细菌内毒素检查验证方案设计
细菌内毒素检查验证方案
-起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日1 概述 (1)2 验证目的及范围 (1)3 验证小组人员组成及职责 (1)4 验证依据 (2)5 验证前准备 (2)6 验证的实施 (2)7 偏差处理 (5)8 验证数据及评估 (5)9 验证报告及评审 (5)10 再验证及周期 (5)11 验证文件及归档 (5)12 附件 (5)细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或者量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判 断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放， 即凝胶法和光度测定法， 后者包括浊度法和显色基 质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法发展实验。
公司自行制备的注射用 水需发展细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法发展试验。
本验证方案合用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性发展评 价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、 QC 、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表"中华人民共和国药典"2022 版 1143 细菌内毒素检查法职 责1. 负责起草验证方案的起草2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的采集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准2. 负责验证现场的监视审查 1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障组成Q C质量部生产部5.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后〔且在验证实施前〕对本次验证相关人员发展培训。
培训人员记录见附件 1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
5.3 相关文件，确认以下文件皆为现行有效版本。
序号相关文件文件编号1 DHG 型电热恒温鼓风枯燥箱操作规程 WI-1002 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-1013 W*QI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-1034 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-1045 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-1056 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-1067 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-1088 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-1099 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-11310 "培养基管理规程" WI-766.1实验材料及用具电子天平6.1.2. 电热枯燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂〔具有国家主管部门的批准文号〕 6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品) 6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案一、背景介绍细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒分子，它可以引起中毒反应并对人类健康造成危害。
因此，准确检测和验证细菌内毒素的方法非常重要。
本方案旨在验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
二、实验目的本实验旨在验证细菌内毒素检验方法，确保其能够准确地检测细菌内毒素的含量。
三、实验材料和设备1. 细菌内毒素检验试剂盒2. 细菌培养基3. 细菌菌种4. 培养皿5. 恒温培养箱6. 试管7. 离心机8. 显微镜9. 无菌培养室四、实验步骤1. 准备工作a. 清洁实验桌面和实验器材，防止污染。
b. 准备所需要的材料和设备，并确保其干净和无菌。
2. 细菌培养a. 随机取一支细菌菌种采样放入培养基中并均匀涂抹于培养皿上。
b. 将培养皿置于恒温培养箱中，以适当的温度和时间培养细菌。
3. 细菌内毒素检验a. 取一份细菌内毒素检验试剂盒，根据说明书的指导进行试剂的调配和处理。
b. 等待试剂反应完成后，根据试剂盒的说明书进行结果的解读。
4. 结果分析a. 观察试剂盒结果，根据颜色变化和强度判断细菌内毒素的含量。
b. 结果符合预期的样本被认为是阳性，否则为阴性。
五、质量控制1. 测量前需进行必要的质量控制，包括试剂的稳定性和标准品的准确性。
六、风险控制1. 实验过程中需佩戴个人防护装备，如实验手套和口罩，以减少潜在的健康风险。
七、数据处理与结果1. 将实验所得数据进行整理和统计，并进行数据分析和结果的解读。
八、讨论与结论1. 讨论实验结果与预期结果之间的差异，分析可能的原因，并提出改进和优化的建议。
2. 结论验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
九、参考文献参考实验所使用的细菌内毒素检验方法的相关文献。
以上是细菌内毒素检验方法验证方案的内容，该方案通过详细的步骤和操作说明，确保了实验的准确性和可靠性。
通过验证该方法，将可为细菌内毒素检验提供可靠的数据支持，为相关领域的研究和应用提供技术支持。
注射用水内毒素检验方法验证方案设计
注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。
2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。
3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。
将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。
6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。
细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。
6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。
6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。
中国药典 细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法
中国药典细菌内毒素检验方法中，按以下步骤进行实验。
首先，制备试样溶液。
将待测样品溶解在合适的溶剂中，并通过过滤将溶液过滤至少两次以去除杂质。
然后，制备标准溶液。
将内毒素标准品按照指定浓度配制成溶液。
接下来，准备试管。
将标准溶液和试样溶液分别装入两个试管中，并加入适量的无菌生理盐水作为空白对照。
然后，进行混合。
轻轻旋转试管混合样品，确保溶液均匀混合。
接着，培养细菌。
将特定的细菌株接种在培养基中，分别加入试管中的样品溶液，并在适当条件下进行培养。
培养结束后，观察结果。
通过观察培养基的变化，比较试管中的样品溶液和空白对照的差异，判断样品中是否存在细菌内毒素。
最后，记录结果。
根据观察结果，记录样品的检验结果，并进行数据分析。
细菌内毒素检查验证方案之欧阳学创编
细菌内毒素检查验证方案时间：2021.03.03 创作：欧阳学文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述1 2 验证目的及范围13 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5验证前准备26验证的实施27 偏差处理5 8 验证数据及评估59验证报告及评审510 再验证及周期511 验证文件及归档512 附件51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4验证依据《中华人民共和国药典》2015版 1143 细菌内毒素检查法 5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2.电热干燥箱6.1.3.恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5.旋涡混合器6.1.6.鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
光度法细菌内毒素检测实验方案设1
光度法细菌内毒素检测实验方案设计一、样品限值的确定1．药典规定品种：查阅2005版药典，找出其细菌内毒素限值。
2．非药典规定品种：通过计算得出限值，计算公式参照2005版药典L=K/M，式中L 为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg〃h)表示，注射剂K=5E U/(kg〃h)，放射性药品注射剂K=2.5 EU/(kg〃h)，鞘内用注射剂K=0.2 EU/(kg〃h)；M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml(kg〃h)、mg (kg〃h)或U/ (kg〃h)表示，人均体重按60kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。
注射剂安全性检查法应用指导原则（修订稿）（国药典化发〔2007 〕82 号）对热原检查或细菌内毒素检查设定限值有以下说明：热原检查或细菌内毒素检查的限值根据临床人每公斤体重每小时最大用药剂量计算（临床最大用药剂量应采用国内外权威资料作为依据，如药典临床用药须知。
计算公式见细菌内毒素检查法），由于药品生产和临床适应症的不同（如抗感染、抗肿瘤、心血管药等重症用药、儿童和老人用药、联合用药），可适当调整限值（提高至计算限值的2～3倍），以保证安全用药。
细菌内毒素限值一般以EU/mg、EU/U表示，复方制剂以EU/ml表示。
大输液热原检查剂量为10ml/kg、细菌内毒素限值一般为0.5EU/ml。
二、最大有效稀释倍数（MVD）的确定：最大有效稀释倍数是指在实验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。
用以下公式来确定MVD：MVD=CL/λ式中L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则C等于1.0ml/ml，当L 以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U/ml；如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1，可计算供试品的最小稀释浓度C=λ/L。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检测方法验证方案说明
细菌内毒素检测方法验证方案起草人__________起草日期________审核人__________审核日期________批准人__________批准日期________西安力邦制药有限公司细菌内毒素检测方法验证方案目的范围责任人内容1.实验材料及用具2实验准备3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.2..干扰实验33供试品细菌内毒素检查4. 验证结附: 表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录细菌内毒素检测方法验证方案目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
范围：盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验材料及用具1.1.电子天平12电热干燥箱13恒温水浴箱14水银温度计1.5.旋涡混合器16 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）1.7.细菌内毒素工作标准品（由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品）1.8.细菌内毒素检查用水1.9.实验用具：移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
2实验准备2.1.玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。
2.2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250C，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时。
达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。
3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.1.1.实验操作3.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
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细菌毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌毒素，以判断供试品中细菌毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民国药典》2015版1143 细菌毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其毒素含量小于0.015EU/ml，且对毒素试验无干扰作用。
6.1.9. 实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。
6.2实验准备6.2.1玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器，放置入烤箱。
6.2.2除去玻璃器皿表面可能存在的外源性毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1 小时。
达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性毒素。
6.3鲎试剂灵敏度复核试验本试验采用凝胶法，凝胶法系通过鲎试剂与毒素产生凝集反应的原理进行限度检测的方法。
6.3.1 细菌毒素标准溶液的制备取细菌毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶。
按照标准品说明书，加入规定量的细菌毒素检查用水溶解其容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌毒素标准溶液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30 秒钟。
6.3.2 待复核鲎试剂的准备取规格为0.1ml/ 支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶。
每支加入0.1ml 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使容物充分溶解，避免产生气泡。
6.3.3.加样将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支（管），1列2支（管）。
4 支（管）4 列每列每支分别加入0.1ml 的2λ、λ、0.5λ、和0.25λ的毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水，作为阴性对照。
6.3.4 加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，垂直放入试管架上，连同试管架放入37℃±1℃恒温恒湿箱中，试管架保持水平状态，保温60±2分钟。
6.3.5 观察并记录结果。
将试管架从恒温恒湿箱中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转180°观察，管形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
保温和拿取试管过程应避免受到振动，造成假阴性结果。
6.3.6实验结果计算如最大浓度2λ4管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性时实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λc）。
λc = lg-1 (∑X/4)式中x为反应终点浓度的对数值（lg）。
反应终点浓度是系列递减的毒素标准溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
6.3.7结果判断6.3.7.1.判断标准当λc在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格，可用于干扰实验和供试品细菌毒素检查，并以λ（标示灵敏度）为该批鲎试剂的灵敏度。
6.3.7.2 判断结果：（记录附后）6.4干扰实验6.4.1目的是检验本公司自制的注射用水对于鲎试剂与毒素的反应有无干扰作用。
使用的供试品溶液应为未检验出毒素且不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶液。
6.4.2 确定最大有效稀释倍数（MVD）注射用水的毒素限值L为0.25EU/ml，鲎试剂的标示灵敏度为0.25 EU/ml，则最大有效稀释倍数MVD为注射用水本身浓度。
公司如下：MVD=cL/λ式中：L为供试品的细菌毒素限值c为供试品溶液浓度λ为鲎试剂灵敏度的标示值。
6.4.3制备毒素标准对照溶液取1支细菌毒素标准品，用细菌毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（方法同6.3.1）。
6.4.4 制备含毒素的供试品溶液再注射用水将6.4.3.中的同支细菌毒素标准品稀释成4个浓度即2λ、λ、0.5λ、0.25λ的含毒素的供试品溶液。
6.4.5鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂28支，轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使容物充分溶解，避免产生气泡。
6.4.5加样：按下列表1方法进行加样1)将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml供试品溶液作为阴性对照。
2)将另外10支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，每列2支（管）。
其中的4列每列每支分别加入0.1ml的含2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的毒素的标准毒素溶液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为样品阴性对照。
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37±1℃恒温恒湿箱中，保温60±2分钟后，观察并记录结果。
表1 凝胶法干扰试验溶液的准备注：A为供试品溶液；B为干扰试验系列；C为鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D为阴性对照。
6.4.7实验结果计算只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果符合鲎试剂里面的复核试液要求时，试验方为有效。
当系列溶液B的结果符合鲎试剂里面的复核试验要求室，认为该供试品溶液物干扰作用。
其他情况则认为供试品溶液存在干扰作用。
按下式计算用检查用水制成的毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(Es)和用供试品溶液制成的毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et).E s = lg-1 (∑Xs/4)E t = lg-1 (∑Xt/4)X s 、Xt分别为用检查用水和供试品溶液或稀释液制成的毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。
6.4.8结果判断6.4.8.1判断标准当Es 在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且Et在0.5 Es～2.0Es（包括0.5 Es和2.0E s）时，则认为该供试品溶液不干扰实验，可对此供试品进行细菌毒素检查。
当Et 不在0.5 Es～2.0Es（包括0.5 Es和2.0Es）时，则认为该供试品溶液干扰实验。
6.4.8.2判断结果：（记录附后）。
6.5供试品的凝胶限度试验检查6.5.1 在细菌毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
6.5.2 凝胶限度溶液的制备：按表2进行各试验溶液的制备表1 凝胶限度试验溶液的制备注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。
6.5.2.1 供试品溶液的制备：取公司自制的注射用水，不需进行稀释处理。
6.5.2.2阳性对照溶液的制备用检查用水将毒素标准品稀释制成2λ浓度的毒素标准溶液（方法同6.3.1）。
6.5.2.3供试品阳性对照溶液的制备用待检测的供试品溶液将毒素标准品制成2λ浓度的毒素溶液。
（方法同6.4.4制备含毒素的供试品溶液）。
6.5.2.4阴性对照液用细菌毒素检查用水6.5.3鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶。
每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使容物充分溶解，避免产生气泡。
6.5.4 加样取8支（管）溶解好的鲎试剂，其中2支（A）加入0.1ml供试品溶液作为供试品管，2支（B）加入0.1ml供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照管，2支(C)加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管，2支(D)加入0.1ml检查用水作为阴性对照管。
6.5.5 将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37℃±1℃恒温恒湿箱中，保温60±2分钟。
保温和取放试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
6.5.6结果判断6.5.6.1判断标准若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。
若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。
若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。
若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，一管为阴性，需进行复试。
复试时溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定，否判定供试品不符合规定。
6.5.6.2 判断结果：（记录附后）7.偏差处理验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《化验室偏差管理规程》进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。