布鲁氏菌病诊断方法的研究进展_吴星星
布鲁氏菌病的诊断技术进展
摘要：随着分子生物学、纳米、化学发光免疫诊断等新技术的迅速发展，布鲁氏菌病的实验室检测技术也有了更多种选择，他们具有灵敏、特异、快速、直接定量、可自动化等多种优势，正逐步被广泛使用，有些已经占据了布病实验室诊断的重要位置，但传统的诊断技术也不可就此丢弃，它是现代检测技术的前提和基础，依然在生产实践的一线起着不可替代的重要作用。
关键词：布鲁氏菌病；检测；技术进展布鲁氏菌病的诊断技术进展刘海成1，刘西源2，朱玲钰1（1.内蒙古巴彦淖尔市动物疫病预防控制中心内蒙古巴彦淖尔015000；2.内蒙古巴彦淖尔市临河区医保局内蒙古巴彦淖尔015000）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.03.004收稿日期：2023-06-19作者简介：刘海成（1973.10—），男，山东济南人，本科，高级兽医师，研究方向：动物疫病的实验室诊断。
1布鲁氏菌病传统的诊断技术家畜布鲁氏菌病传统的诊断技术包括流行病学、临床症状、病理变化、病原的分离鉴定以及实验室里的虎红平板凝集试验、试管凝集试验、全乳环状试验、琼脂扩散实验、补体结合试验、ELISA 等血清学检测技术以及适合现场操作的变态反应等。
1.1流行病学特点布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人和多种动物共患的变态反应性传染病，几乎所有陆生动物和海洋里的哺乳动物都易感，陆生家畜中羊、牛、猪最易感，接触性传播，无明显的季节性。
布鲁氏菌细胞内寄生，典型症状过后，细菌寄生胞内，药物很难对它起到作用，至今尚无根治办法，主要侵害生殖系统，母畜比公畜易感，成年畜比幼年畜易感。
1.2临床症状多数动物隐性感染、排毒却无明显症状；典型症状主要表现为发热、流产、关节炎、乳房炎、睾丸炎等相关症状。
1.3病理变化子宫、胎盘炎性浸润、化脓性坏死、睾丸炎、关节内膜炎，多器官特征性肉芽肿、胎儿败血症等病变。
1.4病原分离鉴定1）取典型病变组织。
取典型病变组织抹片，柯氏染色后镜检，发现红色球杆状小杆菌，其他菌为蓝色时可做出初步判断。
布鲁氏菌病实验室诊断技术的研究进展
布鲁氏菌病实验室诊断技术的研究进展佚名【摘要】布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种重要人兽共患病。
近年来，我国人、畜间布鲁氏菌病呈高发态势，严重威胁畜牧业生产和人民身体健康。
及时准确诊断对防治和净化布鲁氏菌病具有重要意义，本文主要从病原学和免疫学两个方面对布鲁氏菌实验室诊断技术进行综述。
【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2013(000)005【总页数】4页(P82-85)【关键词】布鲁氏菌;实验室诊断技术;研究进展【正文语种】中文【中图分类】S852.614布鲁氏菌病是由布鲁菌引起的一种重要人兽共患病，在世界各地广泛流行。
近年来，我国畜间和人间布鲁氏菌病均呈现明显上升趋势，给畜牧业和人民身体健康造成了巨大损失。
及时准确诊断是防治布鲁氏菌病的一个有效手段，100多年来，各国学者进行了大量研究和探索，其中实验室诊断技术得到了快速发展和广泛应用。
本文就布鲁氏菌实验室诊断技术研究进展作一简要综述。
1 病原学诊断1.1 染色镜检采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。
该方法常应用于对流产物质的分析，但不具有特异性，因为一些导致流产的病原体如流产衣原体以及贝氏立克次氏体也能够被染成红色。
1.2 分离培养布鲁氏菌可以用胰蛋白胨琼脂、血液琼脂、肝汤琼脂等培养基进行分离培养，通过菌体形态、染色特征、菌落形态、生长特性、生化反应特点以及布鲁氏菌多克隆抗体凝集试验等方法进行鉴定。
布鲁氏菌的分离培养是诊断布鲁氏菌病的“金标准”，但是由于布鲁氏菌的分离率较低、所需时间较长（至少3～8天，有时甚至达45天）、生物安全要求较高，因此不适合普遍应用。
1.3 分子生物学检测布鲁氏菌分子生物学检测技术是近年来的研究热点，它可以从多方面揭示布鲁氏菌各型之间的区别和关联，目前主要有DNA同源性测定、多种PCR分析、核酸探针、环介导等温扩增等技术。
布鲁菌病临床诊断及治疗的研究进展
1802018 年第 5 卷第 28 期2018 Vol.5 No.28临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical布鲁菌病临床诊断及治疗的研究进展孙 震，王 涛（青海大学附属医院，青海 西宁 810000）【关键词】 布鲁菌病；流行病学；临床表现；鉴别诊断；治疗【中图分类号】R378.5 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.28.180.02布鲁菌病，是布鲁杆菌感染引起的乙类人兽共患传染病[1]。
因患者可以出现临床特征多样，相关实验室及影像学检查特征不明显，加上目前广大临床医生对此病仍处在认知模糊、诊断不明的现状，所以临床上极易误诊；治疗方式目前也存在不规范。
因此，通过阐述有关布氏病的诊疗研究进展，可以更好的实现对布鲁菌病的防治。
1 流行病学因布鲁菌病属于传染病范畴，明确流行病学对诊疗有至关重要的作用。
目前查阅大量文献[2]，其最主要的流行病学特点是：①好发于青壮年（男：女=3:1）；②分布广泛，牧区常见；③4～9月高发。
且近几年布鲁菌病疫情特点出现发病率呈明显增高趋势[3]，我国主要高发于西北五省及东北三省，其他地区也有少量个案报道。
④与人类有关的主要传染源为牛、羊、猪[4]，我国主要是羊。
且传播途径为：①饮食：吃未完全煮熟的牛羊肉；②密切接触：主要常见于牧民牛羊养殖户；③空气传播：较少。
2 主要临床表现①发热：典型病例表现为波浪热。
但因不规范用药及滥用抗生素现病例热型往往不典型，可表现为午后或夜间低热和不规则热；②乏力多汗：急性期尤甚；③肌肉和关节疼痛：呈剧烈游走性疼痛，主要累及负重大关节（如髋、膝关节）或脊柱。
极易误诊为骨科疾病。
④急性期可有肝、脾及淋巴结肿大[5]。
⑤其他：睾丸炎、卵巢炎；累及心、肾及神经 系统[6-7]。
3 诊 断发病前有疫区传染源密切接触史，结合发热，乏力多汗，肌肉和关节疼痛等表现。
加上虎红平板（RBPT ）凝集试验、试管凝集试验（SAT ）阳性和（或）分离到布鲁杆菌者，排除其他类似病例后可予以诊断。
布鲁氏菌病诊断技术的研究进展
很少用于牛种布鲁氏菌。布鲁氏菌 术主要有试管凝集试验（SAT）、抗 试验操作复杂，结论受主观因素影
生长困难而且缓慢，Araj 对 173 位 球蛋白试验（AHG 或 Coombs 试验）、 响较大，不利于基层工作的检测。
急性布鲁氏菌病（可能是羊种布鲁 补体结合试验（CFT）、以及酶联免
4. 酶联免疫吸附试验（ELISA）。
进展进行综述。
也有一定的问题 ：已治愈患者体内 结合，无法与加入的溶血素和红细
一、病原学诊断
1. 布鲁氏菌的分离培养。细菌
仍能检测到布鲁氏菌 DNA。
二、血清学诊断
胞 形 成 的 复 合 物 结 合， 就 没 有 溶 血 现象的产生 ；反之，当待检血清中 没 有 相 应 抗 体， 游 离 的 补 体 与 加 溶
3 周～ 19% ；4 周～ 3%。
菌病检测方法，对急性布病有很好 氏菌病诊断的方法主要有间接酶联
2. 显微镜检查。采集流产胎衣、 的检测效果，试验操作简单，但耗 免疫吸附试验（iELISA）、斑点酶联
绒毛膜水肿液、肝脏、脾脏、淋巴结、 时较长。试管凝集试验结果的判 技术。今年来，随着分 用被虎红染色并灭活处理后的布鲁 （IgM）最好在急性感染的早期阶段
子生物学技术的发展，PCR 技术在 氏菌作为抗原，根据待检血清是否 使用，因为这些试验所检测的 IgM
布鲁氏菌病的检测，种型鉴定等方 与其发生凝集而判断阴阳性，敏感 是 机 体 从 感 染 后 （下转 75 页）
2018 年第 8 期 兽医实验室
性较高，操作简便，耗时短，成本低，
但准确性易受到温度、缓冲液 PH 等
因素的影响。
布鲁氏菌病诊断技术的 研究进展
2. 抗球蛋白试验（AHG）或库姆 斯试验（Coombs）。抗球蛋白试验克服 了前带效应对凝集试验的影响。许多 情况下，AHG 可以检测出凝集反应的
布鲁氏菌病实验室诊断研究进展
布鲁氏菌病实验室诊断研究进展高明华樊庆德徐春光杨晓刚（呼伦贝尔学院生命科学与化学学院内蒙古呼伦贝尔021008）布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种重要人兽共患病。
根据致病性和宿主特异性，将布鲁氏菌分为6个种19个生物型，即羊种布鲁氏菌(B.meltensis)、牛种布鲁氏菌(B. abortus)、猪种布鲁氏菌(B. suis)、绵羊附睾种布鲁氏菌(B.ovis)、犬种布鲁氏菌(B. canis)和沙林鼠种布鲁氏菌(B. neotomae)。
另外，从海洋动物中分离到在致病性和分子特征上有别于前6种的布鲁氏菌，定为海洋种布鲁氏菌(B. maris)。
据CDC报告，我国人布鲁氏菌病发生严重，2005~2007年全国布鲁氏菌病新发病人分别为18 416、19 013、21 901例，2008年1~10月新发病数已达27 264例，形势十分严峻。
流行病学调查表明，感染来源主要是患布鲁氏菌病的羊，其次是牛及其他动物。
并且具有疫区范围扩大、爆发点增多、典型病例增多、人群分布以农民和牧民为主等特点。
为有效预防和控制人和动物布鲁氏菌病，加强对动物布鲁氏菌病的检疫监测力度十分重要。
为此本文就布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展作以综述。
1 免疫学诊断技术1.1 血清凝集性试验布鲁氏菌病传统检测方法有血清凝集试验、全乳环状试验(MRT)和抗人免疫球蛋白试验(Coomb’s)等。
经典血清凝集试验包括标准试管凝集试验(SAT)和平板凝集试验(PAT)等在发达国家已基本上停止使用，取代方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验，如虎红平板凝集试验(RBT)等。
在国际贸易中，缓冲布鲁氏菌抗原试验是牛、羊、猪种布鲁氏菌病的指定试验。
乳牛MRT依然是乳牛布鲁氏菌病监测的主要方法。
由于凝集性试验是基于检测针对布鲁氏菌多糖O-链的抗体，因此会与有类似多糖O-链的细菌如耶尔森氏菌O:9等出现交叉反应。
1.2 补体结合试验（CFT）CFT至今仍是布鲁氏菌病诊断的重要方法，是牛、羊及绵羊附睾种布鲁氏菌病国际贸易指定试验，并作为确诊用。
动物布鲁氏菌病5种血清学检测方法的应用比较和分析评价
2020年3月第2期(总第201期)草食家畜(双月刊) 10.16863/ki.1003-6377.2020.02.011动物布鲁氏菌病5种血清学检测方法的应用比较和分析评价吴星星1,李爱巧1*,程维疆2(1.新疆乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心,乌鲁木齐830063;2.新疆乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站,乌鲁木齐831400)摘要:[目的]探讨当前动物布鲁氏菌病实验室快捷准确的诊断方法。
[方法]对137份布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清分别用试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光偏振试验(FPA)等5种不同的血清学检测方法进行检测,分析、评价不同检测方法的特异性、敏感性、假阳性率(误诊率)、假阴性率(漏诊率)、符合率、Kappa值等试验指标。
[结果]I-ELSIA、C-ELISA、FPA敏感性高、特异性好、漏诊率低、符合率高、Kappa值均较理想,CFT特异性好、敏感性低、漏诊率高、符合率差、kappa值小于0.75。
[结论]对于动物布鲁氏菌病实验室诊断,要结合实情选择检测方法,伴随目前检测技术的进步和发展,ELSIA和FPA方法值得应用推广,将对防控动物布鲁氏菌病意义重大。
关键词:布鲁氏菌病;检测方法;酶联免疫吸附试验;荧光偏振试验中图分类号:S852.5文献标识码:A文章编号:1003-6377(2020)02-0056-05布鲁氏菌病(Brucellosis),简称布病,是由革兰氏阴性、兼性细胞内寄生的布鲁氏菌(Brucella)引起的人兽共患病,部分感染动物出现流产、不育、生殖器官炎症,大多数感染动物不表现临床症状,但可经奶制品、流产物或其他途径感染人,导致人的波状热、关节痛及泌尿生殖系统炎症,严重威胁公共卫生安全和畜牧业健康发展[1,2],基于此,快速、准确地进行动物布病实验室诊断对该病防控至关重要。
当前,动物布病血清学检测方法多,不同方法各有优缺点,在实际生产环节中,选择什么方法、按照什么样的程序开展布基金项目:乌鲁木齐市科技局项目(P161210004)作者简介:吴星星(1986-),女,高级兽医师,硕士,主要从事动物疫病实验室监测、检测及动物疫病防控工作。
人类布鲁氏菌病的PCR诊断技术研究进展
用 Ｐ Ｃ Ｒ法在属 水平 上鉴 定布鲁 氏菌 ， 引 物包括 编码 Ｂ Ｃ Ｓ Ｐ
一
３ １序 列 的 （ Ｂ ４ ／ Ｂ ５） ， ｏ ｍ ｐ ２（ Ｊ Ｐ Ｆ ／ Ｊ Ｐ Ｒ） ， １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ（ Ｆ ４ ／ Ｒ ２） ，
果与传统方法符合率 较 高 ， 操 作安 全且 简单快 速 ， 可 以作为 布
蛋白Ｖ ｉ ｒ Ｂ ８和随机 引物 。不 同引 物 的灵敏 性 和特 异性 差异 很
大， 其 中编码 Ｂ Ｃ Ｓ Ｐ一 ３ １序 列 的（ Ｂ ４ ／ Ｂ ５ ） 常 用于人 类 布病 的诊
断： 以血液为样本 ， 增加反应 的循环数 ， 会 对引物表 现 出很 高的 灵敏性 。Ｌ ｅ ａ ｌ —Ｋ ｌ ｅ ｖ ｅ ｚ ａ ｓ Ｄ Ｓ等 根据 编码 ｂ ｃ ｓ ｐ一 ３ １和外 膜蛋 白 （ ｏ ｍｐ ２ ｂ、 ｏ ｍ ｐ ２ ａ 、 ｏ ｍ ｐ ３ １ ） 序列设计 了 ４对 引物 ， 以不 同的组合 用
Ｉ Ｓ ７ １ Ｉ （Ｉ Ｓ ３ １ ３ ／ Ｉ Ｓ ６ ３ ９） ，１ ６ Ｓ 一 ２ ３ Ｓ 内 源 转 录 间 隔 区
（ Ｂ ｍ Ｉ Ｔ Ｓ—Ｓ ／ Ｂ ｒ ｕ Ｉ Ｔ Ｓ—Ａ ） ， ｐ ｅ ｒ （ ｂ ｍｃ ｌ ／ ｂ ｍｃ ５） ， 夕 膜蛋 白（ ｏ ｍ ｐ ２ ｂ ， ｏ ｍｐ ２ ａ 和ｏ ｍｐ ３ １ ） ， ｏ ｍ ｐ ２ ５ ／ ｏ ｍ ｐ ３ １ 家 族 的 布鲁 氏 菌 蛋 白 ， 分 泌
赵 越， 王 英， 于 慧 ，王 占黎
（ 包头 医学院， 内蒙古 包头 ０ １ ４ ０ ６ ０ ）
摘
要
Ｐ Ｃ Ｒ是体外基 因扩增技术 ， 已广泛应用 于感染 性疾病的诊断 。采用 Ｐ Ｃ Ｒ进行病原体 的检 测 、 基因分型和定量等具有多种
布鲁氏菌检测技术的研究进展
用于检测布鲁 氏茵的分子 生物学方
０
、
０ 嗜肺军团茵Ｌ 大肠杆菌０ １７ 一， ¨， ：５ 、
Ｎ 不 法主要是 指多聚酶链式反应 （ｏ ｍｅａｅ Ｈ １ １ 小牛 胸腺 Ｄ Ａ） 扩增 。说 明扩 ｐ ｌ ｒ Ｂ ０ ｙ ｓ
ｂ是 ８ 个种问的 猪布鲁氏茵 （ ｕｓ ， Ｂ ｓｉ） 主要引起猪的布鲁 ｃａｎｒａｔ ｎ Ｃ ） Ｃ 是 用于扩增 两 增产物 １Ｏ ｐ 同源性很高 的６ ｈｉ ｅｃｉ Ｐ Ｒ ，Ｐ Ｒ ｏ 氏菌病。被感染 的动物主要表 现流产和 条已知序列之间的 Ｄ Ａ区段 ， ２ 世 纪 保 守序列 当布鲁 氏茵 ＤＮＡ 的浓度 为 Ｎ 是 Ｏ
鲁 氏茵病 则主要来源于牛和 猪 ：在城市 １ ９ 年 。国际方面 ，１ ９ 年和 １ ９ 年将 ９ ｐ／￣ 布鲁 氏茵 Ｄ Ａ。说 明 Ｂ 、Ｂ ０ ９ ５ ９ ６ ９ ５ｇ ｌ ｌ Ｎ ４ ５的
然而 ，０４ ２０ 里， 布鲁 氏茵病 主要 来源是动物屠宰厂 。 Ｐ Ｒ技术 用于人畜布鲁 氏茵病 的诊 断探 特异性 和敏 感性也是 良好 的 。 Ｃ
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布鲁 氏菌检测技术的研 究进展
梅建军 任林柱 综述 吉林大学畜牧兽 医学 院 １０ ６ ０２ ３
１０ ６ ０２ ３ 王兴龙 审校 军事医学科学院军 事兽 医研 究所
布鲁 氏茵 病是一种 人畜共患 的传 染 病。目前 ． 在世界 范围内流 行较广的是 ：
疫学 方法 ，这两种 方法各 自又包括 几种 次将 Ｐ Ｒ ｃ 应用于布鲁 氏菌病 病人 的诊 断 。 理 想 ，阳性 检 出率极低 ，即敏 感性 太差 ，
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布鲁氏菌病诊断方法的研究进展吴星星 1，李爱巧 1，杨启元 1，李建玲 1，张 婕 1，王清平 1，王 涛 1，王 璐 1，钟 旗 2， 古文喜 2（1.乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆 乌鲁木齐 830063；2.新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000）摘要：布鲁氏菌病已成为世界性公共卫生问题，其疫情在人、畜间逐年上升。
不仅对人类健康构成威胁，而且严重影响我国现代畜牧业经济的快速发展。
因此，及早发现、准确、快速地检测该病具有重要意义，本文就动物布鲁氏菌病诊断方法做一简要概述，为今后布病诊断新方法的研究和现有方法的选择运用提供参考，以便更有效地防控该病发生。
关键词：布鲁氏菌病；诊断方法；公共卫生中图分类号：S858.2 文献标识码：B文章编号：1003-4889(2013)01-0016-05布鲁氏菌病（Brucellosis）简称布病，是由布鲁氏菌引起的一种重要的人畜共患传染病，家畜中牛、羊、猪最常发生，且可感染人，在我国，布病广泛流行，尤其是以畜牧业为主的地区。
据统计，截至2009年，全国有29个省（区、市）发生人畜间布病，牛、羊、猪感染达百万头之多，人的布病亦呈上升趋势，2009年全年新增人布病3.7万例[1]。
世界范围内，每年出现约50万例人布病[2]。
该病危害较大，可引起母畜流产、奶牛乳房炎、公畜不育等病症，影响产仔率和产奶量，使畜牧业和养殖户的经济利益严重受损；在我国进出口贸易中，牲畜和其产品占据重要地位，但此病的流行，阻碍了我国外贸业的发展。
据1993年报导，我国出口到日本的13峰骆驼，因布病检测阳性被拒绝引进[3]；布病感染人传播途径较多，消化道、皮肤、黏膜伤口是主要途径，通过食用病畜乳肉制品可发生感染，屠宰工、饲养人员、兽医、动物产品加工者等职业者可通过直接接触感染，是兽医人员的职业病；另外，污染的水源、收稿日期：2012-11-12基金项目：乌鲁木齐市科技局人才工程专项（P101210003）。
作者简介：吴星星（1986- ）,女,汉族,硕士研究生,主要从 事动物疫病监测工作。
土壤、吸血昆虫均可造成间接感染。
患者主要表现为发热、寒颤、盗汗、关节痛等且反复发作，难以治愈，久病者可丧失劳动能力，严重者则造成死亡[4]，对人类健康和生活构成了巨大威胁，在社会公共卫生上具有重要的意义。
布鲁氏菌分6个种19个生物型，由于各型间流行特点及免疫原性的差异，加之人工免疫与交叉抗体等因素的影响，所以建立布病快速、准确的诊断方法一直是国内外学者的研究热点。
目前，布病的诊断方法包括病原学诊断、血清学诊断和现代分子生物学诊断技术。
1 病原学诊断1.1 布鲁氏菌的分离培养细菌分离培养是病原学诊断的传统方法。
通常采取流产胎儿的胃内容物、肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水进行布鲁氏菌的分离培养。
该菌对营养条件要求较高，普通培养基上较难生长，必需添加血清或马铃薯浸液等成分，生长繁殖缓慢，初代分离需1~2周，长者达20~30d，布鲁氏菌牛种和绵羊附睾中的某些生物型初次分离时还需要5%~10%CO2。
菌落生长形态呈圆形、稍隆起，边缘整齐、光滑湿润、大小为0.5 ~1.0mm，在血琼脂上生长为白色，且不溶血，在马铃薯琼脂斜面上，长出水溶性微棕色菌苔。
1.2 布鲁氏菌的染色与镜检培养菌落经涂片镜检观察，布鲁氏菌为小球杆状或短杆状，多呈散在分布，偶见成对、短链状或串状排列。
边缘稍圆或直，无芽孢及鞭毛，但在条件不利时具有形成荚膜的能力。
革兰氏染色为红色；姬姆萨染色呈紫色；改良Ziehl-Neelsen 氏法染色显红色，背景为蓝色；改良 Koster 氏法染色显红色，背景为蓝色；柯兹洛夫斯基法染色显红色，其他细菌呈现绿色。
1.3 生化试验鉴定获得布鲁氏菌分离株后，需对其进行一系列的表型研究。
传统种型鉴别方法有：根据生物化学特征（细菌生长是否需要CO2、是否产生H2S、各种细胞代谢酶类的活性检测）、血清学特征（A、M、R因子血清凝集试验）、噬菌体和细菌素裂解被检细菌所形成裂解谱的判定、药物敏感试验等。
不同布鲁氏菌种及生物型之间抗原特性差别较小，分型过程繁杂且易造成实验室感染，主观因素影响较大。
因此，从基因水平上建立布鲁氏杆菌分型标准可能得出更为科学的结论。
2 血清学诊断技术2.1 凝集实验2.1.1 全乳环状试验（MRT）全乳环状试验（MRT）主要用于乳样的布病筛查，操作简单快速适合现场应用，但大规模监测时可靠性差，且对羊种布鲁氏菌敏感性低。
在检测牛初乳、干奶期接近的奶牛、发情旺盛期奶牛、乳房炎患牛、免疫疫苗后不到４个月的牛乳样时，均可能出现假阳性结果[5]。
2.1.2 虎红平板凝集试验（RBPT）RBPT抗原是将布鲁氏菌菌株（抗原性良好）经培养、灭活、离心后收集菌体用虎红染料染色后悬于乳酸缓冲液中制成，与被检血清在洁净的玻璃板上进行凝集反应，若出现沙粒状凝集者则判为阳性。
该方法操作简易、检测快速，成本低廉，但准确性易受温度和凝集时间的影响，且抗原的标准化也可影响其敏感性[6]，有时会因牛种布鲁氏菌S19弱毒疫苗免疫和交叉反应造成假阳性结果，偶尔会因前带现象出现假阴性结果[7] ，故RBPT适于动物布病的普查，目前，在国际贸易中仍用于牛、羊、猪布病检测，在我国也用于人布病监测的初筛。
2.1.3 试管凝集试验（SAT）SAT由Wrigh于1987年建立，可以定量，因而在判定反应强度上比虎红平板凝集试验更精确。
1998年，我国将其列入国标作为诊断布病的正式法定试验并沿用至今。
该实验操作步骤繁琐，需37℃条件下孵育过夜，较费时，不适于现场检疫和基层采用，家畜感染（自然感染或人工免疫）布病一定时间后，机体中先后产生IgM与IgG两种抗体，而SAT检测IgM敏感性较高，因此可用于布病早期诊断，且对人畜布病疫苗免疫后血清抗体也能检测[8]，但不适合绵羊种布病的诊断。
单独应用会造成误诊和漏诊，因为不是所有感染动物所处的抗体水平都具有诊断意义。
同RBPT一样，SAT也不能鉴别人工免疫和自然感染动物。
上述常规血清学方法均是基于抗体对布鲁氏菌脂多糖O链抗原的检测，而布鲁氏菌脂多糖O链抗原可以和结肠炎耶尔森氏菌（O：9）、大肠杆菌（O：157）等阴性菌抗原以及小牛胸腺DNA发生交叉反应，故都有假阳性结果产生[9]。
研究表明：若将抗原血清混合液的pH值降低到3~4，可大大降低非特异性凝集，而不影响感染血清的凝集[10]。
2.2 补体结合试验补体结合试验（C F T）是世界动物卫生组织（OIE）公认的布病确诊性试验。
相比SAT和RBPT，特异性和敏感性较高[11]，具有较高的临床诊断价值，对于慢性布鲁氏菌病，RBPT检测为阴性，而CFT检测为阳性，且在检测成年牛（未经免疫或犊牛时给予免疫的）时非常准确[3]。
主要应用于牛、羊、绵羊附睾种布氏杆菌病的诊断，但不适合猪个体布病的诊断，因为豚鼠补体会受到猪补体的干扰，使实验敏感性降低38%~40%[12，13]，发生溶血的样品，也不能用CFT检测，另外，实验参与反应成分多，需设立多组对照，结果判定主要通过肉眼观察溶液颜色的深浅判定出溶血程度，所以结论主观性强，易产生误差。
而且实验要求条件高，操作复杂，基层检疫难以采用。
靖吉强[14]等将低速离心技术应用于CFT中，通过比较样品离心管和红细胞对照管红细胞沉淀的多少来判定结果发现：经过改进，主观因素对实验结果的影响程度明显降低。
2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA分为间接ELISA（i-ELISA）和竞争E L I S A（C-E L I S A），可用于血清及乳汁样本布病的检测，i-ELISA是以光滑型布鲁氏菌菌体脂多糖（S-LPS）作包被抗原，主要检测IgGs或IgG亚型，在美国、加拿大、瑞典等国家已有商品化的检测试剂盒问世，国内也有类似研究。
Kittelberger 指出i-ELISA敏感性高，优于上述其他血清学方法[15]，但在实际应用中仍存在血清交叉问题，难以区分人工免疫和自然感染。
因此主要用作布病的筛查，为解决面临的问题，Nielsen[16]建立了C-ELISA方法，即在ELISA微孔上包被光滑型布鲁氏菌菌体脂多糖（S-LPS），加入O型多糖（OPS）表位之一的特异单克隆抗体，再加入稀释被检血清，洗涤，加入酶标抗鼠IgG辣根过氧化物酶的复合物。
Weynants V等在1996年制备了2株辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体，用辣根过氧化物酶其检测牛血清表明：该方法较敏感，无假阴性结果出现，且能较好的区分人工免疫和自然感染[17]。
敏感性与i-ELISA相当，但大于缓冲平板凝集试验（BPAT）。
在检测未免疫动物和假阳性样品时，特异性高于或等于i-ELISA，为此，2004年，C-ELISA被OIE列为诊断和清除牛布鲁氏菌病的推荐方法[9]。
3 分子生物学诊断自1985年美国Mullis等建立聚合酶链式反应（PCR）以来，以其为代表的分子生物学技术便迅速发展和普及开来，并广泛应用于微量DNA的研究。
20世纪90年代以来，PCR方法在布病研究中的应用日益增多，各国学者纷纷建立起多种PCR方法用以鉴定布鲁氏菌的属、种及生物型。
3.1 布鲁氏菌属鉴定的PCR方法Mayfield等和Herman等[18]分别以BCSP31、16srRNA为靶基因建立了常规PCR诊断方法得出：在所有布鲁氏菌种和生物型中，BCSP31基因十分保守，对疫苗株、代表菌株、分离野毒株均存在特异性扩增，对存在血清学交叉或进化关联大的细菌扩增呈阴性，表明可利用BCSP31和16srRNA 从属的水平鉴定布鲁氏菌；国内杜振昆等[19]建立了以165rRNA为靶基因的套式PCR以乳样为检测品，得出与Herman相一致的结论，除此之外，omp2和VirB8基因也可用做菌属鉴定[20，21]。
后来E.Navarro 等[22]针对BCSP31、16srRNA和omp2三种靶基因PCR 的敏感性进行比较实验得出：三者检测灵敏度在8 fg-20 fg DNA、omp2 PCR不会受人类DNA的干扰，而BCSP31、16srRNA PCR则相反，但16 SrNA PCR 方法是最敏感的。
3.2 布鲁氏菌种、型鉴定的PCR方法Bricker等根据不同种布鲁氏菌基因组中插入序列IS711在数量及位置上的差异建立了AMOS-PCR （Abortus Melitensis Ovis Suis-PCR），可区分布鲁氏菌牛种（1、2、4型）、羊种（1、2、3型）、猪种（1型）、绵羊附睾种，能鉴别牛种布鲁氏菌S19和RB51（粗糙型突变菌株）疫苗[23，24]，后经Ewalt等[25]证实：该方法准确率达100%。
2008年，国内钟旗等[26]研究发现：AMOS-PCR还可鉴定犬布鲁氏菌，区分S19疫苗株和野毒株。