高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸

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HPLC同时测定关节炎大鼠血清色氨酸和犬尿氨酸

过建立 AA 模型，检测正常和模型大鼠血清中 Trp 和 Kyn 含量变化，目前主要采用高效液相色谱法（ high performance liquid chromatography，HPLC）检测 Trp 和 Kyn 的含量［6 － 7］，在制备标准曲线等时对使用的血清进行了透析，此法可在同时测定 Trp 和 Kyn 的条件下，减少干扰因素。
安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2019 Aug； 54（ 8）
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网络出版时间： 2019 － 7 － 15 18： 07 网络出版地址： http： / / kns． cnki． net / kcms / detail /34． 1065．Ｒ． 20190715． 0922． 030． html
1 材料与方法
1． 1 样本动物为健康雄性 SD 大鼠 20 只，合格证号：［SCXK（皖） 2017 － 001］，体质量（ 170 ± 20） g，购自安徽医科大学实验动物中心。样本的收集 AA 大鼠成模后处死取血于 15 ml 离心管中，静置 2 h 后，2 000 r / min 离心 20 min，取上清液，并于－ 20 ℃ 保存。 1． 2 仪器 Agilent1200 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）； Sigma 3-30K 高速冷冻离心机（上海纳腾仪器有限公司）； AA-200DS 电子分析天平（美国 Denver 仪器公司）； Amicon Uitra-0. 5 超滤离心机（美国 Millipore 公司）。 1． 3 试剂 L-Trp（ WXBC4097V）、L-Kyn（ BCBT1074）购自德国 SIGMA-ALOＲICH，纯度 ≥ 98% ；冰醋酸（ 20170106 ）、醋酸钠（ 20170320 ）、高氯酸（ 20170204）均为分析纯，购自中国医药集团化学试剂有限公司。 1． 4 AA 大鼠模型的制备将大鼠随机分为两组，即对照组和模型组，每组 10 只。将 BCG 80 ℃ 水浴灭活 1 h，与经过高压灭菌的石蜡充分研磨，制成 10 mg / ml 完全弗氏佐剂（ complete freund adjuvant， CFA），于大鼠右后足跖皮内注射 CFA 0. 1 ml 致炎［8］，正常组用生理盐水同法注射。 1． 5 溶液的配制 1． 5． 1 储备液配制精密称取 L-Trp 对照品 40. 90 mg，L-Kyn 对照品 2. 08 mg，用体积百分比为 2. 5% 的高氯酸溶解，定容至 10 ml 容量瓶中，得浓度 20 000 μmol / L、1 000 μmol / L 对照品储备液，4 ℃ 保存，用时稀释。 1． 5． 2 流动相溶液配制精密称取醋酸钠 4. 922 8

液相色谱-质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸

化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第29卷，第4期2020年7月V ol. 29，No. 4Jul. 202067doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2020.04.015液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸周资凯1，2，郑柳2，鲍益帆2，杨丽2，章志远2（1.南昌大学环境资源与化工学院，南昌　330031；　2.台州市台环环境检测科技有限公司，浙江台州　318020）摘要　建立液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸的方法。

先利用活性碳吸附去除复杂基质，再以高氯酸、甲酸酸化沉淀，简单快速去除大量蛋白，然后以液相色谱–质谱联用法进行测定。

总分析时间小于4.00 min ，色氨酸和犬尿氨酸的质量浓度在0.500~1.000×104 μg ／L 范围内与色谱峰面积线性关系良好，检出限分别为0.147，0.148 μg ／L ，测定结果的相对标准偏差不大于4.7%（n =5），方样品加标回收率为99.2%～102.0%。

样品经–80℃冻融循环和室温放置120 h 内稳定性良好。

该方法优化了净化提纯前处理方式，与已报道的方法相比更加灵敏，绿色环保，可保持样本稳定，为需分析高通量生物基质样本的药物动力学相关工作提供一参考。

关键词　色氨酸；犬尿氨酸；代谢途径；液相色谱–质谱联用法；活性碳中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2020)04–0067–05Determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography-mass spectrometryZHOU Zikai 1，2，ZHENG Liu 2，BAO Yifan 2，YANG Li 2，ZHANG Zhiyuan 2(1. School of resources environmental & chemical engineering, Nanchang University, Nanchang 330031, China ；2. Taizhou TaiHuan Environmental detection technology Co., Ltd., Taizhou 318020, China ）Abstract A method for simultaneous determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography mass spectrometry was established. Firstly, the complex matrix was removed by activated carbon adsorption, then precipitated by perchloric acid and formic acid, then a large number of proteins were simply and rapidly removed, and then determined by liquid chromatography–mass spectrometry. The total analysis time was less than 4.00 min. The mass concentration of tryptophan and kynurenine was in the range of 0.500–1.000×104 μg ／L, which had a good linear relationship with the peak area, and the detection limits were 0.147, 0.148 μg ／L, respectively. The relative standard deviation was not more than 4.7% (n =5), the absolute recoveries were 99.2%–102.0%, The sample had good stability in –80℃ freeze–thaw cycle and room temperature for 120 h. Compared with the reported methods, this method is more sensitive, green and environmental friendly, and can keep the sample stable ，which provides a reference for the pharmacokinetics related to the analysis of a large number of biological matrix samples.Keywords tryptophan; kynurenine; metabolic pathway; liquid chromatography–mass spectrometry; activated charcoal通讯作者　周资凯，硕士，工程师，从事环境化学、分析化学、药物化学和纯化分离技术工作，E–mail:*****************收稿日期　2020–04–13引用格式　周资凯，郑柳，鲍益帆，等.液相色谱–质谱联用法同时测定大鼠血浆中色氨酸和犬尿氨酸［J ］.化学分析计量，2020，29(4): 67–71.ZHOU Z K ，ZHENG L ，BAO Y F, et al. Determination of tryptophan and kynurenine in rat plasma by liquid chromatography-mass spectrometry ［J ］. Chemical analysis and meterage ，2020，29(4): 67–71.人体中的色氨酸和犬尿氨酸代谢途径已被证实与许多疾病和失调有相关联性，如人类免疫缺陷病毒的感染、亨廷顿病、阿尔茨海默病和精神分裂症［1–2］。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸支小平;崔盼盼;柳英霞【摘要】建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS／MS）同时测定人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸分析新方法。

采用乙腈－0．1％甲酸溶液（10：90，V：V）为流动相，流速为0．3 mL·min－1。

在全扫描模式下，将m／z为182．2、205．2的离子分别确定为酪氨酸和色氨酸的母离子，m／z136．1与188．0分别为定量子离子。

在质谱的多反应监测正离子模式下进行分析，酪氨酸和色氨酸的检测限分别为0．10和0．25 ng·mL－1。

在已优化的色谱和质谱条件下，待测样品经过简单的离心、过滤后即可直接进样检测。

在3个不同添加水平的回收实验中，酪氨酸和色氨酸的平均回收率为74．0％～124．0％，RSD值小于7．97％，表明该方法可满足实际样品检测要求。

该方法操作简单、快速、灵敏度高，可用于人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸的同时测定。

%A new method for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine samples by HPLC-MS/MS was developed.The chromatographic separation was achieved on an Agilent XDB-C18 column(4.6×50mm,1.8μm),the column temperature was 25 ℃,the mobile phase wasCH3CN-0.1%HCOOH(10:90,v/v),the flow rate was 0.3 mL·min-1 .In the full scan mode,the m/z 182.2 and m/z 205.2 were identified as the precursor ions of tyrosine and tryptophan,the m/z 136.1 and m/z 188 were quantitative product ion,respectively.The analysis was realized by multiple reaction-monitoring modes.Under optimal conditions,the linear ranges of tyrosine and tryptophan were 0.001-2.00μg · mL-1 ,and the limits ofdetection were 0.10 and 0.25 ng·mL-1 ,respectively.The average recoveries for tyrosine and tryptophan(spiked at three different levels)ranged from 74.0 to 124.0%,the RSD was below 7.97%.The method is simple,rapid and sensitive,and suitable for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine.【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》【年(卷),期】2016(040)004【总页数】5页(P341-345)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;人体尿液;酪氨酸;色氨酸【作者】支小平;崔盼盼;柳英霞【作者单位】南昌师范高等专科学校，江西南昌330103;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】O657氨基酸不但是构建生物体的基本物质，而且在生物机体的生命活动中扮演着重要角色，它是生物化学、蛋白质组学、临床医学等领域的重要研究内容[1-2]。

高效液相色谱_荧光检测法测定血清中的犬尿氨酸

收稿日期 : 2007206218 第一作者 :罗昔波 , 硕士研究生. E 2m a il: l20002721@ s ina. com. com. 通讯联系人 :唐爱国 ,教授 ,硕士生导师. Te l: ( 0731) 5292142, E 2m a il: a iguo tang@ yahoo. com. cn. 基金项目 :湖南省医药卫生科研计划课题 ( C2005019)和湖南省科技计划项目课题 ( 05S K3026)资助.
and c rea tin in e ( C r) ha d no in te rfe ring e ffec ts to the de te rm ina tio n of Kyn. The m e th od is of h igh a cc u rac y, ea sy op e ra tion, s a tis fac to ry re cove rie s and good rep ro duc ib ility, and ca n be us ed fo r rou tine a na lys is. Ke y w o rd s: h igh p e rfo rm a nce liqu id c h rom a tog rap hy ( H PLC ) ; f luo res cen ce de te c tion ( FLD ) ; kyn u ren ine; hum an s e rum
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂高效液相色谱仪 , 包括 510 色谱泵、2475 型荧光检测器 (W a te rs 公司 ) 、HS 2000色谱数据工作站 (杭州英谱科技开发有限公司 ) 、R he odyne 7725 手动进样器 (带 20 μL 进样环 ) 。 0145 μm 滤膜及其抽滤器 (M illip o re 公司 ) ; M illi2Q 纯水器 (M illip o re 公司 ) ; TGLL 218台式高速冷冻离心机 (湖南湘仪离心机厂 ) ; AA 2250电子天平 (美国 ) ; N ich ip e t微量移液器 (日本 ) ; SB 2200型超声去气仪 (上海必信能有限公司 ) 。犬尿氨酸、苯丙氨酸 ( P he ) 、酪氨酸 ( Ty r) 、色氨酸、52羟色胺 ( 52H T ) 、犬尿喹啉酸和肌酐 ( C r)均购自 S igm a 公司 ; 乙腈、甲醇均为色谱纯 (美国 Ted ia 公司 ) ; 醋酸锌、冰醋酸等均为国产分析纯 ; 高氯酸为国产优级纯。配制试剂用水均为 M illi2Q 纯水器制备的超纯水。 1. 2 色谱条件色谱柱 : H yp e rs il C8柱 ( 300 m m ×610 m m , 10 μm ,大连依利特分析仪器有限公司 ) ; 流动相 : 0125 m o l /L 醋酸锌 250 m m o l /L 醋酸溶液 (含 3% ( v / v ) 乙腈 ) ; 流速 : 115 m L /m in; 激发光波长 365 nm , 发射光波长 480 nm ; 进样量 20μL; 室温下测定。 1. 3 试剂的配制 1. 3. 1 应用试剂的配制蛋白质沉淀剂 :用超纯水配制 510% ( v / v)的高氯酸溶液作血清蛋白质沉淀剂。流动相的配制 : 准确称取醋酸锌 , 加入冰醋酸、乙腈及水制成 0125 m o l /L 醋酸锌 250 m m o l /L 醋酸溶液 (含 3% ( v / v)乙腈 ) , 再用 0145 μm 微孔滤膜过滤 ,使用前超声脱气 30 m in。

一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法[发明专利]

专利名称：一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法
专利类型：发明专利
发明人：唐爱国,项忠元,罗昔波,肖乐东,皮兰敢,周前选,任亚萍
申请号：CN201010300361.X
申请日：20100115
公开号：CN101776662A
公开日：
20100714
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种用高效液相色谱-荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法。

步骤包括：a、采用Hypersil C18 250mm×4.6mm i.d，7μm色谱柱；b、每升流动相中含醋酸锌0.2mol、醋酸8.3mmol和2.5v/v％的乙腈；c、流速为1.5ml/min，进样量：20μl，柱温25℃；d、可调波长的设定为：0-11min激发光波长365nm，发射光波长为480nm；11-15.5min激发光波长344nm，发射光波长为404nm；15.5-20min激发光波长254nm，发射光波长为404nm条件下检测。

方法操作简单，分离快速，无需柱前柱后衍生，灵敏度高，结果真实准确，能同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸。

申请人：中南大学湘雅二医院
地址：410011 湖南省长沙市人民中路139号
国籍：CN
代理机构：长沙市融智专利事务所
代理人：颜勇
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高效液相色谱紫外法测定血清犬尿氨酸及色氨酸及其临床应用

ａｎｄ
ＫＴｒａｔｉｏｉｎｓｅｒｕｍｖａｌｕｅｓｏｆｈｅａｌｔｈｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｓｅｒｕｍｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ
ｐｅｒｓｏｎｓ，ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌ
ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ｃｈｒｏｎｉｃ
ｒｅｎａｌ
ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｎｉｃ
ｍｍｏｌ／Ｌ
ｔｈｅ
ｓｏｄｉｕｍａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｔ
ａ
２．７％（ｖ／ｖ）ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｓ
ｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１．０ｍｌ／ｍｉｎ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｄｅｔｅｃｔｏｒｗｏｒｋｅｄａｔ
２２５ｎｍ．Ｔｈｅｔｏｔａｌａｓｓａｙｔｉｍｅｏｆｓｅｒｕｍｗａｓｗｉｔｈｉｎ１０ｍｉｎｕｔｅｓ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ
ｓｅｒｕｍｂｙ
ｒｅｖｅｒｓｅ
ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ（ＫＶＮ）ａｎｄｔｒｙｔｏｐｈａｎ（ｎ冲）ｉｎ
２．ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅＫＹＮ
ｐｈａｓｅｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗｉｔｈｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＨＰＬＣ．ＵＶｌ．ａｎｄ
量显著升高、ＴＲＰ含量显著降低，且ＣＲＹ组血清ＫＹＮ和ＴＲＰ含量
与肾功能状态、某些血液学参数有一定相关性；尿毒症患者血液透析治疗后血清ＫＹＮ含量显著降低，ＴＲＰ无明显变化。结论：１．本文建立的ＨＰＬＣ－－ＵＶ法可同时测定血清ＫＹＮ和
ＴＲＰ，方法简单、快速、灵敏、特异、准确，适宜于临床与科研工作。所建立的血清ＫＹＮ含量和ＫＴ比值范围可为相关疾病和基础研究工作提供参考依据。２．ＣＲＦ患者外周血存在较为严重的犬尿氨酸代谢紊乱，且与肾功

高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物

３０ｎｍ。６
是经双加氧酶的作用生成 Ⅳ＿甲酰犬尿氨酸，然后
转变为犬尿氨酸（ｙｕｅｉｅｙ。研究表明ｋｎｒｎｎ，Ｋｎ）Ｔｐ代谢与免疫性疾病、血管性疾病、经性疾病ｒ心神
密切相关。目前检测Ｔｐ及其代谢物常用高效ｒ液相色谱法（ＰＣ）ＨＬ，中Ｔｐ及５Ｈ其ｒ－Ｔ检测大多采用荧光检测器，Ｋｎ检测采用紫外检测器，而ｙ但同时分析Ｔｐ两条代谢途径的报道较少，中有ｒ其
ＨＰＣ电化学检测或采用多种检测器同时检Ｌ一
２结果与讨论
２１ＨＬ．ＰＣ条件的确定２１１流动相中乙腈的比例对保留时间的影响．．本研究选择乙腈和醋酸钠缓冲液作为流动相，并对流动相比例进行了考察。以混合标准液和混合血浆作为样品进行分析。在乙腈比例为２～７％％时，随着乙腈比例的增大，析物的保留时间均缩分
・４６・３来自色谱１３ＨＰＣ条件．Ｌ
第２９卷
色氨酸（ｒｐｏｈｎｒ是人体必需氨基酸ｔｔｐａ，Ｔｐ）ｙ之一，其代谢主要通过两条途径：是在羟化酶的作一用下生成５羟色胺（－ｙｒｘｔｐａｎ，－Ｔ）一５ｈｄｏｙｒｔｍｉｅ５Ｈ，ｙ
了ＨＰＣ程序波长紫外检测法同时测定血浆中Ｌ一Ｔｐ、ｙｒＫｎ和５Ｈ该方法简便、速、敏，成功一Ｔ，快灵并应用于抑郁症患者血浆中Ｔｐ的代谢分析。ｒ

高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量

高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量【摘要】本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-0.1%醋酸钠水溶液（3：5：92）为流动相，检测波长为280nm；色氨酸在50～150μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；酪氨酸在100～900μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

色氨酸和酪氨酸的平均回收率分别为99.5%、99.5%，RSD为0.63%（n=6）、0.56%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于复方氨基酸注射液中色氨酸和酪氨酸的含量测定。

【关键词】复方氨基酸注射液；色氨酸；酪氨酸复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，可提供完全、平衡的18种必需和非必需氨基酸，改善氮平衡。

复方氨基酸注射液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。

复方氨基酸注射液用于大面积烧伤、创伤及严重感染等应激状态下肌肉分解代谢亢进、消化系统功能障碍、营养恶化及免疫功能下降的病人的营养支持。

复方氨基酸注射液含有L-脯氨酸（C5H9NO2）、L-组氨酸（C6H9N3O2）、L-色氨酸（C11H12N2O2）、L-丝氨酸（C3H7NO3）、L-丙氨酸（C3H7NO2）、L-精氨酸（C6H14N4O2）、L-缬氨酸等。

本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。

1.仪器与试药WP-UP-Ⅱ-30分析型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；FL2200-2高效液相色谱仪（浙江福立分析仪器有限公司）；CO-1000型色谱柱温箱（武汉恒信世纪科技有限公司）；B8510E-DTH超声波清洗机（必能信超声（上海）有限公司）；320 XT 电子分析天平（上海精科天美贸易有限公司）；U-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

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３５ｍｉ，ｔｅｌａａｅｏｆｔｅｈｏｓｒｍ０８ｔ￣ｍｏｌ．ｎｈｉｒｒｎｇｈｅｍｔｄｗａｆｏ０．９ｏ４９ｎｅ／Ｌ，ａｈｅｄｅｅｔｏｎｌｍｉｎｄｔｔｃｉｉｔ
一
王瑞，唐爱国
中南大学湘雅二医院检验科，湖南长沙４０１）１０１
摘要：建立了一种能同时检测血清中的犬尿氨酸（ｙｕｅｉｅＫｎ和色氨酸（ｒｐｏｈｎＴｐ）ｋｎｒｎｎ，ｙ）ｔｙｔｐａ，ｒ的高效液相色谱－
ａｅｏｉｉ（Ｈ，ｃｔｎｔｌｐ３６）ａｌｗａｅｏ．／ｎ．Ｔｅｕｔａｉｌｔｄｔｃｏｓｏｅａｅｔｒｅｔａｆｏｒｔｆ１０ｍＬｍｉｈｌｖｏｅｅｅｔｒｗａｐｒｔｄａｒ
￣ｍｏ／Ｌ．Ｔｈｅｒｃｅｅｐｅｅｆｏｍ５５１ｌｅｏｖｒｓｏｆＴｒｗｒｉｒ９．％ｔ８＋７．ｔｎｔａｙａｎｅｄｙｖａａｏ９６％ｈｅｉｒｄａｎｄｉｔｒａｒ－ｉｔｏｎｅｅ１５ｉｓｗｒ．０％ａｄ２．％，ｒｓｃｉｌ．Ｔｈｅｍｅｈｏｓｓｍｐｌｎ６５ｅｐｅｔｖｅｙｔｄｉｉｅ，ｆｓ，ａｃａｅ，ａｄｓｉａｅａｔｃｕｒｔｎｕｔｂｌｆｒｒｕｔｅａｎｙｉ．ｏｏｉａｌｓｓｎ
（Ｌ－Ｖ）ｔｅｌｙｄａＳｍｍｅｒｈｅｄＲ－８ｃｌｍｎ（５ＨＰＣＵ＋ＩｍｐｏｅｙｔＳｉｌＰＣ１ｏｕｙ１０ｍｍ．ｘ３９ｍｍｄ，ｍ）ｉ．５ｉ．ｘａｄａｍｏｉｈｓｆ１ｎｂｌｐａｅｏｍｍｏ／ｏｉｍｃｔｔ－ｃｔｃｄｓｌｔｎｃｎａｎｎ，％（／）ｅ５ｌＬｓｄｕａｅａｅａｅｉａｉｏｕｉｏｔｉｉｇ２７ｖｖｃｏ
Ｋｅｒｓｉｈｐｒｒａｃｉｕｄｃｒｍａｏｒｐｙ（Ｌ；ｕｔａｉｌｅｅｔｎ（ｙｗｏｄ：ｈｇｅｏｆｍｎｅｌｉｈｏｔｇａｈｑＨＰＣ）ｌｖｏｅｄｔｃｉｒｔｏＵＶ）；
ｔｙｏｐｎ；ｋｙｒｎｉｒｐｔｈａｎｕｅｎｅ；ｓｒｍｅｕ
通讯联系人：唐爱国，，授，士生导师，ｅ：０３）５０５。－ｉ：ｉｕｔｎ男教硕Ｔｌ（７１５５２８Ｅｍａｌａｇｏａｇ＠ｙｈｏｃｒ．ｎａｏ．ｏｃｎ基金项目：南省医药卫生科研计划课题（２００９和湖南省科技计划项目课题（５ｋ０６）湖Ｃ０５１）０ｓ３２．
色氨酸（ｒｐｏｈｎＴｐ是人体必需氨基酸之ｔｔｐａ，ｒ）ｙ
一
ｄｏｙｅａｅＩＯ）ｉｘｇｎｓ，Ｄ的催化下合成重要的中间代谢产物犬尿氨酸（ｙｕｅｉｅｙ。当机体处于细ｋｎｒｎｎ，Ｋｎ）胞免疫激活状态时，Ｔ细胞释放的一扰素可活化干
ｔｅｌｅｒｒｇｈｅｍｅｈｏｓｏ４９ｔ０￣ｍｏｌｈｉａａｅｏｆｔｔｄｗａｆｍ．ｏ４９ｎｎｒ／Ｌ．ａｈｅｄｅｅｔｏｎｌｍｉｓ０．Ｏｎｄｔｔｃｉｉｔｗａ２
．
ＡｂｔａｔＡｍｅｈｄｗａｓａｌｈｄｆｒｈｉｌｎｏｓｄｔｒｎｔｎｏｙｕｅｍｅ（ｙｓｒｃ：ｔｏｓｅｔｂｉｅｏｅｓｓｔｍｕｔｅｕｅｅｍｉａｉｆｋｎｒｎａｏＫｎ）ａｄｔｐｏｈｎ（ｒ）ｉｅｕｂｉｈｐｒｒｎｅｌｕｄｃｒｍａｏｒｐｙｕｔｖｏｅｅｅｔｎｎｒｔｐａＴｐｎｓｒｍｙｈｇｅｆｍａｃｑｉｈｏｔｇａｈ－ｌａｉｌｔｔｃｉｙｏｉｒｄｏ
紫外检测法。采用的色谱柱为ＳｍｍｅｒｈｅｄＲ — ８（５ｙｔＳｉＰＣ１柱１０ｍｍ ×３９ｍｍｄ，ｐ）流动相为１ｙｌ．ｉ．５，，．ｍ５ｍｍｏ／ｌＬ
乙酸钠一乙酸溶液（２７乙腈。Ｈ３６，含．％ｐ．）流速为１０ｍＬｍｉ。．／ｎ紫外检测波长为２５ｔ２ｉｍ。血清标本经５Ｏ体积．％（
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维普资讯
第２期
王瑞，：等高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸
・１１－４
相关，ｙＫｎ与Ｔｐ在血清中的含量之比是反映人体ｒ
流动相：准确吸取冰乙酸溶液、腈溶液，取乙称
ＳｍｕｔｎｏｓＤｔｒｎｔｏｆｙｕｅｉｅａｄＴｔｐａｉｌｅｕｅｅｍｔａｉｎｏｎｒｎｎｎ￣ｏｈｎｉａＫｎ
～
…Ｓｔ．ｅｍｍｙＨｉｈＰｒｏｍａｃｉｕｄＣｈｏｔｇａｈｂｇｅｆｒｎｅＬｑｉｒｍａｏｒｐｙ
前超声脱气３ｎ。０ｍｉ
供重要依据。
目前，内外科研人员主要应用高效液相色谱国
法检测Ｋｎ和Ｔｐｙｒ。由于Ｋｎ本身不能产生荧光，ｙ
干扰样品溶液：体积分数为２５用．％的高氯酸溶
液分别配制一定浓度的ＰｅＴｒ５ＨＫＮ和ｈ，ｙ，－Ｔ，ＹＡ
多种细胞中的ＩＤＯ。研究表明，ｙ、ｒＫｎＴｐ与肾脏疾
，
除了能在人体内合成蛋白质外，还可在肝、、肾脑
等组织中代谢为多种生物活性分子。在哺乳动物中，摄入的Ｔｐ绝大多数经犬尿氨酸代谢途径代谢，ｒ
２５ｎ．Ｓｒｍａｐｅｅｅｆｒｔｐｅｉｉａｅｔ．％ｐｒｈｏｉｃｄｓｌｔｏｔｅｅ．２ｍｅｕｓｍｌｓｗｒｓｒｃｐｔｔｄｗｉａ５Ｏｉｈｅｃｌｒａｉｏｕｉｎ．ｃｈｎｃｎｔｉｇｄｔｅｏｅｐｏｅｎｒｓｄｅａｄｆｎｌｎｙｅｙＨＰＣ．ＴｅｒｔｎｉｎｔｍｅｏｎｗａｒｆｅｏｒｍｖｒｔｉｅｉｕｎａｌａａｚｄｂＬｕｉｙｌｈｅｅｔｏｉｆＫｙｓ
即Ｔｐ在吲哚胺－，－ｒ２３双加氧酶（ｄｌａｉｅ２３ｎｉｏｅｎ一，－ｍ
收稿日期：０５０ —０２０ —４３
病、经精神疾病、神异常妊娠等－］３的发生发展密切
第一作者：王
瑞，，士研究生， — ｉｗａｇｕ１７１２＠１３ｃｒ．女硕Ｅｍａｌｎｒｉ９９１１６．ｏ：ｎ
维普资讯
２００６年３月
Ｍａｃ０６ｒｈ２０
色
谱
ＶｏＩ４Ｎｏ．ｌ２２１０ —１３４４
ＣｉｅｅＪｕｎｌｆＣｒｍａｏｒｐｙｈｎｓｏｒａｈｏｔｇａｈｏ
高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸、
稳定、可行，可应用于临床和科研工作。关键词：高效液相色谱法；紫外检测；色氨酸；犬尿氨酸；血清中圈分类号：６８０５文献标识码：Ａ文章编号：００８１（０６０ —１００１０ —７３２０）２０４－４栏目类别：研究论文
内免疫状态的敏感指标。因此，量分析血清中的定
Ｋｎ和Ｔｐ可为相关疾患的诊断治疗和基础研究提ｙｒ
乙酸钠晶体加水制成１５ｍｍｏ／ｌＬ乙酸钠－乙酸溶液（２７含．％乙腈）再用０４ｍ微孔滤膜过滤，，．５使用
分数）氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样分析测定。研究结果表明，ｙ高Ｋｎ保留时间为３５ｍｉ，性范围．ｎ线为００８— ９￣ｌＬ，低检出浓度为００￣ＶＬ回收率为９．２一３４％；ｒ．９４ｍｏ／最．２ｍｏ，０８％９．５Ｔｐ保留时间为８１ｍｉ，性．ｎ线范围为４９— ９￣ＶＬ，低检出浓度为０２ｍｏ，．４０ｍｏ最．０￣ＶＬ回收率为９．１一８６％。Ｋｎ和Ｔｐ日内、５５％９．７ｙｒ日间测定的相对标准偏差均小于４苯丙氨酸、氨酸、－％，酪５羟色胺和犬尿喹啉酸等物质对该法均无干扰。该方法简便、速、快