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微生物实验思考题

1、用油镜观察时应该注意哪些问题在载破片和镜头之间加滴什么油起什么作用

答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.

加滴香柏油。作用：增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.

2、根据实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。

答：细菌用油镜,真菌用高倍镜.都是先用低倍镜找到目标后,再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度. 放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。

3、哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性其中最关键的环节是什么

答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节。

4、进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题

答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌。

5、革兰氏染色时，初染前能加碘液吗乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色

答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对实验结果造成影响。脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色，阴性菌无色。

6、不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌

答：不行。在复染之前，革兰氏阴性菌是无色透明的，在显微镜下很难观察到；或者脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区别。

7、你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节

答:1制备适宜的培养基

2在超净工作台上进行,保持无菌环境

3对培养基,接种环等物品的高温高压灭菌.

4倒置培养基,防止冷凝水内流

8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察

答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。镜头非常精密,被污染后不利于下次观察；2、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰。

9. 如果涂片未以热固定,将会出现什么问题加热温度过高、时间太长，又会怎么样呢

答:如果没有加热固定的话，水分蒸发太慢或者在染色时菌体会被冲洗掉；如果加热时间过久，菌体变形或形态破坏，无法染色。

10. 制备培养基的一般程序是什么

答：称量——溶解—调PH 值—融化琼脂—过滤分装—包扎标记——灭菌——倒平板

11. 做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题

答：溶解配料的水要适量；PH 要调到左右；要小心手提式高压锅的使用；倒平板时要防止培养基被污染

12. 灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义

答：防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果

13. 试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。

答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的