告
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。
微生物细菌分离培养实验报告
微生物细菌分离培养实验报告土壤微生物的分离培养技术实验报告重庆大学研究生专业实验教学实验报告书实验课程名称:实验指导教师:学院: 专业及类别: 学号: 姓名: 实验日期: 成绩:重庆大学研究生院制一、实验目的1、了解分离与纯化微生物的基本原理及方法;2、了解倒平板配制土豆培养基的方法与平板划线分离的基本操作技术;;3、学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能;4、初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。
二、实验原理1、培养基的种类培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。
培养基的种类很多，根据培养成分的不同可分为天然培养基、合成培养基与半合成培养基;根据物理状态的不同又可分为液体培养基和固体培养基。
微生物的分离、纯化、记数等方面的研究常常使用的就是固体培养基。
本实验就是使用的固体培养基。
已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。
培养基的原材料来源十分广泛，本实验采用的原材料为土豆。
2、接种方法与无菌接种将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
接种的关键是要严格的进行无菌操作。
微生物的接种方法很多，划线接种、三点接种、穿刺接种、混浇接种与涂布接种是几种常用的接种方法。
划线接种是最常用的接种方法，即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可以达到接种的目的。
常用的接种工具为接种环、针等。
在斜面接种和平板划线中就常用此法。
三点接种是把少量的微生物接种在平板表面，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察研究它们的形态。
研究霉菌形态时就常用此法。
微生物实验教程
实验 1—1 普通光学显微镜的使用……………………………………………………………
实验 1—2 细菌的形态结构观察 (简单染色、革兰氏染色、抗酸染色) ……………………
实验 1—3 细菌的特殊结构和运动性观察 (芽胞染色、荚膜染色、鞭毛染色) ……………
实验 1—4 放线菌的形态结构观察 …………………………………………………………
一滴镜油作为介质。国产显微镜的油镜常标有“油”字，国外产品则常用“oil”（oil Immersion）
或“HI”（Hemcyeneous Immersion）字样，以供识别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径
（亦称镜口率）、工作距离等主要参数。
3、聚光器：也叫集光器，由聚光镜和可变光阑组成。聚光镜由一片或数片透镜组成，
面是平面镜，另一面是凹面镜，其作用是使光源发出的光或自然光射向聚光镜。光强时用平
面镜，光弱时用凹面镜。有的显微镜的人工光源安装在镜座内，其反光镜也固定在镜座内。
（三） 普通光学显微镜的光学原理
心
由单透镜构成的放大镜和由几块透镜组成的实 体显微镜（解剖镜）称单式显微镜生物学教学及科 研所用的光学显微镜一般是复式显微镜。
高学生的综合能力与创新意识。
教
验
实 3. 提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本
学 特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的
问题点样分析，
范
师
京
南
第一节 微生物的形态结构观察
微生物的个体微小，肉眼难以看见，必须借助显微镜才能观察到。因此．显微镜就成为 微物学研究工作者不可缺少的基本工具，从事有关微生物学教学、科研和生产的人员，都应 该了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握不同显微镜的使用方法。
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药敏试验步骤
用无菌棉拭子蘸取金黄色 葡萄球菌16～18h培养物，均 匀涂布于普通琼脂平板表面。 用无菌镊子分别取含有抗 生素的滤纸片均匀贴于已涂 布细菌的平板表面。 置37℃培养18～24h，观 察并测量滤纸片周围抑菌圈 及大小。
干热灭菌法
1.焚烧：是一种彻底的灭菌 方法，但仅适用于废弃物 品或尸体等。
微生物学试验 实验三 消毒灭菌和药敏试验
实验内容和要求
1.掌握药敏试验的原理、步骤、结果及 意义
2.掌握常用的消毒与灭菌技术 3.熟悉紫外线杀菌试验的原理 4.了解细菌L型的诱导和菌落类型
药敏试验原理
体外测定抗生素药物抑菌或 杀菌的能力。可帮助临床对感染 性疾病选择最佳用药，还可进行 流行病学调查，了解某些致病菌 耐药性变异情术有哪些？分 别有什么用途？灭菌的标准是什 么？
2.紫外线杀菌作用的原理如何？有 什么特点？
3.什么是细菌L型？细菌L型的形态 染色有什么特点？分离培养细菌 L型的培养基有什么特点？
本次实验课结束
明天看试验结果后请组长收齐作 业交上来，值日同学留下 再见！
滤过除菌
化学消毒法
用化学药品进行消毒的方法，由于 化学药品对细菌及人体都有毒性，故只 能用于体表、医疗器械及周围环境等的 消毒。 杀菌机制： （1）使菌体蛋白质变性或凝固； （2）干扰细菌的酶系统和代谢； （3）影响细菌胞浆膜的通透性。
消毒剂类别 重金属盐
氧化剂
卤素类 醇类 酚类
表面活性剂 酸碱类 染料
2.烧灼：直接用火焰灭菌， 适用于微生物学实验室的 接种环、试管口等的灭菌。
3.干烤
湿热灭菌法
1.煮沸法 2.巴氏消毒法 3.高压蒸汽灭菌
法
紫外线消毒法
波长240～280nm时具有 杀菌作用，紫外线杀菌机理 主要是作用于细菌DNA，干扰 细菌DNA的复制与转录，导致 细菌的死亡或变异。
紫外线穿透力差，故只 适用于空气及不耐热物品的 表面消毒。
同上、也常用于手及皮肤消毒
手术器械消毒 排泄物、地面消毒 表浅创伤消毒
细菌L型－细胞壁缺陷细菌
形成条件： 细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物因素的直 接破坏或合成抑制而形成。
生物学特性：形态多形性 ；染色革兰阴性；培养高渗培 养基；菌落油煎蛋样
与医学关系仍：有一定致病性
临床分离葡萄 球菌L型
葡萄球菌L型 回复后
名称 红汞 硫柳汞 高锰酸钾 过氧化氢 过氧乙酸 碘液 乙醇 石炭酸
来苏
新洁尔灭 生石灰 龙胆紫
浓度(%) 2
0.01 0.1 3 0.2～0.5 2.5 70～75 3～5
3～5
0.1 1:4～1:8
2～4
用途 皮肤、粘膜、小创面消毒 生物制品防腐 皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒 皮肤、粘膜、创伤消毒 塑料、玻璃、人造纤维消毒 皮肤消毒 皮肤、体温计消毒 地面、器皿表面和排泄物消毒