实验一 非特异性反应
梅毒螺旋体抗体特异性与非特异性试验的评价
心发放的室内质控品，每板阴阳性对照均达到试剂规定标准， 室内质控品达到质量要求。ＴＲＩＪｓＴ每板没有阴阳性对照，ＴＰＰＡ
严格按说明书操作。 １．５统计学方法 验。 ２结果
６
三种检测方法的结果比较采用ｒ检
毒特异性抗体，特异性好、灵敏度高，已是目前公认的梅毒血清 确证试验１１；但试剂较贵，检测时需将标本做系列稀释，不利于 大批量标本检测，凡以肉眼判断结果，原始数据无法保存。 综上所述：‘Ｉ＇ＲｕｓＴ法虽然具有快速、经济的优点，但由丁其 检测的是非特异性抗体，对Ⅱ、Ⅲ期梅毒可旱阳性反应。但对早 期和治疗期梅毒可呈阴性反应。因此，其检测的阳性率较低，易 造成漏检，也可斟室温、技术操作、标本等岗素的影响而出现假 阳性。ＴＰＰＡ法由于采用梅毒螺旋体致病血球来检测梅毒特异 性抗体，是目前公认的梅毒确诊试验，但其试剂是国外进口，价
９１６
万方数据
一囤衄目国回
２季阳，王培华，等．全国高等医学院教材・输血技术ＩＭ］．第２版．北京： 人民卫生出版社．２００２，１１３一１１６ ３许秀文．徐世春．潘万秋，等．ＴＰ－ＥＬＩＳＡ检测献血者梅毒螺旋体抗体 的实验报告ｌｊ】．中国输血杂志。２００１．１４（１）：２４ ４郭秀筠，郑治修．谢文峰，等．酶联免疫吸附法检测梅毒特异性球蛋 白Ｃ［Ｊ１．中华医学检验杂志，１９９９，２２（３）：１７８ 作者简介：邱月燕．女，４８岁，中专学历，毕业干福建省龙岩卫生学 校。副主任技师。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｙｙｐｈｐ＠１６３．ｃｏｍ （收稿口期：２００９．－０４—２７） ５丛宪玲。姜日花，等．５８０例梅毒患者实验室检测结果分析们．中国实 验诊断学，２００３，７（３）：２６４－２６５
②ＴＲＵＳＴ法为非特异性抗体试验，非特异性抗体是具有抗
体性质的反应索，不是螺旋体所产生的抗体，而是螺旋体破坏 人体组织过程巾所释放的物质间接引起的抗体，它不是终身存 在的。由于感染梅毒后磷脂抗体出现晚于特异性螺旋体，而晚 期梅毒及治疗后梅毒这类抗体有可能转阴，据报道ＴＲＩＪＳＴ在 Ｉ期梅毒、Ⅱ期梅毒的检出牢高达９６％～１００％。因此这类试验 不适于Ⅲ期梅毒，治疗后梅毒对潜伏期梅毒和神经性梅毒也不 敏感［４１。 （勤ＴＰＰＡ使用梅毒螺旋体毒株制成抗原，检测血清中的梅
非特异性免疫应答
定义与特点
定义
非特异性免疫应答是机体在长期 进化过程中形成的天然防御功能 ，针对多种病原体的入侵具有普 适性。
特点
非特异性免疫应答具有快速、非 特异性的特点，能够在病原体入 侵初期迅速启动防御机制，防止 感染扩散。
非特异性免疫应答的重要性
01
02
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防止感染扩散
非特异性免疫应答能够在 病原体入侵初期快速反应 ，有效遏制感染扩散，降 低疾病严重程度。
负向调节
负向调节机制能够抑制过度激活的非特异性免疫应答，防止对正 常组织造成损伤。
信号转导
炎症信号转导
炎症信号转导通路能够将病原体的刺激转化为细胞内的信号，触发 非特异性免疫应答的激活。
细胞因子信号转导
细胞因子信号转导通路能够调控固有免疫细胞的活化、增殖和分化 ，影响非特异性免疫应答的强度和方向。
自身免疫性疾病治疗
深入探讨非特异性免疫应答在自身免疫性疾病中的作用，为开发新型治疗方法和药物提供 理论支持。
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基因敲除与转基因技术
基因敲除
通过基因敲除技术，可以构建特定基因敲除的动物模型，用于研究特定基因在非 特异性免疫应答中的作用。基因敲除技术包括同源重组、胚胎干细胞技术等。
转基因技术
通过转基因技术，可以将特定基因转入动物体内，以研究其在非特异性免疫应答 中的功能。转基因技术包括显微注射、病毒载体转染等。
细胞培养与分离技术
细胞培养
通过将免疫细胞在体外培养，可以模拟体内环境，研究非特异性免疫细胞的生 长、分化、功能等。细胞培养技术可用于分离和鉴定不同类型的非特异性免疫 细胞，并研究其在不同刺激条件下的反应。
细胞分离
通过特定的分离技术，如密度梯度离心、流式细胞术等，可以从组织或血液中 分离出非特异性免疫细胞，如巨噬细胞、树突状细胞等，用于后续的实验研究 。
免疫学技术概论测试题
1.可用用于抗原定量量测定的沉淀试验有哪些？列列举两个并简述其原理理。 2.简述凝集试验的类型及其原理理用用途。 3.比比较凝集试验与沉淀试验的区别。 4.可溶性抗原都哪ຫໍສະໝຸດ 。 5.简述间接凝集抑制试验的原理理。
参考答案：
第四章 免疫学技术概论
一一、名词解释
1.是指一一个抗体分子子与整个抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接向关。亲合力力力表现 为多价优势。 2.大大多数抗体为二二价，大大多数抗原为多价，只有两者比比例例适当时，才能形成彼此连接的大大复 合物。而而抗原过多或抗体过少时，形成的单个复合物不不能被肉肉眼所⻅见。 3.因反应体系中抗原过多或抗体过多出现抑制可⻅见反应的现象。 4.用用于检测抗原或抗体的体外免疫学技术，又又称免疫检测技术。 5.抗体的抗原结合位点与相应的抗原决定簇之间的结合强度，它是抗原抗体间固有的结合力力力。 6.与细胞免疫有关的各种检测技术，包括对免疫细胞、细胞因子子的检测及功能分析。 7.特异性：抗原与抗体的结合具有高高度特异性。 交叉性：两种天然抗原之间含有部分相同抗原或表位，或表位构象相似，则可发生生交叉反 应。 8.当抗原抗体发生生最强的结合反应，出现可⻅见反应时的抗原和抗体的适当比比例例。 9.制备与免疫检测有关制剂的技术，包括抗原制备、抗体纯化和抗体标记等技术。 10.抗体的抗原结合位点与相应抗原决定簇间的结合强度，是抗原抗体间固有的结合力力力。 11.一一个抗体分子子与整个抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关。
6.间接凝集试验通常用用于检测抗体，间接凝集抑制试验通常用用于检测抗原。（ ） 7.试管发是一一种定性实验，用用以检测待测血血清中是否存在相应抗体和相应抗体的效价。() 8.间接凝集反应的优点有敏敏感性高高，比比直接凝集反应敏敏感 2～8 倍，以及特异性强。（） 9.协同凝集实验是利利用用葡萄球菌 A 蛋白白（SPA）与特异性抗体相结合再来检验未知抗原的方方 法。（） 10.桥梁梁凝集实验用用于检测不不完全抗体。不不完全抗体与抗原结合出现凝集反应。( ) 11.在琼脂凝胶扩散试验中，抗体浓度越高高，白白色色沉淀线离其所在孔越远，甚至至不不出现沉淀线。 （） 12.乳胶凝集试验既能检测抗体又又能检测抗原，快速简便便，保存方方便便，但准确度很低。 （） 13.可用用血血凝试验和血血凝抑制试验检测和鉴定病毒，血血凝抑制试验也可用用于检测病毒特异性 抗体。 （） 14.免疫电泳法可用用于抗体成分分析和抗原纯度鉴定。（） 15.任意颗粒性抗原和可溶性抗原均可产生生凝集试验。 16.直接凝集试验中的玻片片法是一一种定量量试验，而而试管法是一一种定性试验。 17.间接凝集抑制反应中一一共用用到三种颗粒分别为：致敏敏颗粒、抗体和载体。 18.SPA 是葡萄球菌的特异性表面面抗原，能与多种哺乳动物 IgG 分子子的 Fab 片片段结合，Fc 片片 段暴暴露露在外，保持抗体活性，当葡萄球菌 SPA-Ab 与相应抗原结合时，可产生生凝集反应。
补体实验报告
补体实验报告篇一：补体结合试验第二节补体结合试验补体结合试验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。
早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。
这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及hla的检测和分析中也有应用。
一、类型及原理自身免疫性溶血，如果有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜攻击复合物（membrane attack complex），它可以直接攻击红细胞膜，导致红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。
而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。
该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。
反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。
如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。
如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性（图14-2）。
因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
图14-2补体结合试验示意图二、试验方法补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。
目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。
炎症的实验报告
炎症的实验报告炎症的实验报告引言：炎症是机体对外界刺激的一种非特异性防御反应，是生物体自身免疫系统的一种保护机制。
炎症反应的发生与机体的免疫系统密切相关，而炎症反应的调节对于维持机体的正常功能至关重要。
本实验旨在研究炎症反应的发生机制以及炎症对机体的影响。
实验一：炎症的诱导首先，我们使用小鼠作为实验动物，将其分为实验组和对照组。
实验组小鼠接受一种炎症诱导剂的注射，而对照组小鼠则注射生理盐水。
注射后，我们观察小鼠的行为变化以及体温的变化。
实验结果显示，实验组小鼠在注射后不久出现了明显的行为异常，包括活动减少、食欲下降等。
与此同时，实验组小鼠的体温也明显升高，说明炎症反应的发生导致了机体的生理变化。
实验二：炎症的病理变化为了进一步了解炎症对机体的影响，我们进行了病理学检查。
我们选择了实验组和对照组小鼠的肝脏和肺组织进行病理切片，并进行了组织学染色。
结果显示，实验组小鼠的肝脏和肺组织中出现了明显的炎症反应。
炎症细胞的浸润、组织细胞的肿胀以及组织结构的破坏都可以在实验组小鼠的组织切片中观察到。
而对照组小鼠的组织切片则没有出现这些病理变化。
实验三：炎症对机体免疫系统的影响为了进一步研究炎症对机体免疫系统的影响，我们进行了免疫细胞的计数实验。
我们选择了实验组和对照组小鼠的外周血进行细胞计数，并分析不同类型免疫细胞的比例。
结果显示，实验组小鼠的外周血中，中性粒细胞的数量明显增加，而淋巴细胞的数量则明显减少。
这表明炎症反应的发生导致了机体免疫系统的紊乱，使得某些免疫细胞的数量发生了变化。
讨论：通过以上实验，我们可以得出以下结论：炎症反应的发生导致了机体的生理变化，包括行为异常和体温升高。
炎症反应还会引起病理变化，包括组织炎症细胞的浸润、组织细胞的肿胀以及组织结构的破坏。
此外，炎症反应还会对机体免疫系统产生影响，使得某些免疫细胞的数量发生变化。
这些实验结果对于我们进一步理解炎症反应的发生机制以及炎症对机体的影响具有重要意义。
外-斐反应
外斐氏反应又称变形杆菌凝集试验，用于诊断流行性斑疹伤寒、恙虫病等急性传染病。
一、外斐氏反应可以检查什么病？
1、外斐氏反应是一种非特异性凝集反应。
外部试验用于诊断急性传染病，如恙虫病、立克次体病和流行性斑疹伤寒。
2、立克次体的诊断方法有很多，而威非尔试验存在无法分型、特异性差等缺点。
但由于抗原易得易保存，操作简单，外菲尔试验仍是国内实验室最常用的血清学试验。
3、发病后4~6天首次出现外凝血，5个月后基本消失。
可取两三份血清样本，抗体滴度升高4倍以上，有诊断意义。
二、外斐氏反应的临床表现有哪些？
1、急性发作、寒战或寒战、高烧、全身疼痛、疲劳、食欲不振和其他急性感染症状。
2、面部潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
3、在病程的第二周，病情往往加重，可能出现情感淡漠、听力障碍、谵妄甚至惊厥或昏迷、脑膜刺激征或心肌炎，或咳嗽、胸痛、气短等肺炎症状。
三、外斐氏反应的诊断依据是什么？
1、流行病学资料：发病前3周内有恙螨野外或孳生环境的啮齿动物暴露史。
2、临床表现：突起寒战，持续高热，结膜充血，皮疹，淋巴结肿大，特别是局部淋巴结明显肿胀压痛，肝脾肿大。
体表焦痂或溃疡是诊断的最有价值的特异性征象。
3、实验室检查：血象白细胞正常或减少，分类左移，血小板可能减少。
补体结合试验阳性，间接免疫荧光试验双份血清效价升高4倍以上，单份血清效价达到1:800，或小鼠腹腔接种分离出恙虫病立克次体，均可确诊。
非特异性染色的名词解释
非特异性染色的名词解释非特异性染色是一种常见的实验技术，用于鉴定细胞或组织中的特定分子或结构。
它是通过与试剂反应特定分子或结构而发生颜色变化的技术，因此被广泛运用于细胞生物学、病理学和分子生物学研究中。
在非特异性染色技术中，常用的试剂有荧光染料、色素染料和特定抗体。
荧光染料是一类特殊的分子，它们能够在受到特定波长光的激发下发出特定颜色的荧光。
而色素染料则是一些有机化合物，当它们与特定物质发生化学反应时，会产生颜色变化。
特定抗体是生物学研究中常用的工具，它们能够与特定蛋白质或其他分子结合，并标记出它们的存在。
非特异性染色的原理就是在实验条件下，使试剂与目标分子或结构发生反应，形成可见的颜色变化或荧光信号。
这些试剂不一定能够特异性地检测目标物质，也就是说，它们可能与其他分子或结构发生相同或相似的反应。
然而，通过合理设计实验和选择试剂，可以使非特异性染色方法在许多研究领域中有广泛的应用。
例如，在细胞生物学研究中，染色技术可以用来鉴定细胞中的不同亚细胞结构，如细胞器、核酸和蛋白质分布。
荧光染料比色素染料更常用于这些应用，因为荧光染料具有较高的特异性和灵敏度。
通过与特定抗体结合，荧光染料可以用来检测并定位特定蛋白质在细胞中的存在。
通过观察染色后的细胞，科学家可以对细胞结构和功能有更深入的了解。
在病理学中，非特异性染色也被广泛应用于诊断和研究。
病理学家使用染色技术来鉴定和定量组织中的病理变化。
例如，免疫组化染色法可以用来检测和定位肿瘤标记物，并帮助确定肿瘤类型和病情。
此外，非特异性染色方法还可以用于研究组织中的细胞增殖、凋亡和发炎等生理和病理过程。
除了在细胞生物学和病理学中的应用，非特异性染色还可以用于分子生物学研究中的许多领域。
例如，DNA染色可以用来检测和定位细胞核中的DNA，从而帮助验证分子克隆的成功与否。
蛋白质染色则可以用来检测和定量蛋白质的表达水平，并研究蛋白质相互作用和功能。
总之，非特异性染色是一种重要的实验技术，在生物科学研究中发挥着重要作用。
炎症实验报告分析
炎症是机体对损伤、感染、异物侵入等刺激的一种非特异性防御反应。
炎症反应涉及多种细胞、介质和分子，包括白细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、细胞因子等。
为了研究炎症反应的机制和药物作用，本实验采用二甲苯诱导小鼠耳部炎症模型，观察糖皮质激素对炎症的治疗效果。
二、实验目的1. 观察糖皮质激素对二甲苯所致小鼠耳部水肿及毛细血管通透性的影响。
2. 分析糖皮质激素在炎症治疗中的作用机制。
三、实验方法1. 实验动物：选用6只健康的昆明小鼠，随机分为两组，每组3只。
2. 实验分组：实验组给予地塞米松，对照组给予生理盐水。
3. 实验步骤：（1）将小鼠随机分为实验组和对照组，每组3只。
（2）实验组腹腔注射地塞米松，剂量为0.2ml/10g，对照组腹腔注射等量生理盐水。
（3）30分钟后，将二甲苯均匀涂于小鼠左耳前后两面，记录时间。
（4）致炎后30分钟，颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用打孔器分别在同一部位打下耳片，称重，记录。
（5）计算肿胀程度：(左耳片重量-右耳片重量)/右耳片重量×100%。
四、实验结果1. 实验组小鼠左耳片重量与右耳片重量之差明显小于对照组，说明地塞米松能够减轻小鼠耳部炎症反应。
2. 实验组小鼠左耳片重量与右耳片重量之差与生理盐水组相比有显著差异，表明地塞米松对炎症具有显著的治疗作用。
3. 实验组小鼠毛细血管通透性较对照组显著降低，说明地塞米松能够降低毛细血管通透性，减轻炎症反应。
1. 糖皮质激素具有抗炎、抗过敏、抗毒素、抗休克等作用。
本实验结果表明，地塞米松能够有效减轻小鼠耳部炎症反应，说明糖皮质激素在炎症治疗中具有重要作用。
2. 地塞米松能够降低毛细血管通透性，减轻炎症反应。
这可能与糖皮质激素抑制炎症介质释放、减少炎症细胞浸润、抑制细胞因子生成等因素有关。
3. 实验过程中，部分小鼠出现应激反应，如食欲减退、活动减少等。
这可能是因为实验过程中对小鼠进行了手术操作，导致其应激反应。
在今后的实验中，应尽量减少对实验动物的应激刺激，提高实验结果的可靠性。
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▲ 物理屏障
▲ 化学屏障 ▲ 微生物屏障 2、血脑屏障 3、血胎屏障
（二）固有免疫细胞
吞噬细胞、NK细胞、 NK1.1+ T细胞T细胞、 B-1细胞 （详见p89 第九章）
（三）固有免疫效应分子
补体、细胞因子、防御素、溶菌酶、乙型溶素
补体的溶血作用
概念 (complement) 存在于正常人或动物血清及组织液中 一组与免疫相具有酶活性和自我调解作 用的球蛋白质。因它们能协助和补充特 异性抗体介导的免疫溶菌、溶血作用， 故称为补体。它是由30种成分组成的复 杂系统，部分成分遇热不稳定（56℃加 热30分钟即可灭活）。 三条激活途径的比较：(page 55)
形态及 镜下特征
a. 胞体大、不规则，有伪足，边 缘不整齐，胞内见不规则的大核 b. 胞浆内见吞噬的鸡红细胞呈椭 圆形、淡紫红色且有核
a. 胞体较小，边缘较整齐， 胞内见深紫色的分叶核及 淡红色的中性颗粒 b. 胞浆内见被吞噬的细菌 团呈紫色
功能
参与非特异及特异性免疫
参与非特异性免疫
单核细胞
巨噬细胞
2%SRBC SRBC溶血素 补体 盐水 试管 吸管
1瓶（30ml）/列 1支（2.5ml）/2组 1支（2.5ml）/2组 1瓶（30ml）/列 3根/组(做好标记) **试管及吸管的拿捏方法
豚鼠图
实验步骤
（如下图）加样 管号 2%SRBC 1 2 3 0.5 0.5 0.5 SRBC溶血素 0.5 0.5 补体 0.5 0.5 盐水 0.5 1.0 1.0 结果
补体三条激活途径及共同末端效应全过程
本次实验涉及的原理
绵羊红细胞（SRBC）+SRBC溶血素——Ag-Ab（IC）
识别：与免疫复合物抗体（ Ig ）中补体结合位点结合后 其分子构象发生改变，致C1r及C1s被激活
活化： C4 、 C2 在激活 C1 的作用下分解产生 C4b 及 C2b ， 两者组成 C42b ，它为 C3 转化酶 ——C3 分解产生 C3b ，与 C42b结合形成C423（C5转化酶）——C5分解产生C5b 膜攻击复合物形成： C5b 进一步与 C6 、 C7 、 C8 、 C9作用 后，最终产生 C5b6789 （即膜攻击复合物），使 SRBC 穿 孔，发生溶血反应。
巨噬细胞伪足包裹异物示意图
中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
中 性 粒 细 胞 形 态
单 核 细 胞 形 验原理、实验结果、结果分析
实验一 非特异性免疫
[实验内容]：
补体的溶血作用（操作） 大小吞噬细胞的吞噬作用（示教）
人体免疫系统
屏障结构（如皮肤、粘膜 血脑屏障、胎盘屏障） 吞噬细胞 体液因素(如补体、溶菌酶、 乙型溶素等） 细胞免疫 体液免疫
非特异性
人体 免疫
免疫 特异性
免疫
一、固有免疫的组成
（ 一）组织屏障及其作用
1、皮肤黏膜及其附属成分的屏障作用
膜攻击复合物（mebrane attack complex, MAC)结构示意图
膜攻击复合物电镜观测示意图
实验一 补体的溶血作用
原理
• SRBC（Ag）+ 溶血素（ Ab） Ag-Ab（IC）
• 识别： C1q • 效应：溶血
补体结合位点
• 活化：膜攻击复合体（MAC）形成
实验材料：
37℃水浴15-30分钟,观察结果 1号管中SRBC溶解,液体由混浊变为澄清\透明 **实验结束后吸管置废液缸,试管置铁蓝框
大小吞噬细胞 的比较
大吞噬细胞 (macrophage,monocyte) 小吞噬细胞
(neutrophile granulocyte)
细胞类型
组织中巨噬细胞和单核细胞
血液中中性粒细胞