疾病基因克隆与基因诊断
克隆技术在生物医药研发中的应用
克隆技术在生物医药研发中的应用克隆技术是指利用DNA重组技术和细胞培养技术，从一个个体中获得一个或多个基因，再将其导入另一种基因组细胞中，使之能够表达所需蛋白质的一种技术。
克隆技术可以在生物医药领域中发挥重要作用，包括疾病诊断、治疗以及药物研发等方面。
本文将探讨克隆技术在生物医药研发中的应用。
一、克隆技术在制备蛋白质药物中的应用蛋白质药物是以蛋白质为主要靶向药物，如肿瘤靶向治疗药物、血液凝固因子替代治疗药物、免疫调节蛋白、酶替代治疗药物等。
蛋白质药物的制备需要通过基因工程技术将人类源或自然源中的基因进行克隆，之后在实验室中将其与真核细胞或质粒载体整合，制备出可量产的蛋白质药物。
克隆技术可以更为准确地获取目标蛋白质的基因序列，从而制备出更为纯净、高效的蛋白质药物。
二、克隆技术在切除病毒中的应用疫苗是预防疾病传染的一种重要手段。
而一些疾病病毒在重组DNA技术反复的地存储和传染中发生恶性突变，在繁殖中产生了大量的突变子病毒。
其病毒表面抗原变异后，质子基基因的序列也发生了变异。
因此，生产用于疫苗克隆，研究和开发新的切除病毒疫苗对生物医学研究和应用发挥了很大的作用。
三、克隆技术在疾病基因诊断中的应用许多疾病都是由基因突变引起的，对这些基因进行克隆再序列化可以确定导致疾病的突变，并且能够对相关的家族成员进行基因诊断，有效预防该疾病。
四、克隆技术在实现个性化医学中的应用克隆技术可以针对个体不同的基因序列，为每个人提供个性化医学治疗。
个性化医学是根据每个人的遗传信息、生活方式和临床表现等因素，量身定制治疗方案。
在克隆技术的帮助下，医生可以过基因序列信息有效地制定个性化治疗方案，为每个病人提供最佳治疗效果。
五、克隆技术发展的前景和挑战克隆技术的广泛应用是生物医药研发和临床治疗的重要进展。
未来，克隆技术的应用将进一步完善和创新，包括基因治疗、药物免疫疗法、干细胞研究、智能化和大数据挖掘等。
不过，克隆技术在实践中的应用也面临着挑战。
心血管疾病的基因诊断和治疗
心血管疾病的基因诊断和治疗心血管疾病是指影响心血管系统的疾病，包括冠心病、高血压、心肌梗死、心力衰竭等。
这些疾病是当前全球范围内最常见的疾病之一，严重威胁人们的健康和生命安全。
然而，随着分子生物学、基因工程等技术的进步，心血管疾病的基因诊断和治疗取得了重大进展，为广大患者带来了新的治疗和预防方案。
本文将从基因诊断和基因治疗两个方面，介绍目前心血管疾病的最新研究成果和治疗方法。
一、基因诊断基因诊断是指通过检测一个人的基因信息，确定他是否携带与某种疾病相关的致病基因。
目前，基因诊断主要利用DNA分析技术，包括聚合酶链式反应（PCR）、基因芯片技术、下一代测序技术等。
1.1 基因检测目前，已经确定的和心血管疾病相关的基因有数千个，其中一些基因的变异与心血管疾病的发病率密切相关。
为了有效地检测这些基因的变异情况，科学家们研制出了一种名为"基因芯片"的技术。
基因芯片技术将数万种基因片段固定到一块小芯片上，可以同时检测大量基因的变异情况。
该技术具有高效、快速、经济等特点，因此被广泛应用于心血管疾病的基因检测中。
1.2 基因标记除了基因检测外，基因标记也是一种重要的基因诊断方法。
基因标记是指在人类基因组中选择一些具有多态性（即不同个体具有不同的基因型）的基因位点，并对它们进行基因特异性的检测。
这些基因位点标记可以用来研究基因和心血管疾病之间的关系，从而为心血管疾病的诊断和治疗提供依据。
二、基因治疗基因治疗是指利用基因工程技术，向患者的细胞或组织中导入特定的基因，以达到治疗目的。
在心血管疾病的治疗中，基因治疗具有针对性强、副作用小、治愈率高等优点，因此备受关注。
2.1 基因修饰基因修饰是指利用基因工程技术，将特定的基因导入目标细胞或组织中，从而影响其生物学行为。
在心血管疾病的治疗中，基因修饰主要用来调节心血管系统中的生物学过程，例如通过调节内皮细胞生成的NO、增加心肌细胞转化为成熟细胞的能力等，来预防或治疗心血管疾病。
基因分离克隆和功能鉴定
基因分离克隆和功能鉴定1.DNA提取：从目标生物体的细胞中提取总DNA。
2.扩增目标基因：使用聚合酶链反应（PCR）技术，扩增目标基因片段。
PCR使用引物特异性地扩增目标基因的DNA序列。
3.电泳检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过电泳检测目标基因的异常片段。
4.转染：将PCR产物转染到宿主细胞中。
转染技术有多种，常用的包括热激转染、电穿孔转染等。
5.筛选与分离：将转染后的细胞放入含有抗生素的培养基中，通过抗生素的筛选，可以筛选出带有目标基因的细胞克隆。
6.扩增目标基因片段：将带有目标基因的细胞克隆进行培养，通过培养扩增目标基因片段。
功能鉴定是对克隆的目标基因进行进一步研究，了解其功能及相关生物过程的一种方法。
常用的功能鉴定方法包括以下几种：1. 基因敲除：通过CRISPR-Cas9或siRNA等技术，在细胞或生物体中敲除目标基因，观察敲除后表型的变化，从而推断目标基因的功能。
2.基因表达：将目标基因导入细胞中，并观察已知的目标基因的功能变化。
该方法通过建立过表达或亚表达的模型，来研究目标基因对生物体的影响。
3.转基因模型研究：通过将目标基因导入实验动物模型中，观察目标基因的功能变化以及对生物体的影响。
通过这种方法，可以更深入地了解目标基因在整个生物体中的功能。
4.蛋白互作分析：通过蛋白质互作实验，将目标基因转化为蛋白质，并分析其与其他蛋白质之间的相互作用关系。
这种方法可以推测目标基因的功能及其参与的信号通路。
5.基因芯片分析：运用基因芯片技术，可以同时检测上千个基因在不同条件下的表达量，用来对目标基因和其他相关基因进行比较。
基因分离克隆和功能鉴定的应用广泛，可以用于动植物育种、疾病诊断、新药开发等领域。
例如，通过克隆和鉴定植物抗性基因，可以增加作物对病虫害的抗性，提高农作物产量和品质；通过克隆和鉴定人类基因，可以预测人类遗传疾病的风险，为个体化治疗提供依据；通过克隆和鉴定药物靶标基因，可以加速新药研发过程，提高疗效和安全性。
分子生物学实际应用例子
分子生物学实际应用例子1. 基因检测及疾病诊断随着分子生物学技术的不断发展，基因检测已经成为一种普遍的方法，可以帮助医生更准确地诊断疾病，并进行更好的治疗。
比如，通过红细胞病基因检测，可以更早地诊断和治疗新生儿遗传性疾病。
此外，基因检测还被广泛用于预测个体是否易患某些遗传性疾病，例如乳腺癌和结直肠癌。
2. 基因编辑CRISPR-Cas9技术是分子生物学中最具有革命性的技术之一，可用于修改基因组序列，引起特定基因的突变，从而改变相关功能。
此技术已广泛用于动物模型，为疾病研究和治疗提供了新的思路。
3. 基因克隆基因克隆是利用酵母或细菌等生物技术的方法，将目标基因插入到载体DNA中并复制多份，从而实现大规模基因表达及生产重要蛋白质的目的。
例如，利用基因克隆技术已经成功生产出多种重要的药物，例如人类胰岛素和丝氨酸蛋白酶。
4. DNA指纹DNA指纹技术是利用多态性DNA的特点，针对人类或动植物等生物物种的细胞样本，通过各种技术进行分离、纯化、PCR扩增、电泳等处理，制备出每个个体在特定基因座中的基因型信息，并进行验证与鉴定。
此技术可广泛应用于法医学、遗传学、生态学、生物多样性保护等领域。
5. 基因表达分析基因表达分析是分子生物学中最为基础和重要的技术之一，可以帮助人们了解细胞在不同生理和病理状态下的基因表达情况。
通过基因表达分析，人们可以筛选出与疾病相关的基因，为疾病的预测、诊断和治疗提供新的理论支持。
同时，基因表达分析也被广泛应用于生命科学的研究领域，例如转录组学和蛋白组学等。
综上所述，分子生物学技术在生命科学、医学、生态学等领域中的应用越来越广泛，为人类社会的进步和发展做出了重要贡献。
但是，随着技术的不断进步，我们也需要加强对技术的监管和指导，确保技术的安全性和可靠性，同时保护受试者和生态系统的权益。
基因克隆载体有什么用途
基因克隆载体有什么用途基因克隆载体是一种重要的分子生物学工具，它们在基因工程、疫苗、药物研发、基因诊断、转基因作物等领域中有着广泛的应用。
在这篇文章中，我们将以1500个字以上的篇幅，详细讨论基因克隆载体的用途。
一、基因工程基因工程是指利用基因工具对DNA进行修饰和改造的技术。
基因克隆载体作为基因工程的重要工具之一，可以把某些人工合成的DNA片段导入到细胞中，使得这些DNA片段可以在细胞中表达出来。
此外，基因克隆载体可以用于构建重组DNA、基因点突变、介导基因转移等基因工程技术。
二、疫苗研发基因克隆载体可以用于疫苗研发中。
例如，利用细胞载体将某种病原菌的DNA 序列克隆到载体中，然后通过表达、提纯等步骤得到该病原菌的蛋白质。
这种蛋白质可以被用来制作疫苗，以让人体的免疫系统产生针对该病原菌的免疫力，从而预防疾病的发生。
三、药物研发基因克隆载体也可以用于药物研发。
例如，利用基因克隆载体将某种人类细胞或动物基因表达出来，得到该蛋白质。
然后，这种蛋白质可以被用来开发创新药物，因为许多疾病都是由于缺少某种蛋白质或蛋白质缺陷导致的。
通过基因克隆载体的使用，研究人员可以操纵某些基因的表达，进而研究疾病的基本机制。
四、基因诊断基因克隆载体也广泛应用于基因诊断领域。
例如，利用基因克隆载体可以生产用于疾病检测的重组核酸探针。
此外，基因克隆载体还可以用于快速检测基因变异等疾病导致的基因变化。
基因克隆载体可以用作定量荧光PCR扩增的模板，用于疾病诊断和治疗。
五、转基因植物基因克隆载体还被广泛应用于转基因植物领域中。
如今，农业领域使用大量转基因植物，以提高产量、抗病和抗逆性能。
基因克隆载体可以用于纵向和横向基因转移。
纵向相对较为简单、常见，是将拥有外源基因的构建体（例如基因克隆载体）通过种子传到下一代。
而横向基因转移是指把外源基因插入植物基因组的过程。
无论是纵向还是横向，基因克隆载体都是植物基因工程研究中不可或缺的工具。
基因克隆的基本原理的应用
基因克隆的基本原理及应用1. 前言基因克隆是分子生物学中的一个重要技术，通过将DNA片段从一个生物体中复制并插入到另一个生物体中，实现对基因的表达和功能的研究。
本文将介绍基因克隆的基本原理和其在生物科学研究、医学领域以及农业领域的应用。
2. 基因克隆的基本原理基因克隆的基本原理包括以下几个步骤：2.1 DNA提取首先，需要从捐献者的细胞中提取DNA。
常用的DNA提取方法包括酚/氯仿法、盐析法和商业化试剂盒法等。
2.2 DNA片段制备通过限制性内切酶对DNA进行切割，得到所需要的DNA片段。
限制性内切酶是一种特异性切割DNA的酶，能够在特定的DNA序列上切割。
2.3 载体准备选择适当的载体（如质粒或病毒），并将其进行准备。
质粒是一种环状的DNA 分子，具有自主复制的能力，并能被基因工程操作所改变。
2.4 核酸连接将DNA片段与载体进行连接，通常采用DNA连接酶将两者连接起来形成重组DNA。
2.5 转化将重组DNA转化到宿主细胞中。
转化是指将外源DNA导入宿主细胞，在宿主细胞中复制和表达。
2.6 筛选经过转化后，使用适当的选择标记（如抗生素抗性基因）、检测方法或者荧光蛋白的表达等筛选方法，选出含有目标基因的克隆。
3. 基因克隆的应用基因克隆技术在生物科学研究、医学领域以及农业领域有广泛的应用。
3.1 生物科学研究基因克隆技术为生物科学研究提供了强有力的工具。
通过对特定基因的克隆与表达，可以研究该基因在细胞过程、生物发育和疾病发生中的功能和调控机制。
例如，研究人类基因在小鼠模型中的功能，有助于揭示人类遗传性疾病的发病机制。
3.2 医学领域基因克隆在医学领域具有重要的应用价值。
通过克隆人类基因，可以制备重组蛋白或基因药物，用于治疗疾病。
此外，基因克隆技术还可以用于基因诊断、疫苗制备以及基因治疗等领域。
3.3 农业领域基因克隆技术在农业领域的应用主要包括转基因作物的培育。
通过将特定基因导入植物，可以使植物获得抗虫害、抗逆境、提高产量等性状，从而提高农作物的品质和产量。
基因克隆与表达及功能鉴定研究
基因克隆与表达及功能鉴定研究在现代生命科学领域中，基因克隆与表达以及功能鉴定是非常重要的研究方向之一，它涉及到许多生物医学、农业、工业和环境等领域的研究和实际应用。
本文将从基因克隆与表达的基本原理、方法、技术和应用，以及功能鉴定的原理、方法、技术和应用等方面进行探讨。
一、基因克隆与表达基因克隆是指通过分子生物学技术，将含有某个或某些特定基因的DNA序列从一个大的DNA分子（如染色体）中分离出来，然后插入到特定的载体DNA中，形成重组DNA分子的过程。
基因表达是指基因信息的转录和翻译过程，将基因的DNA序列转录成RNA分子，然后翻译成蛋白质分子的过程。
基因表达是生物体形成和发展的基础，也是生命活动的重要表现形式。
1. 基因克隆原理基因克隆的主要原理是利用限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶以及质粒或噬菌体等DNA载体的特性，将特定DNA序列插入到载体DNA中，形成重组DNA分子。
限制酶是一种能够识别、切割DNA分子特定序列的酶，其识别序列具有一定的特异性。
DNA连接酶是一种能够连接两个DNA分子的酶，常用的有T4 DNA连接酶和快速连接酶等。
DNA聚合酶是一种能够在DNA模板上合成互补链的酶，其作用是在重组DNA分子中完成互补链的合成。
2. 基因克隆方法基因克隆的主要方法有限制性片段长度多态性（RFLP）分析、聚合酶链式反应（PCR）克隆、原核表达克隆和真核表达克隆等。
RFLP分析是一种利用限制酶对DNA序列进行切割，并根据不同的RFLP位点进行区分的方法，其主要应用于基因型鉴定和进化研究等领域。
PCR克隆是一种利用PCR技术扩增目标基因或DNA片段，并将扩增产物克隆到载体DNA中的方法，其主要应用于基因检测、DNA测序和分子克隆等领域。
原核表达克隆是一种利用质粒或噬菌体等原核生物作为DNA载体，将外源基因转入细菌或古细菌等原核生物细胞中，通过蛋白质表达实现基因功能研究的方法。
真核表达克隆是一种利用真核生物（如哺乳动物、鸟类、昆虫、线虫等）作为DNA载体，将外源基因转入具有表达能力的真核细胞中，通过蛋白质表达实现基因功能研究的方法。
基因克隆的意义
基因克隆的意义
一、基因克隆的意义
基因克隆是指通过复制和复制一个特定DNA片段来重组和表达一个特定的基因的技术。
它是分子生物学中一项重要的技术，在研究基因组结构、基因功能和基因突变等方面具有重要的发展意义。
1、发掘基因：基因克隆可以帮助发现特定片段的DNA序列，使其可以被进一步研究。
这有助于更好地理解基因组，从而有助于开发新的药物。
2、改造生物体：基因克隆可以被用来改造特定的生物体，例如把一种物种的基因拷贝到另一种物种以改变这两种物种的性状。
3、研究基因组：基因克隆可以帮助研究基因组结构，这有助于理解基因的作用以及其他遗传特性。
4、研究疾病：基因克隆也可以用来研究疾病的遗传机制，以及诊断和治疗疾病的方法。
二、基因克隆的风险
基因克隆也可能带来一些风险，如改变物种基因可能会导致不可预知的结果；病毒克隆可能会传播给其他生物；基因克隆既可以用于研究疾病，也可以被用于开发新的生物武器。
同时，在科学发展日新月异的今天，克隆技术受到了很多人的质疑，有人担心基因突变等负面影响可能发生。
基因克隆技术可以带来许多好处，但也需要尽量减少风险。
只有在既可以控制风险又可以按照道德准则操作的情况下，才能让克隆技
术真正发挥出潜在的价值。
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RDA技术原理和基本过程示意图
mRNA-DD技术原理和基本过程示意图
（三）采用动物模型鉴定克隆疾病相关基因
人类的部分疾病，已经有相应的动物模型。
如果动物某种表型的突变基因定位于染色体的 某一部位, 而具有相似人类疾病表型的基因很 有可能存在于人染色体的同源部位。 另外，当疾病基因在动物模型上已完成鉴 定，还可以采用荧光原位杂交来定位分离人的 同源基因。
（）
②CAPS（Cleaved amplified polymorphic sequence ）标记:
是特异引物PCR与限制性酶切相结合而产生的一种DNA标记,当 SCAR（sequence characterized amplified regions)或STS的特异 扩增产物的电泳谱带不表现多态性时，一种补救办法就是用限制性 内切酶对扩增产物进行酶切，然后再通过琼脂糖或聚丙烯胺凝胶电 泳检测其多态性,这种多态性称为CAPS标记。它揭示的是特异PCR产 物DNA序列内限制性酶切位点变异的信息，也表现为限制性片段长度 的多态性。
（3）基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记
①AFLP（amplified fragments length polymorphism ） 标记:扩增片段长度多态性。通过对基因组DNA酶切片段的 选择性扩增来检测DNA酶切片段长度的多态性。AFLP揭示 的DNA多态性是酶切位点和其后的选择性碱基的变异。
• RFLP连锁图 ♪ RFLP 作图的程序 与经典遗传作图类似,只是统计性状改为DNA 分子标记; 程序：选择已知基因型的亲本 → 设计杂交方案 → 获得交配的子代 → 分析其DNA分子标记
第三节：疾病基因鉴定
鉴定疾病相关基因的关键是确定疾病 表型和基因间的实质联系
正确的诊断是鉴定疾病基因的先决条件
v-l之间也是连锁的，其中重组配 子型为⑤、⑥、⑦、⑧，因此： Rfv-l＝(⑤＋⑥＋⑦＋⑧)/1011 ＝18.9%
⑧
vb+
总数
19
1011
因此v和b之间的重组频率最高，应当相距最远， l在v和b位点之间，用遗传图表示如下：
18.9 v l 25.6 b
由此可见，通过一次三因子杂交和测交分析， 不仅可以确定3个基因间的遗传距离，而且还可 以弄清楚它们在染色体上的排列顺序。
1 39
Recombinant s
39
(B)
9RFLP analysis of plants in F2 population with RG214
Fig.1 The southern analysis of RFLP marker RG214.
Байду номын сангаас
（2 ）基于PCR的DNA标记：
①RAPD（random amplified polymorphic DNA ）标记：
B
A. 基于DNA分子标记的一条
人类染色体上的（基因）连锁图
B. A
基于VNTR标记的人系谱分析图
• 遗传图谱(genetic map)：将基因在染色体上的相 对位置和距离描绘出来的图，又称为连锁遗传 图谱(linkage genetic map)。在遗传图谱上代表 一对等位基因的位置称为基因位点。
• 多点杂交
1. 三点杂交
VvBbLl × vvbbll
类型
① ② ③ ④
对于v-b这对基因之间的4种基因 型：
vb＝①＋⑧＝302＋19＝321
++＝②＋⑦＝298＋20＝318
F1配子基因型
vbl +++ +b+ v+l
数目
302 298 115 105
v+ ＝④＋⑥＝105＋72＝177 +b ＝③＋⑤＝115＋80＝195 四种基因型比例不符合1:1:1:1的 比例，因此v-b之间是连锁的。其 中③、④、⑤、⑥为重组配子类 型，因此： Rfv-b＝(③＋④＋⑤＋⑥)/1011
（4）单核苷酸多态性的DNA标记
SNP（single nucleotide polymorphism）标记:
单核苷酸多态性。不同个体基因组DNA序列同一位置上的 单个核苷酸的差别。其比较的不是DNA的片段长度，而是相同 序列长度里的单个碱基的差别。
第二节：遗传作图
5.1 经典的遗传学图谱:
主要用来确定生物体的基因在染色体上的排列，只能标明基因 之间的相对位置，无法指明基因在染色体上的具体位置，因此无法 按图直接克隆分离基因。 5.2 现 代 遗传学图谱： 其概念是David Botstein等 于1980年提出来的，当时由于DNA 限制性内切酶和连接酶的应用，RFLP成为一种崭新的DNA多态性 标记。他们提出来利用RFLP作为标记去构建多态性基因与这些标 记连锁关系，进而确定多态性基因的位置。其精髓在于将单纯的表 型研究深入到DNA分子的本质上去。 即：表型多样性对应于DNA分子的多样性 将单纯的表现多态性的界标改变为以DNA序列的多态作为作图 界标。这些界标包括： RFLP、 VNTR和STR等。
解及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子，然后用经标记的特异DNA探针
与之杂交，通过放射自显影或非同位素显色技术来揭示DNA的多态性。 ( 图 Southern )
1 2 3 4
(A)
ZCL ZZA
1 The polymorphism of RFLP marker RG214 between 2 parents and 2 bulks
1.形 态 标记： 是指那些能够明确显示遗传多态的外
观性状，如株高、粒色等的相对差异 2.细胞学标记 ：是指能够明确显示遗传多态的细胞学特征。
如染色体结构上和数量上的遗传多态性等。
3.蛋白质标记：非酶蛋白质和酶蛋白质 在非酶蛋白质中，用得较多的是种子贮藏蛋白；
酶蛋白质主要是同功酶。
4.DNA 标 记： 也称DNA多态性标记、 DNA分子标记， 是 DNA水平上遗传多态性的直接反映。
功能克隆（functional cloning）采用的是从 蛋白质到DNA的研究路线，针对的是一些对影 响疾病的功能蛋白具有一定了解的疾病
1．依据蛋白质的氨基酸序列信息鉴定克隆疾病相关基因 2．用蛋白质的特异性抗体鉴定疾病基因
（二）从疾病的表型差异出发发现疾病相 关基因
表型克隆（phenotype cloning）基于对疾病 表型和基因结构或基因表达的特征联系已经有所 认识的基础上来分离鉴定疾病相关基因
针对未知基因常用的技术有
mRNA差异显示（mRNA differential display，mRNA-DD） 抑制消减杂交（suppressive substractive hybridization，SSH）
基因表达系列分析（SAGE）
cDNA微阵列 （cDNA microarray） 基因鉴定集成法 （integrated procedure for gene identification）
确定疾病的遗传因素，即通过孪生子分析，
领养分析和同胞罹患率分析等确定遗传因素
是否在疾病发病中的作用及其作用程度。
一、不依赖染色体定位的疾病相关基 因克隆策略
不依赖染色体定位的疾病相关基因克隆策
略包括功能克隆、表型克隆及采用位点非依赖
的DNA序列信息和动物模型来鉴定和克隆疾
病基因。
（一）从已知蛋白质的功能和结构出发鉴 定克隆疾病基因
2. 双交换与染色体作图
但事实：
18.9 v 44.5 l 25.6 b
对于v与b而言，双交换类型与亲本型没有区别，
这就导致了前面在直接计算v与b之间的遗传图距
时出现偏低估计。由于双交换类型是两次单交换
的结果，为了对此进行校正，因此在计算v-b之间 的遗传图距时双交换类型必须计入两次：
Rfv-b＝[(③＋④＋⑤＋⑥)＋ 2(⑦＋⑧)]/1011 ＝45.5%
⑤
⑥ ⑦ ⑧
+bl
v++ ++l vb+ 总数
80
72 20 19 1011
＝36.8%
类型
① ②
F1配子基因型
vbl +++
数目
302 298
③
④ ⑤ ⑥ ⑦
+b+
v+l +bl v++ ++l
115
105 80 72 20
b-l的四种基因型： bl＝①＋⑤＝302＋80＝382 ++＝②＋⑥＝298＋72＝370 b+＝③＋⑧＝115＋19＝134 +l＝④＋⑦＝105＋20＝125 同理可以判断b-l之间也是连锁的， 其中③、④、⑦、⑧为重组配子 类型，因此： Rfb-l＝(③＋④＋⑦＋⑧)/1011 ＝25.6%
依据DNA或mRNA的改变与疾病表型的关 系，可有几种策略：
1. 从疾病的表型出发，比较患者基因组 DNA 与正常人基因 组 DNA 的不同，直接对产生变异的 DNA 片段进行克隆， 而不需要基因的染色体位置或基因产物的其他信息。
2. 针对已知基因。如果高度怀疑某种疾病是由于某个特殊 的已知基因所致，可通过比较患者和正常对照间该基因表 达的差异来确定该基因是否为该疾病相关基因。 3. 针对未知基因的，可通过比较疾病和正常组织中的所有 mRNA的表达种类和含量间的差异，从而克隆疾病相关基 因。这种差异可能源于基因结构改变，也可能源于表达调 控机制的改变。
这里仅介绍遗传的分子标记中的几种重要的分子标记:
1.同工酶标记: 同工酶（Isozyme）是一类分子结构不同、 功能相似、催化同样的生化反应的酶。 同工酶标记是利用编码同工酶的等位基因与同工酶酶谱的 相关性及其共显性的特点进行染色体定位和遗传连锁分析。
2.DNA分子标记: