TLC常用试剂配制及显色方法
常用试剂配制及显色方法
（一）通用显色剂
1．重铬酸钾——硫酸
一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。
喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物
（1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高
显色的灵敏度。
（2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。
4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。
5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。
6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。
溶液II：5%碳酸钠溶液。
溶液I和溶液II等量混合使用。
7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。
8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。
溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。
临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。
9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。
溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。
溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。
10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。
溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。
11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。
溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II 等量混合。
12．浓硫酸：甲醇（1：1）溶液，或5%硫酸的乙醇溶液，喷后100o C烤15分钟，各种不同物质显不同颜色。
13．萤光显色剂溶液：试喷以下一溶液，不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。
A：0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。
B：0.01萤光素乙醇液
C：0.1%桑色素乙醇溶液
D：0.05罗丹明B乙醇溶液
E：萤光素一溴，检不饱和化合物。
（1）0.1%萤光素乙醇溶液
（2）5%溴的CCL4溶液。
喷洒（1）以后，放置（2）溶液的缸内，可在UV光下检查萤光，萤光素与溴化合成曙红（ensln）（无萤光），而光饱和化合物则与溴加成，保留了原来的萤光；若点样量较多，则成黄色斑点，底板成红色。
14．碱式醋酸铅试剂（可做喷洒或沉淀试剂，多种有机化合物均反应）。
取Pbo14g置乳钵内，加蒸馏水10ml，研后成糊状后，倾入玻璃瓶中，乳钵用10ml 蒸馏水洗净，洗液并入瓶中，加醋酸铅溶液（取醋酸铅22g，加蒸馏水70ml制成）70ml，用力振摇，放置七天，滤过，并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。（二）生物碱显色剂
通用显色剂：
1．改良碘化铋钾（Dragendorff）试剂：生物碱和某些含氯化合物显橙红色。
溶液I：碱式硝酸铋0.85g，溶于冰乙酸10ml和40ml.
溶液II：碘化钾0.8g溶于水20ml.
储存液：溶液I和溶液II等量混合（置棕色瓶中杨以长期保存）。
显色剂：储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合，用前配制。
2．碘化铂钾（碘铂酸）试剂，不同的生物碱显不同的颜色。10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合，加6%碘化钾溶液100ml，混合均匀，临用前配制。
3．碘—碘化钾（Wagner）试剂：生物碱显棕褐色。
碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中，加热，加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。
4．改良碘化铋钾：碘，碘化钾（1：1）试剂；生物碱显紫棕色或灰黑色。
5．硫酸铈——硫酸试剂（改良sonnensclein试剂）：喷后110o C烤几分钟，不同的生物碱
显不同的颜色。硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中，加三氯化乙酸1g，加热煮沸，放冷，逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。
6．碘化氯钾（vmayer）试剂（沉淀试剂）：取HgCL2（毒）1.35g加蒸馏水60ml溶解后，量取碘化钾5g，加碘馏水10ml使溶解将两液混合，加蒸馏水稀释使成100ml即得。7．硅钨酸（Bertrand）试剂（沉淀试剂）：5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中，加稀盐酸使呈酸性反应即得。
（三）强心苷显色剂
1．碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂：强心苷显紫红色、几分钟后褪色。2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液，用前按劳1：1混合。
2．碱性三硝基苯：在浅橙色背景上显橙红色。
溶液I：间三硝基苯100mg。溶于二甲基甲酰胺40ml，加浓HCL3~4滴，加水至100ml，避光能长期保存。
溶液II：5%碳酸风溶液
先喷溶液I，再喷溶液II，喷后90~103.0o C烤5分钟。
3．三氯乙酸试剂：喷后110o C烤7~10分钟，紫外光下观察萤光。
试剂I：25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液，配制后可放置数日。或用试剂II：上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4：1混合。
4．三氯化锑试剂：喷后100o C烤5分钟，日光下或紫外光下观察。
25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。
5．磷酸——溴试剂
溶液I：10%磷酸溶液。溶液II：溴化钾饱和溶液：25%盐酸溶液（1：1：1）。
薄层用溶液I喷洒后，在125o C烤12分钟（薄层太湿时则烤的时间可适当延长），在紫外光下观察一次，将薄层再烤热，趁热喷溶液II，再在紫外光下观察。6．Keller——Kllianl试剂：（检查α——去氧糖）
试液：100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀，试样1ml混匀。试样1ml加试液2ml溶解后，沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。渐变浅绿，兰色。最后HAC层全部染成兰色。
（四）黄酮苷显色剂
黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色，用氨熏，喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液，则颜色变深或变色。
1．氨气
2．10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。
3．1%或5%碳酸钠溶液。
4．1%或5%三氯化铝乙醇溶液。
5．2%乙酸镁甲醇溶液。
6．饱和三氯化锑的氯仿溶液，100o C烤5分钟。
以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。
7．1~2%三氯化铁乙醇溶液。
8．1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。
9．0.1N硝酸银溶液。
10．铁氰色钾——三氯化铁试剂。
溶液I：2%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I与溶液II等量混合。
11．硼氢化钾试剂：双氢黄酮化合物显红、橙红色。
溶液I：1~2%硼氢化钾（钠）异丙醇溶液，必须新鲜配制。溶液II：浓盐酸
先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。
12．Shinoda试剂：在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸，黄酮醇显红紫色。制备硅胶薄层时，加入2%w/w锌粉混合，薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性，可在展开后先喷锌——丙酮混悬液，再喷盐酸溶液。
罗丹明——氨试剂。
溶液I：0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。溶液II：浓氨溶液。
先喷溶液I，然后再将薄层放入氨汽槽内。
14．对氨基苯磺酸试剂。
溶液I：对氨基苯磺酸盐溶液。溶液II：5%亚硝酸钠溶液。
将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中，到紫溶液25ml用冰冷却，加预冷的溶液II1.5ml。
15．硼酸——柠檬酸试剂
溶液I：饱和硼酸的丙酮溶液。溶液II：柠檬酸丙酮溶液。
先喷溶液I，再喷溶液II。
16．福林试剂（Folin Ciocalteu试剂）
钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中，再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml，将混合液回流煮沸10小时，然后加硫酸锂15g，水5ml及溴1滴，再回去流煮沸15分钟，所
得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度（贮备液），溶液应不显绿色。
溶液I：20%碳酸钠溶液。溶液II：临用前上述贮备液1份用水三分稀释。
先喷溶液I，稍干再喷溶液II。
（五）皂苷灶显色剂
1．25%磷钼酸乙醇溶液：喷后在140o C加热5~10分钟皂苷元均呈深兰色。
2．三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液：喷后在90o C烤10分钟（应在通风厨中进行），不同的皂苷元在可见光或紫外光下显出各种颜色。
3．硫酸：甲醇（1：2）溶液，喷后加热，不同的皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色，所显颜色与温度无关。
4．氟磺酸：乙酸（1：1）溶液，喷后130o C加热5分钟。各种皂苷元可显天兰紫、粉红、淡棕等色，在紫外光下也显不同萤光。
5．碘蒸汽：薄层置于碘蒸汽筒中，皂苷无皆显棕黄色斑点。
6．三氯快乙酸或三氯乙酸：乙酸（1：2）溶液，喷后在100o C加热20分钟皆显黄色。7．2%血球生理盐水混悬液（溶血试验、检皂苷）。
取新鲜兔血（由心脏或静脉取血）适量，用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白，并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后，量取沉降红血球（可以管的离心管通接读取）用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用（贮存期2~3天）。
（六）蒽醌苷显色剂
蒽醌及其苷本身在日光下显黄色，在紫外光下则显黄，红橙色萤光。在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液，则颜色变深或变色。
1．氨气
2．10%氢氧化钾、甲醇溶液。
3．3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
4．50%哌啶的苯溶液。
5．饱和喷酸锂溶液。
6．饱和硼砂溶液。
7．0.5%乙酸镁甲醇溶液：喷后90o C烤5分钟。
8．0.5%乙酸铝溶液，喷后紫外光下看萤光。
9．0.5%牢固兰B试剂，喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。也可先喷本试剂，再喷稀氢氧化钠溶液而显色。也用于酚类及能偶芳香胺的显色。
溶液I：新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。溶液II：0.1N/L氢氧化钠溶液。
先喷溶液I，喷溶液II。
（七）香豆精苷显色剂
1.0.5%碘的碘化钾溶液，香豆精各种颜色，很多其他类型的化合显色。
2．重氟化氨基苯磺酸试剂，香豆精显黄、橙、红、棕紫等颜色也用于酚类，芳香胺反转偶合的朵环化合物的显色。
对氨基苯横酸0.9g克加热溶于12N盐酸9ml，用水稀释到100ml，取此溶液10ml 用冰冷却，加冰冷的4.5%亚硝酸钠溶液10ml，0o C放15分钟（在0o C可保存三天），用前加等体积1%碳酸钠溶液。
3．重氮化对硝基苯胺试剂、香豆精显黄、红、棕、紫等颜色，也用于酚类的显色。
对硝基苯苯胺0.7g溶于12N盐酸9ml，用水稀释到100ml，将此溶液逐渐滴加到冰冷的1%亚硝酸钠溶液5，再用冰冷的水稀释到100，需临用时新配。
4.4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂：香豆素和酚类显橙红至深红色。
溶液I：2%4——氨基安替比林乙醇溶液。溶液II：8%铁氨化钾溶液。
先喷溶液I，再喷溶液II，再用氨气熏之。
5．稀氢氧化钠：喷前喷后薄层在短波长的紫外光下观察萤光。
（八）挥发油显色剂
1．茴香醛——浓硫酸试剂：喷后150o C烤。挥发油中各成分显不同颜色。
浓硫酸1ml加到冰醋酸50ml中，冷后加茴香醛0.5ml必须临时配制。
2．萤光素——溴试剂：检出含乙烯化合物。（配法及使用见前）。
3．碘化钾——冰乙酸——淀粉试剂：斑点显兰色则为过氧化物。
溶液I：4%碘化钾溶液10ml与冰乙酸40ml混合，再加锌粉——小勺过滤。溶液II：新制的1%淀粉溶液。
先喷溶液I，5分钟后大量喷溶液II，直喷到薄层透明为止。
4．对二甲氨基苯甲醛剂；检出菌与菌前体在室温或80o C烤10分钟显深兰色。
对二甲氨基苯醛0.25克，溶于冰乙酸50g，85g磷酸5克和水20ml的混合液中，此试剂储于棕色瓶中能稳定数月。
5．异羟肟酸铁试剂：斑点显淡红色，可能是酯和内酯。
溶液I：盐酸羟胺5克溶于水12ml,乙醇稀释到50ml,冷处。
溶液II：氢氧化钾10g溶于很少量水，再用乙醇稀释到50ml，储于冷处。
溶液III：溶液I和溶液II以1：2混合，滤去氯化钾沉淀，所得滤液必须放入冰箱中，可
稳定两星期。
溶液IV：三氯化铁（FeCL36H2O）10克溶于36%盐酸20ml，与乙醚200ml振摇，得均匀的溶液，密塞储存可长久使用。
先喷溶液III，在室温先干燥后，再喷溶液IV。
6．2.4——二硝基苯肼试剂，醛和酮化合物显黄色。
36%盐酸10ml加到2.4——二硝基苯肼试剂1克在乙醇1000ml的溶液中。
7．0.3%邻联二茴香胺冰乙酸溶液，醛和酮化合物显各种颜色。
8．三氯化铁试剂：酚性物质显兰绿色。
1~5%三氯化铁的0.5N盐酸溶液。
9．4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂：酚性物质显橙红色至深红色。
溶液I：2%4——氨基安替比林乙醇溶液。
溶液II：8%铁氰化外溶液。
先喷溶液I，再喷溶液II，再用氨气熏之。
10．硝酸铈试剂：醇在黄色背景显棕色。
硝酸铈铵6g溶于4N硝酸溶液100ml。
11．钒酸铵（钠）8——羟基喹啉试剂：醇在兰灰色背景显淡红色，有时需做加热。
1%酸铵（钠）溶液1ml和25%8——羟基喹啉的6%乙醇溶液，1ml用苯30ml振摇，争出灰兰色的苯溶液使用。
12．溴甲酚绿试剂：有机酸显黄色。
双甲酮30mg溶于乙醇90ml，慢慢加入85%磷酸10ml，配制后的试剂放置于冷处能用几个星期，但新配的效果较好。
13．酚——硫酸试剂：喷后110o C烤10~15分钟，糖显棕色，酚3g及浓硫酸5ml溶于乙酸95ml。
14．3.5——二氨基苯甲酸——硫酸试剂：喷后100o C烤15分钟，2——去氧糖在日光下显红棕色，在紫外光下显黄绿色萤光。
甲基红1g及溴酚兰3g溶于95%乙醇1000ml。
15．溴粉兰指示剂，显黄色。0.04mol/L溴酚兰乙醇溶液，用氢氧化钠溶液调至微碱性。16．溴甲酚绿指示剂：如展开剂中含乙酸，则喷前薄层在120o C烘烤除去，在兰色背景上显黄色。溴甲酚绿0.04克溶于乙醇100ml，加0.1N氢氧化钠溶液至兰色刚刚出现。17．溴甲酚紫指示剂，喷前薄层在100o C烤10分钟，冷到室温后，喷显色剂。在兰色背景上显黄色。
溴甲酚紫0.04克溶于50%乙醇100ml ，用0.1N 氢氧化钠溶液调至pH10.0。
18．溴甲酚紫柠檬酸试剂
溴甲酚紫25ml 及柠檬酸100mg 溶于丙酮：水（9：1）混合液100ml 。
19．焦红栖溶液：在灰或灰兰色背景上白色。
0.1%焦酚红水溶液：2%氢氧化钠溶液（1：1）混合。
20．百里酚酞碱溶液：在灰或兰色背景上显红色或白色。百里酚酞50mg ()2%溶于氧化溶液1：1混合.
21．二氯靛酚试剂：喷后加热片刻，在天兰色背景上显粉红色如加热时间延生，则钼酸转变为白色，而其色羧不变故可识别酮 酸。2.6三氯靛酚0.1g 溶于95%乙醇100ml 。
22．芳香胺——还原糖试剂
芳香胺(如苯胺5g)和还有糖（如木糖5g ）溶于95%乙醇
23．碘化物淀粉试剂：在白色或浅兰色背景上显深兰色，灵敏度为2μg 。
8%碘化钾溶液，2%碘酸钾溶液及1%淀粉溶液等到量混合，用前新鲜配制。
24．硝酸铈铵——引朵乙醇 溶液。
溶液I ：10%硝酸铈铵溶液。 溶液II ：吲哚乙醇溶液。
25．联苯胺——亚硝酸钠试剂：喷后在紫外光灯下254毫微米观察萤光。
溶液I ：联苯胺2.5克溶于浓盐酸7毫升及水500ml 。溶液II ：10%亚硝酸溶液。 临用前溶液I3份和溶液II2份混合。
（九）氨基酸显色剂
通用试剂
1．茚三酮试剂，用于氨基酸，氨及打官司基糖，喷后110o C 加热泪盈眶至显出颜色 。 试剂I ：茚三酮0.3g 溶于下丁醇100ml 中，加乙醇3ml 或试剂II ，茚三 酮0.2g 溶于乙醇中100ml 。
为了使茚 三酮 的颜色稳定， 采用下法：
硝酸酶试剂：饱和硝酸酮溶液1ml 与10%硝酸溶液及96%乙醇100ml 混合。
方法：用茚 三酮剂显色后用硝酸酮 试剂喷，斑点由兰紫色转成红色。
2．吲哚醌试剂：吲哚醌于乙醇100中，加冰乙酸10。
3．茚三酮——硝酸酮 试剂（Moffatt--Lytle 反应）喷后在电炉上烤至刚刚显色，颜色 在日光灯中逐渐加深，某些氨基酸首先显出颜色，用笔立刻将色点记下，许多氨基酸赕出特殊的颜色，不同的氨基酸显出的速度也有差别，。
4．2——萘醌——4——磺酸试剂（Folin 试剂）喷后在室温干燥 不同的氨基产生各种颜
色。
1．2萘醌——4——碘酸钠的0.62克溶于5%碳酸钠溶液100ml制备。
5．氯气——联甲苯胺试剂。
氯化作用，薄层放在氯气中，假如氯气要从气筒中得到的放置5~10分钟，假如由1.5%高锰酸钾溶液及10%盐酸（1：1）的混合物制得的，则需放置5~20分钟，然后将薄层置空气中顾委分钟以除去过量的氯气，再喷试剂。
试剂配制：邻联甲苯胺160mg溶于乙醇酸30ml中，溶液用蒸馏水500ml稀释，然后再加碘化钾1克。
（十）糖显色剂
1．茴香醛——硫酸试剂：喷后100~105o C烤，各种糖显不同颜色，浓硫酸1ml加到含茴香醛的乙醇溶液50ml中需临用前配。
2．1.3——二羟基苯萘酚——硫酸试剂：在110o C予热的薄层上喷试剂几分钟后在白色背景显不同颜色，再加热，颜色加深背景也变深。
3．苯胺——二苯胺——磷酸试剂：喷后85o C烤10分钟各种糖不同颜色。
二苯胺4g，苯胺4ml及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。
4．茴香胺——邻苯二甲酸试剂：喷后100o C烤10分钟。已糖显颜色。去氧已糖显色，戊糖显红紫色，醛酸显棕色。
0.1M对茴香胺和0.1M邻二甲酸的乙醇溶液。
5 苯胺——邻苯二钾酸试剂：喷后105~110o C烤10分钟，糖显红棕色。
6．α——苯胺——邻苯二钾酸试剂：喷后100o C烤3~6分钟，多数糖显兰色。鼠李糖显橙色，所显颜色于室温稳定2~3天。
15%萘酚乙醇溶液21ml，浓硫酸13ml，乙醇87ml，及水8ml混匀后使用。7．3——二羟基嗪酚——磷酸试剂：喷后105o C烤5~10分钟，酮糖显红色，醛糖显淡兰色。
0.2%1．3——二羟基试剂：喷后120o C烤15~20分钟，多数糖在白色背景上显暗红色，继续加热则变成浅紫色。
8．百里酚及浓硫酸5ml溶于乙醇95ml。
9．双甲酮——磷酸试剂：喷后110o C烤15~20分钟，仅酮显暗绿灰色。10．Kellev——Killani试剂：（检查α——去氧糖）
配法及使用见附录二（强心苷项下）
11．3．5二氨基苯甲酸二盐酸1克溶于80%磷酸25毫升磷酸25毫升加水稀释至60毫升。
喷后100o C烤10~15分钟，糖显棕色，在紫外光下显黄绿色萤光。
12．酚——硫酸试剂
酚3克及浓硫酸5毫升溶于乙醇95毫升。
喷后100o C烤10~15分钟，糖显棕色。
13．对硝基苯胺——过碘酸试剂。
溶液I：饱和偏高碘酸溶液1份加水2份稀释。
溶液II：1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。
先喷溶液II：放置10分钟，再喷溶液II，去氧糖显黄色，紫外先下显强萤光，再喷5%氢氧化钠醇溶液，颜色转绿乙二醇同样显色。
（十一）鞣质
检查鞣质的试剂除检一般酚性物试剂均能反应以外，现列出二种较专一的沉淀如下：1．氯化钠明胺试剂
取明胺1克溶于50水中，然后加1.0gNaCL使溶解后，加水稀释至100ml即得。保存期2~3个月（10o C左右）。
2．铁铵明矾试液：
即硫酸铁铵FeNH4(SO4)212H2O
取硫酸铁铵结晶1克加蒸馏水溶解后，使成100ml即得。
TAKARA 实验室常规试剂配制方法
031*-2./4,+ 5 8679giaifi [`eg]\_debe^h \ZgZbe^ edb`d]:mwwtYOOyyyNwioiuiNjsqNjr .1/{30,z +|2}-4*~ Q c gunvM_\p Jt_WNTL WNVL XNPK : I JRNS7GDO :H :8b~:;:8:M JRNS QK :H 4^R U ;8t 3L A99 POg /} T8Yclw\1yU <8[?`~t 3-C9ix ;AD gQG O U =8u 1E j 2P :HU >8m >m B,{qY 7>]dU SF Z I61E |0P7>q N ijQG O Y H 试剂的配制 1、酚酞指示剂：酚酞1g+无水乙醇100ml混合液0.5+50mL 2、淀粉指示剂：淀粉0.5g + 100ml水（加热100℃保持2-3分钟），冷却至室温备用。 随配随用，6天失效。 3、冰乙酸氯仿（三氯甲烷）混合液：冰乙酸60ml + 三氯甲烷40ml 4、树脂粉二硫化碳饱和溶液：纯净的树脂粉2-3g + 二硫化碳100ml，摇晃几分钟使 其成为饱和溶液，再用滤纸过滤后即可。 5、碘化钾KI饱和溶液：碘化钾10g + 蒸馏水5ml 6、乙醇乙醚混合液：无水乙醇100ml + 无水乙醚100ml + 5滴1%的酚酞指示剂 7、KOH-甲醇溶液配制：K（OH）11.2 g + 甲醇100ml 8、KOH配制：KOH称取14g + 2000ml蒸馏水，放置一个月标定 KOH标准溶液的标定及浓度： 清洗2个瓶子→称重（取平均值误差小于0.00005g）→邻苯二甲酸氢钾0.6g（烘105℃90分钟）→加蒸馏水80ml完全溶解→加2-3滴1%酚酞指示剂. 用上面配制好的邻苯二甲酸氢钾溶液来滴定待标定的KOH标准溶液， 滴加到变为微红色（30秒不变色）即可。记下滴定体积V。 邻苯二甲酸氢钾重量M KOH标准溶液的浓度= 滴定体积V ×邻苯二甲酸氢钾分子量（0.2042） 9、硫代硫酸钠溶液：硫代硫酸钠26g + 碳酸钠0.2g（或硼砂3.8g）+ 蒸馏水 至1000ml ，放置一周标定。 标定：称取0.15g在120℃干燥的重铬酸钾，置于500ml碘量的瓶中，加入50ml蒸馏水使之溶解，加入2g碘化钾使之溶解，再加入（1+8）比例的硫酸溶液20ml（10ml的浓硫酸+80ml 蒸馏水），密塞摇匀。放置阴暗处10分钟后加250ml蒸馏水。 用硫代硫酸钠的溶液滴至浅黄色， 再加入0.5%的淀粉指示剂3ml,继续滴定滴至蓝色消失而显亮绿色。 重铬酸钾M 硫代硫酸钠溶液的浓度= 滴定体积V ×重铬酸钾分子量（0.04903） 4. 硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L） 常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒 几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。 实验室试剂管理办法 1目的 1.1使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2范围 2.1适用于化验室化验员日常药品的管理。 3职责 3.1化验室 4内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、 通风良好、温度一般不超过３０℃。 4.1.2化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3室内备有消防器材。 4.1.4所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分 类，钾盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示 剂按用途分类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按 测定对象分类。 4.1.5易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配 备相应的灭火设备。 4.1.6低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂 同置一个柜中。 4.1.7见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财 产损失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于<化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过 程中都应避免受热和强光照射。 4.2.2所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原 标签，配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影 响。 4.2.3.1试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标 明配制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光等。 4.2.3.2试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓 度多会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 化学试剂管理规定 一、目的 建立化学试剂管理规程，保证化学试剂正确使用，确保检验结果真实可靠。 二、适用范围 本制度适用于公司化学试剂的采购、贮存、使用与管理。 三、职责 1 严格按照操作程序使用和储存化学试剂。 2 理化实验室主管负责化验室化学试剂日常使用的监督与管理。 3 综合办公室负责化验室化学试剂的采购。 四、管理规定 1 化学试剂的分级 1.1 术语 化学试剂：是指在化学实验、化学分析工作中所用的具有一定纯度标准的各种单质和有机、无机化合物。 1.2 我们常用的化学试剂按使用等级分为4级，如下表1所示： 表1：一般化学试剂的分级 1.3 除上述把化学试剂分为四级外，尚有其它特殊规格的化学试剂，如表2所示： 表2：特殊规格化学试剂的分级 2 化学试剂的贮存 2.1 化学试剂由专人管理，管理人员应由具备一定的专业知识，具有高度责任心，保证化学试剂按规定的要求贮存。 2.2 化学试剂应单独贮藏于专用的试剂贮存室内。保持贮存室内清洁，通风，保证所贮试剂的贮存条件符合规定要求。 2.3 化学试剂贮存室应设在安全位置，消防灭火设施器材完备，以防一旦事故发生造成伤害和损失。 2.4 化学试剂贮藏室应有良好排风装置。盛放易燃易爆化学试剂的贮存柜顶部需装有通风设施，取用方便。 2.5 化学性质或防护、灭火方法相互抵触的化学危险物品，不得在同一柜或同一储存室内存放。 2.6 对于易燃、毒害性较大的试剂应上锁保管。危险物品的采购和提运按公安部门和交通运输部门的有关规定办理。剧毒、放射性物体、爆炸品试剂及其它危险物品，要单独存放，应执行双人双锁双台帐双人验收双人发放“五双”管理，由使用人员领取使用，保管人员应建立记录，记录内容应有试剂名称、存放数量、领用人、领用日期、领用量、发放人姓名等内容，剧毒试剂的领用需实验室负责人签字。 2.7 配制的试剂应贴标识，注明试剂名称、浓度、配制时间、有效期及配制人。 2.8 每周检查试剂是否过期，过期试剂应及时妥善处置。 2.9 配制的试剂除有特殊规定外，存放期不应超过三个月。 2.10 应定期检查试剂是否齐全，所缺试剂应及时申请购买。 2.11 标准物质应按规定存放，定期检查是否完好，每次使用必须有相应的记录。标准物质证书统一存放在资料柜。 2.13 所有药品必须有明显的标志。对字迹不清的标签要及时更换，对过期失效和没有标签 实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱 NOx的测定试剂配制 1、1.00g/L盐酸萘乙二胺贮备液：称取0.50g(N-l-萘基)乙二胺盐酸盐(C10H7NH(CH2)NH2·2HCl)于500ml容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液贮于密闭的棕色试剂瓶中，在冰箱中冷藏可稳定三个月。 2、显色液：称取5.0g对氨基苯磺酸(NH2C6H4S03H)，溶解于约200ml热水中，将溶液冷却至室温，全部移入1000ml容量瓶中，加入50.0ml盐酸萘乙二胺贮备液和50ml冰乙酸，用水稀释至标线。此溶液于密闭的棕色瓶中，在25℃以下暗处存放，可稳定三个月。若呈现淡红色，应弃之重配。 3、吸收液：临用时将显色液和水按4+1(V/V)比例混合，即为吸收液。吸收液的吸光度不超过0.005(540nm，lcm比色皿，以水为参比)。否则，应检查水、试剂纯度或显色液的配制时间和贮存方法。 4、亚硝酸钠标准贮备液：准确称取0.3750g亚硝酸钠(NaN02，优级纯，预先在干燥器内放置24h)溶解于水，移入1000ml容量瓶中，用水稀释至标线。贮于密闭的棕色试剂瓶中，可稳定三个月。此溶液每毫升含0.250mg亚硝酸根。 5、亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准贮备液1.00ml于100ml容量瓶中，用水稀释至标线。临用前现配。此溶液每毫升含2.5μg亚硝酸根。 6、硫酸溶液C(1/2H2S04)＝lmol/L：取15ml硫酸(ρ＝1.84g/m1)徐徐加入500ml水中。 7、酸性高锰酸钾溶液：称取25g高锰酸钾，稍微加热使其全部溶解于500ml水中，然后加入lmol/L硫酸溶液500ml，混匀，贮于棕色试剂瓶中。 SO 2的测定试剂配制 1、环己二胺四乙酸二钠溶液C(CDTA-2Na)＝0.0050mol/L ：称取1.82g 反式-l ，2-环己二胺四乙酸((trans-1，2-Cyclohexylenedinitrilo)tetraacetic acid ，简称CDTA)，加入1.50mol/L 的氢氧化钠溶液6.5ml ，溶解后用水稀释至100ml 。 2、甲醛缓冲吸收液贮备液：吸取36%～38%的甲醛溶液5.5ml ，0.050mol/L 的CDTA-2Na 溶液20.0ml ；称取2.04g 邻苯二甲酸氢钾，溶解于少量水中；将三种溶液合并，用水稀释至100ml ，贮于冰箱，可保存10个月。 3、甲醛缓冲吸收液：用水将甲醛缓冲吸收液贮备液稀释100倍而成，此吸收液每毫升含0.2mg 甲醛，临用现配。 4、氢氧化钠溶液C(NaOH)＝1.50mol/L 。 5、0.60％(m/V)氨磺酸钠溶液：称取0.60g 氨磺酸(H 2NSO 3H)于烧杯中，加入1.50mol/L 氢氧化钠溶液4.0ml ，搅拌至完全溶解后稀释至100ml ，摇匀。此溶液密封保存可使用l0d 。 6、碘贮备液C(1/2I 2)＝0.10mol/L ：称取12.7g 碘(I 2)于烧杯中，加入40g 碘化钾和25ml 水，搅拌至完全溶解后，用水稀释至1000ml ，贮于棕色细口瓶中。 7、碘使用液C(1/2I 2)＝0.05mol/L ：量取碘贮备液250ml ，用水稀释至500ml ，贮于棕色细口瓶中。 8、0.5％(m/V)淀粉溶液：称取0.5g 可溶性淀粉，用少量水调成糊状，慢慢倒入100ml 沸水中，继续煮沸至溶液澄清，冷却后贮于试剂瓶中。临用现配。 9、碘酸钾标准溶液C(1/6KIO 3)＝0.1000mol/L ：称取3.5667g 碘酸钾(KIO 3，优级纯，经110℃干燥2h)溶解于水，移入1000ml 容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。 10、盐酸溶液(1+9)。 11、硫代硫酸钠贮备液C(Na 2S 2O 3)＝0.10mol/L ：称取25.0g 硫代硫酸钠(Na 2S 2O 3·5H 2O)，溶解于1000ml 新煮沸并已冷却的水中，加入0.20g 无水碳酸钠(Na 2CO 3)，贮于棕色细口瓶中，放置一周后备用。如溶液呈现混浊，必须过滤。 12、硫代硫酸钠标准溶液C(Na 2S 2O 3)＝0.05mol/L ：取250.0ml 硫代硫酸钠贮备液，置于500ml 容量瓶中，用新煮沸并已冷却的水稀释至标线，摇匀。 标定方法：吸取三份0.1000mol/L 碘酸钾标准溶液10.00m1分别置于250ml 碘量瓶中，加入70ml 新煮沸并已冷却的水，加入1g 碘化钾，摇匀至完全溶解后，加入(1+9)盐酸溶液10ml ，立即盖好瓶塞，摇匀。于暗处放置5min 后，用硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液至浅黄色，加入2ml 淀粉溶液，继续滴定溶液至蓝色刚好褪去为终点。硫代硫酸钠标准溶液的浓度按下式计算： V C 00 .101000.0?= （2-1-1） 式中：C ——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L ； V ——滴定所消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml 。 13、0.05％(m/V)乙二胺四乙酸二钠盐(Na 2EDTA)溶液：称取0.25gNa 2EDTA(C 10H 14N 2O 8Na 2·2H 2O)，溶解于500ml 新煮沸但已冷却的水中，临用现配。 14、二氧化硫标准溶液：称取0.200g 亚硫酸钠(Na 2SO 3)，溶解于200mlNa 2EDTA 溶液中，缓缓摇匀以防充氧，使其溶解。放置2～3h 后标定。此溶液每毫升相当于320～400μg 二氧化硫。 标定方法：吸取三份20.00ml 二氧化硫标准溶液，分别置于250ml 碘量瓶中，加入50ml 新煮沸但已冷却的水、20.00ml 碘使用液及lml 冰乙酸，盖塞，摇匀。于暗处放置5min 后，用硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液至浅黄色，加入2ml 淀粉溶液，继续滴定至溶液蓝色刚好 实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30 注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃； 化学试剂管理规定 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】 化学试剂管理规定 一、目的：为加强公司化学试剂的使用管理，特制定本规定； 二、范围：本文件规定了化学试剂管理的内容及要求，适用于本公司； 三、职责： 资产管理部负责化学试剂购置； 各检测室负责人对领用的化学试剂进行管理、处置，对本单位化学试剂的使用管理进行监督检查； 四、管理内容及要求 化学试剂的采购 化学试剂的贮存 化学试剂的领用 化学试剂的使用 对于盐酸设立专门区域存放，实行双人双锁，钥匙由专人保管。出入库时应两人一起到场，使用过的空瓶等容器，应及时回收，统一处理。配制时，只许缓缓将试剂倒入水中，严禁将水倾入药品中。保管人员要定时维护和检查药品是否有损坏或泄露，采取合理办法处理事故隐患。 对于易制毒化学品采取专柜放置，并实行固定的双人双锁，“易制毒化学品专柜”不得长时间敞开；原则上，领用时不可以带走整瓶，当天使用多少领用多少。易制毒化学品原包装（外包装、试剂瓶等）放置于“易制毒化学品专柜”上，并统一回收，不得改作他 用，所有易制毒化学品应符合标签管理、普通试剂管理、记录管理 之规定 化学危险品管理制度 为了加强对化学危险品的安全管理,保证安全的使用,保障员工生命财产的安全,保护环境,特制定如下制定: 一、本公司对化学危险品的购置、使用、存储、统一规划，严格管理； 二、在使用某种化学危险品时需办理领用手续，同时填写《化学试剂领用记录》； 三、所用化学危险品必须有明确的标识； 四、使用化学危险品时，必须遵守各项安全生产制度和操作规程； 五、根据化学品的性质、种类设置相应的通风、操作等安全设施； 六、盛装化学危险品的容器在使用前后，必须进行检查，消除隐患，防止事故发生； 七、开封的化学危险品应尽快使用完毕，暂时不用的化学危险品应重新密封保存； 八、加强对使用场所、储存场所的日常检查和定期检查，并做好记录。 标准溶液的配制管理制度 1、目的 保证标准滴定溶液在保质期内浓度的可靠性以及被测样品 分析结果的准确性与真实性。 2、基本要求 从事标准溶液配制的人员需持试验检测证书上岗。 所用化学药品试剂无异常现象。 标准溶液制备水，除另有规定外，均系指蒸馏水。 制备标准溶液所用的玻璃计量器具、天平必须经过严格检定、校准合格，方可使用。 实验室试剂管理办法 1 目的 1.1 使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2 使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2 范围 2.1 适用于化验室化验员日常药品的管理。 3 职责 3.1 化验室 4 内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1 化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、通 风良好、温度一般不超过3 0C。 4.1.2 化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3 室内备有消防器材。 4.1.4 所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分类，钾 盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示剂按用途分 类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按测定对象分类。 4.1.5 易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配备相应 的灭火设备。 4.1.6 低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂同置一 个柜中。 4.1.7 见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财产损 失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于< 化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1 化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过程中 都应避免受热和强光照射。 4.2.2 所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原标签， 配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3 影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影响。 4.2.3.1 试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标明配 制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹 象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光 等。 4.2.3.2 试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓度多 会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 4.2.3.3 容器的耐蚀性。玻璃容器的耐碱性都较差，玻璃被腐蚀后可释放出某些杂质污染试液，所以，应采用聚乙烯瓶盛放碱性试液。软质玻璃的耐酸性和耐水性也较差，不应采用此种玻璃制成的容器长期贮存试液。 化验室化学试剂管理规定 1.范围和目的 本规程适用于品检科所有化学试剂以及配制试剂。 制定本规程的目的是为了建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂，保证化验工作质量。 2.化学试剂的购买： 技术员根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经化验室负责人审核，公司厂长批准，交供应科采购员购买。 3.化学试剂的入库 购买后由采购员直接交给仓库管理员并办理入库手续。 技术人员根据购买计划办理出库手续并通知化学试剂管理员到出库接受。 化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对。 化学试剂保管员必须每天检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。 无标签的试剂应予销毁。 4.化学试剂的领用 化验员根据检验需要量提出领用要求。 化学试剂管理员根据化验员的要求发放化学试剂，并填写化学试剂领用记录。 5.化学试剂贮存 原装化学试剂贮存环境 55 5 55℃,相对湿度以45-75%为宜。 5应有良好的通风设备。 化验室内化学试剂的贮存 5 配制好的化学试剂应存放于试剂架上。性质不稳定的配制试剂应根据不同的性质存放，如放在阴暗处、冰箱等地方。使用化学试剂的过程中应特别注意其外观的变化。 配制化学试剂一般贮存1~2个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 55需要冷藏保存的化学试剂应放在冷藏箱内保存。 易潮解、易失水风化、易挥发易吸收、二氧化碳、易氧化、易吸水变质化学试剂，需密闭保存或蜡封保存,应存放试剂柜下部柜中,平时应关门上锁；。 易爆炸品、易燃品、腐蚀品应单独存放,平时应关门上锁,剧毒品用后归还专用库（柜）。某些高活性试剂应低温干燥贮放。 保持室内清洁,通风和温湿度应符合规定。 每日检查一次消防灭火器材的完好状况,保证随时可以使用。 化学需氧量的药剂配制方法 1.重铬酸钾标准溶液： 浓度为C=0.2500mol/L的重铬酸钾标准溶液：将13g（25g）的重铬酸钾在105℃干燥箱里烘干，时间为2小时放置干燥器内空气冷却（冷却时，要用定性滤纸把口盖住烧杯口，以防潮气），再用精细天平称重（称后的重量为12.258g[24.516g],当天烘干，当天称量），放置烧杯中用纯水稀释，随放随搅，保证完全溶解，然后放入容量瓶中，稀释至1000ml(2000ml)。 2.硫酸-硫酸银试剂：向2.5L硫酸中加入25g硫酸银，放置3-4 天使之溶解，并混匀，使用前小心摇动。 3.硫酸亚铁铵标准滴定溶液： a:称40g(80g)硫酸亚铁铵放入大烧杯中。 b:加入700ml(1400ml)纯水。 C:加入20ml(40ml)浓硫酸。 d:搅棒搅匀，放24小时。 e:最后稀释至1000ml(2000ml). 4.试亚铁林指示剂： 溶解0.7g七水合硫酸亚铁于50ml的水中，加入1.5g邻菲罗啉，搅动加热至完全溶解，冷却后加水稀释至100ml。 阴离子表面活性剂试剂配制方法 1.4%氢氧化钠溶液： 取4g氢氧化钠用水定容至100ml。 2.3%硫酸 取3ml硫酸用水定容至100ml. 2.亚甲蓝溶液：称取50g一水合磷酸二氢钠（56.5g二水合磷酸 二氢钠）置于烧杯中，溶于水，慢慢岩壁加入6.8ml浓硫酸，混匀，转移入1000ml容量瓶中。另称取30mg亚甲蓝（指示级），用50ml水溶解后也移入容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。此溶液贮存于棕色试剂瓶中。 3.酚酞指示剂溶液： 将1g酚酞溶于50ml乙醇，然后边搅拌边加入50ml水，滤去沉淀物。 https://www.360docs.net/doc/674064612.html, 常用试剂配制及显色方法 （一）通用显色剂 1．重铬酸钾——硫酸 一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。 喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物 （1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高 显色的灵敏度。 （2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。 4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。 5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。 6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。 溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。 7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。 8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。 临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。 10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。 溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。 11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II 目 录 蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 30% (W/V) Acrylamide 1 40% (W/V)Acrylamide 1 10% (W/V) 过硫酸铵 1 5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液) 1 5×SDS-PAGE Loading Buffer 1 考马斯亮蓝R-250染色液 2 考马斯亮蓝染色脱色液 2 凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 显影液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) 4 IPTG (24 mg/ml) 4 X-Gal (20 mg/ml) 4 LB培养基 4 LB/Amp培养基 4 TB培养基 5 TB/Amp培养基 5 SOB培养基 5 SOC培养基 5 2×YT培养基 6Φb×broth 6 NZCYM培养基 6 NZYM培养基 6 NZM培养基 7 一般固体培养基的配制 7 LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 TB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法 1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)9 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 9 10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0) 9 3 M 醋酸钠 (pH5.2) 9 PBS Buffer 9 10 M 醋酸铵 10 Tris-HCl平衡苯酚 10 苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1) 10 10% (W/V) SDS 10 2 N NaOH 10 2.5 N HCl 10 5 M NaCl 11 20% (W/V) Glucose 11 Solution I (质粒提取用) 11 Solution II (质粒提取用)11 Solution III (质粒提取用) 11 0.5 M EDTA (pH8.0)11 1 M DTT1 2 10 mM ATP 12 核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5)13 10×TBE Buffer (pH8.3)13 10×MOPS Buffer 13溴乙锭（10mg/ml） 13 Agarose 凝胶 13 6×Loading Buffer (DNA电泳用)14 氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml 实验室药品的取用和溶液的配制 1 固体试剂的取用规则 （1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能再使用，以免沾污试剂。 （2）取用试剂后立即盖紧瓶盖。 （3）称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。 2 液体试剂的取用规则 （1）从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免接触器壁而沾污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需要专用滴管。装有药品的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中。 （2）使用胶头滴管“四不能”：不能伸入和接触容器内壁，不能平放和倒拿，不能随意放置，未清洗的滴管不能吸取别的试剂。 （3）配制一定物质的量溶液时，溶解或稀释后溶液应冷却再移入容量瓶。 （4）配制一定物质的量浓度溶液，要引流时，玻璃棒的上面不能靠在容量瓶口，而下端则应靠在容量瓶刻度线下的内壁上（即下靠上不靠，下端靠线下）。 （5）容量瓶不能长期存放溶液，更不能作为反应容器，也不能互用。（一般用于配制标准溶液的容量瓶最好专用） 3 溶液的配制 （1）配制溶质质量分数一定的溶液 计算：算出所需溶质和水的质量。把水的质量换算成体积。如溶质是液体时，要算出液体的体积。 称量：用天平称取固体溶质的质量；用量筒量取所需液体、水的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯里,加入所需的水,用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。（2）配制一定物质的量浓度的溶液 计算：算出固体溶质的质量或液体溶质的体积。 称量：用托盘天平称取固体溶质质量，用量筒量取所需液体溶质的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水用玻璃棒搅拌使之溶解，冷却到室温后，将溶液引流注入容量瓶里。 转移：用适量蒸馏水将烧杯及玻璃棒洗涤2－3 次，将洗涤液注入容量瓶，振荡，使溶液混合均匀。 常用试剂配制方法 氨试液 取浓氨水200ml，置1000ml量杯中，加水稀释至500ml。 碱性酒石酸铜试液：配600ml。 （1）取硫酸铜结晶20.8g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml试剂瓶中备用。（可长期保存） （2）取酒石酸钾钠结晶103.8g与氢氧化钠30g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml 试剂瓶中备用。（需新鲜配制） 临用前将两液等量混合，即得。 0.2％酚酞指示液：配500ml。（可长期保存） 粗称酚酞1g，置500ml量杯中，加95％乙醇500ml，使溶解，即得。 0.02mol/l氢氧化钠滴定液：配500ml。（可长期保存） 取氢氧化钠0.4g，置500ml量杯中，加水使溶解成500ml。 稀硝酸：配4000ml。（可长期保存） 取硝酸（16mol/L）210ml，置3000ml烧杯中，加水稀释至2000ml。配2次。 标准氯化钠溶液（10ug/ml）：配1000ml。（可长期保存） 精称氯化钠16.5mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100μg/ml）临用前，精密量取储备液100.0mL，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 8．硝酸银试液：配500ml。（需新鲜配制） 取硝酸银8.75g，置500ml量杯中，加水溶解至500ml。 9．稀盐酸：配3000ml。（可长期保存） 取盐酸（12.5mol/L）702ml，置5000ml烧杯中，加水稀释至3000ml。 10．标准硫酸钾溶液（100ug SO4-2/ml）：配500ml。（可长期保存） 精称硫酸钾90.5mg，置100ml烧杯中，加水溶解后，转移至500ml量瓶中。 11．25%氯化钡：配3000ml。（可长期保存，第二年如混浊，过滤） 粗称BaCl2750g，置5000ml烧杯中，加水超声溶解并稀释至3000ml（澄清）。 12．标准铅溶液（10ugPb/ml）：配600ml 。 精称硝酸铅16mg，置50ml烧杯中，加硝酸0.5ml与水5ml溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100ugPb/ml）（放冰箱长期保存） 临用前，精密量取储备液10.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 13．稀醋酸：配2000ml 。（可长期保存） 粗量冰醋酸（17.5mol/L）60ml，置1000ml量杯中，加水稀释至1000ml，调pH3.5。 14．醋酸盐缓冲液（PH3.5）：配2000ml。（包括阿司匹林的重金属检查，需新鲜配制） 粗称醋酸铵250g，置1000ml量杯中，加水250ml溶解后，加7mol/L 盐酸溶液380ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH值至3.5（电位法指示），用水稀释至1000ml，即得。 15．硫代乙酰胺试液：配1200ml。（需新鲜配制） （1）粗称硫代乙酰胺8g，置500ml烧杯中，加水200ml超声溶解，转移至试剂瓶中（硫代乙酰胺液），置冰箱中保存。（需新鲜配制） （2）配制1mol/L NaOH 1000ml：粗称NaOH 40g，置1000ml量杯中，加水溶解至1000ml。取600ml NaOH，200ml水，800ml丙三醇在3000ml烧杯中混匀（混合液）。转移至试剂瓶中，置冰箱中保存。（可长期保存）临用前取混合液1000ml，硫代乙酰胺液200ml，置80℃水浴上加热30秒，冷却，分装。试剂配制方法
常用试剂的配制.
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