(优选)肿瘤分子生物标志物的流式定量分析
㈠癌前病变出现DNA异倍体及在癌变
早期诊断的意义。
癌前期病变是肿瘤防治研究中的一个重要课题， 从癌前病变中发现早期癌变的患者，并找出作 为早期癌变的特征性标志物，是人们一直努力 探寻的方法，使肿瘤得到早期发现、早期治疗 具有重要意义。
研究发现，在众多的癌前病例中，并非所有的 癌前病变都将发生、发展成为癌症。哪些癌前 病变将发生癌变，哪此将不发生癌变，是人们 正在努力寻找作为癌变的恃征性标志物。
4.GO/1期细胞峰的CV值大于9%，作为参考指 标。
我们的研究结果(见表16)，表明DNA异倍体可 能是重要的癌变标志物。
从癌前病变中发现早期癌变和潜在癌变病例， 并对其作出一个早期预警性诊断，已成为人们 十分关注的研究焦点，通过对癌前病变细胞 DNA异倍体的FCM检测，可能有助于对癌前病 变作出病理学诊断的超早期癌诊断。
野生型 P53 基因的丢失和突变，使 P53基因正常 功能丧失，而成为突变型P53基因，科学家研究 认为， 突变型 P53 可导致细胞增殖功能的增强。 突变后的P53不但失去了正常调控细胞增殖分化 的功能，而且可变为一个直接的肿瘤基因， 对 细胞恶性转化起促进作用。
近年来的研究发现，在人类大多数恶性肿瘤中均存在 P53突变基因，而且不同的致癌物可引起不同的特异性 突变谱。因此P53基因的突变已引起肿瘤研究者极大关 注。
因此，对癌基因与抗癌基因与癌变的关系研究 成为肿瘤研究的热点之一，已随着分子生物技 术的迅速发展和单克隆抗体技术的应用，大量 具有高度特异性识别肿瘤细胞内外抗原的单克 降抗体出现，为肿瘤研究寻找到了很多新的标 志物。
癌基因和抑癌基因在人体组织的调整作用，是 通过其效应分子蛋白质产物。近年来，由于生 产出多种高度特异的癌基因蛋白产物的单克隆 抗体，为探索癌基因与肿瘤发生、发展以及与 肿瘤的生物学特性关系的研究辟出了新径。
P53基因是近年来发现的具有重要作用的抑癌基 因，定位于人的17号染色体(17、13、1)其早 在1979年就发现了P53基因。
当时是在被恶性转化的细胞内发现，被认为是 一个原癌基因(oncogene)，因此没有引起研究 者的重视，直到1989年，一些科学家的研究有 了新发现，认为P53基因存在两种类型：即野生 型(wild type)和突变型(Mutant type)，这两种 类型的P53基因在人体内具有两种不同的作用。
由此可见，癌前病变出现DNA非整倍体对预测 和诊断癌变是一个重要而有价值的标志物， 对 于形态学上诊断为癌前病变的病例， 有必要进 行 DNA 倍体的检测， 对出现DNA异倍体病人， 应 进行密 切的随访， 及时发现早期癌 变征象， 做到早诊断、早治疗。
二、抑癌基因P53蛋白
从生物分子水平研究证明，肿瘤是基因性疾病， 是由某些致癌基因激活或抑癌基因的失活(突 变或丢失)及其功能的调控失常而促发肿瘤， 当各种致癌因子参与下诱导癌基因和抑癌基因 的异常改变，其效应分子的基因蛋白产物的过 量表达，它们相互之间在肿瘤的发生发展上起 着重要作用。
研究发现癌前病变细胞DNA含量与病变不典型 增生程度密切相关(见表17)。DNA指数随不典 型增生增高逐渐渐升高，从DNA含量进一步说 明癌变并非由正常细胞突发为癌细胞，而是经 过一个量变到质变的过程，癌前病变即处于量 变过程。
出现DNA异倍体细胞群则证明从量变到质变的 过程，Tedori 等认为，当癌前病变出现 DNA异 倍体时， 说明已发生癌变或已具有潜在癌变的 可能性， 尽管还不具备病理形态学的癌变诊断 标准， 大多数研究者还发现，癌前病变不典型 增生程度越重，DNA非整倍体出现率越高，不 典型增生程度越重，癌变的发生率越高。
目前，从病理形态学方法对于可能癌变的病例 作出一个确切的诊断标准还十分困难。
研究证明，DNA异倍体的出现可能是癌前病变 发生癌变的一个重要标志物，已有作者对食管、 宫颈、胃、鼻咽、口腔粘膜癌前病变进行了流 式DNA倍体分析研究。
Tedori等应用 FCM 分析了20例胃粘膜萎缩性胃 炎伴不典型增生细胞的DNA倍体，发现DNA异 倍体9例，其中5 例在随诊半年后被病理学确诊 为癌变，发现异倍体与癌前病变细胞不典型增 生程度有关。
研究认为，癌基因致癌作用是通过其效应分子 的癌基因蛋白来发挥其对细胞的转化作用的。 因此，检测癌基因蛋白 的表达量是一种极有效 的研究方法。
研究证明，野生型P53基因蛋白具有极不稳定的 构型，半衰期很短(约30分钟)，因此，在正常 状态下细胞内含量甚微，一般方法很难测量到。 然而，突变后的P53基因，其蛋白发生了构型上 的改变，半衰期明显延长，稳定性增强，在细 胞内形成堆积，含量增高。
（优选）肿瘤分子生物标志物 的流式定量分析
一、DNห้องสมุดไป่ตู้异倍体
研究证明，大部分恶性肿瘤有DNA含量的异常 改变(DNA含量的增多或减少)，Badogie等报道， 实体瘤的异倍体检出率在60-100%。由于肿瘤 细胞在增殖分裂过程中出现DNA合成的丢失或 不分离，而产生了DNA异常的细胞群，即出现 DNA异常的干系(克隆)，这种DNA异常干系， 即称为DNA异倍体。流式细胞术定量分析DNA 异倍体，应用于肿瘤的早期诊断和预后评价方 面。
作者对208例石蜡包埋组织、和1000 多例食管 脱落细胞的癌前病变细胞流式 DNA 倍体分析 (见表15)，并指出如下诊断标准，供参考。
1.出现DNA异倍体峰位诊断阳性。
2.S期细胞大于15%，G2M期大于10%(突出的 四倍体峰位)诊断为阳性。
3.S期细胞大于 10-15%， 并有突出四倍体峰位， 诊断为可疑癌。
野生型P53可以阻止细胞发生恶性转化，并可阻 止受损伤细胞 DNA无法修复的细胞DNA复制过 程，引起细胞凋亡 (Apoptosis)或程序性细胞死 亡(program cell death. pcd)。这一发现使人们 认识到野生型P53的一个重要功能是作用细胞增 殖周期的一个调控点(check-point)。
肿瘤分子生物标志物的流式定量分析
总结词
乳腺癌肿瘤分子生物标志物的流式定量分析有助于乳腺癌的早期诊断、治疗和预后评估。
详细描述
乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，早期诊断和治疗对于提高治愈率和生存率至关重要。通过流式定量分析技术，可以检测乳腺癌患者血液或组织样本中肿瘤分子生物标志物的表达水平，如癌抗原15-3（CA15-3）、癌抗原125（CA125）和组织多肽抗原（TPA）等。这些标志物水平的异常升高可能提示乳腺癌的发生或复发，有助于早期发现乳腺癌。此外，流式定量分析还可以评估乳腺癌患者的病情进展、治疗效果和预后，为临床医生制定治疗方案提供重要依据。
肿瘤分子生物标志物定义
根据其来源和功能，肿瘤分子生物标志物可分为肿瘤细胞自身产生的标志物和机体对肿瘤反应产生的标志物两类。
肿瘤分子生物标志物分类
通过检测肿瘤分子生物标志物，有助于早期发现肿瘤，提高诊断的准确性和可靠性。
诊断
通过检测肿瘤分子生物标志物，可以评估肿瘤的恶性程度、转移风险和患者的预后情况。
随着科学技术的发展，新的肿瘤分子生物标志物不断被发现和验证，为肿瘤的早期诊断、预后评估和治疗提供了更多的选择和可能性。
流式定量分析技术原理
CATALOGUE
02
流式定量分析是一种基于流式细胞术的定量检测技术，用于对细胞或亚细胞结构进行多参数、快速、高通量的检测。
该技术通过将待测样本制成单细胞悬液，与荧光标记的抗体结合，利用荧光信号的强度和特异性对目标分子进行定量分析。
抗体和荧光标记物的质量对结果影响较大；样本制备过程可能影响检测结果；物的流式定量分析方法
CATALOGUE
03
采集肿瘤组织或体液样本，确保样本新鲜且无污染。
样本收集
细胞分离
细胞洗涤与固定
肿瘤分子生物标志物的流式定量分析
作者对208例石蜡包埋组织、和1000 多例食管 脱落细胞的癌前病变细胞流式 DNA 倍体分析 (见表15)，并指出如下诊断标准，供参考。 1.出现DNA异倍体峰位诊断阳性。 2.S期细胞大于15%，G2M期大于10%(突出的 四倍体峰位)诊断为阳性。 3.S期细胞大于 10-15%， 并有突出四倍体峰位， 诊断为可疑癌。 4.GO/1期细胞峰的CV值大于9%，作为参考指 标。
图－26 结直肠癌的多阶段发生过程
至今癌症的确诊主要依靠细胞病理学，大多不 能分辨癌症的病因，发现P53 特征性突变将有可 能使癌症的研究从细胞水平进入分子水平，从 能确诊癌的细胞病理学进入能分析基因特征结 构的分子生物学，流式细胞技术是能保持细胞 和亚细胞成分的完整生活状态下，进行定量分 子分析方法。并可为其他分析技术，提供富集 制样基础，无疑地，它将为上述转变提供重要 的技术基础。
在众多的癌基因中，人们最关注、研究最深入 的是ras原癌基因。在人类恶性肿瘤中，最常见 的癌基因之一，ras基因的激活能启动和加速细 胞的生长、增殖以致引发细胞的恶性转化，ras 原癌基因族(K-ras、N-ras、Ha-ras)P21蛋白产 物是一种共同表达的蛋白。 研究证明，ras癌基因的激活与细胞恶性转化有 关，当癌变发生时， ras 癌基因首先激活， P21 蛋白常出现过量表达，ras P21蛋白已被证明在 各种人类肿瘤 ( 乳腺癌、肺癌、胃癌 ) 有过量表 达。
野生型P53可以阻止细胞发生恶性转化，并可阻 止受损伤细胞 DNA无法修复的细胞DNA复制过 程，引起细胞凋亡 (Apoptosis)或程序性细胞死 亡(program cell death. pcd)。这一发现使人们 认识到野生型P53的一个重要功能是作用细胞增 殖周期的一个调控点(check-point)。 野生型 P53 基因的丢失和突变，使 P53基因正常 功能丧失，而成为突变型P53基因，科学家研究 认为， 突变型 P53 可导致细胞增殖功能的增强。 突变后的P53不但失去了正常调控细胞增殖分化 的功能，而且可变为一个直接的肿瘤基因， 对 细胞恶性转化起促进作用。
肿瘤分子标志物分析
肿瘤分子标志物分析肿瘤分子标志物是指在肿瘤细胞中产生的特异性蛋白质、核酸或其他化学物质。
通过分析和检测肿瘤分子标志物可以帮助医生了解肿瘤的类型、大小、分级、预后，并可以作为监测疗效和预测复发的指标。
本文将围绕肿瘤分子标志物的概念、分类、应用及未来前景展开讨论。
一、肿瘤分子标志物的概念肿瘤分子标志物是指在肿瘤细胞或其周围环境中特异性表达的生物标记物。
这些生物标记物可以通过检测技术的手段，如免疫组织化学、流式细胞术、基因芯片技术等进行定量和定性分析。
肿瘤分子标志物具有较高的灵敏度和特异性，可以作为肿瘤的诊断、治疗和预后判断的重要依据。
二、肿瘤分子标志物的分类肿瘤分子标志物可根据其来源和功能进行分类。
根据来源可分为内源性和外源性标志物。
内源性标志物是指在肿瘤细胞内合成的特异性蛋白质或核酸，如CA125、PSA等。
外源性标志物是指在肿瘤细胞外源合成的蛋白质或核酸，如Carcinoembryonic antigen (CEA)。
根据功能可分为诊断标志物、预后标志物和治疗标志物。
诊断标志物用于确定肿瘤的类型、分级和分期，预后标志物用于判断疾病的预后和预测患者的生存率，而治疗标志物则可作为评估肿瘤治疗效果的依据。
三、肿瘤分子标志物的应用1. 诊断：肿瘤分子标志物在临床诊断中起着关键的作用。
通过检测血清中的肿瘤标志物，医生可以辅助诊断出患者是否患有肿瘤，并可进一步确定肿瘤的类型和分期，为治疗方案的制定提供依据。
2. 监测疗效：肿瘤分子标志物可用于监测肿瘤治疗的效果。
在患者接受治疗前后，通过比较肿瘤标志物的水平变化，可以初步评估治疗的有效性，并及时调整治疗方案，以期获得更好的疗效。
3. 预测复发：肿瘤分子标志物在预测肿瘤复发和预后方面也具有重要意义。
通过观察肿瘤标志物在手术切除后的变化，可以预测患者的复发风险和生存期，为患者提供更为精确的治疗建议。
四、肿瘤分子标志物的未来前景随着生物技术的不断进步，肿瘤分子标志物的研究也在不断深入。
肿瘤分子标志物的筛选和应用
肿瘤分子标志物的筛选和应用肿瘤是一种常见的恶性疾病，其发生和发展的机制仍有很多不确定的地方。
近年来，随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的研究表明，肿瘤的发生和发展与多个分子标志物的异常表达密切相关。
因此，研究肿瘤分子标志物的筛选和应用对预防、诊断和治疗肿瘤具有重要意义。
一、肿瘤分子标志物的筛选1.基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的生物技术，通过对细胞、组织或体液中的上千个基因同时进行检测，来寻找与某种生理或病理情况相关的基因。
在肿瘤分子标志物的筛选中，基因芯片技术可以较为全面地评估多种基因的表达情况，帮助我们找出与肿瘤相关的基因并进行有效筛选。
2.蛋白质组学技术蛋白质组学技术是一种通过对样本中的蛋白质进行分离、检测和鉴定，来了解生理和病理情况的生物技术。
在肿瘤分子标志物的筛选中，蛋白质质谱技术可以识别出肿瘤组织中的特定蛋白质，并与正常组织中的蛋白质进行比较，从而筛选出与肿瘤相关的分子标志物。
3.体液组学技术体液组学技术是一种通过对体液中的代谢产物、蛋白质或核酸进行检测与分析，以寻找生理、病理状态标志的科学技术。
在肿瘤分子标志物的筛选中，体液组学技术可以分析肿瘤患者体液中的代谢产物、蛋白质、核酸等，寻找与肿瘤相关的标志物。
以上三种技术都是最常用的肿瘤分子标志物筛选技术，它们能够快速、准确地评估分子标志物的表达情况，是未来肿瘤分子标志物研究的重要方向。
二、肿瘤分子标志物的应用1.诊断肿瘤分子标志物的应用在肿瘤诊断方面非常重要。
通过检测血清或尿液中的标志物，可以辅助医生进行初诊或监测病情。
例如，PSA是前列腺癌标志物，CA125是卵巢癌标志物，CEA是大肠癌标志物等。
通过检测这些分子标志物的异常情况，就可以初诊或监测肿瘤病情。
2.治疗肿瘤分子标志物的应用还可以在治疗方面发挥作用。
通过分析肿瘤组织中的特异性分子标志物，可以了解肿瘤细胞的分子特征，为精准治疗提供依据。
例如，HER2是乳腺癌治疗中的一个重要靶点，与HER2阳性的患者可以使用靶向HER2的药物进行治疗。
流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用
流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用杨恩环;周宇琼【摘要】目的建立检测人血清多种肿瘤标志物的流式荧光法并评估方法学性能.方法将抗AFP、CEA、CA125、CA242、NSE、free-3-hCG、cyfra 21-1、F-PSA、T-PSA、CA15-3、SCC、CA72-4、CA19-9抗体包被于Luminex荧光编码微球,用流式荧光法检测血清中上述标志物,并进行方法学与临床应用评价.结果与ELISA 试剂盒相比,建立的流式荧光法线性范围较宽,灵敏度与电化学发光法较一致.各个指标的批内变异系数(CV)为(6.10±2.35)％,批间CV为(6.61±2.41)％；平均回收率均＞90％.干扰实验结果表明,200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素和10mg/mL血红蛋白对各指标检测均无显著影响且不受类风湿因子(RF)、异嗜性抗体、人抗动物抗体(HAAAs)及补体等干扰；有效指示AFP高浓度样本、避免hook效应导致的假阴性；临床实验结果表明,该法与电化学发光、ELISA法相关性良好.结论流式荧光法可实现多肿瘤标志物并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(030)012【总页数】4页(P960-963)【关键词】流式荧光法;肿瘤标志物;方法学性能评价【作者】杨恩环;周宇琼【作者单位】上海透景生命科技有限公司,上海201203;上海透景生命科技有限公司,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R730.4流式荧光是基于荧光编码微球和流式技术的一种临床应用型高通量发光检测技术［1］，具有通量高、配套试剂多、应用领域广、重复性好、既能检测蛋白质又能检测核酸等优点［2-6］。
利用该技术开发的多肿瘤标志物定量检测试剂盒具有多指标、批量标本联合检测的特点，且其速度快，定量准确。
本研究应用流式荧光技术对多种肿瘤标志物进行检测，并对多肿瘤标志物定量检测试剂盒进行性能分析及诊断价值评估，报告如下。
生物大分子的定量分析技术
生物大分子的定量分析技术生物大分子是指生命体中质量较大的有机分子，包括蛋白质、核酸、多糖、脂质等。
这些分子在生命体内扮演着重要的角色，因此其定量分析技术在生命科学研究中具有极其重要的意义和应用价值。
本文将介绍几种生物大分子的定量分析技术，分别包括比浊法、高效液相色谱法（HPLC）和生物传感器技术。
一、比浊法比浊法是指利用光的散射规律来作为测定物质浓度的一种方法。
在比浊法中，测量的光散射和样品中测定物质的浓度成正比。
这种方法适用于测定大分子比如蛋白质、核酸等的浓度。
比浊法的优点在于简便易行且不需要昂贵的仪器设备，但其缺点是所需的样品量相对较大，且测量范围受到限制。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种通过溶液流动来进行分离、检测样品成分的方法。
色谱柱中的填料是分离样品的关键，以双氧水吹出的硅胶为主要填料，还有乙烯基化硅胶、酸性树脂、碳氢化合物和松树脂等。
高效液相色谱法能够分离并定量化测定生命体中的蛋白质、核酸及其它生物大分子的基本分子，具有适用于多种生物大分子的特点。
三、生物传感器技术生物传感器技术是指通过生物体内长期稳定的生物分子与非生物分子相互作用的机制，准确的监测并控制生命体内的各项指标。
此技术被广泛应用于医疗保健、农业、环境保护等领域。
目前，生物传感器技术的研究方向包括光纤传感和微流控芯片生物传感等。
综上所述，生物大分子的定量分析是生命科学研究中至关重要的一部分。
各种定量分析技术具有各自的优缺点，科学家应根据实际需要选择合适的方法进行定量分析。
随着生命科学研究的深入，生物大分子的定量分析技术将不断发展和创新。
分子诊断技术在肿瘤诊断中的应用
分子诊断技术在肿瘤诊断中的应用肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病。
传统的肿瘤诊断方法往往不能满足准确诊断的需求，而分子诊断技术的出现为肿瘤诊断带来了新的希望。
分子诊断技术以分子水平的变化作为依据，可提供更准确和精细化的肿瘤诊断信息。
本文将从肿瘤分子标志物的检测、分子诊断技术的种类及其应用、分子诊断技术在肿瘤治疗中的作用等方面进行论述。
一、肿瘤分子标志物的检测肿瘤分子标志物是指在肿瘤发生、发展过程中产生的某些特定分子，它们可以反映肿瘤的存在、类型、严重程度以及预后等信息。
肿瘤分子标志物的检测是分子诊断技术的基础，常用的方法包括PCR、免疫组化、流式细胞术等。
以肿瘤标志物CEA为例，利用PCR技术可以在患者血液中检测到CEA的特定序列，进而判断其是否患有结直肠癌等相关肿瘤。
二、分子诊断技术的种类及其应用1. 基因组学技术基因组学技术在肿瘤分子诊断中发挥着重要作用。
通过测序技术可以对肿瘤细胞的基因组进行测定，从而发现潜在的致病基因和突变。
此外，基因芯片技术也被广泛用于肿瘤分子诊断中。
通过芯片上的探针可以同时检测成千上万个基因的表达水平，进一步了解肿瘤的生物学特征和发展机制。
2. 蛋白质组学技术蛋白质组学技术可以对肿瘤细胞中的蛋白质进行分析和鉴定，从而寻找肿瘤标志物。
质谱技术是蛋白质组学的核心技术之一，通过质谱仪的分析可以鉴定出肿瘤细胞中表达异常的蛋白质，进而用于肿瘤的诊断和预后评估。
3. 微小RNA技术微小RNA（miRNA）是一类长度约为22nt的小分子RNA，在肿瘤发生和发展过程中起着重要的调控作用。
利用高通量测序技术可以对肿瘤细胞中的miRNA进行筛查和鉴定，从而找到与肿瘤相关的潜在标志物。
此外，还可以通过检测患者血液中的循环miRNA水平来判断肿瘤的存在和预后情况。
三、分子诊断技术在肿瘤治疗中的作用分子诊断技术不仅可以提供肿瘤的准确诊断信息，还可以指导肿瘤治疗的选择和评估治疗效果。
例如，通过检测肿瘤细胞中的某些基因突变，可以确定是否适合采用靶向治疗方法。
检验科常见肿瘤标志物检测方法
检验科常见肿瘤标志物检测方法肿瘤标志物检测是一种通过测定人体内特定蛋白质、酶或其他相关物质的浓度或活性水平来筛查、诊断和监测肿瘤的方法。
在检验科中，肿瘤标志物检测方法被广泛应用于临床实践中，对于早期发现和诊断肿瘤具有重要意义。
本文将介绍检验科常见的肿瘤标志物检测方法，以提供相关医学专业人员和科研人员参考。
一、免疫测定法免疫测定法是目前应用最为广泛的肿瘤标志物检测方法之一。
它基于人体免疫系统产生对抗肿瘤细胞的抗体原理，通过测定血液或体液中特定抗原与抗体的结合程度来确定肿瘤标志物是否存在。
常用的免疫测定法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、免疫荧光法等。
二、核酸检测法核酸检测法是一种通过检测肿瘤细胞或肿瘤相关基因的异常变化来判断肿瘤存在与否的方法。
常见的核酸检测法包括聚合酶链式反应（PCR）、荧光原位杂交（FISH）、基因芯片技术等。
相比于其他方法，核酸检测法具有更高的灵敏度和特异性，可以提供更准确的肿瘤诊断结果。
三、蛋白质质谱法蛋白质质谱法是一种通过分析体液中蛋白质的质谱图谱来鉴定和定量肿瘤标志物的方法。
该方法主要通过样本前处理、质谱分析和数据分析三个步骤进行。
蛋白质质谱法具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点，适用于多种肿瘤标志物的检测和筛查。
四、细胞生物学方法细胞生物学方法是一种通过观察和分析肿瘤细胞的形态学特征、增殖、分化以及遗传学变化来确定肿瘤的存在和发展情况的方法。
常用的细胞生物学方法包括细胞培养、细胞遗传学分析、细胞增殖和凋亡检测等。
细胞生物学方法在肿瘤的早期筛查和疾病的进展监测中具有重要作用。
五、图像学检测法图像学检测法是一种通过医学影像学技术来观察和评估肿瘤的生物学特征和形态学变化的方法。
常见的图像学检测法包括X射线、CT扫描、MRI等。
这些技术能够提供肿瘤的位置、大小、形状等信息，辅助临床医生进行肿瘤的诊断和治疗方案选择。
六、流式细胞术流式细胞术是一种通过激光和电子学技术来检测和分析肿瘤细胞的多参数数据的方法。
肿瘤分子生物标志物课件
肿瘤分子生物标志物
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临床意义：
• (1) 原发性肝癌患者血清中AFP浓度明显升高，约77.1%的患者AFP>500ug/L， 但也有18%的病人AFP并不升高。 (2) 病毒性肝炎，肝硬化患者AFP浓度有不同程度的升高，但其水平通常低于 100ug/L。其升高原因主要是由于受损伤的肝细胞再生而幼稚化时，肝细胞 便重新具有产生AFP的能力，随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。 (3) 生殖腺胚胎性肿瘤患者血清中AFP浓度可见升高，如睾丸癌、畸胎瘤等。 (4) 妇女妊娠3个月后，血清AFP浓度开始升高，7-8个月时达到高峰，一般在 400 ug/L以下，分娩后3周恢复正常。孕妇血清中AFP异常升高，应考虑胎儿 神经管缺损畸形的可能性。
肿瘤分子生物标志物
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肿瘤分子标记物可分为：
1、肿瘤组织产生：胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；
激素(HCG) ；组织特异性抗原(PSA)；粘蛋白、糖蛋白、 糖脂(CA125) 、癌基因及其产物；多胺类 等 ； 2、肿瘤与宿主相互作用后产生： 血清铁蛋白；免疫复 合物；急性时相蛋白；同工酶；白细胞介素受体；肿瘤 坏死因子 等 ； 3、某些与肿瘤发生密切相关的物质：SNP、miRNA等
肿瘤分子生物标志物
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二、甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)
• 正常成人血清中含量为5.8μg/L以下，男性略高于女性。AFP由卵 黄囊及胚胎肝脏产生，在妊娠5个月时达高峰，出生时下降。胎 儿出生后1年，血清AFP应降至正常成人水平。AFP是原发性肝癌 的最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以 上，或含量有不断增高者，更应高度警惕。
现选取各代表性肿瘤分子标记物分述如下：
流式细胞术双标记法检测实体肿瘤DNA含量,细胞周期及Ki67表达
流式细胞术双标记法检测实体肿瘤DNA含量,细胞周期及Ki67表达一垂壅!墨翌!堂兰!塑流式细胞术双标记法检测实体肿瘤DNA含量,细胞周期及Ki67表达孙晓非,何丽海林z,廖海-彤哆0,中山医科大学肿瘤防治中心1内科2检验科.广东广州510060关键词:z三盟周期增殖桩抗原;苎盐蜜中国分类号:R730.4文献标识码:B文章编号:1000—467x(2000)07～0729—02本研究主要利用瘴式细胞术DNA/Ki67双标记法同时检测恶性实体肿瘤细胞的DNA含量,细胞周期和Ki67的表达和周期分布,并探索其相互之间和与病理组织学分级的关系.1材料与方法1.1材料1999年2—8月,经我院病理确诊的新鲜恶性实体唐标本87伪.按病理组织学分级,高分化肿瘤9例.中度分化肿瘤24例,低分化肿瘤54倒.标本置于RPMI1640培养液内,4℃保存,24 小时内制备成单细胞悬液.1.2方法12l单细胞悬液制备:上述标本用PBS冼净后剪成1咖碎块,置于100 目不锈铜网上轻辗,边以PBS缓滴.收集滴下的液体后用200目尼龙膜过滤后,I500r/rain离心5min,PBS冼两次,去上清沉淀细胞加70%乙醇固定, 4’E冰箱保存1.22KJ67和DNA双染色:将上述乙醇固定的标本PIIS洗两次后,去陈上清,将细胞悬渡分成两管.一管加20l FITC.MsIgG,另一管加20FLIT..Ki67.置于4避光30min.PBS洗两次,弃陈上清,分别加人50p.IRNase 酶(1mg/m1),450P1(50p.g/m1)染料,行DNA染色,常温避光30min.200 目尼龙膜过滤后,即可上机检测123流式细胞术检测:利用流式细流式细胞术PA胞仪FASCalibur(美国BD公司)进行免疫荧光检测.每次测定均正常人外周血淋巴细胞为DNA二倍体参照标准. Nodfit软件进行I)NA分析,全部标本cv值均在8%以下.Cellquest软件行Ki67含量分析.每份标本分析30000个细胞,细胞在波长488nm处被氲离子激光激发,P1的红荧光和FITC的绿荧光分别通过585nm和530nm滤光片收集13统计数据用SPSS统计学方法进行处理2结果2,1DNA倍体DNA指数(DI1:l,为正常二倍体细胞.DI>l或<l则为异倍体细胞. 87例实体瘤病人中异倍体发生率为40.23%.22S期细胞百分比全组87例肿瘤S期细胞百分比0%～24%(528%±4,85%)见表l,表2.表1异倍体,S期细胞百分比和Ki67与病理组织学分级注:高分化与中分化肿癌Kib7:P<0.O1,S期:P<005高分化与低分化肿瘤Ki67;P<0.O1,S期:P<001中分化与低分化肿瘸Ki67:P>005,S期:P>0.05表2异倍体和二倍体肿■的S期细胞百分比和Ki67表达一蛊收稿日期:1999—1l一09;修回日期:2000—01一o4★通讯作者:Tel:86—20—87765368—5212Fax:86—20—87761547E—mail;zsesun@2lc/1.co111FL2一Area圉I二倍体中度分化食管鳞癌Ki67/DNA双参数流式细胞术分析A:同型阴性对照.B:Ki67/DNA双染色图,横坐标是DNA含量.纵坐标是Ki67阳性细胞百分比.730孙晓非,等流式细胞术双标记法检删实体肿瘤DNA含量,细胞周期及Ki67表达2.3增殖核抗原Ki67的表达30例正常人外周血淋巴细胞K167阳性表选为0%～6%(4.3%±15%)全部肿瘤的阳性表达范围0.5%～87%f1736%±16.6%)见表1,表2.K167与DNA的关系见图1.3讨论奉研究利用流式细胞术的双标记法在同一标本行Ki67/DNA染色结果与国内外许多学者的报道相似.Ki67是一种细胞的增殖核抗原.在细胞周期G,.S,Gz/M期表达,反映细胞的增殖活性.1,21o本研究中,Ki67与S期细胞一样.中度分化和低分化肿瘤中Ki67阳性表达比高分化肿瘤高,统计学七有明显差异.然而,中度分化和低分化肿瘤之间Ki67阳性表达统计学无明显差异.异倍体肿瘤与二倍体肿瘤之间Ki67阳性表达统计学上无明显差异.流式细胞术是一种定量指标,检测标本全部细胞中K167阳性细胞的百分比,故仅能作为标本中各种细胞增殖的参考指标,如标本存在反应性增生,炎症的情况下,K167阳性细胞可增加.流式细胞术DNA/Ki67双染色法可在双参数点图上观察到K167的含量及其在细胞周期的分布(图1),有助于对细胞周期动力学的了解…:本研究是利用流式细胞术Ki67/DNA双标记法同时检测肿瘤细胞DNA 含量,细胞周期分析,增殖核抗原Ki67 的表达等参数.作为一种方法而言,此法能在24小时内获得以上参数,方法简便,快速.有助于对肿瘤细胞生物学特性的了解.本研究的病例均为新病例,所获取的参数与临床疗效与预后的关系尚需要时间进行随访观察及进一步的研究.[参考文献lll】GerdesJLiL.S4’h[ueterc,a1.Imman0bi~henfiealandmole(ular biologiceharaclerJzaliontheU pmliferatlon-~iamdnuclear~ligenthatisdefinedhvmono,10=ml[标签:快照]。