九种载体的多克隆位点及质粒图谱
———————————————————————————————— 作者：
———————————————————————————————— 日期：
九种载体的多克隆位点及质粒图谱
（ｐLLP-OｍpA、pLLP－ＳＴＩI、ｐＭBP-P、pMBP-C、ｐTrc－CKS、pＥT-ＧＳT、pEＴ－Trx、ｐET－His、ｐEＴ-DsｂA)
PＣＲ引物设计时BamＨI和EcｏRＩ位点的5端保护碱基有２至3个ＧC即可,而XｂaI、ＮheＩ和SpｅＩ位点5端保护碱基须在５个左右才容易被酶切割。
（一）ｐLLｐ-OmｐA
Siｚe: 7．５Kb
多克隆位点：
PｌpｐlacｏperatｏrRBＳ
ＣＧAGＧＣGCAAＡAＡATG AAAAＡＧACAＧCT AＴC GCG
EcoRINｈeI 6Hiｓ-tagHindＩII
BamHＩEcoRＩＮheＩ６His-ｓtop HｉnｄＩIＩ
PｌpｐlacopｅｒatｏrＲBS—ATＧ—OmpA siｇnal—MCＳ—
基因克隆表达功能区序列如下,经DNＡ双向测序验证ｃtｃacｔttatctaagaｔgaatccgaｔｇgaaｇｃaｔcｃtgttｔtctctcaaｔttttｔｔatctaaaacccagcgttｃｇatｇcｔｔcｔtｔｇａgcgaaｃｇatcaaaaaｔaagtgccttcccatcａaaaaaａｔattcｔcaacaｔａaaａaａctttgtgｔaａtacttｇtａacｇctacａtgｇagaｔtaａctｃaatcｔaｇctagagaggｃtｔtａcactｔtatｇｃｔtcｃggctｃgtaｔaａtgtgｔggaattｇtgagcgｇataａｃaatttcacacaggａaacagctaｔgaｃcａtgattａcggaｔtcａctgｇａactctａｇatａａcｇaggｃgcaaaａaaｔgaaaaagａｃagctaｔcgcgattｇcａgtｇｇｃａctggｃａgｇtｔtcgctacｃgtｃgｃtcaggcｔggatcｃgcagａattｃagcgｃtagcｃacｃatcａｔcatcａｔcattａagcｔtagatcｃgｇctgagcａacgacgｔgaａcgｃaａtｇcgtｔccgacgttcaggｃｔgcｔａaaｇａtgacｇcagｃtｃgtgｃtａaccａgｃgtcｔｇgacaacaｔgｇctactaaaｔaccgcaａgtａatagｔａcctgtｇaａgｔgaaaａaｔｇgcgcａcatｔgｔgcgacatｔｔtｔtttｇtｃｔｇccgtttａcｃgctactｇcgtcacgcgtａａcatatｔｃccttｇctctgｇtｔcaccattｃtｇcgctgａctcｔaｃｔgaaggｃgcaｔｔgｃｔggcｔgcｇggaｇttｇｃtｃcactgｃtｃaccgaaaccggａtaccctgcｃｃgacgaｔacａacｇctttatcgaｃta
STIIsｉgnal
CTG GＣＡＴＣＴAＴG TＴTＧTT TTC TＣT AＴC GCTＡCCAＡC GCT TＡCGＣＴＧＧＡTCC
Leu Ala Sｅr MetPｈeＶal Pｈe Ser Ile Aｌa Thr AｓnAla TyrAｌa BａmmHＩ
GＣＡGAA TTＣAGCGＣT AＧCCACCAT CＡT CATCAＴＣATTAA GCTT
这九种载体的多克隆位点均为
GGAＴCCGＣAGAA TＴCＡGＣＧＣTＡGCCAC（TＡA) CAT CＡT
BａｍHIEcoRIＮｈｅIHiｓHis His
CＡＴCＡTCAT TAAGCTT
HｉsＨisＨisＨindＩIＩ
我们建议您扩增基因5端选BamHI或BglII，３端选NheI或ＸbａＩ或SpeI,同时3端不要带终止密码子,注意与ＧＧA TＣＣ（Gly Sｅr)表达框架正确,载体用NheI—BamHＩ双酶切。ＢaｍＨＩ和BｇlＩI为同裂酶，NheI、XbaI和SpｅI为同裂酶。
载体其它部分序列见GeｎｅbanｋＬoｃｕs ASAK３１21（ｐlａsmidpIN-III-ompＡ1)
（二）pLＬp-ＳTII
Ｓize：7.5kb
多克隆住点：
PｌｐplacｏperatoｒRBS
GAＡＧGAＧATＡTACＡT ATGＡAA AＡGＡACＡTC GCA TTC CTC
Ｍet LyｓLｙｓAsn IleAlaPｈe Leu
Met LysLys ThrAlaＩleAｌa
OｍpA signal
ATＴGＣA GTG GCＡCTGＧＣA GGTTTＣGCT ACC GTCＧCTCAＧGＣTＧGATＣＣGCA
IleAla VａlAlaＬeuAlａGｌyＰheＡlaＴｈr ValＡｌaGln Ala BamHI
GＡA TTCＡGCＧCT AGCCAＣCATＣAT CAT CAT CAT TＡAGCＴT
如您目的基因无法满足上述要求,如同时含有ＢamＨI和BgｌＩＩ，5端可选择EcoRI,但须注意与表达框架GAAＴTC（ＧluＰhe)对齐。如您目的基因同时含有XbａI、ＮheI和SpeＩ,3端可选择EcoRI。
如果您的目的基因已带有终止密码子，同样可以进行克隆表达,只是注意有些表达载体是在C端带6个His。
NｈｅI6His－ｔagHｉｎdＩＩI
BａmHIＥｃoRI NheＩ6Hiｓ-stopＨiｎdIII
PlpｐlaｃoperａtorＡTＧ—SＴII siｇnａl pｅptide—MCS—
ﻩ
基因克隆表达功能区序列如下,经DNＡ双向测序验证
ctcactttａtctaagatｇaａｔccｇａｔggａａgcatcctｇttttctctｃaatttttttatcｔaaaacccagｃgttｃｇaｔgcｔtctttgａgcｇaacgatｃaaaaaｔaagtgcｃttｃｃcatｃaaaaaaatattｃtｃaａcataａaaａａctttgtgtaatａcｔtｇtaacgｃtａcａtｇgagａtｔaａｃtcaaｔctagcｔaｇagaggctttacaｃttｔａtgcttccggctｃgtaｔａaｔｇtgtｇｇaａttgｔgaｇｃggataacaattｔcacａｃaｇｇaaａｃagｃｔａtｇaccatgatｔacggattcａctggａacｔctagaaataaｔtｔｔｇｔtｔaａcttｔaagａaggaｇataｔａcataｔｇａａａaagaacatcgcattcｃｔcｃtggcatctａtgtｔtgttｔｔctｃtａtcgcｔaｃcａaｃgｃｔtacgctggａtｃcgcagaattｃagcgctaｇccａｃｃａtcａtcatcaｔcａtｔaagcttａgatcｃggctgagcaaｃｇａcgtgaacgcaaｔgｃgｔtcｃｇacｇｔｔｃaｇｇctgｃtaaagatgａcgcagｃtcgtgctａａcｃａgｃgtctggaｃaａcatggctactaaataccgcaagtaatagtacctｇtgaagtｇaaaaatgｇｃgcacaห้องสมุดไป่ตู้tgｔgcgaｃattttttｔtｇtctgｃcｇtttacｃgctactgｃｇtcaｃgcgtaacatattccctｔｇctctggttｃaccaｔｔctｇｃｇctgaｃtｃtaｃtgaagｇcgcattgctggctgcgｇｇaｇttgctｃcactgｃｔcａccgａaaccgｇataccctgcccgacｇaｔａcａacgｃttｔａtcgａcta
质粒图谱大全
〔转载〕Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbApTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKitsTEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3PTYB1PTYB2PTYB11PTYB12pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZαApBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
基因工程载体(质粒)(三)
从不同位点整合到寄主菌染色体上，这种细胞称为Hfr细胞
(高频重组细胞)。
F因子是雄性决定因子，F+ 细胞表面可以形成 一种叫做性须（pilus）的结果，它促使F+ 经 性须进入F- 细胞。F- 细胞则变为F+ 细胞。F因 子可以通过接合作用自我转移，也能够带动寄 主染色体一道转移。但F因子的这种整合过程 是可逆的。在一定条件下，Hfr细胞又可重新 变为F+或F-细胞。 基因工程多选用非接合型质粒，主要安全角度 考虑
常用的是抗生素抗性基因的选择标记。主要有： 四环素（Ter），氨苄青霉素（Amp），氯霉 素（Cm），卡那霉素（Km）。新霉素（Neo） 等。如质粒对氨苄青霉素有抗生时，则写成 AmPr，反之则写成AmPs，。带有抗药性质粒 称为R质粒。一个质粒载体通常有二种抗生素 抗性基因
新的质粒还带有下列标记基因，使于筛选重 组体： ①HA ②Luaferase ③GFP ④便于检测的多肽
非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一 种接合型质粒，那么它们通常也是可以 被转移的。这种由共存的接合型质粒引 发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒 的迁移作用（mobiligation）又叫质粒 的诱动。
带有大肠杆菌素基因的Col质粒和带有抗菌素抗性基因的R 质粒既有属于接合型的，也有属于非接合型的。 如果在非接合型质粒的寄主细胞中同时存在一种接合 型质粒，那么它们通常也是可以被转移的。这种由共存的 接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程，叫质粒的迁 移作用(mobilization)又叫质粒的诱动。ColE1 是一种可以
钝化了一个抗性基因，保留了另一个抗性基因。插入失活型载体，就是将 外源DNA片段插入到会导致选择性基因(Ampr，Tetr等)失活的位点。如
PTG19-T载体
PTG19-T载体的制备
前 言
我们公司针对克隆载体，开发出了五种 新型实用的载体，其中T克隆载体就有 四种。PTG19-T载体是其中一种，该载 体为高效克隆PCR产物的专用载体， Amp抗性，是一种新颖的pUC系列T载 体，由PTZ19R载体改造而成。
pTG19-T 载体多克隆位点结构
实验得知：柱使用1-2次，Buffer QC PH7.8；柱 使用3-7次， Buffer QC PH7.7对PTG19-T载体的 回收能达到60%。
实例：
取3k+100bp（各约2.5ug）DNA片段进行tip20柱回收实验
柱使用次数
PH7.8 PH7.7
1次
A
4次
B
5次
C D
6次
E
6次
F
7次
G
· PTG19-T载体的连接转化实验
· 700bp和1.5kb DNA片段连接转化及自连转化
连接体系：15uL 载体与目的片段的摩尔比为1：3 自连体系中载体为180ng
PTG19-T Vector 10×T4 Buffer T4 DNA Ligase DNA片段 补水至15uL 60ng 1.5uL 2uL 2uL
实验结果：
700bp平板中：白斑2000个 左右、蓝斑9个 1.5kb平板中：白斑1000个 左右、蓝斑13个 自连平板中：蓝斑40个
平板展示！
· PTG19-T载体的连接转化实验
· 连接时间长短对PTG19-T载体连接转化的影响
四个连接时间梯度，分别为 10min，20min，30min，60min
主要内容
· G364-3，G364-4质粒的大量制备
· Xcm Ⅰ酶切
pPICZαA质粒图谱
pPICZaa载体基本信息出品公司: InvitrogenpPICZalpha A, pPICZαA, pPICZalphaA, pPICZαA, pPICZaA, 载体名称:pPICZa-A质粒类型: 毕赤酵母蛋白表达载体表达水平: 高拷贝启动子: AOX1克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 3593 bp5' 测序引物及序列: 5´AOX1:5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´3' 测序引物及序列: 3´AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´载体标签: C-Myc, C-His载体抗性: Zeocin 博来霉素筛选标记: HIS4备注: 插入基因是必需包含起始密码子ATG。
产品目录号: V195-20稳定性: 稳定Stable组成型: 组成型Constitutive病毒/非病毒: 非病毒pPICZaa载体质粒图谱和多克隆位点信息pPICZaa载体简介pPICZαA，B和C是3.6 kb的毕赤酵母蛋白分泌表达载体。
表达的重组蛋白是融合蛋白，含有一个N-端多肽，编码酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）α-因子分泌信号。
载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白，并且可以用在任何毕赤酵母中，包括X33，GS115菌株，SMD1168H，KM71H。
pPICZαA，B和C系列载体包含以下元素：•5'端含有AOX1启动子的严格调控，利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因（Ellis等，1985; Koutz 等人，1989;tschopp等人，1987A）。
•α-因子分泌信号能够分泌性表达目的蛋白。
•Zeocin抗性基因在大肠杆菌(Escherichia coli)和毕赤酵母都能用于筛选（Baron等人,1992; Drocourt等人，1990）。
质粒大全及质粒图谱
一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19R DNApUC57 DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescript II KS (+)L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Dsb Fusion Systems 39b and 40b Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression System 33bProtein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression SystemsProtein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Expression Systems plus Competent CellsProtein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET GST Fusion Systems 41 and 42 Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET NusA Fusion Systems 43.1 and 44Protein Expression ? Prokaryotic Expression ? pET Vector DNAProtein Purification ? Purification Systems ? Strep?Tactin Resins and Purification Kits四.PGEX系列表达载体T EcoR?pGEX-1 I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYB systemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1(+)pPICZ alpha ApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
质粒图谱
)质粒图谱登记号：00012)质粒名称：pIRES3)来源：BD Co4)用途：真核双表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00022)质粒名称：pECFP-C13)来源：BD Co4)用途：检测真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00032)质粒名称：pShuttle3)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：2)pShuttle MCS很多人用pEGFP-C1，我也来发一个)质粒图谱登记号：00042)质粒名称：pSBR322、pUC183)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：1)质粒图谱登记号：00052)质粒名称：pcDNA3.1(+)/CAT3)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：无偿7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00062)质粒名称：pQEx3)来源：Qiagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM2)1)质粒图谱登记号：00072)质粒名称：pIVEX2.33)来源：Rocho4)用途：体外转录翻译5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM质粒图谱登记号：0008质粒名称：pIRES-EGFP来源：用途：是否可以提供更详细资料：是否可以共享：否联系方式：1)质粒图谱登记号：00092)质粒名称：pET-28a（+）3)来源：Novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00112)质粒名称：pET-32a(+)3)来源：novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pcDNA3.1/Zeo (+)3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pEGFP-N33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00142)质粒名称：pcDNA33)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00152)质粒名称：pfastbac13)来源：invitrogene4)用途：昆虫表达5)是否可以提供更详细资料：不可以6)是否可以共享：不可以7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00162)质粒名称：pEGFP-C33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PMwangjun2002274 edited on 2004-06-22 00:041)质粒图谱登记号：00172)质粒名称：pSecTag23)来源：Invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)1质粒图谱登记号：00192)质粒名称：pET20b3)来源：NOVAGEN4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00222)质粒名称：pThioHisA3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：4.365kb , HP-thioredoxin fusion proteinexpressionvector, trc promoter, Ampr, a EK cleavage site lies between HP-thioredoxin and MCS宿主菌TOP10（基因型为：F-mcrA △（mrr-hsd RMS-mcrBC）Ф80 lacZ M15 △lacX74 deoR recAl araD139 △（ara-leu）7697 galU galK rpsL endAl nupG6)是否可以共享：交换或其它7)联系方式：PM2)3)1)质粒图谱登记号：00242)质粒名称：pcDNA3.1-Myc-His-A-3)来源：invitrogen4)用途：真核核表达4))质粒图谱登记号：00252)质粒名称：pSUPER.neo3)来源：4)用途：siRNA5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00312)质粒名称：pSilencer1.0-siRNA3)来源：Ambion4)用途：RNAi5)是否可以提供更详细资料：/techlib/Documents.html?fkResSxn=7&fkSub Sxn=236)是否可以共享：实验结束后，可提供含shRNA模板的质粒7)联系方式：pm5) )质粒图谱登记号：00322)质粒名称：pSilencer2.0-U6siRNA 3)来源：Ambion4)用途：RNAi ，与1.0相比，可以建立稳转株5)更详细资料：/techlib/prot/fm_7209.pdf 6)是否可以共享：交换 7)联系方式：pm6)会员名：mlluoE-mail：*************可提供试验资源名称和简要介绍：pSilencer 3.1-H1 neo Vector，是Ambion公司目前最高版本的shRNA 载体，为扩增此载体我已插入目的片段，如有战友需要，将此片段双酶切再连上自己的片段即可。
质粒图谱大全
（转载）一. 九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二. 克隆载体pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescriptIIKS( )L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET 系列表达载体ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETDsbFusionSystems39band40b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystem33b ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystems ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETExpressionSystemsplusCompetentCells ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETGSTFusionSystems41and42 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETNusAFusionSystems43.1and44 ProteinExpression?ProkaryoticExpression?pETVectorDNAProteinPurification?PurificationSystems?Strep?TactinResinsandPurificationKits四.PGEX 系列表达载体TEcoR?pGEX-1I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYBsystemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六. 真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1( )pPICZalphaApGAPZα APYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
常用pGEX载体图谱
Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因...pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导便可表达之五兆芳芳创作Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp 都强.其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个分解的46 bp DNA片段(包含Pribnow盒)和Lac把持基因组成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac把持子中的把持基因部分和SD序列融合而成蛋白标签：A myc tag is a polypeptide protein tag derived fromthe c-myc gene product that can be added to a proteinusing recombinant DNA technology. It can be used for affinity chromatography, then used to separate recombinant, overexpressed protein from wild type protein expressed by the host organism. It can also be used in the isolation of protein complexes with multiple subunits.A myc tag can be used in many different assays that require recognition by an antibody. If there is no antibody against the studied protein, adding a myc-tag allows one to follow the protein with an antibody against the Myc epitope. Examples are cellularlocalization studies by immunofluorescence or detectionby Western blotting.The peptide sequence of the myc-tag is (in 1- and 3-letter codes, respectively): N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C, where N stands for Amino-terminus and C stands for Carboxy terminus. The tag is approximately 1202 Daltons in atomic mass and has 10 amino acids.It can be fused to the C-terminus and the N-terminus of a protein. It is advisable not to fuse the tag directly behind the signal peptide of a secretory protein, since it can interfere with translocation into the secretory pathway.A monoclonal antibody against the myc epitope, named 9E10, is available from the non-commercial Developmental Studies Hybridoma BankpGEX4T1载体根本信息出品公司:GE别号:pGEX-4T-1, pGEX4T1, pGEX 4T 1质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4969 bp5' 测序引物及序列:pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGT G3' 测序引物及序列:pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin 氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4580-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功效的碱基序列.大肠杆菌的复制起点包含OriC和OriHThrombin 凝血酶pGEX4T1载体简介pGEX4T1载体序列LOCUS pGEX-4T-1 4969 bp DNA circular SYNDEFINITION pGEX-4T-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.COMMENT This file is created by Vector NTI COMMENT VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4969/organism="pGEX-4T-1"/mol_type="other DNA" promoter 184..212/label="tac_promoter"misc_feature 224..246/label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..977/label="GST (variant)"/gene="GST (variant)"CDS 258..977/label="ORF frame 3"misc_feature complement(1019..1041)/label="pGEX_3_primer" promoter 1307..1335/label="AmpR_promoter" gene 1377..2237/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS 1377..2237/label="ORF frame 3" rep_origin 2392..3011/label="pBR322_origin" misc_feature 3309..4400/label="lacI"CDS 3441..4400/label="ORF frame 3" promoter 4449..4478/label="lac_promoter"misc_feature 4492..4514/label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4513..4531/label="M13_reverse_primer"CDS 4523..81/label="ORF frame 2"misc_feature 4540..4695/label="lacZ_a"promoter complement(4543..4559)/label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4552..4574)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX4T2载体根本信息出品公司:GE别号:pGEX-4T-2, pGEX4T2, pGEX 4T 2质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4970 bp5' 测序引物及序列:pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGT G3' 测序引物及序列:pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin 氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4581-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX4T2载体简介pGEX4T2载体序列LOCUS pGEX-4T-2 4970 bp DNA circular SYNDEFINITION pGEX-4T-2ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI COMMENT VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifierssource 1..4970/organism="pGEX-4T-2"/mol_type="other DNA" promoter 184..212/label="tac_promoter"misc_feature 224..246/label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..978/label="GST (variant)"/gene="GST (variant)"CDS 258..974/label="ORF frame 3"misc_feature complement(1020..1042)/label="pGEX_3_primer" promoter 1308..1336/label="AmpR_promoter"gene 1378..2238/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS 1378..2238/label="ORF frame 1"rep_origin 2393..3012/label="pBR322_origin"misc_feature 3310..4401/label="lacI"CDS 3442..4401/label="ORF frame 1" promoter 4450..4479/label="lac_promoter"misc_feature 4493..4515/label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4514..4532/label="M13_reverse_primer"CDS 4524..81/label="ORF frame 3"misc_feature 4541..4696/label="lacZ_a"promoter complement(4544..4560)/label="M13_forward20_primer"misc_feature complement(4553..4575)/label="M13_pUC_fwd_primer" pGEX4T3载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX4T3载体简介pGEX4T3载体序列LOCUS pGEX-4T-3 4968 bp DNA circular SYNDEFINITION pGEX-4T-3ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI COMMENT VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifierssource 1..4968/organism="pGEX-4T-3"/mol_type="other DNA"promoter 184..212/label="tac_promoter"misc_feature 224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene 258..976/label="GST (variant)"/gene="GST (variant)"CDS 258..980/label="ORF frame 3" misc_feature complement(1018..1040)/label="pGEX_3_primer" promoter 1306..1334/label="AmpR_promoter" gene 1376..2236/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS 1376..2236/label="ORF frame 2" rep_origin 2391..3010/label="pBR322_origin" misc_feature 3308..4399/label="lacI"CDS 3440..4399/label="ORF frame 2" promoter 4448..4477/label="lac_promoter"misc_feature 4491..4513/label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4512..4530/label="M13_reverse_primer"CDS 4522..81/label="ORF frame 1"misc_feature 4539..4694/label="lacZ_a"promoter complement(4542..4558)/label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4551..4573)/label="M13_pUC_fwd_primer" pGEX6P1载体根本信息出品公司:GE别号:pGEX-6P-1, pGEX6P1, pGEX 6P 1质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4984 bp5' 测序引物及序列:pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3' 测序引物及序列:pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin 氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4597-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX6P1载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX6P1载体简介pGEX6P1载体序列LOCUS pGEX-6P-1 4984 bp DNA circular SYNDEFINITION pGEX-6P-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.COMMENT This file is created by Vector NTI COMMENT VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4984/organism="pGEX-6P-1"/mol_type="other DNA" promoter 184..212/label="tac_promoter"misc_feature 224..246/label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..992/label="GST"/gene="GST"CDS 258..992/label="ORF frame 3"misc_feature 918..938/label="precision"misc_feature complement(1034..1056)/label="pGEX_3_primer" promoter 1322..1350/label="AmpR_promoter" gene 1392..2252/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS 1392..2252/label="ORF frame 3" rep_origin 2407..3026/label="pBR322_origin" misc_feature 3324..4415/label="lacI"CDS 3456..4415/label="ORF frame 3"promoter 4464..4493/label="lac_promoter"misc_feature 4507..4529/label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4528..4546/label="M13_reverse_primer"CDS 4538..81/label="ORF frame 2"misc_feature 4555..4710/label="lacZ_a"promoter complement(4558..4574)/label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4567..4589)/label="M13_pUC_fwd_primer"pET28a载体根本信息出品公司:EMD Biosciences (Novagen)别号:pET28a, pet 28a, pET-28a(+)质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5369 bp5' 测序引物及序列:T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物序列: T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:N-His, N-Thrombin, N-T7, C-His载体抗性:卡那备注:N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c的差别仅仅存在于多克隆位点处.产品目录号:69864-3稳定性:瞬时表达Transient组成型:组成型Constitutive病毒/非病毒:非病毒pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息pET28a载体简介pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签.pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱.注意：载体序列是以pBR322质粒的编码端方进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的.T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来.质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译.pET30a载体根本信息出品公司:EMD Biosciences (Novagen)别号:pET30a, pet 30a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5422 bp5' 测序引物及序列:T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3' 测序引物序列: T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:N-His, N-S, N-Thrombin, N-EK, C-His载体抗性:卡那备注:pET30a, b, c的差别只存在于多克隆位点，其他位点不存在.产品目录号:69909-3稳定性:瞬时表达组成型:组成型病毒/非病毒:非病毒pET30a载体质粒图谱和多克隆位点信息pET30a载体简介pET-30a(+)载体携带有一个N端的His标签/Thrombin酶切位点/ S标签/ EK蛋白酶切标签以及一个可选择的C端His标签.载体的多克隆位点见上面的图谱.需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制标的目的为正标的目的，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置.T7 RNA 聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来.质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译.pet32a载体根本信息出品公司:EMD Biosciences(Novagen)别号:pET32a, pet 32a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5900bp5' 测序引物:T7：5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物: T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:thioredoxin (N端); His (中间和C端)载体抗性:氨苄备注:pET32a载体用于表达可溶性，具有活性功效的蛋白;pET-32a(+)载体具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位点，N端肠激酶酶切位点.pET32啊，pET32b，pET32c载体的差别主要是在于多克隆位点，其他地方完全一致.产品货号:69015-3稳定性:瞬时表达组成型:组成型病毒/非病毒:非病毒pet32a载体质粒图谱和多克隆位点信息pet32a载体简介pET32系列载体是设计用来克隆构建和高水平融合表达表达带有109个氨基酸Trx标签的蛋白质序列.将基因拔出到载体的多克隆位点，能够取得融合表达蛋白质.同时融合蛋白包含有His标签和S标签，这些可以用于蛋白表达检测和纯化进程.载体的多克隆位点见上面的图谱.需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制标的目的为正标的目的，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置.T7 RNA 聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来.质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译.pET23a载体根本信息出品公司:EMD Biosciences(Novagen)别号:pET23a, pet 23a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:3666bp5' 测序引物:T75' 测序引物序列: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'载体标签:N-T7, C-His载体抗性:Ampicillin克隆菌株:DH5a表达菌株:BL21系列备注:Same as pET21abcd(+) but no lac; a,b,c,d vary by MCS.产品目录号: 69745-3稳定性:稳表达组成型:组成型病毒/非病毒:非病毒pET23a载体质粒图谱和多克隆位点信息pET23a载体简介The pET-23a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-21a-d(+) by the “plain” T7 promoter instead of the T7lac promoter and by the absence of the lacI gene. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequenceis numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore,single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer (Cat. No. 69337-3).pGEXKG载体根本信息出品公司:ATCC别号:pGEX-KG, pGEXKG, pGEX KG质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆办法:多克隆位点，限制性内切酶, BamHI，SmaI, EcoRI, XbaI, NcoI, SalI, XhoI, SacI, HindIII载体大小:5006 bp5' 测序引物及序列:pGEX5': GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3' 测序引物及序列:pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin 氨苄备注:复制子是pMB1, 来源于pGEX-2T产品目录号:77103稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEXKG载体质粒图谱和多克隆位点信息pMAL-C2X 表达载体使用直链淀粉树脂（amylose resin）别离融合蛋白。
常用克隆载体
PAC ( P1-derived artificial chromosome, 插入片 段可达300kb)
本图所表数字是 以 EcoR I 位点中央计为0， 从顺时针方向计算，至各 酶切位点的 第一个碱基的 数。在圆的内 部所表示的 各限制酶是在 pBR322 DNA上只有一个酶 切位 点的酶，圆外所表示的各 酶是在pBR322 DNA上 有2个至3个的酶切位点的 酶，（）内的数是酶切位 点数
质粒载体pUC19
缺点：插入M13的外源DNA超过1000bp时就不稳定，在 噬菌体增殖时会出现缺失。
噬菌粒载体
由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型载体系列， 称为噬菌粒（phagemid）。
噬菌粒（phagemid）是带有丝状噬菌体复制起始点的 质粒。
pUC118/pUC119噬菌粒载体; pBluescript噬菌粒载体（最常用，M13载体在多克隆 位点的两侧引入了T7和T3两个噬菌体的启动子。）
常用的粘粒载体
用于在细菌中增殖真核DNA的粘粒载体 pJB8, c2RB, pcos1EMBL 用于转染哺乳动物细胞的粘粒载体 cos202/203，pWE15/16
粘粒的主要特征
（1）由质粒与组成的一种4-6kb的环状杂种DNA， 容易分离并可分离操作。既能像质粒一样在细菌 中繁殖，又能像一样在体外包装，并高效导入受 体细胞。
基因工程常用的克隆载体
克隆载体
目的基因进入细胞必须要有载体（vector） 的运载作用才能实现。
载体运载外源DNA至宿主细胞，是通过 载体自身DNA的核酸序列中插入了外源 DNA，再进入宿主细胞内进行的DNA复制， 在载体DNA复制时，外源DNA分子也获得 了复制（扩增）和表达。
质粒图谱——精选推荐
1)质粒图谱登记号：00012)质粒名称：pIRES3)来源：BD Co4)用途：真核双表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00022)质粒名称：pECFP-C13)来源：BD Co4)用途：检测真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00032)质粒名称：pShuttle3)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：2)pShuttle MCS很多人用pEGFP-C1，我也来发一个)质粒图谱登记号：00042)质粒名称：pS BR322、pUC183)来源：4)用途：5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：1)质粒图谱登记号：00052)质粒名称：pcDNA3.1(+)/CAT3)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：无偿7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00062)质粒名称：pQEx3)来源：Qiagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM2)1)质粒图谱登记号：00072)质粒名称：pIVEX2.33)来源：Rocho4)用途：体外转录翻译5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM质粒图谱登记号：0008质粒名称：pIRES-EGFP来源：用途：是否可以提供更详细资料：是否可以共享：否联系方式：1)质粒图谱登记号：00092)质粒名称：pET-28a（+）3)来源：Novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00112)质粒名称：pET-32a(+)3)来源：novagen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：6)是否可以共享：7)联系方式：pm1)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pcDNA3.1/Zeo (+)3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00132)质粒名称：pEGFP-N33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00142)质粒名称：pcDNA33)来源：invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00152)质粒名称：pfastbac13)来源：invitrogene4)用途：昆虫表达5)是否可以提供更详细资料：不可以6)是否可以共享：不可以7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00162)质粒名称：pEGFP-C33)来源：clontech4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PMwangjun2002274 edited on 2004-06-22 00:041)质粒图谱登记号：00172)质粒名称：pSecTag23)来源：Invitrogen4)用途：真核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)1质粒图谱登记号：00192)质粒名称：pET20b3)来源：NOVAGEN4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM1)质粒图谱登记号：00222)质粒名称：pThioHisA3)来源：invitrogen4)用途：原核表达5)是否可以提供更详细资料：4.365kb , HP-thioredoxin fusion proteinexpressionvector, trc promoter, Ampr, a EK cleavage site lies between HP-thioredoxin and MCS宿主菌TOP10（基因型为：F-mcrA △（mrr-hsd RMS-mcrBC）Ф80 lacZ M15 △lacX74 deoR recAl araD139 △（ara-leu）7697 galU galK rpsL endAl nupG6)是否可以共享：交换或其它7)联系方式：PM2)3)1)质粒图谱登记号：00242)质粒名称：pcDNA3.1-Myc-His-A-3)来源：invitrogen4)用途：真核核表达4))质粒图谱登记号：00252)质粒名称：pS UPER.neo3)来源：4)用途：siRNA5)是否可以提供更详细资料：可以6)是否可以共享：交换7)联系方式：PM)质粒图谱登记号：00312)质粒名称：pSilencer1.0-siRNA3)来源：Ambion4)用途：RNAi5)是否可以提供更详细资料：/techlib/Documents.html?fkResSxn=7&fkSub Sxn=236)是否可以共享：实验结束后，可提供含shRNA模板的质粒7)联系方式：pm5))质粒图谱登记号：00322)质粒名称：pSilencer2.0-U6siRNA3)来源：Ambion4)用途：RNAi，与1.0相比，可以建立稳转株5)更详细资料：/techlib/prot/fm_7209.pdf6)是否可以共享：交换7)联系方式：pm6)会员名：mlluoE-mail：*************可提供试验资源名称和简要介绍：pSilencer 3.1-H1 neo Vector，是Ambion公司目前最高版本的shRNA 载体，为扩增此载体我已插入目的片段，如有战友需要，将此片段双酶切再连上自己的片段即可。