大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察
大豆磷脂微生物限度检查法验证(DOC)
验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号目录1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -1适用范围本验证方案适用于大豆磷脂微生物限度检查法的验证。
乙醇冷冻法纯化分离大豆磷脂酰胆碱研究
time，freezing temperature，solid–liquid ratio and alcohol concentration. The results indicated that the optimal conditions for ethanol freeze–purify were：freezing time 6 h，freezing temperature –12℃， solid–liquid ratio 1∶8 and alcohol concentration 97.5%. Moreover，a proof test w脂技术有限公司，其理化 指标见表 1。
表 1 大豆粉末磷脂理化指标
酸价（mgKOH/g）
18
水分及可挥发物（%）
1.7
丙酮不溶物（%）
96.7
乙醚不溶物（%）
0.01
过氧化值（mmol/kg）
1.1
PC 含量（%）
22.8
1.2 试剂与仪器装置 1.2.1 试剂
磷脂酰胆碱标样：Sigma 公司；正己烷（色谱纯）， 异丙醇（色谱纯），95%乙醇，无水乙醇，氯仿，甲醇，丙 酮，乙醚，碘化钾，氢氧化钾，硫代硫酸钠，韦氏试剂及 常用指示剂：除说明外均为分析纯。 1.2.2 仪器装置
液比为 1 ∶ 6。
2.3.2 冷冻时间对纯化影响
按 1.3.4（2）方法，选用乙醇浓度为 95%，料液比
为 1 ∶ 8，冷冻温度 –17℃，分别选择冷冻时间 3 h、6 h、
12 h、24 h 进行实验，实验结果见图 4。
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大豆磷脂微生物限度检查法验证(DOC)
验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号目录1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -1适用范围本验证方案适用于大豆磷脂微生物限度检查法的验证。
大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的测定
大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的测定
按照大豆磷脂《2020版中国药典》的方法，建立大豆磷脂中磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的
测定方法。
一、样品配制
取磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱对照品各适量，用三氯甲烷/乙醇=2/1溶解，制成每Im1.含上述对照品分别
50ug.IOOug.100ug>200ug.200ug>200ug的混合溶液
二、分析条件
色谱柱：Kromasi1.100-5-SI1.ICA(4.6*25Omm,5μm,PN：M05SIA25)
流动相：
流动相A：甲醇/水/冰醋酸/三乙胺=85/15/0.45/0.05,V/V
流动相B：正己烷/异丙醇/流动相A=20∕48∕32,V/V
时间∕min A/%B∕%
01090
203070
35955
361090
411090
流速：1..0m1.∕min
进样量：20μ1.
柱温:40℃
检测器：蒸发光散射检测器(参考设置：漂移管温度72℃；载气流量2.0m1.∕min)
三、实验结果
标样图谱：
样品图谱:。
药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测
药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测药用大豆磷脂PC90小包装有微生物内毒素检测[8030-76-0]大豆磷脂系从大豆中提取精制而得的磷脂混合物。
按无水物计算，含氮（N）应为1.5%～2.0%，磷（P）不得少于2.7%，磷脂酰胆碱不得少于45.0%，磷脂酰乙醇胺不得过30.0%，磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺总量不得少于70%。
【性状】本品为黄色至棕色的半固体、块状体。
本品在或乙醇中易溶，在丙酮中不溶。
酸值本品的酸值（通则0713）应不大于30。
碘值本品的碘值（通则0713）应不小于75。
过氧化值本品的过氧化值（通则0713）应不大于3.0。
【鉴别】（1）取本品约10mg，加乙醇2ml，加5%氯化镉乙醇溶液1～2滴，即产生白色沉淀。
（2）取本品0.4g，加乙醇2ml，加硝酸铋钾溶液（取硝酸铋8g，加硝酸20ml使溶解；另取碘化钾27.2g，加水50ml使溶解，合并上述两种溶液，用水稀释至100ml）1～2滴，即产生砖红色沉淀。
【检查】溶液的颜色取本品适量，加乙醇制成每1ml中含6mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在350nm 的波特长测定吸光度，不得过0.8。
丙酮不溶物取本品1.0g，精密称定，加丙酮约15ml，搅拌使其溶解后，用G4垂熔玻璃坩埚滤过，残渣用丙酮洗涤，洗至丙酮几乎无色。
残渣在105℃干燥至恒重，不溶物不得少于90.0%。
己烷不溶物取本品10.0g，精密称定，加正己烷100ml，振摇使样品溶解，用在105℃干燥1小时的G4垂熔玻璃坩埚滤过，锥形瓶用正己烷25ml洗涤两次，洗液过滤后，G4垂熔玻璃坩埚于105℃干燥1小时，不溶物不得过0.3%。
残留溶剂取本品0.2g，精密称定，置20ml顶空瓶中，加水2ml，密封，作为供试品溶液；另取乙醇、丙酮石油醚与正己烷各适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含200μg、200μg、200μg、50μg、27μg的溶液，作为对比品溶液。
大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法国家标准编制说明
《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准编制说明１．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做工作等）根据2007年国家标准计划要求，开展《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准的制定，本标准由江南大学负责起草，编号20050652-T-449。
江南大学组成了《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》标准起草小组，主要起草人为王兴国、金青哲、宋志华等，负责本标准制定的各项工作。
本标准制定主要工作过程为：1）本国家标准参考AOCS Ja 7b-91，根据GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T 20000.2-2001《标准化工作指南第2部分：采用国际标准的规则》、GB/T 20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定进行本国家标准的编制工作,形成《大豆磷脂酰胆碱的检测方法高效液相色谱法》国家标准的征求意见稿。
2）征求国内若干具有代表性的科研院校和企业单位的意见，对返回的意见进行总结汇总和处理。
3）根据意见汇总和处理结果对本标准的征求意见稿进行修改，编制本标准的送审稿，同时对编制说明进行修改和补充。
报送全国粮油标准化技术委员会秘书处，由全国粮油标准化技术委员会秘书处组织全国范围内全体委员对本标准送审稿进行审查，并投票。
4）根据审查意见，对本标准送审稿作进一步的修改和完善，编制本标准报批稿。
上报国家标准技术审查机构，申请批准为国家标准。
２．国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家标准水平的对比2.1标准编制原则由于国内、外贸易及科学技术的进步，要求我国标准化工作与国际标准接轨。
本标准的制定不仅要适应我国加入WTO后市场的需要，同时也要适应我国市场经济和粮食流通体制改革的总体要求，满足我国油脂加工生产和科研的需要。
生化药物质量标准中的生物检定及其进展
生长激素
重法和胫骨法
重组人胰岛素 小鼠或家兔血糖法 HPLC
降钙素
大鼠血钙法
HPLC
低分子肝素 血浆凝固法或家兔 分光光度法 全血凝固法
ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 BP2007
在本实验室已用理化测定代替生物测定 两种方法间具有良好相关性（P﹤0.01）的品种
活性测定分类
活性测定---定量：质量标准中生物效价 测定（HCG、HMG、肝素）
---半定量 ---定性
活性测定------半定量
半定量------当理化测定占主导地位，生物效价 测定降为辅助作用，只用于活性检查，设定限 值，采用半定量方法，不需精确的生物统计， 尽可能减少实验动物用量
如治疗二型糖尿病新药重组人胰高血糖素类多 肽-1（7-36）质量标准中采用半定量方法（限 值为小鼠血糖降低应大于20%）进行活性检查
生化药名
生物测定方法
理化测定方法 收载标准
伟素
大鼠血脂清除率法 分光光度法
(Sulodexide)
重组绒促性素 幼小鼠子宫增重法 HPLC (rHCG)
重组卵泡刺激 幼大鼠卵巢增重法 HPLC 素(rFSH)
重组黄体生成 幼大鼠精囊增重法 HPLC 素(rLH)
企业标准 企业标准 企业标准 企业标准
BP2007版胰岛素采用HPLC法
ChP2005版二部，动物胰腺提取的胰岛素定量生物测定
中国药典2010年版二部生化药品专业科研项目
1、药品中氨基酸分析方法的研究（归纳分类）。（中检所负责） 2、蛋白质含量测定方法的规范化研究，增订附录。（上海所负
责） 3、人工肠液和胃液中所用酶试剂的标准化研究。（中检所和北
大豆磷脂检验操作规程
大豆磷脂检验操作规程1 目的：建立大豆磷脂检验操作规程。
2 适用范围：适用于大豆磷脂检验操作。
3 职责：检验人员对本规程的实施负责。
4 规程：4.1编制依据：《中国药典》2010年版二部P1183。
4.2 质量指标：见《大豆磷脂质量标准》。
4.3 仪器与用具：电子天平、水浴锅、PH计、紫外分光光度计、干燥箱。
4.4 试药与试液：乙醚、乙醇、丙酮、氯化镉、硝酸铋钾溶液、碘化钾、过氧化氢、钼酸铵硫酸试液、亚硫酸钠试液、对苯二酚、硫酸。
4.5 操作方法4.5.1.1 性状：本品为黄色至棕色的半固体或块状物。
本品在乙醚和乙醇中易溶，在丙酮中不溶。
4.5.1.2 酸值：本品的酸值应不大于30。
4.5.1.3 碘值：本品的碘值应不小于75。
4.5.1.4过氧化值：本品的过氧化值应不大于5。
4.5.2 鉴别4.5.2.1 化学反应：取本品约10mg，加乙醇溶液2ml 使溶解，加5%氯化镉乙醇溶液1-2滴，即产生白色沉淀。
4.5.2.2化学反应：取本品0.4g，加乙醇溶液2ml使溶解，加硝酸铋钾溶液（取硝酸铋8g，加硝酸20ml使溶解；另取碘化钾27.2g，加水50ml使溶解，合并上述两种溶液，加水稀释成100ml）1-2滴，即产生砖红色沉淀。
4.5.3.1 溶液的颜色：取本品，加乙醇制成每1ml中含6mg的溶液，照《紫外分光光度法检验操作规程》测定，在350nm的波长处测定吸收度，不得过0.8。
4.5.3.2 丙酮不溶物：取本品约1g，精密称定，加丙酮约15ml，充分搅拌后，用经105℃干燥1小时并称重的4号垂熔玻璃坩埚滤过，残渣用丙酮洗涤，至洗出的丙酮几乎无色。
残渣在105℃干燥至恒重，不溶物不得少于90.0%。
4.5.3.3 己烷中不溶物：取本品约10g，精密称定，加正己烷100ml，振摇使溶解，用经105℃干燥1小时并称重的4号垂熔玻璃坩埚滤过，容器用25ml正己烷洗涤两次，洗液滤过后，4号垂熔玻璃坩埚在105℃干燥1小是后，称重，不溶物不得过0.3%。
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大豆磷脂酰胆碱是大豆磷脂的主要活性成分，大豆 磷脂作为天然乳化剂、增溶剂、分散剂广泛应用于药物 注射剂中 犤１－２犦，故大豆磷脂酰胆碱也是一种用于注射剂 的药用辅料。注射剂直接注入人体，其细菌内毒素的含
量或限值有严格规定，所用辅料也必须符合相应规定。 ２０１５年版《中国药典》尚未将大豆磷脂酰胆碱作为药用 辅料收载，本研究中参照 ２０１５年版《中国药典（四部）》 通 则 １１４３犤３犦１５４－１５７“细 菌 内 毒 素 检 查 法 ”，全 面 考 察 了
犤２犦苏德模，马绪荣 ．药品微生物学检验技术犤Ｍ犦．北京：华龄出版社， ２００７：２１８－２２０．
犤３犦胡昌勤 ．药品微生物控制现状与展望 犤Ｊ犦．中国药学杂志， ２０１５，５０（２０）：１７４７－１７５１．
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人民卫生出版社，２０１５：６３． 犤７犦夏蕴琼，刘 将 ．盐酸氨溴索葡萄糖注射液无菌检查方法验
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ｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｂｅ
ｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｗａｓａｔｏｒｌｅｓｓｔｈａｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒｓｏｙｂｅａｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎ ｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｉｎｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｒｕｌｅ１１４３ ｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（２０１５ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌｕｍｅⅣ），ｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔｆｏｒ
综上所述，ＭｇＳＯ４较聚山梨酯 ８０更能有效中和、去 除甲磺酸左氧氟沙星对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的抑菌性，更适合用作喹诺酮 类抗菌药物的抑菌剂和中和剂，在无菌检查过程消除药 品的抑菌性。 参考文献：
犤１犦国家药典委员会 ．中华人民共和国药典（四部）犤Ｍ犦．北京： 中国医药科技出版社，２０１５．
２０１９年 ８月 ２０日 第 ２８卷第 １６期 Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．１６牞Ａｕｇｕｓｔ２０牞２０１９
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
·研究· Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．１６．０１３
大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查方法考察
６２．５ ｇ／Ｌ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｂｏｔｈ ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅｕｓｅｄ ｆｏｒｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｅｓｔｏｆｓｏｙｂｅａｎ
ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｂｅａｎｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｅｓｔ；ｇｅｌｍｅｔｈｏｄ；ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃｓｕｂｓｔｒａｔｅｍｅｔｈｏｄ
ＸＩＡＯ Ｊｉｎｇｗｅｉ，ＷＡＮＧ Ｗｅｎｊｉａ，ＨＥ Ｈｕａｈｏｎｇ，ＬＩＷｅｉ
（ＭｅｄｉｃａｌＤｅｖｉｃｅｓａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰａｃｋａｇｉｎｇ＜Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＞ Ｒｏｏｍ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ ５１０１６０）
中国医药科技出版社，２诺酮类抗菌药物能螯合细 犤６犦胡 昌 勤 ．实 用 药 品 微 生 物 检 验 检 测 技 术 指 南 犤Ｍ犦．北 京 ：
菌所需的镁离子、钙离子等金属元素，故在最后少许冲 洗液中加入 ＭｇＳＯ４，并作用 ２０ｍｉｎ，结果有效中和、去除 了该药品的抑菌性 。 犤１３犦
第一作者：肖婧薇，女，硕士研究生，主管药师，研究方向为药理学及毒理学，（电话）０２０－８１７４４９４７（电子信箱）０２１３ｒａｉｎｙ＠１６３．ｃｏｍ。
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
每膜 ６００ｍＬ时，仍未能有效中和、去除注射用甲磺酸左
方法学验证 犤Ｊ犦．包头医学院学报，２０１８，３４（７）：９９－１０１． 犤１０犦张少锋，鄢 丹，唐慧英，等 ．微量量热法研究增溶性辅料
胶法和显色基质法的鲎试剂反应均无干扰作用。结论 凝胶法与基质显色法均可用于大豆磷脂酰胆碱的细菌内毒素检查。
关键词：大豆磷脂酰胆碱；细菌内毒素检查；凝胶法；显色基质法
中图分类号：Ｒ９１７；Ｒ９７９．９
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－４９３１牗２０１９牘１６－００４１－０４
ＢａｃｔｅｒｉａｌＥｎｄｏｔｏｘｉｎ ＴｅｓｔｆｏｒＳｏｙｂｅａｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ
肖婧薇，王文佳，何华红，李 薇
（广东省广州市药品检验所医疗器械及药包材 ＜药理 ＞室，广东 广州 ５１０６１０）
摘要：目的 建立大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素的检查方法。方法 按 ２０１５年版《中国药典（四部）》通则 １１４３“细菌内毒素检查法”，分别
采用凝胶法与显色基质法考察大豆磷脂酰胆碱细菌内毒素检查的可行性。结果 大豆磷脂酰胆碱质量浓度在 ６２．５ｇ／Ｌ及以下时，对凝