高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件
中性纤维素酶高产菌株的诱变选育及产酶条件
中性纤维素酶高产菌株的诱变选育及产酶条件
韩铭海;黄俊;余晓斌;缪静
【期刊名称】《食品与生物技术学报》
【年(卷),期】2004(023)003
【摘要】通过紫外线和γ射线交替诱变,筛选得到一株高产纤维素酶的突变菌株BE40-39.与出发株相比,其产酶能力提高1.3倍,发酵性状与出发菌株也有明显的差异.突变菌株发酵试验发现,Avicel是突变菌株产酶最合适的纤维素质碳源.通过对发酵培养条件的试验,得出最佳培养条件是:Avicel质量浓度为0.1 g/dL,胰蛋白胨质量浓度为0.3 g/dL,最适发酵温度为30℃,最佳培养基初始pH 4.2,发酵5 d达到产酶高峰.
【总页数】4页(P85-88)
【作者】韩铭海;黄俊;余晓斌;缪静
【作者单位】江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036;烟台师范大学生命科学院,山东,烟台,264025
【正文语种】中文
【中图分类】TQ925
【相关文献】
1.胆固醇氧化酶高产菌株的诱变选育及产酶条件优化 [J], 黄寅;葛飞;陶玉贵;汤斌;李英
2.N＋注入诱变选育纤维素酶高产菌株及发酵产酶营养因子优化研究 [J], 张宁;蒋剑春;杨静;卫民;赵剑;童娅娟
3.N+注入诱变选育β-葡萄糖苷酶高产菌株及其产酶条件的优化 [J], 沈加成;朱明田;曲音波
4.产纤维素酶地衣芽孢杆菌的诱变选育及其产酶条件优化 [J], 余祖华;丁轲;侯奎;李元晓;李旺;刘一尘;曹平华;贾艳艳;程相朝
5.纤维素酶高产菌株的诱变选育及产酶条件研究 [J], 董志扬;祝令香;于巍;林敏;平淑珍
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一株高产纤维素酶菌的筛选及发酵条件优化
一株高产纤维素酶菌的筛选及发酵条件优化作者：柴明艳来源：《湖北农业科学》 2014年第13期柴明艳（淄博职业学院，山东淄博２５５３１４）摘要：采用羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ）－刚果红平板法，对富含腐烂玉米秸秆的土样进行纤维素酶产生菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。
结果表明，筛选分离出１０株产纤维素酶菌株，其中有３株菌株产酶效果较好，特别是菌株ｔｇ３１对玉米秸秆水解率高达３７．６２％，其最佳发酵工艺的温度为２８℃，发酵初始ｐＨ５．０，接种量６％，摇瓶转速１８０ｒ／ｍｉｎ，经５Ｌ罐放大试验，得出在１２０ｈ时其滤纸酶活力（ＦＰＡ）可达到１４．２１ＩＵ／ｍＬ。
关键词：纤维素酶；菌株；发酵；玉米秸秆；水解中图分类号：Q９３９．９６文献标识码：Ａ文章编号：０４３９－８１１４（２０１４）１３－3141－０4中国是农业大国，每年产生的农作物秸秆总量超过７亿ｔ，约占世界秸秆总产量的１／３［１，２］，其中玉米秸秆产量高达２．２亿ｔ［３］。
玉米秸秆的主要成分是纤维素、半纤维素和木质素等，难以被人类有效利用。
目前，中国玉米秸秆大部分被直接焚烧，不仅对环境造成了极大的污染，同时也浪费了大量的秸秆纤维素资源［４］。
为改变现状，开发纤维素酶降解玉米秸秆，实现废弃资源的生物利用，已逐渐成为该领域的研究热点之一。
纤维素酶可充分降解秸秆中的纤维素，将其转化为微生物可利用的糖类，大大提高玉米秸秆的经济利用价值，该技术在医药中间体、精细化工、食品、饲料及生物能源等领域都有广泛的应用前景［５，６］。
因此，展开高产纤维素酶菌株的选育、发酵工艺条件优化等研究工作，对纤维素的商业化开发具有重大意义。
本研究在玉米秸秆地进行针对性的取样筛选，获得一株高产、高玉米秸秆水解率的菌株，并对其产酶条件进行了摇瓶优化及５Ｌ罐发酵工艺放大，为玉米秸秆纤维素资源的产业化应用打下基础。
１材料与方法１．１材料１．１．１样品采集从辽宁省喀左县富含腐烂玉米秸秆地区取土样若干。
高产L-乳酸米根霉的原生质体制备与再生条件研究
高产L-乳酸米根霉的原生质体制备与再生条件研究邱静;罗水忠;姜绍通;郑志;杨培周【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2011(032)009【摘要】为建立原生质体融合法选育高产L-乳酸米根霉(Rhizopus oryzae)菌株,对米根霉菌株原生质体制备及再生条件进行研究.考察酶种类、酶质量浓度、时间、温度、pH值、渗透压、预处理等因素对原生质体制得量及再生率的影响,获得原生质体制备及其再生的优良条件:不添加甘氨酸,渗透压稳定剂为0.6mol/L的NaCl缓冲液,按1.5mg/mL组合酶质量浓度,蜗牛酶、纤维素酶和溶壁酶质量浓度配比为1:1:1进行混合,35℃、pH6、酶解2h,可获得原生质体制得量最大为2.74×10<'6>个/mL,再生率最高为6.8%.【总页数】5页(P174-178)【作者】邱静;罗水忠;姜绍通;郑志;杨培周【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽,合肥,230009【正文语种】中文【中图分类】Q935【相关文献】1.L-乳酸生产菌根霉菌的原生质体化及再生条件的研究 [J], 庄文容;陈海晏2.L-乳酸高产突变菌株一米根霉NAF-032菌种培养条件的研究 [J], 朱晓红;乔长晟;汤凤霞3.米根霉发酵甘薯淀粉制备L-乳酸的最适条件 [J], 李兴江;潘丽军;姜绍通;潘利华;郑志4.高产L-乳酸米根霉RE3303菌株特性研究 [J], 古绍彬;葛春梅;周秀红;姚建铭;潘仁瑞;余增亮5.离子注入选育高产L-乳酸的米根霉突变株及其酵特性研究 [J], 杨英歌;郑之明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶高产菌株的选育
纤维素酶是一种能够分解纤维素的酶，对生物质的利用具有重要意义。
选育纤维素酶高产菌株是提高纤维素酶生产效率的关键。
以下是一些选育纤维素酶高产菌株的常用策略和方法：
1. 采用自然筛选法：从自然环境中采集植物残渣、堆肥等具有高纤维素含量的样品，通过培养和筛选获取纤维素酶高产菌株。
这种方法的优势是能够发现具有适应性强、高纤维素酶产量的菌株。
2. 遗传工程法：通过对已知具有高纤维素酶产量的菌株进行基因工程改造，引入其他有利于纤维素酶产量提高的基因或突变体。
3. 诱变法：通过化学物质（如EMS、亚硝酸钠等）或辐射（如紫外光、X射线等）处理菌株，诱发基因突变，筛选出纤维素酶高产突变菌株。
4. 基因筛选法：通过分析纤维素酶基因的表达水平和调控机制，筛选具有高纤维素酶基因表达水平和调控机制的菌株。
5. 代谢工程法：通过改造代谢途径，优化产生纤维素酶所需的底物和能量供应等因素，提高纤维素酶产量。
以上方法可根据实验室条件和研究目的选择合适的方法进行选育纤维素酶高产菌株。
纤维素酶高产菌株的选育
（Ｕ／ ）来 表 示 。 Ｉ ｍＥ １ ３ 抗 分 解代谢 阻遏 的 突 变株 的选 育过 程 ． １ ３ １ 诱 变处 理 过程 ．．
纤 维 素物 质 的酶 促水 解 具 有 良好 的应 用 前景 。但
是 ，目前所存在的主要问题是酶解效率不高。为提高 纤维素酶解 的效率 ，多采用选育高产纤维素酶菌种和 改变纤维材料的结构 ，提高对酶的敏感性的方法 。选 育优 良菌种是提高纤 维素酶活力的关键 。通常，从 自 然界 分 离筛 选 的野 生 型菌 株 其产 酶 能力 比较 低 。为提 高纤维素酶 活力 ，诱 变育 种是一 种有效 的方法 。 目
基础。
天～１ 天 ，液体培养 ６ ～８ 。 ０ 天 天
１ ２ 分析 方 法 ．
还 原糖 测 定 ：取 上清 液 ，按 照 Ｍｉｅ 方 法 ，使 用 ｌｒ ｌ ＤｉＳ试 剂 测定 还 原 糖 的含 量 。 以葡 萄糖作 为标 准 。 Ｎ 纤 维素 酶 活力 测定 ：采 用 Ｍａ ｄｌ方 法来 测 定 滤 ｎｅ ｓ 纸 酶 活 （ ｉｅ ａｅ ｔ ｉ ，简 称 为 Ｆ Ａ）和 Ｃ ＦｌｒＰｐｒ ｉ ｔ ｔ Ａｃ ｖ ｙ Ｐ ＭＣ 酶 活 （ ＩＣ’ｅ） 其 酶 活 力 单 位 用 国 际 单 位 ＣＶ ａ 。 Ｉ ｓ
菌糠中产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及增殖条件响应面法优化
物、蛋白胨、牛肉膏均由北京奥博星有限公司提供。MgSO4 · 7H2 O、K2 HPO4 、KH2 PO4 、葡萄糖由天津福晨化学试剂厂提供。 1． 1． 3 培养基 牛肉膏蛋白胨液体培养基： 牛肉膏 3 g、蛋白 胨 10 g、NaCl 5 g、加 水补 足 至 1 000 mL，pH 值 7． 0 ～ 8． 0， 121 ℃ 灭菌 20 min，备用； 发酵产酶培养基： CMC － Na 10 g、 KH2 PO4 2 g、MgSO4 ·7H2 O 0． 5 g、蛋白胨 5 g、酵母粉 5 g，加 水补足至 1 000 mL，121 ℃ 灭菌 20 min，备用。刚果红筛选培 养基： CMC － Na 2 g、（ NH4 ） 2 SO4 2 g、MgSO4 ·7H2 O 0． 5 g、 K2 HPO4 1 g、NaCl 0． 5 g、刚果红 0． 4 g、琼脂 20 g，加水补足至 1 000 mL，pH 值 7． 0，121 ℃ 灭菌 30 min。 1． 2 试验方法 1． 2． 1 菌株筛选 1． 2． 1． 1 富集培养 菌糠中添加 2% 糖蜜、1% 硫酸铵、60% 水，于 30 ℃ 恒 温 培 养 箱 中 培 养 48 h。将 发 酵 后 的 菌 糠 按 1 ∶ 9 的比例置于生理盐水中，静置 30 min，5 000 r / min 离心 5 min，将离心后得到的菌悬液进行梯度稀释，涂布后于 30 ℃ 恒温培养箱倒置培养 48 h。 1． 2． 1． 2 产纤维素酶菌株初筛 将培养后的菌糠按 1 ∶ 9 的 比例溶于生理盐水中，5 000 r / min 离心 5 min，将离心后得到 的菌悬液 进 行 梯 度 稀 释，并 涂 布 于 刚 果 红 筛 选 培 养 基 上， 37 ℃ 培养 24 h 后放置 2 d，测量透明圈直径与菌落直径，挑 选出透明圈直径与菌落直径比值（ 简称圈菌比） 较大的作为 初筛菌株［6 － 7］，在刚果红初筛平板上进行划线分离纯化，并于 斜面保存菌种。 1． 2． 1． 3 产纤维素酶菌株复筛 将初筛得到的菌株接种到 产酶培养 基 中，于 37 ℃ 、160 r / min 培 养 48 h，后 于 4 ℃ 、 5 000 r / min 离心 10 min，测 定 上 清 液 的 羧 甲 基 纤 维 素 酶 活性［8］。 1． 2． 2 菌株鉴定 1． 2． 2． 1 形态学特征及生理生化鉴定 观察菌株的菌落形 态，革兰氏染色后观察菌株显微形态。利用细菌微量生化鉴
高产纤维素酶青霉菌的筛选和及产酶条件的研究
ａ ｄ Ｃｅｌ ｌ ｓ ｏ ｕ ｔ０ ｎ ｌ ｏ ｅＰｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｕ
ＨＵ Ｄａ ， Ｌ Ｕ Ｘｉ ， ＬＥＩ ｉ ｎ Ｉ ａ Ｊ
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高产纤维素酶生产菌的筛选及诱变育种
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丢糟 ，是在 固态 发 酵法 酿造 白酒 时 入窖 回糟 蒸 酒后 的酒醅 。 由于 丢糟含 有难 于消 化 的稻壳 ， 粗纤 维
素 的酶解 是 一个 复 杂 的过 程 ，其 真正 的酶解 机 制还 不 完全 清楚团 。 从 自然 中分 离 出 的纤 维 素 酶生产 菌纤维 素 酶活 力 一直 不 高 ， 了最 大 限度 的利 用丢 糟 中的 纤维 素 ， 为
Ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ａ ｄ Ｍ ｕ ａ ｅ ｅ ｉ ｆＨｉ ｈ Ｃｅｌ ｌ ｓ ｔ ｉｙ Ｓ ｒ ｉ ｃ ｅ ｎ ｎ ｎ ｔ ｇ ｎ ｓｓｏ ｇ ｌ ａ ｅ Ａｃｉ ｔ ｔ ａ ｎ ｕ ｖ
Ｆ Ｎ ｈｎ －ｉｇ Ｙ Ｎ ａ－ ａ ， Ｉ Ｎ Ｚ ｉｗ ｉＬ ｉ － ｉｎ ， ＨＥ ｏ ｂｎ Ａ Ｇ Ｓ ａ ｇ ｌ ， Ａ Ｇ Ｄ ｎ ｄ ｎ Ｑ Ａ ｈ－ ｅ， Ｉ ａ ｑａ ｇ Ｃ Ｎ Ｍａ－ ｉ ｎ Ｘ ｏ
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同
产纤维素酶菌株原生质体制备及再 生条件
李 淼， 曾柏全 ， 冯金儒
（ 中南林 业科技 大学 生命科 学与技术 学院 ，湖 南 长 沙 ４ １ ０ ０ ０ ４ ）
摘 要：研究青霉菌 Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ Ｑ５ 和枯草 芽孢 杆菌 Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ Ｋ ３原生质体制备与再 生的最佳条件 。采用 酶解法制备 了青 霉菌和枯草芽孢杆菌 的高质量 的原 生质 体。试验对亲本菌株 的菌丝生长，酶浓度 ，酶解 时间和 灭活时 间进行 了优化 。亲 本菌 株 Ｏ ５ ，培养液 中加入浓度 ０ ． ５ ％ 甘氨酸和含量 １ ０ ％ 的蔗糖 处理后 ，在质量 浓度 均
Ｐ ｒ ｏ ｔ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ Ｑ５ ａ ｎ ｄ
Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ ｋ ３
率 与 再 生 率 的乘 积 达 到最 大值 ，此 时 Ｋ３原 生 质 体 量 为 １ ． ４ ６ ×１ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍＬ 。青霉菌在 ６ ５℃ 热 灭 活 的 时 间 为 ｌ ｈ ，
紫外灭活时间为 ３ ｍｉ ｎ ；枯草芽孢杆菌在 ６ ５ ℃热灭活的时间是 ２ ． ５ ｈ ，紫外灭活时间为 ５ ｍｉ ｎ 。这为后续原生质 体 融合选 育具有抗逆性 的高产纤维素酶菌株打下基础。
ＬＩ Ｍｉ ａ ｏ ， ＺＥＮＧ Ｂａ ｉ — ｑ ｕ ａ ｎ ， Ｆ ＥＮＧ Ｊ ｉ ｎ — ｒ ｕ
（ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｌ ｉ ￣ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄＴ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈＵ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ ａ ｎ ｄＴ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ４ １ ０ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｒ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｔ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ Ｑ５ ａ ｎ ｄ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ
为 １ ０ ｍｇ ／ ｍＬ的 溶 菌 酶 和 蜗 牛 酶 （ １ ：１ ） 酶解 作 用 下 ， ３ ５ ℃处理 ３ ｈ ，原 生 质 体 生 成 量 达 到 最 大 值 ，为 ７ ． ３ ５ ×１ ０ 。
ｃ ｆ ｕ ／ ｍＬ；亲本菌株 Ｋ ３ ，用 ４ Ｕ ／ ｍＬ的青霉 素处理，在 １ ｍｇ ／ ｍＬ的溶菌酶作用 下，３ ５℃处理 １ ｈ ，原生质体形成
关 键 词 ：青 霉 菌 Ｏ５ ； 枯 草 芽 孢杆 菌 Ｋ３ ； 原 生质 体 制 备 ；原 生 质 体 再 生 ； 原 生 质 体 灭活
中图分类号：￥ ７ １ ８ ． ８
文献标志码：Ａ
文章编号：１ ６ ７ ３ — ９ ２ ３ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） １ ２ 一 ｏ ｌ ７ ４ — ０ ７
ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ Ｋ３ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｈ ｉ ｇ ｈ — ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｐ ｒ ｏ ｔ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｔ ｓ ｏ ｆ Ｐ ｅ ｎ ｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｕ ｍ Ｑ５ ａ ｎ ｄ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ Ｋ３ ｈ ａ ｖ ｅ ｂ ｅ ｅ ｎ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍａ ｔ ｉ ｃ
第 ３ ３卷 第 １ ２期 ２ ０ １ ３ 年 １ ２月
中 南 林 业 科 技 大 学 学 报
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