流式细胞技术基本原理及临床应用
流式细胞术——原理,操作及应用(一)
流式细胞术——原理,操作及应用(一)流式细胞术——原理,操作及应用1. 原理•流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和计数悬浮在溶液中的个体细胞的技术。
•通过利用激光器激发细胞或微粒上荧光探针或吸光染料产生的荧光信号或散射光信号进行检测和分析。
2. 操作步骤样本制备•通过细胞培养、组织消化等方法获得需要检测的细胞样品。
•样本可能需要进行染色或标记以便于特定细胞或分子的检测。
流式细胞仪设置•调整激光器和探测器以适应所用标记物的激发和发射波长。
•设置仪器参数，如流速、放大倍数等。
数据采集和分析•将样本注入流式细胞仪，使其以单个细胞的方式流过激光束。
•通过荧光或散射光信号来检测和记录每个细胞的特征。
•利用专业软件对采集到的数据进行分析和解读。
3. 应用免疫表型分析•流式细胞术可以用于检测和分析细胞表面标记物的表达情况。
•可以用于分离和鉴定各种免疫细胞亚群，如T细胞、B细胞和NK 细胞等。
细胞周期分析•通过染色剂标记DNA，流式细胞术可以区分细胞的不同周期阶段。
•可以用于评估细胞增殖能力和细胞周期的营养、药物等因素影响。
细胞凋亡检测•利用荧光探针标记凋亡标记物，流式细胞术可以检测和计数凋亡细胞比例。
•可以用于评估药物对细胞凋亡的影响以及疾病状态的分析。
粒子分析•可以用于分析和鉴定不同大小、不同形状的微粒，如细胞、细胞器、胞外囊泡等。
•可以用于研究细胞的分泌和吞噬过程等。
其他应用•流式细胞术还可用于检测和分析细胞内钙离子浓度、细胞内蛋白、RNA和DNA含量等。
•可以应用于疾病诊断、药物筛选、生命科学研究等领域。
以上是流式细胞术的原理、操作步骤及一些常见应用的介绍。
流式细胞术的广泛应用使其成为现代生命科学研究和临床实践中必不可少的技术之一。
流式细胞术的基础和临床应用
流式细胞术的基础和临床应用流式细胞术是一种在单个细胞水平上进行多参数快速测定的技术，它利用流体力学原理和荧光化学技术，对细胞进行快速、准确地分析和分类。
流式细胞术具有高速度、高精度和高分辨率的特点，因此在生物学、医学和生物技术等领域得到了广泛应用。
流式细胞术的基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
细胞物理特性是指细胞的大小、形状、粒度等物理性质，这些性质可以通过流式细胞术进行测量。
荧光化学特性是指利用荧光物质标记抗体或核酸等分子，对细胞进行标记和染色，然后通过流式细胞术进行检测。
现代光学技术、计算机技术和电子技术的应用则使得流式细胞术能够实现多参数、高精度和高分辨率的检测。
在临床应用方面，流式细胞术被广泛应用于淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等方面。
淋巴细胞亚群分析是流式细胞术最常用的检测项目之一，通过对淋巴细胞亚群的检测和分析，可以了解机体的免疫状态和疾病发病机制，对于免疫相关性疾病的诊断和治疗具有重要意义。
功能性T淋巴细胞亚群分析则可以进一步了解T淋巴细胞的免疫功能和分化特点，对于肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等的治疗和预后评估具有指导作用。
肿瘤免疫分析则通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面的抗原和抗体，了解肿瘤细胞的免疫逃逸机制和免疫应答情况，为肿瘤的免疫治疗提供依据。
此外，流式细胞术还被应用于干细胞研究、基因表达分析、药物筛选和毒理学研究等领域。
例如，通过对干细胞的表面标志物进行检测和分析，可以了解干细胞的特性和分化能力；通过对基因表达谱的检测和分析，可以了解基因的表达水平和调控机制，为疾病治疗和药物研发提供依据。
总之，流式细胞术作为一种强大的细胞分析工具，其基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
在临床应用方面，流式细胞术已经成为医学研究和诊断中不可或缺的工具之一，其应用范围涵盖了淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等多个方面。
流式细胞计数方法
流式细胞计数方法一、流式细胞计数方法概述流式细胞计数（Flow Cytometry，FCM）是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速测量、分析和分选的技术。
它基于细胞在一个线性流动通道中通过激光束时，根据激光与细胞产生的散射光信号和荧光信号，对细胞进行定量、定性及分类。
流式细胞计数方法在生物学、医学等领域具有广泛的应用价值。
二、流式细胞计数技术的原理与应用1.细胞标记技术细胞标记技术是将荧光染料或其他示踪剂标记在细胞表面或内部，通过流式细胞仪检测标记物的信号，实现对细胞的特异性识别和定量分析。
常用的细胞标记物有荧光素、藻红蛋白、量子点等。
2.流式细胞仪的构成与工作原理流式细胞仪主要由光源、流动细胞室、光学系统、检测器、数据处理系统和样品制备系统等部分组成。
光源发出的光束经过流动细胞室时，照射到细胞，根据细胞产生的散射光和荧光信号，经过光学系统收集和传递，由检测器转换为电信号，最后通过数据处理系统进行分析。
3.流式细胞计数的应用领域流式细胞计数技术在生物科学、临床医学、免疫学、细胞生物学等领域具有广泛应用。
例如，在免疫学研究中，通过流式细胞计数可以对T细胞、B细胞等进行分选和检测；在细胞生物学研究中，可以用于检测细胞周期、细胞凋亡、细胞表面受体等。
三、流式细胞计数的优缺点优点：1.快速、高通量：可在短时间内对大量细胞进行检测和分析。
2.灵敏度高：对细胞数量较少的情况仍具有较好的检测效果。
3.分辨率高：可以对细胞表面和内部的抗原进行精确检测。
4.多样本分析：可同时检测多种标记物的表达。
缺点：1.样本要求较高：需对细胞进行适当的处理和标记。
2.设备昂贵：流式细胞仪价格较高，维护成本较高。
3.数据处理复杂：需要专业知识和技能进行数据分析和解读。
四、流式细胞计数在生物科学研究中的应用案例1.研究细胞表面抗原的表达：通过流式细胞计数，可以检测细胞表面抗原的表达水平，探讨细胞分化和发育过程中的分子机制。
2.细胞凋亡分析：利用流式细胞计数检测细胞凋亡率，了解细胞在生理和病理条件下的存活状态。
简述流式细胞术的原理与应用
简述流式细胞术的原理与应用一、流式细胞术的原理介绍流式细胞术（Flow cytometry）是一种利用流式细胞术仪（Flow cytometer）对单个活细胞进行多参数分析的技术。
它基于细胞的光学性质和生物化学特性，通过探针标记、荧光染料和细胞表面抗原的相互作用，对细胞进行高速连续检测和分离。
流式细胞术的原理如下：1.细胞悬浮和样本处理：将细胞样品作为悬浮液，通过离心等方法将细胞分散在液体中，去除细胞的团块和碎片，保证单个细胞的流式检测。
2.细胞标记：采用流式细胞术特定的探针和染料对细胞进行标记，以便后续检测和分析。
常用的标记方法包括荧光染料标记、抗体标记和细胞分子探针标记。
3.细胞分离和传送：将标记的细胞悬浮液通过流式细胞术仪，以流速每秒数千个细胞的速度单个分子传送到探测点。
4.光散射与荧光探测：细胞经过流式细胞术仪后，以激光束照射细胞，通过散射光和荧光信号的检测，对细胞进行空间分布和化学信息的获得。
5.数据采集与分析：通过计算机系统采集和记录细胞经过流式细胞术仪后所产生的光散射和荧光信号，在分析软件中对数据进行处理和解读，获得有关细胞的信息。
二、流式细胞术的应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，它在细胞学、免疫学、血液学、肿瘤学等领域有着重要的应用价值。
下面列举几个流式细胞术的应用示例：1.血液学研究：流式细胞术结合细胞表面标记和荧光染料标记，可以对血液中的不同细胞类型进行快速的鉴定和数量分析。
例如，通过流式细胞术可对血液中的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞等进行分类和计数，从而判断患者的免疫状态和疾病进展。
2.癌症诊断与治疗：流式细胞术对肿瘤细胞的检测和分析有着重要的作用。
通过流式细胞术，可以检测和定量肿瘤细胞的表面抗原和细胞内信号分子，进一步了解肿瘤细胞的类型、分化程度和增殖状态，为癌症的诊断和治疗提供指导。
3.免疫学研究：流式细胞术能够对免疫系统中的各种细胞类型进行鉴定、计数和功能分析。
FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用
流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细 胞仪对单个生物颗粒(红细胞、白细胞、各类组织细 胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和 生物学特性进行多参数定量分析，并能对特定细胞 群体加以分选的分析技术。
FCM的工作原理
流式细胞仪组成：
1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统
双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪 能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信 号。检测时需注意荧光补偿。
常用免疫荧光染料组合
荧光染料 FITC+PE
激发波长 （nm）
488
发射波长（nm） 525、575
颜色 绿色、橙色
FITC+PeCy5
488
525、675
绿色、红色
FITC+ECD
488
实体瘤以多倍体居多；
G0 期：DNA 合成静止期 G1 期：DNA 合成前期 S 期： DNA 合成期 G2 期：DNA 合成后期 M 期： 细胞分裂期
DNA 倍体 2N 2N
2N-4N 4N 4N
DNA非2倍体出现是鉴别良性与恶性肿瘤的特异性指 标:
良性肿瘤和正常组织良性增生不出现DNA非2倍体细 胞而恶性肿瘤常可出现异倍体细胞；
过去认为 FCM测定残存白血病细胞不可靠， 因为现用的 McAb不能鉴别正常血细胞与白血 病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗 原，但近来有人提出根据白血病细胞的以下特 征， FCM检测的敏感度可明显提高
白血病细胞的某些抗原表达量明显高于相应 的正常血细胞
如小儿ALL，其CDl0+细胞的荧光强度可 高达3-4个对数值，而其 CD45则为弱阳性或 阴性。
525、625
临床免疫学：流式细胞术
荧光染料的选择
仪器所配置的激光光源的 波长，即荧光素的激发光 谱；
荧光素的发射光谱与检测 器的接收光谱；
染色细胞的抗原表达的相 对密度；
液相芯片技术（liquid chip tech，LP） 及原理
将流式检测技术和芯片技术 相结合，实现对可溶性物质 的分析；
以不同颜色的荧光微球作为 反应载体，将不同的生物探 针标记在微球上，将结合不 同探针的不同颜色的荧光微 球与被测标本反应，利用FCM 进行分析和定量。
✓ 流式微球阵列技术 （cytometric beads array, CBA）
阴性细胞上的Fc受体情况； 使用同一波长激发光的荧
光素时，其发射波长应不 相同；
荧光补偿
在做多色分析时纠 正荧光素发射光谱 重叠的过程，即从 一个被检测的荧光 信号中去除其他来 源的干扰信号。
荧光补偿调节
1、先将所有补偿和电压 调为“0”；
2、用同型对照或阴性对 照管调节电压使阴性群位 于“左下角”；
3、用单阳性管依次调节 相关通道荧光之间的补偿， 如FL1-%FL2， FL2-%FL1
阴性对照：未染色的待分析标本；
同型对照（抗体）：与荧光标记抗体相同 来源、相同标记、相同剂量、相同类、亚 类和型的未免疫的免疫球蛋白，用于消除 由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生 的背景染色。
阳性对照：
2. 淋巴细胞功能分析：CD25/CD69/CD71；胞内细胞 因子的检测
3.免疫系统疾病的诊断：免疫缺陷病；AIDS， CD4/CD8比值; 强直，HLA-B27;
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用1. 引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的技术。
通过使用流式细胞仪，可以对生物细胞进行快速、精准的多参数分析，为科学家和医生提供了大量的有关细胞的信息。
流式细胞术已成为生物学领域的重要工具，被广泛应用于细胞分析、免疫表型分析、药物筛选等领域。
2. 原理流式细胞术基于细胞在封闭流动系统中单个通过的原理。
其基本流程包括样本制备、细胞标记、细胞检测和数据分析。
2.1 样本制备样本制备是流式细胞术的第一步，它需要将待检测的细胞样本制备成单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液等方式获得细胞样本。
重点是要避免细胞凝聚和聚集，以确保细胞在流式细胞仪中单个通过。
2.2 细胞标记细胞标记是流式细胞术的关键步骤之一。
它使用荧光染料或抗体等标记物与目标细胞发生特异性反应。
荧光染料可以通过不同的通道发出不同波长的荧光信号，从而实现多参数分析。
细胞表面标记的抗体通常与荧光素共价结合，以产生可检测的荧光信号。
同时，可以利用染料进行细胞内部器官或分子的标记，以更详细地研究细胞的功能和结构。
2.3 细胞检测细胞检测是流式细胞术中最关键的步骤之一。
它通过流式细胞仪将标记后的细胞悬浮液以单个细胞的形式通过单个检测区域。
这些细胞在流式细胞仪中被激活并产生荧光信号。
光电传感器将捕获和记录这些荧光信号，并将其转化为数字信号，供数据分析使用。
2.4 数据分析数据分析是流式细胞术的最后一步。
通过对获得的荧光信号的数字化处理，可以获得有关细胞的详细信息，包括细胞表面标记物的表达水平、细胞数量统计、细胞大小等信息。
数据分析可以使用专业的流式细胞仪软件完成，也可以使用其他数据分析软件进行更复杂的数据处理。
3. 应用流式细胞术作为一种全面、高通量的细胞分析技术，广泛应用于各个领域。
3.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中得到了广泛应用。
通过对免疫细胞的表面标记物进行检测，可以评估免疫细胞亚群的数量、功能和表达水平。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞分析技术，它基于光学、电子和计算机技术，能够对单个细胞进行快速、准确的多参数分析。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和实用技术。
一、基本原理流式细胞术的基本原理是利用细胞在液体中悬浮的特性，在流动状态下通过一个细胞计数器，同时对细胞进行多参数的检测和分析。
其主要包括以下几个步骤：1. 细胞样品的制备：将待检测的细胞样品进行预处理，如离心、洗涤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞的进样：将细胞悬浮液通过微细管道进入流式细胞仪的流动系统中，形成单细胞的液体流。
3. 细胞的定位和聚焦：利用激光束对细胞进行定位和聚焦，使其逐个通过探测区域。
4. 细胞的激发和发射：通过激光束的照射，激发细胞中的荧光染料或标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
5. 光信号的收集和处理：收集细胞发射的荧光信号，并经过光学系统进行分光、分束、分光和聚焦，最后通过光电倍增管或光电二极管转换为电信号。
6. 数据的获取和分析：将电信号转化为数字信号，并通过计算机系统进行数据采集、存储和分析，得到细胞的各项参数及相关统计学分析。
二、实用技术1. 细胞标记技术：为了能够准确地检测和分析细胞的特定性质，常常需要对细胞进行特异性的染色或标记。
常用的标记方法包括荧光染料、抗体标记和基因表达标记等。
2. 多参数分析技术：流式细胞术可以同时检测多个参数，如细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞周期等。
通过合理选择和配置荧光染料和滤光片组合，可以实现多重标记和多参数分析。
3. 数据分析软件：流式细胞术产生的数据量庞大，需要借助计算机软件进行数据的分析和解读。
常用的数据分析软件有FlowJo、CellQuest、ModFit等，它们可以对细胞的分布、比例、相关性等进行统计学分析和图形展示。
4. 高通量流式技术：随着科学研究的深入和技术的发展，高通量流式技术逐渐兴起。
它通过提高仪器的样品处理速度和自动化程度，实现对大量样品的快速检测和分析，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
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荧光标记
表面抗原标记：抗体用量106cells/test 冻干粉可以0.5~1ug/106cells为起始量 脂溶性染料：可直接进入细胞内 细胞内抗原标记及水溶性染料：需要膜通透试剂处理 膜通透试剂的选择 甲醇：中等，可能导致部分蛋白变性 皂素：温和，对细胞形态影响小
Triton-X100：强烈，对细胞形态影响大
临床应用意义
——从临床样本中获取更多的疾病提示信息
举例——FCM白细胞16分类： 相较于血球计数分类，FCM可同时检测更多参数而获得更多信息
FCM是细胞组学的定量工具
可以做以下定量：
细胞相对定量（％） 细胞绝对定量（细胞/µl）
细胞膜蛋白表达定量（蛋白分子/细胞）
可溶性蛋白绝对定量（g/ml）
FCM的技术特点
商品化试剂：含有上述多种成分，不同组合用途不同
五光十色的荧光素
单分子荧光素
耦合的复合荧光素分子
新型的纳米材料荧光物质—量子点染料Qdots
荧光素的选择
荧光染料 EX EM 应用 荧光染料 EX EM 应用
荧光素的选择
CD8-FITC CD8-PE
CD8-ECD
CD8-PC5
CD8-PerCP
CD8-APC
FS：反映细胞相对大小
侧向散射角（SS）
SS：反映细胞形状是否规则，内部颗粒、细胞器多少
外周血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后）
FS
SS
FCM的荧光检测
excited electron ENERGY EMITS ENERGY AS LIGHT
ATOM 荧光激发过程示意图
FITC荧光素的激发和发射光谱
FCM通过荧光标记区分不同的细胞类群
激发波长
发射波长
激光 荧光通道
荧光可以标记在细胞的任何部位
定量的标记：
蛋白表达；DNA含量；生物大分子；细胞器；代谢或生理差异
细胞膜 细胞器 细胞浆
直接标记 直接 打孔
细胞核
代谢
打孔或直接
ANYWAY
二、流式细胞仪的基本组成
流路
流动室 鞘液SHEATH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~5*106个/ml
FITC 520nm
Ex 488nm
Em 520nm
异硫氰酸荧光素（FITC）
荧光素的使用： 选择正确的激光器；确定正确的滤光片；
确定所需荧光探测器（PMT）
流式常用荧光染料
488nm激光 激发的荧光
LASER FITC 488 520 PE 575 ECD PI 615 620 PC5 665 PC7 770
氯化铵
适用于低含量细胞 注意：温度过低会影响裂解效果
作用温和，
红细胞样本：PBS或生理盐水稀释1000倍
血小板样本：避免使用肝素抗凝血， PBS或生理盐水稀释20倍
单细胞悬液制备
某些检测对血样本有特殊要求
检测细胞表面及血浆中都存在的抗原应先将血浆离心去除并洗涤1次以 上，如免疫球蛋白轻链 检测血小板活化采用柠檬酸钠抗凝，抽取中段血，避免体外活化 检测血小板相关抗体，普通台式离心机800rpm离心取上清，收集富血小 板血浆，2000rpm离心洗涤后进行标记 骨髓血样本：基本与外周血相同，但需过300目滤网去除 骨髓小粒
同型对照选择原则
同种属来源 同抗体类型 同荧光素标记 等量加入 例如：FITC标记小鼠抗人CD4单克隆抗体（IgG1）
单细胞悬液制备
组织细胞
脾细胞，在缓冲液中将血洗净，剪成数块，直接在300目 滤网上研碎过筛 肝、肾组织及结肠癌等富含实质细胞的组织，于缓冲液中 充分剪碎，细胞分散于缓冲液中，过100目滤网，再过300目滤网
肺、肠粘膜等结缔组织较多的组织，剪碎并用胰酶、胶原 酶等消化分散
骨、软骨、心肌、骨骼肌、脑组织等，可尝试机械剪碎及 酶消化后于培养液中静置贴壁分离细胞，但可用的细胞往往较少 ，最好进行原代培养
检测速度快 1000~100000cell/s
以单一细胞为分析基础
多参数测量 具有统计学意义 高分辨率(CV<2%)、高灵敏度(荧光检测灵敏度≤100MESF（ Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome），前向角散射
光检测灵敏度(0.2∼0.5µm)
分选纯度可达99%以上
流式细胞仪基本原理与临床应用
主要内容
认识流式细胞技术 流式细胞仪的基本组成 检测样本的制备 样本检测与分析 临床检测应用简介
一、认识流式细胞技术
概念：流式细胞技术(Flow Cytometry, FCM)是利用流 式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多 参数、快速的定量分析及分选的技术 临床发展简史：上世纪50年血球计数仪的问世为其 雏形，70年代第一台流式细胞仪问世，90年代逐渐 开始应用于临床并逐渐得到广泛应用
240 kD
Cy5 = 1500 D
PerCP (F/P Ratio 3-5)
35 kD
Cy7 = 1001 D
PC7 (F/P Ratio 1) APC (F/P Ratio 1)
105 kD 240 kD
荧光素的选择
弱表达抗原选择较“明亮”的荧光素如PE 细胞内抗原检测优先选择小分子荧光素如FITC 多色标记时注意尽量选择相互干扰较小的荧光素组 合
High Sensitivity Quartz Flow Cell
Forward Scatter Detector
525 BP
575 BP
620 BP
488 DLP
488640 DLP 675 BP
流式细胞仪的电路
进行信号检测和分析 荧光信号由光电接收器（PMT）接收，转变为电信号， 可分析电压脉冲的高度、面积和宽度 电脉冲信号经A/D转换成数字信号 数字信号传送到计算机，进行储存、 作图、 统计分析
临床样品
外周血：抗凝全血
骨髓：抗凝骨髓血 胸腹水、穿刺液、灌洗液：脱落细胞 实体组织：分散成细胞悬液 其他：人造微球
科研样品
培养细胞株 动植物、微生物细胞
单细胞悬液制备
样本浓度要求：建议105~106/ml
血样本
样本要求：EDTA、肝素、柠檬酸钠抗凝全血 凝血、溶血样本应当弃用 白细胞样本：需裂解去除红细胞 裂解液的选择：甲酸 般检测 作用强，适用于一
620 -640 nm Light
二向色性滤片 DICHROIC FILTER
550 Long Pass Dichroic Filter
Light Source Reflected light
Transmitted Light >550 nm Light
<550 nm Light
流式细胞仪光路示意图
<390 l
400-450 l
450-500 l
500-570 l
570-590 l 590-620 l
620-750 l
>750 l
violet
blue
green
yellow
orange
red
infra-
荧光的识别——光学滤片组
带通滤片 BAND PASS (BP)
630/20 Band Pass Filter
FCM激光光路
光斑直径d可由下式确定：d=4λf/πD。λ为激光波长；f为透镜焦距；D为 激光束直径。
激光光源
垂直透镜（约束激光的宽度）
横向透镜（约束激光的高度）
形成小的椭圆形激光束
流动室
FCM散射光测量原理
波长与入射光一致，为细胞固有的物理及生理特性，可依此对未染色的 细胞进行分析
前向散射角（FS）
光路
光源 滤片 光电倍增管PMT HV
电路
放大电路HV及GAIN 增益 A/D转换
统计
计算机
FCM样本流路示意图
流动室
鞘液
激光
侧向及荧光信号 前向散射光信号
由于鞘液的作用，待测细胞被限制在液流的轴线上——流体动力学聚 焦
FCM的光源和光路
•光 源 采用激光光源 是一种相干光源，它能提供单一波长、单一方向、 同步的稳定光照
新药研究
细胞生物学研究 • 细胞存活率检测 • 细胞凋亡发生率检测 • 细胞免疫功能改变检测 • 细胞周期检测
生物材料
疾病机理等
纳米药物和材料研究和应用 • 纳米材料基础研究，如半导体种类、组成比例、直径大小 与光谱激发 • 纳米材料的应用，如吸收和发射性能、半衰期、标记效率 、色谱交叉和补偿、标记检测等 • 纳米材料对细胞的毒性性能检测，如凋亡、激活能力等 • 纳米材料导入细胞的途径和效率研究
荧光强度受荧光素本身的性质、pH值及检测仪器影响而不同
荧光检测通道之间的干扰
荧光素的大小 FITC (F/P Ratio 3-5)
389 D
ECD (F/P Ratio 1)
240 kD
Texas Red = 625 D
PE (1/Antikörper)
240 kD
PC5 (F/P Ratio 1)
620BP FL3 (ECD) 575BP FL2 (PE) 525BP FL1 (FITC) Air-cooled Argon Ion Laser Side Scatter Detector
645DL 600DL 550DL
675BP FL4 (PC5)
Beam Shaping Lenses
488BK 488DL
电脉冲信号的产生及光电管和检测系统
光电管和检测系统：放大器
基本原则
-- 信号强弱差<10倍or需线性关系:使用线性放大器(如散射光,DNA分析) -- 信号强弱差>10倍or需分析弱荧光:使用对数放大器(如荧光)