微生物学实验.
微生物学实验
溶血链球菌（Streptomyces microflavus）：形态
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短 不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的 种类及生长环境有关。该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的 碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬 后，转为革兰氏阴性。向一个方向分裂，若没有完全分开
自主设计实验：40%，包括设计实验方案、实验操作，总结， 汇报交流 实验考试10%：理论、实验操作
2. 细菌形态观察（装片） 基本概念： 细菌（Bacteria, Bacterium） 芽孢（spore） 鞭毛（flagella）：所有弧菌、螺菌类普遍着
生鞭毛和假单胞菌都长有端生鞭毛，约半数杆菌 和少数球菌有鞭毛。
1.6. 安全 常规：水、电、门、窗等 微生物与化学试剂 仪器使用：高压灭菌器、离心机 废弃物
1.7、微生物实验安排与考核
5个综合模块，共14次实验：50%
一、综合模块1-细胞水平：个体形态观察（9学时） 二、综合模块2-群体水平：目的微生物的分离筛选及纯化技术（9学时） 三、综合模块3-生理生化水平：生理生化测定、理化因素对微生物生长 的影响（9学时） 四、综合模块4-遗传水平、免疫水平：细菌转导、菌种保藏方法、血清 学反应（6学时） 五、综合模块5-分子水平：微生物系统发育学分析（9学时）
苏云金芽孢杆菌（Bacillus thruingiensis）：芽孢、伴胞晶体
芽孢在一端、易观察。形态与生理特征和蜡状芽孢杆菌相似，所不同的是在适合条件下 能产生伴孢晶体，晶体为菱形，因此被认为是蜡状芽孢杆菌的致病变种，最早由国外引 进，后在国内各地也陆续分离到很多相似的亚种，例如青虫菌、杀螟杆菌等。 存在于土壤及生病的鳞翅目昆虫上。 能使鳞翅目昆虫染病致死，广泛应用于生物防治，做生物杀虫剂。
微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
微生物学实验课目的及意义
微生物学实验课目的及意义
摘要：
一、微生物学实验课的目的
二、微生物学实验课的意义
正文：
微生物学是一门研究微生物种类、结构、生理功能、生态分布、应用技术等方面的学科。
微生物学实验课作为理论教学的补充，具有重要的实践意义。
一、微生物学实验课的目的
1.巩固理论知识：通过实验操作，使学生对微生物学的基本概念、原理和方法有更深入的理解，为今后学习打下坚实基础。
2.培养实际操作能力：实验课让学生亲自动手操作显微镜、染色、制片等，掌握微生物学的基本实验技能。
3.提高观察和分析问题的能力：实验过程中，学生可以观察微生物的形态、结构、生理特性等，培养观察和分析问题的能力。
4.培养科研兴趣：实验课让学生了解微生物学研究的最新动态，激发对科学研究的兴趣和热情。
二、微生物学实验课的意义
1.促进理论联系实际：实验课将课堂所学理论知识与实际操作相结合，有助于提高学生的学习兴趣和效果。
2.培养创新能力：实验过程中，学生可以学会设计实验、分析数据、解决问题，为创新能力的培养奠定基础。
3.增强团队协作能力：实验课通常以小组形式进行，学生需要在团队中分工合作，共同完成实验任务，从而培养团队协作能力。
4.提高综合素质：微生物学实验课有助于培养学生严谨的科学态度、独立的思考能力和良好的实验习惯，提高综合素质。
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
医学微生物学实验：细菌的分布
一、实验题目：细菌的分布
二、实验目的：
1.熟悉细菌分布的常用检查方法。
2.了解细菌分布的广泛性，树立“有菌”观念，认识“无菌操作”对于微生物学及医学实践的重要意义。
3.了解常规消毒方法
三、实验原理
通过不同途径，采集各种状态下的细菌标本，经过培养观察，证明细菌的分布状态。
四、实验材料
1.自来水、土壤悬液、碘液
2.无菌普通琼脂平板培养基、血平板、酒精灯、接种环、恒温培养箱
五、实验方法及步骤
1.空气中细菌的分布：采用暴皿沉降法，取5个无菌普通琼脂平板培养基，分别置于实验室、办公室、无菌室、卫生间、走廊，在空气中暴露30min后盖上盖子，37℃恒温培养48h。
2.水中细菌的分布：采用划线法。
①取1个无菌普通琼脂平板培养基，在培养皿底部用记号笔划线将培养皿平均分成两部分。
②用酒精灯外焰灼烧接种环杀菌，用接种环接取中段自来水，在培养基一侧表面划线。
③再次灼烧接种环，用接种环取土壤悬液，在培养基另一侧表面划线，再次灼烧接种环。
④盖上盖子，37℃恒温培养48h。
3.手上细菌的分布：采用涂抹法。
取1个无菌普通琼脂平板培养基，在皿底将其平均分为3个部分。
①用手指在第一个区域内轻轻压涂两下；②用自来水简单冲洗手，在第二个区域内轻轻压涂两下；③用碘液将手指消毒，风干后在第三个区域内轻轻压涂两下。
④盖上盖子，37℃恒温培养48h。
4.咽喉部细菌的分布：取1个血平板，近皿咳嗽4-6次，确保有飞沫进入培养皿。
盖上盖子，37℃恒温培养48h。
六、实验结果及分析。
微生物常用实验3篇
微生物常用实验第一篇：细菌涂片染色实验细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。
通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。
下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤：一、制备细菌涂片1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。
2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。
3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。
二、涂片染色1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。
2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。
3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。
4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。
5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。
6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。
通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。
第二篇：厌氧培养实验厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。
在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。
下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤：一、制备厌氧培养基制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。
具体操作步骤如下：1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。
2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。
3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。
二、厌氧细菌接种与培养1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。
一般情况下，把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞，并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。
2.在无氧条件下接种厌氧菌，避免暴露于空气中。
可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物学实验技术
微生物学实验技术
微生物学实验技术是研究和发掘微生物的重要方法，也是一门多种实验技术和方法的
综合。
它既可以应用于生物体内，对微生物调查，可以使用培养基或特定介质进行鉴定，
也可以用来通过遗传工程分离、改造微生物，了解不同微生物的全部 trait 特性。
一、培养微生物
培养微生物是一种最常用的微生物实验技术，需要使用特定的培养基，通过控制温度、湿度等变量的变化来培养不同的微生物。
通过检测培养基中的微生物数量及某些代表性特征，可确定微生物的分类特征，来鉴定微生物的种类和形式。
二、基因组测序
基因组测序是一种实验技术，是分析一个微生物种类全部 genetic 的方法。
主要利
用高通量DNA测序技术，对样品中贮藏的 DNA 进行范围检测，得到 DNA 的测定序列，从
而确定微生物的遗传结构、物种种类，以及特定物种生态和功能特征。
三、共价法抗菌药敏试验
共价法抗菌药敏试验是研究微生物对一类药物或多类药物的抗性程度的重要方法之一。
通过检测药物剂量的不同，在药物浓度相同的情况下微生物在某种时间内生长情况不同，
来确定微生物对某种药物或多类药物的抗性情况。
四、特异性提取
特异性提取是一种以特定方法从微生物中提取出特定“ biomolecule ”，比如 DNA、蛋白质等，分离和纯化微生物某功能元件或特征分子的实验技术。
这种技术既可以提取大
量的基因片段，也可提取微量的特异性物质。
五、遗传修饰
遗传修饰是一种利用遗传工程改造或添加微生物特定遗传物质来改变微生物的特性的
实验技术，常用来进行分子育种和改良育种，以提高产品的质量和性能。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
位置，可变光阑开到最大。 6 、调焦： 转动细调焦螺旋，再缓慢地提升油镜调焦至物像
清晰。注意下降或上升镜筒或载物台绝不可用力过猛。 7 、观察: 仔细观察细菌的三种基本形态 8 、显微镜用毕后的处理: 上升镜筒，取下玻片，清洁油镜
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可 形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于 其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱 色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含 类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与 碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
染色结果（革兰氏染色）
枯草芽孢杆菌（革兰氏染色）
大肠杆菌（革兰氏染色）
染色结果（革兰氏染色）
金黄色葡萄球菌（革兰氏染色）
染色结果（芽孢染色）
枯草芽孢杆菌（芽孢染色）
注意事项
1、革兰氏染色关键是脱色时间，如脱色时间过长，会 造成假阴性。如脱色时间过短，会造成假阳性。 2、革兰氏染色的菌种，选用培养18-24h菌龄的细菌为 宜。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶使革兰氏阳性 菌转呈阴性反应。 3、芽孢染色的菌种的菌龄，应使大部分芽孢仍保留在 菌体内为宜。芽孢杆菌一般在37℃下培养12-14h效果 最佳。 4、在孔雀绿加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂 片干涸。
实验一 显微镜（油镜）的使用和细菌 的三种基本形态观察
一、实验目的
1、学习并掌握油镜的基本原理和使用方法。
2、观察和识别细菌的三种基本形态。
二、基本原理
1 、增加照明强度
在油镜与载玻片之间加入与玻片的折射率相仿的 镜油，使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失， 基本上全进入镜头，结果提高了照明强度，使图像更 加清晰。
染色结果：阴性细菌（G-）： 染成红色
2 、芽孢染色原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着 色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦着色后 又难以脱色这一特点，用着色力强的染色剂孔雀绿 或石炭酸，在加热条件下，延长染色时间，使染料 不仅进入菌体也进入芽孢内，进入菌体的染料经水 洗后被脱色，而芽孢一经着色就难以被水洗脱，当 用对比度大的复染剂番红复染后，芽孢仍保留初染 剂的绿色，而菌体则被染成复染剂的红色。
反之， G-细菌的细胞壁薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖 层薄，交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜 迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与 碘复合物的溶出，因此细胞褪成无色。再经番红、沙黄 等红色染料复染, 就使G-细菌呈现红色, 而G+细菌则保 留紫色。染色结果：阳性细菌（G+）： 染成紫色
三、实验器材
1 、菌种：大肠埃希氏菌（Escherichia coli） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 或巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）。
2 、试剂：革兰氏染液:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏典液、 95%乙醇、番红复染液； 芽孢染液:5%孔雀绿染色液、 0.5%番红水溶 液。
染 媒染：滴加卢戈氏碘液，染色1min，水洗 色 脱色：用滴管加95%乙醇冲洗脱色约30秒，立即水洗
复染：滴加番红液复染约2min，水洗
镜检 清洁显微镜
2、芽孢染色
制片 染色 滴加孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片在微
火上加热至染液冒蒸汽时开始计时5min 加热过程中要及时添加染色液，切勿让标本干涸 水洗 待玻片冷却后，用缓流水冲洗至流出的水无 色为 止 复染 用番红染色液复染2min 水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出的水无色 镜检 干后用油镜观察
一、实验目的
1 、学习并掌握革兰氏染色和芽孢染色的 原理和方法。
2 、了解革兰氏染色和芽孢染色在细菌分 类鉴定中的重要性。
二、基本原理
1 、革兰氏染色原理
革兰氏染色法是Gram发明的一种细菌鉴别染色法， 通过这种染色方法，可将细菌分为两大类： 一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌； 一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。 其染色原理主要根据两类细菌的细胞壁化学组成和 结构不同。
折射率(n) 空气 1.00 水 1.33 香柏油 1.52 玻璃 1.55
2 、增加显微镜的分辨率
分辨率是指显微镜能分辨两点间最小距离的能力。 D值愈小则表明分辨力愈强。
D=0.61λ/NA NA=n·sinα/2
λ：光波波长 NA：物镜的数值孔径值
n：介质折射率 α：镜口角（总是小于180°）
实验报告
1、绘枯草芽孢杆菌芽孢染色图
2、将革氏染色结果填于下表
菌种 大肠埃希氏菌 枯草芽孢杆菌
菌体颜色
菌体形态（图示）
G+或G-
实验三 放线菌和真菌的形态 特征观察
3 、器具：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、镊子、 木夹、香柏油、酒精乙醚液、擦镜纸等。
四、实验步骤
1 、革兰氏染色
涂片： 用接种环挑取少许菌苔于水滴中混匀后，再挑取2-3 环菌悬液至另一载片上涂开
干燥： 室温自然干燥或电吹风吹干
固定： 涂片朝上，通过火焰2-3次
初染：滴加草酸铵结晶紫覆盖涂片区域染色2min，水洗
棒状杆菌
螺旋菌
注意事项
1 、油镜工作距离短，故操作时要特别谨慎，切 忌用眼 睛对着目镜边观察边下降镜筒，而应从 侧面注视。
2 、调焦时，应特别注意，切勿将粗调节器向反 方向(由高向低)转动而损失镜头和玻片。
实验报告 1、绘细菌三种基本形态图
2、简述油镜的工作原理
实验二 细菌的芽孢染色和 革兰氏染色法
三、实验器材Βιβλιοθήκη 1 、标本：细菌三型玻片。 2 、试剂：香柏油、镜头清洗液（V乙醚:V酒精＝7:3）。 3 、器具：显微镜（有油镜）、擦镜纸、玻璃棒等。
四、实验步骤
1 、放置标本:将染色的细菌三型玻片置于镜台上。 2 、找合适的视野: 先用低倍镜和高倍镜寻找合适的视野并将
欲观察的部位其移到视野中央。 3 、加香柏油。 4 、转换油镜：将油镜转到工作位置，使油镜镜头浸入香柏油