脂肪干细胞的临床应用
脂肪干细胞运用
ADSCs的分离与纯化关于ADSCs的获取方法很多，但不管哪种方法所得到的并非单一的脂肪干细胞，是一组具有干细胞特性的细胞群。
目前应用最广泛的分离方法是酶胶原消化法。
首先将无菌条件下切取的脂肪组织块剪成细小的颗粒，PBS液冲洗干净后，用0．1％的胶原酶在37℃下振荡消化4O～90 min，再用含10％胎牛血清的等体积DMEM培养基终止。
1 200 r／min离心5～10 min，弃上清液及悬浮的脂肪组织，重悬细胞后经过细胞筛过滤，所得细胞按2—4×105／cm 接种于50ml培养瓶内。
37℃条件5％的CO 饱和湿度培养箱内培养，2 d后首次换液，以后3d换液一次，至细胞达70％～8O％融合时用0．25％胰酶消化，并传代。
经过提取获得的以脂肪干细胞为主的细胞群接种后数小时即开始贴壁生长，24h内完成贴壁。
细胞的形状与成纤维细胞相似，体积较小，核浆比较大，随后细胞体积渐增大，克隆形成。
经传代后，细胞的形态及排列才趋于一致。
由于目前尚未发现脂肪干细胞表面存在特异性的分子标记物，因此无法利用分子表型来分离纯化。
然而可通过纯化脂肪组织块来间接达到纯化脂肪干细胞的目的。
流式细胞仪检测显示：传至第3代时，可达95％以上的细胞纯度。
ADSCs的生物学特性1.ADSCs的鉴定在ADSCs鉴定上，现阶段尚无特异性鉴定方法。
用免疫荧光法和流式细胞术检测结果均显示ADSCs表达特异性分子CD44，OCT一4，E—eadherin，流式细胞术检测细胞周期显示绝大多数细胞是处于静止期的干细胞，传代后生长迅速，随机挑选来源标本，对细胞进行染色体核型分析显示ADSCs具有遗传稳定性。
ADSCs分泌多种生长因子在生理功能方面，脂肪干细胞能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PGF)、转化生长因子一B(TGF—B)、成纤维细胞生长因子(FGF一2)等，低表达的因子有Ang一2 C。
脂肪干细胞的在整形美容外科的应用
脂肪干细胞的在整形美容外科的应用作者：李义来源：《医学美学美容·中旬刊》2013年第04期摘要：脂肪干细胞具有多向分化潜能且具有组织来源丰富，取材方便，创伤小，增殖能力强和等优点。
对多种组织的损伤具有良好的修复作用，是医学界中解决各种医学难题的理想材料。
本文主要介绍了脂肪干细胞生物学特点；脂肪干细胞在医学界以及整形美容中所作的研究与应用。
关键词：脂肪干细胞；来源；整形美容；应用中图分类号：R622 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2013）04-00-021 脂肪干细胞介绍1976年Fridenstein等首先报道从骨髓中分离出克隆源性的具有多向分化潜能的基质细胞-骨髓间充质干细胞。
Zuk等于2001年发现脂肪组织中除了含有已经定型的前脂肪细胞外，也包含一种具有多向分化潜力的细胞群，其性质与MSCs十分相似，但又不完全相同。
这些细胞已被证实不仅具有分化成为骨骼、软骨、脂肪、心肌、神经等组织的能力，而且同样具有促进伤口愈合、损伤组织细胞再生和减少疤痕的能力及抗衰老能力。
这种细胞被称为脂肪来源干细胞、脂肪来源成体干细胞、脂肪来源成体间质细胞、脂肪来源间质细胞、脂肪间充质干细胞，成脂肪细胞等等。
现在被统称为脂肪源性干细胞。
2 脂肪干细胞研究应用的优势作为以修复重建为主旨的整形外科及以年轻化为核心的美容医学，再生医学一直是备受关注与研究探索的领域。
由于MSCs获取途径与疾病治疗性价比的差异，整形外科领域再生医学研究与临床应用受到限制。
脂肪源性间充质干细胞一经报道，首先在整形外科领域引起轰动效应，这种关注大大推动了ADSCs的研究，它的临床应用也正在追赶着MSCs的步伐。
首先，来源取材方便不仅是ADSCs一个最大的优势，也是整形外科的优势。
一方面，脂肪组织在体内分布广泛，储量丰富；另一方面，吸脂术是整形外科成熟的常规手术，手术风险小，其作为常规“废弃的副产品”获取容易。
对患者来说，吸脂雕塑体形的同时享受干细胞的年轻化神奇功效是一次双赢的生命重塑，痛苦与恐惧感少于骨髓提取，亦无血源污染与免疫排斥风险，由此形成临床应用的优势。
脂肪干细胞在再生医学中的研究进展及应用前景
ｉＰＳ细胞，而且所转变的ｉＰＳ细胞安全性更高，将来有望利用 脂肪干细胞培育人体所需的各种器官。斯坦福大学研究人 员发现，脂肪干细胞内两种转录因子的表达水平高于皮肤成 纤维细胞，这表明，在初始状态下，脂肪干细胞较皮肤成纤维 细胞更容易被诱导；研究人员在脂肪干细胞和皮肤成纤维细 胞中分别加入能够编码４种转录因子的基因后，约有
１
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谢ｔｈ
２
ｏｖｅｒ
３０００
ｃａｓｅｓ．Ｐｌａｓｔ
Ｒｅｃｏｎｓｔｒ
Ｓｕｒｇ。１９８３，７２（５）：５９１—５９７ ａ１．Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ
ｉｎ
ＭｃＩｎｔｏｓｈ Ｋ，Ｚｖｏｎｉｃ
１９９９，２２１（１）：６３—７１ Ｚｕｋ ＰＡ，Ｚｈｕ Ｍ，Ａｓｈｉ Ｊａｎ
ｓｏｕｒｃｅ
Ｐ，ｅｔ
ａｌ，Ｈｕｍａｎ
ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ
ｉｓ
ａ
ｏｆ ｍｕｈｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ．２００２，１３（１２）：
４２７９—４２９５
Ｇｒｏｎｔｈｏｓ Ｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ ＤＭ，Ｌｅｄｄｙ ＨＡ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｒｆａｃｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ
疗效果。结果显示，虽然大鼠心脏在组织结构及功能分析上 未见明显改变，但免疫组化结果显示被移入心脏的脂肪干细 胞表达肌球蛋白重链、肌钙蛋白一１及转录因子Ｎｋｘ２．５，即表
基金项目：国家９７３计划资助项目（２００５ＣＢ５２２６０３）；国家自然科学 基金资助项目（３０６７２１７６，３０７３００９０，３０８００４４２） 通讯作者：付小兵（ｆｕｘｉａｏｂｉｎｇ＠ｒｉｐ．ｓｉｎａ，ｃｏｒｎ）
干细胞的制备及应用
间充质干细胞美容保健流程
1.客户订单(销售部,确认细胞种类和规格)。
2.报给技术部(最少提前一天)。
3.细胞制备与质量控制(细胞制剂30毫升) 。
7.应急处理与护理。
6. 静脉回输(回输时间为30～40分钟)。
4. 细胞出库(出库单送给财务部)。
干细胞领域的研究应用 脂肪干细胞
脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到 的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢 复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生， 恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分 改善，有效改善亚健康、卵巢早衰等疾病， 由内而外真正的有效抵抗衰老。
间充质干细胞男性健康与保健
1、提升肾脏功能。 2、恢复旺盛雄性激素分泌水平。 3、增强体力，精力充沛。 4、能使男性性功能得到明显改善
间充质干细胞亚健康与保健
1.脐带间充质干细胞抑制人体衰老、清除多种亚健康 症状，使机体全面调节至年轻状态。 2.防止病毒入侵、使肝硬化、糖尿病症状减轻，脑中 风、偏瘫得到很大程度改善。 3.高血压、高血糖、高血脂降低；风湿、顽固性偏头 痛、眩晕得到缓解或治愈 。 4. 腰肌劳损、四肢无力症状可以得到全面的修复。
干细胞制备及应用
什么是干细胞？
干细胞即为起源细胞，是一类具 有自我复制和多向分化潜能的细 胞，在特定条件下分化成为人体 组织或器官的细胞，医学界上称 为“万用细胞”。
干细胞三大特性
1、原始未分化 2、自我复制或更新 3、多项分化潜能
干细胞的治疗机理
1.激活休眠细胞 2.修复受损细胞 3.替代坏死细胞
干细胞 分化
具有自我复制及多向分化潜能；在体内 或体外特定的诱导条件下，可分化为多 种组织细胞。
人脐带间充质干细胞来源于脐带中精华。
脂肪干细胞实验报告
一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。
脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。
本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。
二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。
2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。
2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。
四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。
（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。
（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。
（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。
五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。
2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。
脂肪源性干细胞在整形美容外科临床应用进展
脂肪源性干细胞在整形美容外科的临床应用进展【关键词】脂肪源性干细胞; 整形美容外科;临床应用【中图分类号】r622.1【文献标识码】b【文章编号】1008-6455（2011）08-0081-02自体脂肪作为一种软组织填充材料，在整形外科的应用已有100多年的历史。
自从1889年vande meulen 报道了首例游离脂肪移植的临床应用后，人们发现脂肪移植有很多的并发症，如液化、坏死、吸收，其吸收率从5%～100%相差甚远。
其主要原因是由于血供不足，导致移植后的脂肪缺氧，出现坏死硬结［1-2］。
鉴于此，自体游离脂肪移植的临床应用曾一度发展很缓慢。
2001年zuk［3］等首次从脂肪组织中分离获得一群具有多向分化潜能的细胞——脂肪源性干细胞（adipose-derived stem cells,ascs）。
这种类型的细胞能自我更新、不断增殖，而且经定向诱导可分化形成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、血管内皮细胞、心肌细胞及神经细胞等多种类型的细胞，为脂肪细胞的应用提供了新的思路［4］。
因此ascs已在基础医学、临床医学等各个领域成为研究的热点。
笔者仅就脂肪源性干细胞在整形美容外科的临床应用进行综述。
1 脂肪源性干细胞的概述脂肪源性干细胞是一个新生的概念，它与大家熟知的骨髓间充质干细胞形态相似，具有同样强大的体外增殖能力和多向分化潜能。
2001年zook等［3］首次从抽脂术中获得的脂肪组织悬液中分离获得了此种细胞。
由于脂肪组织在体内储量丰富，脂肪抽吸技术又是安全和可接受的措施，且创伤小，又没有伦理学争议等优点，来自脂肪抽吸的ascs，是临床应用中安全的自体脂肪来源。
自此许多国家的学者开始致力于ascs的研究，并取得了重大进展。
各研究团体不同时期有许多不同的命名，如脂肪来源基质细胞（adipose-derived stromal cells,adscs）,脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells,admscs）,脂肪祖细胞（adipose progenitor cells）,脂肪前体细胞（adipose precursorcells,apcs）,脂肪基质细胞（adipose stromal/stem cells,ascs），脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cell,ascs）等等。
脂肪间充质干细胞在糖尿病足治疗中的研究进展
脂肪间充质干细胞在糖尿病足治疗中的研究进展脂肪间充质干细胞是一种来源于脂肪组织的多能干细胞，具有自我更新和分化为多种细胞类型的能力。
这种干细胞来源广泛，易于获取，且在体内具有较好的组织兼容性，这些特点使得脂肪间充质干细胞成为治疗糖尿病足的理想选择。
目前，关于脂肪间充质干细胞在糖尿病足治疗中的研究已经取得了一些进展。
脂肪间充质干细胞在促进糖尿病足创面愈合方面的研究取得了一些成果。
研究表明，将脂肪间充质干细胞移植到糖尿病足患者的创面上，可以有效地促进创面愈合，加速组织修复和再生。
脂肪间充质干细胞所分泌的生长因子和细胞因子可以促进血管生成和新生组织形成，提高创面愈合的速度和质量，从而减少患者的痛苦和并发症的发生。
脂肪间充质干细胞在改善糖尿病足患者的微循环方面也表现出了良好的效果。
糖尿病足患者往往伴有微循环障碍，导致组织缺血缺氧，从而加重病情的恶化。
而通过脂肪间充质干细胞移植，可以有效地改善患者的微循环状况，增加局部血流量，减轻组织缺血缺氧，从而改善糖尿病足患者的症状和疼痛感。
脂肪间充质干细胞还能够调节炎症反应，减轻糖尿病足患者的病情。
糖尿病足患者常常伴有严重的炎症反应，而脂肪间充质干细胞具有抗炎作用，可以有效地减轻患者的炎症反应，改善组织的局部环境，有利于创面愈合和病情的缓解。
脂肪间充质干细胞在糖尿病足治疗中的研究进展是十分值得期待的。
虽然目前的研究还存在一些局限性，比如临床试验样本量较小、疗效评估不够全面等问题，但是我们相信随着技术的不断进步和研究工作的深入，脂肪间充质干细胞必将为糖尿病足患者带来更多的希望和福音。
未来，我们期待脂肪间充质干细胞在糖尿病足治疗中能够取得更多的突破，为改善糖尿病足患者的生活质量做出更大的贡献。
脂肪来源干细胞用于乳房整形手术的研究进展
性乳房发育切除等修复重建手术ｎ ］ 。自１ ９ 世纪 ８ ０ 年 代 以来 ， 关 于 乳 房整 形 手 术 的技 术 、 方 法 和 材 料 经 历 了从液 体石 蜡 注 射 隆 乳 ， 硅油 、 硅 胶假 体 乳 房 置 入 到 自体脂 肪移 植 ， 再 到最 近 的研 究热 点脂肪 来
Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｐｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ ａ ｄ ｉ ｐ ｏ ｓ ｅ － ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ｅ ｄ ｓ ｔ ｅ ｍ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｂ ｒ ａ ｓ ｅ ｔ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ｕ ｒ ｇ ｅ ｒ ｙ
是 隆乳和乳房再造术中应用 的研究进展，并对相 关 问题进 行 讨论 。
１ 脂 肪来 源干细 胞 的分离和 鉴定
脂 肪 来源 干 细 胞 由 Ｚ ｕ ｋ等 ［ ３ ３ 于２ ０ ０ １年 首 次 从 人 吸 脂术 的脂 肪 悬 液 中 ， 经消化 、 离心 和 洗 涤 等 处
理 分 离 得 到 ，经 过 细 胞 表 面 抗 原 蛋 白免 疫 表 型 鉴
中国美容医学 ２ ０ １ ３年 ６月第 ２ ２卷第 ｌ ２期 Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｎａ ｒ ｌ ｏ ｆ Ａ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｔ ｉ ｃ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｊ ｕ ｎ ． ２ ０ １ ３ ． Ｖ ｏ １ ． ２ ２ ． Ｎ ｏ ． １ ２
脂肪来源干细胞用于乳房整形手术的研究进展
的基 质 血管 组分 （ Ｓ Ｖ Ｆ ） 从吸 脂 术得 到 的脂 肪 中提
定， 排 除 了混 杂 有 间 充质 干 细 胞 的可 能 ， 证 实 了脂 肪 干细胞 的存 在 。体外 和体 内实验证 明人 类脂 肪来 源 干 细 胞 可 以分 化 成脂 肪 细 胞 ［ ４ ］ 、 成 骨 细胞 ［ ５ － ９ ］ 、 软 骨细胞ｎ ｏ ＿ 、 肌 肉细 胞 ［ １ ３ ． 、 心肌 细 胞 ［ １ ５ － １ ６ ］ 和 神经 细
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09级生科一班 青美芳 孙倩
脂肪干细胞定向分化及临床应用
• 概述 • 脂肪干细胞的定义
• 脂肪干细胞的分离、培养与鉴定
• 脂肪干细胞成脂及成骨分化的影响因素 • 同时影响成脂和成骨分化的因素 • 脂肪干细胞的临床应用
概述
随着城市化进程加速，肥胖在我国尤其是大城市
发病率增长迅速。肥胖是由于长期的能量摄入超 过能量消耗引起的脂肪组织过剩的疾病。在成人 阶段脂肪细胞数量保持恒定是一种细胞死亡与补 充更新的动态平衡过程。然而相关研究提示，成
Thank you！
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2.分化诱导因子
• • 表皮生长因子 成纤维因子
•
3.其他（拉伸应变 、 透明质酸 、
氧浓度、钙离子）
同时影响成脂和成骨分化的因素
干细胞巢（ stem cell niche）
干细胞巢即干细胞周围的微环境构成，一般包括干细胞的 相邻细胞、粘附分子及基质等。干细巢为干细胞提供了一 个隐蔽的场所，直到有分化号的刺激它才脱离静止的状态。 因此干细胞巢在维持干细胞的静止和抑制分化方面发挥着 重要作用。
将分离的脂肪组织在磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline PBS）中充分清洗，以去除毛发 和油滴等；然后将脂肪组织用眼科剪剪碎，加入 胶原酶在37℃水浴摇床消化30min, 用含有 10%FBS的 DMEM/F-12培养基终止消化，细胞 筛过滤后，800rpm/min 预离心，上清液2400 rpm/min离心得到的沉淀即为SVF，其中含有 ADSCs，用含有10%FBS的 DMEM/F-12培养基 重悬细胞沉淀，将单细胞悬液种植到培养瓶或培 养板中，37℃，5% CO2孵箱孵育。
鉴定：Rodeheffer等把CD31(-) CD45(-)
Ter119(-) CD29(+) Sca1(+) CD24(+) 的细胞 作为ADSCs的分选指标（图二）。 流式细胞仪检测和免疫组化染色可以对 ADSCs的确认有辅助作用，但是ADSCs的鉴 定主要还是在确认其多向分化能力方面。通 过多向诱导并且检测确定诱导成功是鉴定 ADSCs的金标准。
脂肪干细胞的临床应用
1.在组织工程方面, 由于其具有多向 分化潜能, 也同样得到重视, 因此是 组织工程理想的种子细胞，受到人 们的关注。 2.脂肪干细胞是脂肪移植合适的靶细 胞，脂肪组织工程有望在乳房再造 术、除皱术及凹陷畸形矫正术中发 挥作用。
3.ADSCs在体外增殖速度快, 不必进 行永生化处理就能获取足够的细胞 用于移植；自体移植, 可以避免排斥 反应等优点 4.ADSCs 体内成骨成软骨方面的实 验研究也是目前研究的热点之一。
脂肪干细胞成脂及成骨分化的影 响因素
• 成脂分化的影响因 • 成骨分化的影响因 素 素
1.供体因素
• • • • • • 种属来源 组织部位 年龄 性别 连续传代 冷冻保存
1.供体因素
• • 组织部位 年龄
• •
性别 冷冻保存
2.分化诱导因子
• 骨形成态蛋白 自体富含血小板血浆或富含生长 因子血浆
熟的脂肪细胞是一种终末分化的细胞，只有有限
的增殖和复制的能力。 以此推测，脂肪组织中存
在着干细胞群，发挥着更新脂肪细胞的作用并且
脂肪干细胞
定义：脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells, ADSCs）是一种存在于脂肪组织中的 间充质干细胞，在皮下白色脂肪组织中约 占细胞总量的10%-20%，具有一般干细胞 的特点，即自我更新和多向分化潜能；这 种细胞群易于分离，在特定条件下可分化 为骨、软骨、心肌等。
脂肪干细胞的分离、培养与鉴定
分离与培养 ：ADSCs最早是上世纪60 年代Rodbell 和Jones从脂肪组织中分 离出的。他们切碎鼠的脂肪垫，经过 充分冲洗以去除血细胞，然后用胶原 酶进行消化、离心，进而从基质血管 组分( stromal vascular fraction , SVF) 中分化出成熟的脂肪细胞。 一般而言，ADSCs的分离都是在分离 脂肪组织后随即进行。如图1所示
参考文献
• Katz AJ, Tholpady A, Tholpady SS, Shang H, Ogle RC. Cell surface and transcriptional characterization of human adipose-derived adherent stromal (hADAS) cells. Stem cells (Dayton, Ohio) 2005;23:412-23. • Rodeheffer MS, Birsoy K, Friedman JM. Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo. Cell 2008;135:240-9. • Zhu M, Kohan E, Bradley J, Hedrick M, Benhaim P, Zuk P. The effect of age on osteogenic, adipogenic and proliferative potential of female adipose-derived stem cells. Journal of tissue engineering and regenerative medicine 2009;3:290-301.