实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
8.细胞骨架和胞间连丝
植物细胞骨架和胞间连 丝的观察
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 （一）实验目的 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光 学显微镜下细胞骨架的网状结构。 （二）实验原理 细胞骨架定义： 狭义的细胞骨架（cytoskeleton）概念是指真核细胞中的蛋 白纤维网络结构。它所组成的结构体系称为 “细胞骨架系 统”，与细胞内的遗传系统、生物膜系统、并称 “细胞内的 三大系统”。包含三类蛋白纤丝？？
植物细胞用适当浓度的 TritonX—100 处理 后， 可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白 质却保存完好。 考马斯亮蓝 R250 (Coomassie brilliant blue R250) 是一种蛋白质染料，处理后的材料用考 马斯亮蓝 R250 染色后，用光学显微镜观察， 可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
（二）实验材料、用品 1、材料：新鲜的红辣椒果实
2、仪器：显微镜，载玻片，镊子，玻璃吸 管，刀片，碘液，红墨水等。
（三）实验步骤
剪取一小块红辣椒，用刀片小心刮去果肉，留下一 层极薄露白的表皮，分别进行以下操作： 1. 放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片后即可观察。 镜检时光线不要太亮。 2. 加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表 皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色 的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹 孔），孔里有细胞质丝穿过。 3. 用红墨水染色30 min，然后吸去多余的染料，加水封 片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹 孔和胞间连丝。
（四）实验结果
Байду номын сангаас
胞间连丝 连丝微管
胞间连丝
（五）实验报告
1 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。 2 描绘所观察到的红辣椒细胞胞间连丝图。
植物细胞骨架光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察黄斌谢卓文徐安乐钟建良邹天生(中山大学生命科学学院00级生物科学专业，广州510275)【摘要】本实验根据细胞骨架的特性，利用适当浓度的TritonX-100处理洋葱鳞茎内表皮细胞，破坏细胞内大多数蛋白质而保存细胞骨架系统，再经考马斯蓝染色，在光学显微镜下观察细胞骨架，对细胞骨架的分布，膜骨架，核骨架，胞间连丝等进行了初步的研究。
【关键词】细胞骨架,光学显微镜,纤维,网络结构1 引言细胞骨架是真核生物细胞中的重要结构，起细胞支架的作用，并参与胞内物质运输、细胞运动、分泌吸收、细胞通讯、有丝分裂等。
由于与细胞各项功能的密切关系，细胞骨架的研究已成为当今细胞生物学中较具吸引力的领域之一。
对细胞骨架的研究须先对其进行观察。
本实验以洋葱鳞茎内表皮细胞为材料对细胞骨架进行观察研究，基本原理是细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂Triton-100形成去垢剂-蛋白/脂质复合物，从而溶于水中被提取，而结合成纤维状的细胞骨架蛋白则保持其在生活细胞中存在的状态。
之后用考马斯亮蓝对蛋白质染色，使骨架系统在光学显微镜下可见，从而对其进行观察研究。
2 材料与方法2.1 材料新鲜洋葱鳞茎，撕取内表皮，切成约0.5cm×0.5cm大小。
2.2 器材光学显微镜、精确天平、0.02ml移液枪、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
2.3 试剂：•M-缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇双（α-氨基乙基）醚四乙酸]、1mmol/L巯基乙醇。
•6mmol/LPH6.8磷酸缓冲液：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。
•1％TritonX-100：0.5ml 100％TritonX-100加入A液49.5ml。
实验三细胞器及细胞骨架的观察总结
作业： 绘人口腔黏膜上皮细胞图和藻叶细胞图
3）中心体的观察 取马蛔虫子宫切片，在低倍镜下寻找其受精卵分裂中期的细胞， 然后换高倍镜观察，可见中期细胞中央有深蓝色条状的结构，这就 是染色体。在染色体两侧，各有一深蓝色的圆形小粒，即中心粒。 在中心粒周围的致密物质叫做中心球。中心粒和中心球构成中心体， 在中心体周围还可看到许多纤细的、呈辐射状分布的星射线。中心 体和星射线合称星体。有时因切面的关系，中心体仅出现在一侧或 两侧均无（该过程由教师示教)
实验三 细胞器及细胞 骨架的观察
一、实验原理
（一）细胞器的观察
光学显微镜由于分辨率较低，一般用于观察细胞的结构。细胞器 的结构主要在电子显微镜下观察，称为细胞的亚微结构。有一些特殊 细胞内的部分细胞器，可以直接在光镜下观察到（如叶绿体)，有些 通过特殊组织化学或组织免疫化学染色，能清晰的在光镜下显示。
1、用镊子撕取洋葱鳞叶内表皮若干片约lcm2大小，放入小烧杯 或小培养皿中，用磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.2) 洗3 次，每次约 0.5 min。 2、吸去PBS，用1％TritonX-100，37℃处理洋葱表皮20～30 min. 3、除去TritonX-100，用M-冲液充分洗3次，每次约2 min，以 使细胞骨架的稳定。 4、 加3.0％戊二醛固定10 min。
二、实验目的
1、观察动植物的各种细胞器。通过特殊组织化学或组织免疫化学染色， 了解细胞器结构。 2、了解洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布 3、能正确的绘图，并记录观察结果，并能理解每个实验步骤的意义
三、实验材料及仪器
(1)器材：光学显微镜、解剖镊、解剖针、手术剪、载玻片、盖玻片、吸管、 吸水纸、擦镜纸、小平皿、恒温培养箱、、1ml取液器、染色缸 。 (2)材料：洋葱鳞叶、脊神经节切片、小白鼠十二指肠横切片。 (3) 试剂：PBS缓冲液（PH=7.2）、1% TritonX-100、M-缓冲液、3.0%戊二 醛、0.2%考马斯亮蓝R250
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）
实验三细胞骨架的光学显微镜观察（5篇）第一篇：实验三细胞骨架的光学显微镜观察实验三细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
二、材料、试剂和仪器1．材料新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞2．试剂1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：50mmol/L咪唑(MW:68.08)，50mmol/L KCl(MW:74.55)，0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30)，1mmol/L EGTA(MW:380.36)，0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24)，1mmol/L DTT(MW:154.3)2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3(见附录3 查磷酸缓冲液的配置)3）0.7% NaCl生理盐水4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)溶于 M-缓冲液5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液 200mL:考马斯亮蓝R250 0.2g，甲醇46.5mL，冰乙酸7mL，蒸馏水46.5 mL3．仪器光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸细胞骨架动画三、实验程序四、结果与分析洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）五、思考题1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？2．对实验成功或失败的原因进行讨论。
细胞骨架的光学显微镜观察
4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏 水46.5mL。
5．3％戊二醛，用6 mmol／L（pH6.8）磷酸缓冲液配制。
【方法与步骤】
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 1．撕取洋葱鳞茎内表皮（约1mm2大小若干片）置于装有 pH6.8磷酸缓冲液的青
霉素小瓶中，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100 处理20～30min吸去。 3．吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗2次，每次5min。 4．3％戊二醛固定15min。 5．pH6.8磷酸缓冲液洗2次，每次5min。 6．0.2％考马斯亮蓝 R250染色 5 min。 7．用蒸馏水洗1～2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观
Microbubules
Microfilamemts
Intermediate filaments
【实验原理】
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的 蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而 被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下 观察到微丝。
Actin-binding proteins(微丝结合蛋白)
◆ monomer-sequestering protein(单体隔离蛋白) ：维持高 浓度的单体肌动蛋白
◆ cross-linking protein(交联蛋白) ：改变细胞内肌动蛋白 丝的三维结构
◆ End-blocking (capping) proteins（封端（加帽）蛋白）： 调节肌动蛋白丝的长度
◆ filament-severing protein(纤维切割蛋白)：同肌动蛋白 丝结合并进行切割
三细胞骨架标本的制备及观察
细胞骨架标本的制备及观察
一、实验目的
• 1. 掌握细胞骨架的显示方法的原理。
• 2．熟悉光学显微镜下细胞骨架的基本形态结构。 • 3. 了解细胞骨架标本的制备方法。
二、实验材料
• 洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻
片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、 擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、pH7.2 PBS
四、实验方法
• 1. 洋葱鳞茎表皮细胞细胞骨架标本制备
• （1） 撕取约5×5mm大小的洋葱鳞茎中层鳞片的
内表皮，浸入pH6.5 PBS中5min后，再放入盛有
2%TritonX-100液的小瓶中，37℃处理20～30min， 以溶解掉细胞骨架以外的蛋白质。 • （2）用吸管吸尽2%TritonX-100液，加入M-缓冲 液洗涤2～3次，每次5min，以使细胞骨架稳定。
四、实验方法
• （3）吸弃M-缓冲液，加人3%戊二醛固定液，固
定10min，再用PBS洗2～3次，每次3min。 • （4）吸尽缓冲液，加0.2%考马斯亮兰染液，染 色8～10min，再用PBS洗2～3次，每次3min。 • （5）取出洋葱鳞茎表皮，平展于载玻片上，盖上
盖玻片即可观察。
五、结果与分析
（无钙镁磷酸缓冲液）、pH6.5 PBS、M-缓冲液
（10×原液）、1% TritonX-100、2%TritonX-
100、3%戊二醛液、0.2%考马斯亮兰染液。
三、实验原理
• 细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维构成的网络结构。当
用适当浓度的TritonX-100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一 种非离子去垢剂）处理细胞时，可将质膜中及细胞内许多 蛋白质溶解，而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏，经固 定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，可使细 胞骨架蛋白着色而显示骨架显微结构。由于骨架系统中有 些纤维（如微管）在该实验条件下不够稳定，而有些类型 的纤维太细，在光镜下无法分辨，因此显示看到的主要是 微丝组成的微丝束。采用活体染色等方法制备细胞骨架标 本，加强动手能力和了解临时制片的方法。
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
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实验三植物细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。
二、实验器具及试剂
1．器具
普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸。
2．试剂
M-缓冲液：咪唑、KCL、MGCL2、EGTA【乙二醇双醚四乙酸】、EDTA、疏基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)；（PH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH值）；Triton X-100，用M-缓冲液配制；考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml；戍二醛、乙醇、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶等。
3. 实验材料
洋葱鳞茎
三、实验内容
细胞骨架事由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可经细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构，就是细胞骨架。
（一）溶液配制
（1）M-缓冲液配制：
M-缓冲液(10×原液) ：咪唑34.04g，氯化镁 (MgCl2•6H2O)1.02g，EGTA（乙二醇双醚四乙酸） 3.8g，EDTA (乙二胺四乙酸)0.29g，巯基乙醇0.78g (0.7ml)蒸馏水加至1 000 ml。
使用时，取100 ml (10×原液)加900 ml蒸馏水。
（2）6mmol/L（PH6.5）磷酸缓冲液配制：
甲液：NaH2PO4•2H2O，0.938g 溶于蒸馏水中，最后稀释至1 000ml。
乙液：Na2HPO4 •12H2O，2.15g加蒸馏水溶解，最后加水至1 000ml。
取甲液685ml，乙液315ml加蒸馏水1000ml即成6mmol/LPH6.5的磷酸缓冲液。
（3）1%Triton X-100，用M-缓冲液配制：
取22ml Triton X-100液加M-缓冲液至200ml。
（4）0.2%考马斯亮蓝R250：
考马斯亮蓝R250为0.2g，甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml
（5）3%戍二醛，用磷酸缓冲液配制。
（二）实验方法与步骤
（1）撕取洋葱鳞茎内表皮（约1cm2大小若干片）置于装有PH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
（2）吸去磷酸缓冲液，用1% Triton X-100处理20~30min。
（3）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次10min。
（4）3%戊二醛固定0.5~1h。
（5）PH6.5磷酸缓冲液洗三次，每次10min。
（6）0.2%考马斯亮蓝R250染色20~30min。
（7）用蒸馏水洗1~2次，细胞置于载破片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
（8）如观察效果好，可制作成永久切片。
在有样品的50ml烧杯中，顺序通过如下药物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2V95%乙醇+1/2V叔丁醇、叔丁醇（每级5-10min）；或正丁醇、正丁醇、二甲苯、二甲苯（每级5-10min），然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好的，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片，即成永久片。
四、实验报告
1．绘出植物细胞骨架微丝结构图。
2．分析在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。