Hela细胞传代培养
Hela细胞转染实验报告
Hela细胞的传代培养及生长周期观察HE染色观察高学敏生36 2013012322一、实验背景（一）关于Hela细胞Hela细胞是源自美国妇女Henrietta Lacks的子宫颈癌细胞，取于1951年，属于增殖型表皮癌细胞。
在体外培养条件下，经过筛选，目前实验使用的Hela 细胞为无限细胞系，在适宜条件下可以无限分裂，不会衰退，可以连续传代。
经过六十多年，Hela细胞已经被培养出多个细胞系，它几乎成为细胞生物学中的一种“模式生物”。
似癌细胞的特征，其核型已非二倍体型，而是非整数倍体（aneuploid）。
2013年Andrew Adey等人在Nature发表的研究表明，Hela细胞的基因组相当稳定，可将不同细胞系区分开的点突变和基因拷贝数改变相当少1，这是Hela细胞的一大特点。
（二）原代培养、传代培养、衰退进行细胞体外培养前，最初需要从活体中获得细胞。
从体内获得细胞进行的首次培养为原代培养。
当原代培养细胞增殖达到一定密度后，需要做继代培养，被称为传代培养。
细胞在体外培养过程中的群体生存状况与在完整机体内的生存与衰老死亡基本一致；本次所做的Hela细胞实验为Hela细胞传代实验，即将已长到相当密度的原培养皿中的Hela细胞转移至新培养皿中培养。
在原代培养期，细胞增殖能力弱，第一次传代后，部分细胞可以重新贴壁，此时细胞增殖能力增强；另外亦是为了获得更多的细胞，因此进行传代操作。
培养的组织细胞在体外可以反复传代十几次左右，若传代十几次后细胞进入衰退阶段并死亡，则该细胞系称为有限细胞系；若在衰退阶段，部分细胞的遗传特性发生改变，可以无限传代，则该部分细胞将发展为无限细胞系。
Hela 细胞系即为无限细胞系，已历经六十多年的传代培养。
（三）贴附型细胞与悬浮型细胞在体外培养时，根据细胞能否贴附于支持物上分为贴附型细胞和悬浮型细胞两类。
大多数细胞系属于贴附型细胞，血液中的白细胞和某些癌细胞属于悬浮型细胞。
Hela细胞属于贴附型细胞，它需要贴附于支持物上才可能存活并增殖。
Hela细胞传代培养操作步骤
Hela细胞传代培养操作步骤1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。
观察时拧紧盖子。
2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。
3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。
不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个，置于架子上。
4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。
放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
5．取待传代的细胞。
打开versene，用酒精灯外焰烧。
烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。
把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。
6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。
（加versene主要是为了将旧培养基洗去）。
在离心管中间部分将液体加入。
吸液体和加液体时都不要对着细胞。
7．打开胰酶，然后将versene弃掉。
换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。
加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。
8．将细胞放入37度孵箱。
放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。
使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。
别忘了用旧培养基中和。
9．取细胞，镜下观察消化情况。
消化程度合适之后（细胞变圆，但不漂起），用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。
用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。
然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。
10．吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。
11．细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。
换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。
12．擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。
不要把枪伸到离心管内。
13．吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。
《HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》范文
《HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》篇一一、引言HeLa细胞，以其发现者和研究者Henrietta Lacks的名字命名，是生物学和医学研究中的关键模型。
该细胞最初来自Lacks女士的子宫颈癌细胞，由于具有持续分裂的特性，成为了细胞学、遗传学和药物研发等领域的研究工具。
然而，在长期传代过程中，这些细胞所发生的基因组突变却引发了人们对遗传不稳定性及其相关疾病的深刻思考。
本文将针对HeLa细胞在长期传代过程中的基因组突变动态变化进行详细分析。
二、HeLa细胞的起源与传代HeLa细胞最初由George Gey在1951年从Lacks女士的宫颈癌肿瘤中分离得到。
从最初的起始培养到今天的实验中，已经进行了大量的传代和筛选。
长期的细胞培养不仅改变了其生长环境，同时也影响了细胞的基因组结构。
三、基因组突变的类型与机制在长期传代过程中，HeLa细胞的基因组发生了多种类型的突变，包括点突变、插入/删除突变、染色体变异等。
这些突变主要由于DNA复制错误、DNA损伤修复机制异常、端粒功能异常等因素引起。
此外，环境因素如培养基的成分、温度、pH值等也可能影响基因组突变的类型和频率。
四、基因组突变的动态变化在HeLa细胞的长期传代过程中，基因组突变的发生率随传代次数的增加而增加。
这种动态变化主要表现在以下几个方面：1. 突变累积：随着传代次数的增加，HeLa细胞中发生的突变数量逐渐累积，形成各种突变类型。
2. 突变的种类：不同的基因突变可能具有不同的生物功能，影响细胞的生长、分裂和功能表达。
某些突变的累积可能导致细胞的生长异常和疾病发生。
3. 突变的选择性：在长期传代过程中，部分具有优势的突变可能被保留下来并继续传递下去，而其他不利的突变则可能被淘汰。
这种选择性的过程导致了基因组的动态变化。
五、基因组突变对HeLa细胞的影响基因组突变对HeLa细胞的影响是多方面的：1. 细胞生长：基因组突变可能影响细胞的生长速度和生长模式，导致细胞在传代过程中出现异常增殖或衰老等现象。
细胞传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本操作流程。
2. 熟悉细胞传代培养过程中的注意事项。
3. 了解细胞传代培养在生物科学研究中的应用。
二、实验原理细胞传代培养是指将已经生长到一定阶段的细胞，通过特定的方法进行分离、洗涤、消化、计数和稀释等步骤，将细胞转移到新的培养容器中继续培养的过程。
细胞传代培养是维持细胞生长、扩大细胞数量和保持细胞特性的重要手段。
三、实验材料1. 细胞：HeLa细胞2. 培养基：DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、10%FBS、PBS缓冲液、酒精4. 仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、移液枪、培养瓶/皿、吸管等四、实验步骤1. 准备阶段（1）将HeLa细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液轻轻洗涤一次，去除残留的培养基。
（2）准备胰蛋白酶工作液，将其置于37℃水浴中预热。
（3）准备含有10%FBS的培养基，将其置于37℃水浴中预热。
2. 分离细胞（1）用移液枪吸取适量胰蛋白酶工作液，滴加到细胞培养皿中的细胞层上。
（2）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中消化2-3分钟。
（3）倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆且亮时，加入等体积含有10%FBS的培养基终止消化。
（4）用移液枪轻轻吹打细胞，使其成为细胞悬液。
3. 计数（1）取适量细胞悬液，使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。
（2）根据计数结果，调整细胞密度至所需的浓度，一般为每毫升105-106个细胞。
4. 传代（1）向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液，并轻轻混匀。
（2）离心管离心，在1500 rpm速度下离心3-5分钟，以沉淀细胞。
（3）弃去上清液，保留沉淀的细胞。
（4）加入适量的新鲜培养基，将细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移到新的培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
五、实验结果1. 成功完成细胞传代培养，观察到细胞在新的培养瓶中继续生长。
2. 细胞生长状态良好，细胞密度符合预期。
《Hela细胞传代培养》课件
细胞数过低
细胞数量太少，可能是由于接 种量太少、营养不足或培养时 间太长等原因导致。可以通过 增加细胞数或更改营养物质来 解决此问题。
将细胞冻存存储，需要在恰当的时机进行复苏。
2 细胞的染色体分析技术
可以使用荧光原位杂交法、karyotyping和CGH等技术来分析细胞的染色体。
3 病毒感染实验技巧
可用于研究病毒的生物学特性、宿主针对病毒的反应等多个方面。
Hela细胞传代培养的应用领域
癌症研究
• 研究癌细胞 • 开发新的抗癌药物 • 探究癌症的发病机制
基因工程
• 研究基因功能 • 进行基因编辑实验 • 疾病的基因诊断和治疗
药物筛选
• 筛选对癌症具有杀伤 力的药物
• 筛选开发新药物的唯 一模型
• 提高药物筛选效率
总结和展望
总结
Hela细胞作为医学研究中最常见的细胞类型 之一，被广泛应用于生命科学领域。
展望
随着技术水平的不断提高，Hela细胞在人类 疾病研究、药物开发等领域的应用前景将广 阔且具有无限潜力。
《Hela细胞传代培养》 PPT课件
欢迎来听我的《Hela细胞传代培养》课程。本课程将会涵盖Hela细胞的来源 和特点，以及传代培养过程、应用领域、实验技巧和常见问题等。
Hela细胞的来源和特点
来源
Hela细胞是从美国Henrietta Lacks的宫颈癌细胞中分离出来的。这些细胞于1951年首次分 离出来，并被广泛应用于医学领域。
特点
Hela细胞具有很高的无限分裂能力和稳定的染色体组成，是许多细胞与分子生物学研究的 理想材料。
应用
这些细胞在癌症、病毒学、基因工程、药物筛选等领域都得到了广泛的应用。
《2024年HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》范文
《HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》篇一一、引言HeLa细胞，由美国细胞生物学家乔治·盖伊·海拉所分离并成功培养，是全球医学研究中应用最广泛的细胞系之一。
自其首次成功培养至今，已通过无数次的传代和分裂，为生物学、医学和遗传学等领域的研究提供了丰富的实验材料。
然而，随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因组动态变化日益明显，对于这一过程的研究具有重要的理论和实践价值。
本文旨在探究HeLa细胞在长期传代过程中基因组突变的动态变化，以及其背后的科学机制和影响。
二、传代过程中的基因组突变在长期的传代过程中，HeLa细胞的基因组发生了显著的突变。
这些突变包括点突变、插入/删除突变、染色体变异等。
这些突变不仅在数量上有所增加，而且在类型上也呈现出多样性。
这些突变可能影响细胞的生长、增殖、分化等生物学特性，进而影响细胞的表型和功能。
三、基因组突变的动态变化在传代过程中，基因组突变的动态变化表现为突变频率和类型的改变。
随着传代次数的增加，点突变和染色体变异的发生频率逐渐增加。
此外，不同类型的突变在传代过程中的比例也有所变化。
这些动态变化可能与细胞适应环境压力、维持自身稳定性的机制有关。
四、影响基因组突变动态变化的因素影响HeLa细胞基因组突变动态变化的因素包括传代环境、遗传背景、随机事件等。
传代环境的变化可能影响细胞的生长和增殖速度，从而影响基因组的稳定性。
遗传背景的差异可能导致细胞对环境变化的敏感度不同，从而影响基因组的突变率。
此外，随机事件如DNA复制错误、基因组不稳定等也可能导致基因组的突变。
五、基因组突变对HeLa细胞的影响基因组的突变对HeLa细胞的影响是多方面的。
首先，这些突变可能影响细胞的生长和增殖速度，导致细胞的生长曲线发生变化。
其次，基因组的突变可能影响细胞的表型和功能，使细胞在形态、结构和功能上发生改变。
此外，这些突变还可能影响细胞的分化、凋亡等生物学过程。
这些改变可能导致HeLa细胞具有更强的适应性，更适用于各种生物学研究的需求。
Hela细胞的传代培养
利用Hela细胞进行药物筛选和毒性测试，评估药物对肿瘤细胞的抑 制作用和安全性。
肿瘤免疫治疗研究
利用Hela细胞研究肿瘤免疫应答机制，为肿瘤免疫治疗提供新的策 略和靶点。
基因治疗与细胞治疗
利用Hela细胞作为载体或靶细胞，开展基因治疗和细胞治疗的研究， 为遗传性疾病和肿瘤等疾病的治疗提供新途径。
Hela细胞的传代培养
目录
• 引言 • Hela细胞的传代培养过程 • Hela细胞传代培养的注意事项 • Hela细胞传代培养的应用 • 未来展望
01 引言
背景介绍
01
Hela细胞，也称为海拉细胞，是 一种源自子宫颈癌的细胞系，是 医学和生物学研究中广泛使用的 细胞模型。
02
Hela细胞的传代培养是维持其生 长和活性的重要手段，对于研究 癌症、病毒、药物筛选等领域具 有重要意义。
记录细胞生长曲线
通过绘制细胞生长曲线，了解细胞的生长规律和倍增时间。
观察异常情况
如发现细胞出现死亡、变形、颜色变化等异常情况，应及时采取 措施处理。
04 Hela细胞传代培养的应用
生物学研究
细胞生物学
Hela细胞是研究细胞增殖、分化、凋亡等基本生物学过程的良好模型，有助于深入了 解细胞生命活动的机制。
细胞培养环境的维持
温度
细胞生长需要稳定的温度环境，一般维持在37°C。
湿度
湿度过高会导致细菌滋生，湿度过低则会导致细胞干燥。
气体环境
细胞培养瓶内的气体环境需保持95%空气(细胞代谢必需的)和5% 的${CO}_{2}($维持培养基的酸碱度)。
细胞的观察与记录
观察细胞的生长状态
通过显微镜观察细胞的形态、密度和生长速度，判断细胞的生长 状态。
《2024年HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联》范文
《HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关联》篇一一、引言HeLa细胞作为人类肿瘤细胞系中研究最为广泛的细胞模型之一，在生物医学研究中有着不可替代的地位。
在长时间的传代过程中，HeLa细胞的基因组与转录组发生了一系列动态变化，这些变化对于理解细胞生长、分化、衰老以及疾病发生等生物学过程具有重要意义。
本文旨在探讨HeLa细胞长期传代过程中基因组与转录组动态变化的关系，为相关研究提供理论依据。
二、HeLa细胞的特点与长期传代背景HeLa细胞，是由一名宫颈癌患者的组织样本培养而成的肿瘤细胞系，自上世纪50年代问世以来，由于其独特的性质，成为科研工作者进行各种研究的热门选择。
这种细胞的复制能力强大，可在体外长期稳定地生长与分裂，并且在传代过程中保持相对稳定的遗传特性。
三、基因组动态变化在HeLa细胞长期传代过程中，基因组动态变化主要表现为遗传物质的不稳定性和突变积累。
一方面，由于复制错误、染色体断裂和重组等机制，导致基因组中碱基的替换、插入和删除等突变；另一方面，由于端粒的缩短和端粒酶的激活等机制，使得染色体数目和结构发生改变。
这些变化对细胞的生长、分化以及功能发挥产生深远影响。
四、转录组动态变化转录组是研究基因表达水平的重要手段。
在HeLa细胞长期传代过程中，转录组的动态变化主要表现为基因表达模式的改变。
这种改变可能与细胞在生长、衰老、适应环境等方面产生的各种调控机制有关。
通过RNA测序等技术手段，我们可以检测到基因表达量的变化，以及基因之间的相互作用和调控关系的变化。
五、基因组与转录组之间的关联在HeLa细胞长期传代过程中，基因组与转录组之间存在着密切的关联。
一方面，基因组的突变和不稳定性会影响基因的表达水平；另一方面，基因表达模式的改变也会对基因组的稳定性产生影响。
例如，某些突变可能导致某些基因的表达水平上升或下降，进而影响细胞的生长和功能。
而基因表达的变化又可能产生新的表型或改变细胞的适应性。
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Hela细胞传代培养
Hela细胞传代培养
实验目的：掌握动物细胞培养的基本原理和方法。
实验用具：每组用具（移液枪一把，一盒枪头，长吸管一包（4-6根），培养瓶1个【4－8人为一组，看细胞数量来定，传代比例1；2最多1：3】。
实验药品：0.25％胰酶，D－Hanks，1640培养基
实验原理：
HeLa 是Henrietta Lacks的简称，Henrietta Lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
实验前的准备:
RPMI-1640培养粉 1袋
碳酸氢钠 2.0 g
青、链霉素各100单位／毫升加三蒸水至 1000ml, 过滤除菌。
调节pH值至7.2临用前加血清（终浓度 10％）
消化液的配置：
胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用灭菌的D－hanks配置。
配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％。
用滤器过滤除菌
D－hanks配方:
氯化钠 8.0g
氯化钾 0.4g
磷酸氢二钠（Na2 HPO ·7H2 O） 0.06g
磷酸二氢钾0.06g
NaHCO3 0.35 g
EDTA二钠 0.2 g
酚红 0.02 g
三蒸水定容到1000毫升。
PH调整到8.0。
血清的准备与添加
●优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀
物，无细菌、支原体、病毒污染。
●血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃水
浴，30 分钟
培养用具的准备：
所用器具高压灭菌，D-hanks缓冲液。
酶液，培养液。
实验步骤：
1.打开超净台，把实验中所需用具放到超净台上。
2.从冰箱中取出0.25％胰酶、培养基。
可以把胰酶和培养基的瓶盖拧松备用。
3.取待传代的细胞，倒掉旧的培养基，移液枪加入胰酶2ml（加入的量以覆盖整个细胞培养面为宜）。
轻轻摇动
4. 1-2分钟后迅速将消化液倒掉。
注意：此步消化时间需要根据每次培养的细胞不同状态灵活掌握，没有固定时间。
消化时间长短是实验成败的关键，宁可短消化，不能过消化。
否则细胞会变死。
在倒置显微镜下观察，当细胞质回缩，胞间间隙加大为消化适宜。
5．取培养基5 ml加入培养瓶终止消化，轻轻摇动，如果瓶壁依然有细胞未脱落，用长吸管反复轻轻吹打培养瓶壁，制备细胞细胞悬液。
吹打的部位均匀，从上到小，从左到右，顺序进行吹打，保证各个部位的培养细胞均能吹打到，成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停止吹打。
吹打时用力不要过猛，尽量不要出现气泡，以免损伤细胞。
6．至所有细胞从培养瓶壁脱落下来，轻轻摇匀，
然后按照1：2或者1；3均分，每个培瓶（50ml）补齐到5 ml培养基，放入CO2培养箱中培养，放入之前瓶盖适当拧松，酒精喷雾消毒瓶盖和瓶身。
7．待培养基（本身为红色），当pH值降低，培养基呈偏淡红色时，一般2天以后，将旧的培养基吸掉，更换新鲜培养基继续培养。
注意：动物细胞特别容易污染，所有环节定要小心消毒。