鸭绿江斑鳜中真鲷虹彩病毒的分离与鉴定

合集下载

鳜高效养殖技术与虹彩病毒病的诊治

2、3、4、6号塘加州鲈产量分别为10750、11750、12600、9500千克，亩均产量分别为1654、1567、1482、1900千克。

2.效益情况2、3、4、6号塘加州鲈的收入分别为313900、343100、367920、277400元。

试验塘3、4号亩均利润分别为6980、6991元，对照塘2、6号亩均利润分别为3177、5580元，具体情况见表2。

试验塘、对照塘平均支出消毒剂、糖蜜、净水剂、中草药等分别为3125、4696元/亩，试验塘比对照塘少支出1571元/亩。

试验塘、对照塘平均利润分别为6986、4222元/亩，试验塘比对照塘多收入2764元/亩。

试验塘饵料系数为1.99，对照塘饵料系数为2.19。

三、分析与讨论试验结果表明，试验塘亩利润比对照塘高65.4%，主要为水质改善导致的用药减少和饲料系数降低。

笔者认为“护料”养护了整个池塘的生物圈，试验塘的水比对照塘水要清爽很多；“护料”改善了水质，使饲料系数降低、用药减少。

鳜是我国优质名贵鱼，生性凶猛，以小型鱼虾为饵料，具有生长速度快、抗病力较强等特点。

随着人民对鳜的需求量逐渐上升，养殖规模也在快速扩大，目前鳜养殖过程中主要采取“预防为主、防治结合”的方法应对疾病，采用科学高效的养殖技术不仅可以提高鳜的产量，也是减少鱼病发生的常用手段。

本文根据鳜的养殖现状和笔者的实践，对如何科学养殖鳜商品鱼和病害防治进行了总结。

一、鳜高效养殖技术1.优化养殖池塘鳜养殖池塘为长方形，面积3～5亩，水深1.5～2.0米，沙泥质底，淤泥厚度15～20厘米。

池塘每年均需在年初进行清塘，池水排放后晒塘至少3天以上，并辅助人工翻土。

合理使用生石灰和土壤氧化剂，修复池塘土壤有助于鳜高效养殖。

2.加强水质监测，提高水体质量水质的好坏直接影响鳜苗种的成活和成鱼的健康。

鳜对水质要求较高，每天需注入适量新水，确保水质清新。

日常管理中，需要注意水质监测，加强培水工作，增加水体中的微量元素，提高水体中浮游植物含量，增加产氧能力，提高水体溶氧。

真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立

真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立袁向芬;石素婷;吕继洲;吴绍强【摘要】为建立一种检测真鲷虹彩病毒的环介导等温扩增(LAMP)方法,满足口岸、养殖场对该病的快速监测的需求,本研究比对分析了GenBank中公布的真鲷虹彩病毒基因组序列,筛选其主要衣壳蛋白MCP基因保守区序列,进行LAMP引物设计,建立了真鲷虹彩病毒LAMP检测方法.对扩增条件进行优化,确定最佳反应条件为62℃,45 min.灵敏度试验结果显示,该方法最低检测限为100拷贝/μL目的基因.特异性试验结果显示,该方法不与流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙病毒3型(FV3)、甲鱼虹彩病毒(STIV)发生交叉反应.结果表明,本研究建立的LAMP方法具有良好的敏感性和特异性.对5份疑似真鲷虹彩病毒感染的临床样品进行检测,发现检测结果与世界动物卫生组织(OIE)推荐的PCR方法检测结果符合率为100%.研究表明,本方法具有灵敏度高、特异性强,以及仪器设备简单、操作便捷、结果直观等优点,非常适合作为初筛手段,应用于养殖场、口岸等一线的疫病监测.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2018(035)001【总页数】5页(P95-99)【关键词】水生动物疫病;真鲷虹彩病毒;环介导等温扩增;快速检测【作者】袁向芬;石素婷;吕继洲;吴绍强【作者单位】中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京 100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京 100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京 100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京 100176【正文语种】中文【中图分类】S852.65真鲷虹彩病毒（Red sea bream iridovirus，RSIV）属于虹彩病毒科（Iridoviridae）、细胞肿大病毒属（Megalocytivirus）[1-2]。

该病毒于1990年首次在日本四国岛的人工养殖患病真鲷中被发现[3]，主要感染真鲷、花鲈、条石鲷等30余种海水鱼类[4-5]。

鱼类虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法[发明专利]

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1827778A [43]公开日2006年9月6日[21]申请号200510042129.X [22]申请日2005.03.02[21]申请号200510042129.X[71]申请人国家海洋局第三海洋研究所地址361005福建省厦门市大学路184号[72]发明人陈新华王小文 [74]专利代理机构厦门市首创君合专利事务所有限公司代理人张松亭[51]Int.CI.C12Q 1/68 (2006.01)权利要求书 1 页说明书 5 页附图 2 页[54]发明名称鱼类虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法[57]摘要本发明是通过对发病鱼排进行流行病及电镜形态学分析，引起大黄鱼、石斑鱼等致病的病原为虹彩病毒。

确定以虹彩病毒ATPase基因保守区序列作为扩增靶序列，设计合成了一对特异性引物和一条分子信标探针应用于对鱼类虹彩病毒的定量检测。

根据不同浓度梯度的阳性质粒制作的定量标准曲线可以看出，不同梯度定量模板数的对数值与Ct值之间有较好的相关关系，其相关系数为0.998；同时，该检测方法具有很高的灵敏度，最低能检测到70个病毒粒子。

对其他病毒以及LYCIV其他基因进行检测表明，该方法具有很好的特异性。

200510042129.X权利要求书第1/1页1、一种鱼类虹彩病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于选取虹彩病毒A T P a s e基因保守区序列作为P C R扩增的靶序列，设计合成特异性的引物和分子信标探针，对鱼类虹彩病毒进行定量检测。

2、根据权利要求1所述的一种鱼类虹彩病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于设计合成了以下引物对和分子信标探针：P1：5’-CGTCACTGGAATGTTCTGGT-3’P2：5’-TTGTCCACACATGTCTGGCT-3’5’-F a m-G C C A G C C G T C T A T A C A A C A C C T C A G G C T G G C-D a b c y l-3’ 3、根据权利要求1所述的一种鱼类虹彩病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于对大黄鱼、石斑鱼、美国红鱼、鲈鱼、真鲷等在内的鱼类虹彩病毒进行定量检测。

鳜鱼病毒病原的检出及组织病理分析

鳜鱼病毒病原的检出及组织病理分析
张奇亚;李正秋
【期刊名称】《水生生物学报》
【年(卷),期】1999(23)2
【摘要】经对患暴发性传染病的鳜组织及病变组织超微切片的电镜观察，在细胞质，核及间隙中都有病毒颗粒，对该病毒进行了分离提纯，这是一种直径约为２８０ｎｍ球形病毒，将粗提病毒液接种到培养细胞中，会引起细胞病变；病毒通过人工感染健康鳜，会引起鳜发病和死亡，对患病獗进行解剖和组织病理观察，表明病鳜的５种器官都发生了病变，研究结果表明分离的鳜病毒（ＳｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉＶｉｒｕｓ，ＳＣＶ）是引起鳜流４行的病
【总页数】1页(P151)
【作者】张奇亚;李正秋
【作者单位】中国科学院水生生物研究所;中国科学院水生生物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S941.41
【相关文献】
1.婴儿巨细胞病毒肝炎肝组织病原和病理检测 [J], 龚四堂;肖作源;董永绥;方峰
2.大鲵蛙病毒感染大鲵的动态病理损伤及病原的组织分布 [J], 刘丹;耿毅;汪开毓;余泽辉;陈德芳;欧阳萍;黄小丽;牟维豪;李亚军
3.鳜鱼病毒性暴发病原毒组织人工感染鳜鱼的研究 [J], 潘厚军;吴淑勤;等
4.杆状病毒性的皮下及造血组织坏死：对虾暴发性流行病的病原和病理学 [J], 样
晓玲;宋晓玲
5.锦鲤疱疹病毒感染鲤鱼的动态病理损伤及病原组织分布 [J], 何汶璐;李根;康慧敏;何嘉乐;杨壮志;阳瑞雪;汪开毓;耿毅;欧阳萍
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用

真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用赵玉然;岳志芹;谭乐义;刘荭;赵巍;梁成珠;史秀杰;徐彪;朱来华;何俊强【期刊名称】《渔业科学进展》【年(卷),期】2011(32)2【摘要】以真鲷虹彩病毒(Red-sea bream iridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Primer Express 3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR Green I实时定量PCR检测方法.将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.184 1gX+40.270,相关系数R2=0.996 9.熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃.该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性.利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析.%A sensitive and specific SYBR Green Ⅰ real-time PCR assay for the detection of red-sea bream iridovirus (RSIV) was established.The real-time PCR primers were designed according to the conserved region of major capsid protein (MCP) gene by using Primer Express 3.0 software.The RSIV MCP gene was inserted into pMD18-T vector to construct the recombinant plasmid.The resulted plasmid was serially diluted and used as the standards.The relationship between plasmid copy number(X)and Ct value was described as a standard curve: Ct=-3.184 lgX+40.270(with an R2 value of 0.996 9).The detection limit of the assay was 2.20×102 virus copiesper reaction.The assay showed specificity and could not be amplified with RSIV and epizootic haematopoietic necrosis virus (EHNV), lymphocystis disease virus (LCDV), frog virus 3 (FV 3) ,or soft-shelled turtle iridovirus (STIV).The Tm of the specific product was obtained as 82.5 ℃ through the melting curve analysis.This assay was applied in detecting whether the sea fish samples (stone flounder, turbot, and weever) of 84 batches were infected by RSIV.It was found that the samples of 5 batches presented positive signals,and the virus was quantified by using the obtained standard curve.The results indicate that the real-time PCR assay is specific, sensitive, fast, and accurate and it has great potential in detecting RSIV and studying the pathogenic mechanism of RSIV.【总页数】6页(P111-116)【作者】赵玉然;岳志芹;谭乐义;刘荭;赵巍;梁成珠;史秀杰;徐彪;朱来华;何俊强【作者单位】山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;深圳出入境检验检疫局,水生动物疫病国家重点实验室,518010;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;深圳出入境检验检疫局,水生动物疫病国家重点实验室,518010;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;山东出入境检验检疫局技术中心,青岛266002;深圳出入境检验检疫局,水生动物疫病国家重点实验室,518010【正文语种】中文【中图分类】S942.2【相关文献】1.一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 张旻;景宏丽;方珍珍;高隆英;江育林;林祥梅2.一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 张旻;景宏丽;方珍珍;高隆英;江育林;林祥梅3.梭子蟹肌孢虫SYBR Green I实时定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 陈甜甜;房文红;王元;李新苍;赵姝;周俊芳;;;;;;;4.梭子蟹肌孢虫SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 陈甜甜;房文红;王元;李新苍;赵姝;周俊芳5.中国大菱鲆虹彩病毒(TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用 [J], 史成银;黄健;杨冰;刘莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立张旻;景宏丽;方珍珍;高隆英;江育林;林祥梅【期刊名称】《检验检疫学刊》【年(卷),期】2011(021)005【摘要】真鲷虹彩病毒一直被世界动物卫生组织列入必报疫病病原目录,该病毒与传染性脾肾坏死病毒在基因序列上没有区别。

为了快速检测病原,本文根据传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白序列中一段基因保守区设计引物和TaqMan探针,建立了真鲷虹彩病毒特异性实时荧光定量PCR检测方法,并利用PCR反应扩增出的衣壳蛋白基因制备了pGEM-T/真鲷虹彩病毒重组质粒作为标准阳性对照。

经试验,反应在模板量102-106拷贝浓度范围内有较好的线性关系,检测限最低可达100拷贝数,而且与流行性造血器官坏死病毒、甲鱼虹彩病毒等6种水生动物病毒无交叉反应。

结果证明该方法具有简便、快速、敏感、特异等特点,它的建立为该病诊断与病原检测提供了一个重要手段。

【总页数】5页(P38-41,59)【作者】张旻;景宏丽;方珍珍;高隆英;江育林;林祥梅【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】Q784【相关文献】1.一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 张旻;景宏丽;方珍珍;高隆英;江育林;林祥梅2.真鲷虹彩病毒LAMP检测方法的建立 [J], 袁向芬;石素婷;吕继洲;吴绍强3.真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 赵玉然;岳志芹;谭乐义;刘荭;赵巍;梁成珠;史秀杰;徐彪;朱来华;何俊强4.大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 周勇;曾令兵;孟彦;周群兰;张辉;高正勇;肖艺;孙建滨5.一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王秀明;刘建奇;陈君彦;魏学峰;刘国英;关平原;范秀丽;张贵刚;武瑾贤;王艳杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

【精品】鳜虹彩病毒病

竭力为客户提供满意的产品和服务
以人为本诚信务实勇于创新乐于奉献鱖虹彩病毒病
【病原】病原为传染性脾肾坏死病病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus）。

【症状】病鱼口腔周围、鳃盖、鳍条基部、尾柄处充血。

有的病鱼眼球突出，有蛀鳍现象。

濒死鱼表现嘴张大，呼吸加快，加深，身体失去平衡，腮苍白，部分鱼体表变黑。

解剖可见肝脏、脾脏和肾脏肿大，并有出血点，肠壁充血或出血。

部分鱼体有腹水，肠内充满黄色粘稠物。

【流行及危害】此病发生在广东、福建等地养殖的鱖(Siniperca chuatsi)上。

发病期是5-10月，高峰期为7-9月；发病水温是25-34℃，最适宜水温为28-30℃。

20℃以下时较少发病。

【防治方法】以防为主：严格检疫，对检测呈病毒阳性的鱼要及时作淘汰处理；加强饲养管理，改良水质，对饵料鱼在饲喂前进行消毒处理，保证鱖鱼的良好生存环境等。

鳜鱼虹彩病毒病

鳜鱼虹彩病毒病
袁圣
【期刊名称】《海洋与渔业》
【年(卷),期】2017(0)11
【摘要】病原鳜鱼是我国名贵的经济鱼类,价格高,肉质鲜美,养殖面积一直比较稳定。

近年来由病毒引起的鳜鱼虹彩病毒病发生趋于严重,病原主要是鳜传染性肝、
肾坏死病毒。

临床症状感染虹彩病毒的鳜鱼：体表症状不明显或者口腔周围、鳃盖、鳍条基部、尾柄处充血。

【总页数】1页(P60)
【作者】袁圣
【作者单位】江苏农牧科技职业学院水产科技系
【正文语种】中文
【相关文献】
1.鳜鱼蛙虹彩病毒病的临床症状和流行特点 [J], 王林锁; 张存宁; 黄文营; 唐绍林
2.大鲵虹彩病毒病灭活疫苗安全性与免疫效力研究 [J], 索钰杰;周勇;林格;江南;李
逸群;范玉顶;刘文枝;孟彦;薛明洋;曾令兵
3.虹彩病毒疫苗在鳜鱼脾肾坏死病防疫中的试验 [J], 孙青;丁文玲;方丽君;冯桃健
4.鱼类虹彩病毒病及其疫苗的研究进展 [J], 巩金鹏;潘晓艺;朱悦;沈锦玉
5.鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)PCR检测方法的建立及虹彩病毒新证据 [J],
邓敏;何建国;左涛;翁少萍;曾慷;吕玲;周松裕;龙綮新
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

ｎｄａＥｎｔｒｙＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎｎｄａＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｄａｌｉａｎ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ１１６６００；
３．ＤａｎｄｏｎｇＦｏｏｄＱｕａｌｉｔｙＭｏｎｉｔｏｒｉｎｇＳｔａｔｉｏｎ，Ｄａｎｄｏｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ１１８００１）
ＧｅｎＢａｎｋ登录的ＲＳＩＶ同源性均为９９．９／ｏ０，命名为ＲＳＩＶ－ＤＤ。表明本研究在国内首次从淡水鱼斑鳜中分离到
ＲＳＩＶ。

关键词：鳜鱼；真鲷虹彩病毒；鉴定
中图分类号：￥９４１．４１文献标识码：Ｂ文章编号：１００５．９４４Ｘ（２０１３）１２ — ００５９．０３
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ０ｎｏｆｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓｉｎＹｉａｌｕＲｉｖｅｒｍａｎｄａｒｉｎｆｉｓｈ
２０１３年第３Ｏ卷第１２期
鸭绿江斑鳜中真鲷虹彩病毒的分离与鉴定
于兵，陈晓东，王海燕。，王东明，麻丽丹
（１．丹东出入境检验检疫局，辽宁丹东１１８０００；２．大窑湾出入境检验检疫局，辽宁大连１１６６００；３．丹东市粮食质量监测站，辽宁丹东１１８００１）
摘要：本实验对患病鸭绿江斑鳜进行病毒检测，将表现典型真鲷虹彩病毒（ＲＳＩＶ）病症状的斑鳜鱼肾脏和
脾脏研磨成组织匀浆，采用试剂盒方法提取病毒ＤＮＡ，并应用ＰＣＲ方法对两对引物进行扩增获得５７０ｂｐ和
５６８ｂｐ两条基因片段，将其中的５６８ｂｐ基因片段连接至ｐＭＤ１８．Ｔ载体中，经酶切鉴定后序列分析表明，与
Ａｂｓｔｒａｅｔ：ＫｉｄｎｅｙｓｎｄａｌｉｖｅｒｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｄＹａｌｕＲｉｖｅｒｍａｎｄａｒｉｎｉｆｓｈｓｕｆｅｒｅｄｆｒｏｍｔｙｐｉｃａ１ｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄｇｒｉｎｄｅｄｉｎｔｏｔｉｓｓｕｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｅａｎｄｔｈｅｖｉｒｕｓＤＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｔｈｅｋｉｔｍｅｈｏｔｄａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＰＣＲｍｅｈｏｔｄ．Ｔｗｏｇｅｎｅｆａｇｍｅｍｓｏｆ５７０ｂｐａｎｄ５６８ｂｐＤＮＡｗｅｒｅａｍｐｌｉｉｆｅｄｂｙＰＣＲｍｅｈｏｔｄａｎｄｔｈｅ５６８ｂｐＤＮＡｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＭＤｌ８．Ｔｖｅｃｔｏｒ．Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｏｆｔｈｅ５６８ｂＤＤＮＡｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｈｅｔｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｃｉｄｈｏｍｏｌｏｇｙｗａｓ９９．９％ｗｉｔｈｔｈｅｅｆｒｅｒｅｎｃｅｓｔｒａｉｎｓｏｆＲＳＩＶｉｎＧｅｎＢａｎｋａｎｄｉｔｗａｓｎｍｅａｄＲＳＩＶ－ＤＤ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｄｅｍｏｎｓｒａｔｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＲＳＩＶｗａｓｉｓｏｌｔｅａｄｆｏｒｈｅｔｉｆｒｓｔｔｉｍｅｆｒｏｍｈｅｔｎａｔｕｒａｌｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄｍａｎｄａｉｒｎｉｆｓｈｉｎＣｈｉｎａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｎｄａｒｉｎｉｆｓｈ；ｒｅｄｓｅａｂｒｅａｍｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓ；ｉｄｅｎｔｉｉｃｆａｔｉｏｎ
ＹｕＢｉｎｇ，ＣｈｅｎｇＸｉａｏｄｏｎｇ，ＷａｎｇＨａｉｙａｎ，ＷａｎｇＤｏｎｇｒｎｉｎｇ，ＭａＬｉｄａｎ
（１．ＤａｎｄｏｎｇＥｘｉｔａｎｄＥｎｔｒｙＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎｎｄａＱｕａｒｎｔａｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｄａｎｄｏｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ１１８０００；２．ＤａｙａｏｗａｎｇＥｘｉｔ