肝脏损伤模型
细胞损伤模型
一、体外肝细胞损伤模型建立(CCｌ4与H2O2)ﻫ 1 大鼠肝细胞得分离与培养大鼠4％戊巴比妥麻醉,门静脉插管,先以无钙灌流液灌流,继以3７℃通入Ｏ２得Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。
将肝脏移至一平皿内,轻轻撕去肝包膜后,加入含5％小牛血清得清洗液,用吸管吹打成单个肝细胞悬液,２00目尼龙网过滤,低速离心(５0０r·miｎ-1,1 mｉｎ,4℃)弃上清,同法用清洗液反复洗3次、然后用完全1640培养液(内含10％小牛血清,10５U·L－1青霉素,1０0 mg·L—1链霉素与10 mg·L-1胰岛素)制成１×109个·L-１肝细胞悬液、分离得肝细胞经0、6%台盼蓝拒染法测得细胞活力大于９0％,高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定9９％为肝实质细胞。
将上述肝细胞悬液分别加入２４孔(每孔１mｌ)与96孔(每孔０。
１ml)培养板中,置３７℃,5%CO2培养箱中培养。
１2～１6 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长、ﻫ2 CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型得建立肝细胞培养12 h后,吸弃上清,更换培养液并加入不同浓度得ＣＣl4〔(1～1６mｍｏｌ·Ｌ-1),以少量得二甲亚砜助溶,二甲亚砜终浓度为0、1％(体积分数)〕,作用不同时间(1～12h)后,收集２4孔板中培养上清检测AST,以及肝细胞得MDA含量与ＧSHpｘ活性;同步测定96孔板中培养肝细胞得MTT反应。
根据检测结果制备CＣｌ4诱导肝细胞损伤得量效与时效曲线、选择最造损伤浓度与损伤时间制备肝细胞得损伤模型,同时设溶媒对照组,每组至少设３个复孔、３H2O2诱导肝细胞坏死性损伤模型得建立同法更换培养液,加入不同浓度得H２O2(０.２～３。
2 ｍmol·Ｌ—１),作用不同时间(0、5～4 h)后,收集24孔板中培养上清检测AＬT,测定肝细胞得MDA含量;同步测定９６孔板中培养肝细胞得MTT反应。
cde小鼠模型肝损伤原理
cde小鼠模型肝损伤原理
CDE小鼠模型是一种常用的实验动物模型，用于研究肝损伤和
肝纤维化。
CDE模型的原理主要是通过饮食操纵来诱导小鼠发生肝
损伤。
CDE模型中的C代表胆固醇（cholesterol）、D代表二乙基
二硫代碳酸酯（diethyldithiocarbamate），E代表乙醇（ethanol）。
这种饮食操纵可以导致小鼠发生脂肪肝、肝细胞损伤、肝纤维化等肝病变化。
具体来说，CDE模型通过高脂饮食（高胆固醇）、二乙基二硫
代碳酸酯（一种抗氧化剂）和乙醇（酒精）的摄入来诱导小鼠发生
肝损伤。
这些因素会引起肝细胞脂质代谢紊乱、氧化应激、炎症反
应和纤维化等病理生理过程。
高脂饮食可以导致脂肪在肝脏内沉积，形成脂肪肝，而二乙基二硫代碳酸酯和乙醇则可以加剧肝脏损伤和
纤维化的发展。
CDE模型肝损伤的原理涉及多个方面，包括脂质代谢、氧化应激、炎症反应、纤维化等生物学过程。
研究人员可以利用这个模型
来探究肝损伤的发生机制，以及寻找潜在的治疗方法。
在研究肝病
理生理过程和开发新的治疗策略方面，CDE小鼠模型都发挥着重要
的作用。
肝损伤动物模型的研究进展
肝损伤动物模型的研究进展肝损伤是指肝脏受到各种原因引起的不同程度损害的病理过程。
肝损伤的研究对于深入了解肝脏病理生理学机制、发现新的治疗靶点和开发新的药物具有重要意义。
动物模型是肝损伤研究的重要手段之一，通过构建适用的动物模型，可以模拟人类肝损伤的发生和发展过程，为肝损伤的基础研究和临床治疗提供有力支持。
常用的肝损伤动物模型包括化学性损伤模型、物理性损伤模型和生物学性损伤模型。
化学性损伤模型是利用特定的化学物质对动物肝脏进行损伤，常用的化学物质有四氯化碳、二乙二酸、乙醇和亚硝酸等。
物理性损伤模型是通过不同的物理因素对动物肝脏造成损伤，常见的有手术切除、缺血再灌注和冷冻等。
生物学性损伤模型是利用病原体感染、毒素作用或基因突变等因素引起肝损伤。
在化学性损伤模型中，四氯化碳（CCl4）是常用的肝损伤诱导剂。
CCl4会在肝脏中产生活性氯自由基，进而导致肝细胞膜的破坏和肝细胞损伤。
研究表明，CCl4模型可以模拟急性和慢性肝损伤的发生和发展过程。
在物理性损伤模型中，手术切除是常用的研究方法，通过肝叶的摘除可以模拟肝切除术后的肝再生和组织损伤修复过程。
在生物学性损伤模型中，病原体感染模型是研究肝炎和肝硬化等感染性肝损伤的重要手段。
近年来，肝损伤动物模型的研究得到了广泛关注，取得了一系列重要进展。
利用基因编辑技术构建特定基因敲除或过表达的动物模型，可以探究特定基因在肝损伤中的功能和作用机制。
使用CRISPR/Cas9技术敲除一些促炎因子基因，可以研究这些基因在非酒精性脂肪性肝病和肝纤维化中的作用。
利用转基因和基因表达技术构建特定基因表达的动物模型，可以模拟人类肝病的发病机制和临床表现。
构建APOE敲除小鼠模型，可模拟人类高脂血症和动脉粥样硬化的发生过程。
利用大型动物模型，如猪、猴等，可以更好地模拟人类的肝损伤，并提高疗效和安全性的评价。
猪模型可以模拟人类慢性肝炎病毒感染和肝硬化的发展过程。
肝损伤动物模型的研究已经取得了重要进展。
急性肝损伤模型的研究进展
急性肝损伤模型的研究进展作者：刘彦双朱淑霞王永利作者单位：050200 河北省石家庄市卫生学校（刘彦双）;河北武警总队医院（朱淑霞）;河北医科大学药理教研室（王永利）【关键词】急性肝损伤肝损伤实验动物模型的复制是进行防治肝损伤药物研究的前提。
目前，肝损伤动物模型的复制主要有生物性、免疫性、化学性等方法，生物学方法要求实验条件高且费用昂贵，限制了应用。
免疫方法是造成免疫肝损伤，主要用于通过免疫机制而抗肝损伤的药物研究。
化学方法则是通过化学性肝毒物质，如四氯化碳、氨基半乳糖、硫代乙酰胺、黄曲霉素等致肝损伤。
在我国卫生部颁布的《中药药理实验指导原则》中明确指定应用四氯化碳和氨基半乳糖肝损伤动物模型进行保肝降酶新药的药理实验，应用四氯化碳和氨基半乳糖复制肝损伤动物模型，条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，是其他任何肝损伤模型无法比拟的，故目前研究抗肝损伤新药常采用四氯化碳和氨基半乳糖复制动物模型。
1 化学性肝损伤动物模型1.1 四氯化碳性肝损伤四氯化碳（CCl4 ）溶于精致植物油，配制0.1%浓度，按10ml.kg小鼠腹腔注射，12～24h后处死动物。
测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红质（TB）、总蛋白（TP）、白蛋白（A）、，肝匀浆脂质过氧化物（LPD）或丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）或还原性谷胱甘肽（GSH）等反映肝功能及脂质过氧化的指标，并进行组织病理学检查。
关于CCl 4 肝毒的作用机制，存在多种假设，但都一致公认，自由基的形成及引发的链式过氧化反应是其主要机制。
CCl 4在体内可经肝微粒体细胞色素P450 代谢激活，生成两个活性自由基（CCl 3 O 2 和Cl）及一系列氧活性物，可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化反应，膜磷脂大量降解，从而破坏细胞膜结构完整性，引起膜通透性增加，最终导致肝细胞死亡［1］。
肝损伤动物模型的研究进展
肝损伤动物模型的研究进展肝脏是人体最重要的器官之一，它具有排毒、合成蛋白质、解毒、能量储备和胆汁分泌等功能。
由于不良的生活习惯以及环境污染等因素，肝脏疾病的发病率逐年增加。
研究肝损伤的动物模型具有重要的理论和临床意义。
本文将从动物模型的选择、建立方法和研究进展等方面进行综述。
一、动物模型的选择在研究肝损伤的动物模型时，研究者首先需要选择合适的动物种类。
常用的动物模型包括小鼠、大鼠、猪和猕猴等。
小鼠和大鼠是最为常用的实验动物，它们具有生殖力强、易于获取、成本低等优点，更适合大规模的实验研究。
而猪和猕猴则更接近人类的生理特征，更适合用于某些特定的研究。
二、动物模型的建立方法1. 化学性肝损伤模型化学性肝损伤模型是最为常见的一种模型，常用的损伤剂包括四氯化碳（CCl4）、酒精、丙酮、二乙酰肼等。
CCl4是最为常用的肝损伤剂，它会在肝脏内产生自由基，进而导致肝细胞损伤和坏死。
通过给予动物不同剂量和不同途径的CCl4，可以模拟出不同程度的肝损伤，从而用于疾病的研究。
2. 生物性肝损伤模型生物性肝损伤模型是通过给予动物不同病原体或毒素，来诱导其产生肝炎、肝硬化等疾病，从而模拟出相应的肝损伤。
常用的病原体包括甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等，而常用的毒素包括霉菌毒素、大豆异黄酮等。
3. 物理性肝损伤模型物理性肝损伤模型是通过给予动物不同的物理性因素，如电击、冷冻等，来诱导其产生肝损伤。
这种模型一般用于肝损伤的急性期研究。
三、研究进展近年来，随着生物技术的不断发展和进步，肝损伤动物模型的研究也取得了长足的进步。
一方面，利用基因编辑技术和转基因动物技术，研究者可以构建出更为理想的肝损伤动物模型，从而更好地模拟出人类肝脏疾病的发生和发展过程。
利用影像学技术和免疫组化技术，研究者可以对肝脏进行更为直观和准确的研究，从而更深入地了解肝损伤的机制和病理生理过程。
近年来，许多研究者还利用干细胞和干细胞衍生物，构建出更为完整和复杂的肝脏器官模型，从而更好地模拟出人类肝脏的生理和病理过程。
改良小鼠酒精性肝损伤模型的建立
利用 简易 胃造
【 要】 目的 摘
探 索建立简便和稳定 的酒精性肝病 （ Ｌ 的动 物模 型。方法 Ａ Ｄ）
漏 的方法 ， 将实验动物分为 四组 ， 为正 常小 鼠（ Ａ组 ｎ＝１ ） Ｂ组为 胃造 瘘后 给予生理盐水 （ ２； ｎ＝１ ） Ｃ ２ ； 组为 胃造瘘后给予酒 精（ ８ｇ・ ｇ ・ ） ＝ ２ ； １ ｋ ～ ｄ （ ２ ） Ｄ组小 鼠给予 自制 的 ｚ Ｑ液 （ ２ ） ｎ＝ ２ 。实验动态 观察 ｌ ， ２周 分别 在第 ４周 、 、 、２周测 四组小 鼠肝重、 ６周 ８周 １ 体重值并 检测肝脏 Ａ Ｔ和 Ａ Ｔ水平 ， Ｌ Ｓ 同 时 收集肝脏标本经 Ｈ Ｅ染色后光镜观察肝 组织 的结构变化 。结果 Ｃ组模 型与 Ａ组 和 Ｂ组 比较也 出 现不 同程度的肝脏损害 ， 但损害的程度较 Ｄ组轻。Ｄ组小 鼠在 ４周开始 出现 了肝细胞脂肪 变性 ， ８周
（８ｇ・ ｇ ・ ａ ） （ １ ｋ ～ ｄｙ ｎ＝２ ） ｒｕ ｅｅｇ ｅ ｏ ｍａｅＺ ｕ （ ２ ；Ｇ ｏｐＤ ｗ ｒ ｉ Ｄｈｍｅ ｄ Ｑ ｆ ｉ ｎ＝２ ） ｈ ｉ ｒＡ Ｊ ａｄ ｖ ｌ ｄ ２ ．Ｔ ｅｌ ｅ Ｉ ｎ ｖ Ｔ
ＡＳ ｖ ｌ ｗｅｅ ｄ ｎ ｍｉａｌ ｎ ｔｒｄ ｆｒ １ ｅ ｋ ． Ｔ ｅ ｍｏ ｓ ｒ ｍ ｖ ｒ ｒ ｕ ｒ ａ ｕ ｅ ｉ ｅ Ｔ ｌ ｅｓ ｅ ｒ ｙ ａ ｃ ｌ ｍｏ ｉ ｅ ｏ ２ ｗ ｅ ｓ ｙ ｏ ｈ ｕ ｅ ｆｏ ｅ ｅｙ ｇ ｏ ｐ ｗｅ ｅ ｍｅ ｓ ｒｄ ｌ ｒ ｖ ｗ ｉｈ 。ｂ ｄ ｅ ｇ ｔ ｎ ｅ ｅ ｔ ｄ ｌｖ ｌ ｏ Ｔ ａ ｄ ＡＳ ｔ ｈ ６， １ ｅ ｋ ｅ ｐ ｃｉｅ ｙｗｈ ｎ ｔ ｅ ｌ ｅ ｅｇ ｔ ｏ ｙ ｗ ｉｈ ｄ ｄ ｔ ｃｅ ｅ ｅｓ ｆ ａ ＡＬ ｎ Ｔ ａ ｅ４， ８， ２ ｗ ｅ ｓ ｒｓ ｅ ｔ ｌ ｅ ｈ ｖ ｒ ｔ ｖ ｉ ｗ ｒ ｏｌｃｅ ｔ ｔ ｅ ｓ ｎｅ ｔ ． Ｔ ｅ ｐ ｔ ｏ ｏ ｉ ｈ ｎ ｅ ｏ ｈ ｐ ｔ ｉｓ ｅ ｉ ｏｈ ｇ ｏ ｐ ａ ｂ ｅ ｖ ｄ ｅ ｅ ｃ ｌ ｔｄ ａ ｈ ａ ｌ ｉ ｅ ｍｅ ｈ ａ ｌｇ ｃ ｃ ａ ｇ ｆ，ｅ ａ ｉ ｔ ｕ ｎ ｂ ｔ ｒ ｕ ｓ ｗ ｓ ｏ ｓ ｒ ｅ ｈ ｃ ｓ
大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型
大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型缺血再灌注损伤，即缺血器官、组织重新获得血液供应，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重了功能代谢障碍及结构破坏。
对麻醉动物的肝中叶和肝左叶的门静脉和肝动脉进行阻断和再通，由于肝脏中叶和左叶血流的阻断和再通，引起肝脏中叶和左叶明显的再灌注损伤。
肝脏缺血过程中由于肝细胞内ATP迅速耗尽，导致乳酸酮体等的堆积，及线粒体氧化磷酸化功能低下，引发代谢性酸中毒，缺血过程中细胞缺氧使ATP含量下降，导致肝细胞内外Ca2 +重新分布，即Ca2 +内流，引起线粒体的损伤。
再灌注过程中由于氧自由基的爆发性增多，中性粒细胞的聚集，kupffer细胞的激活，细胞凋亡及其他多种细胞因子的作用，使得肝细胞膜损伤，内皮细胞损伤及肝脏微循环障碍等导致肝脏功能代谢障碍及结构破坏。
1.实验动物SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g。
2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.实验周期0h、3h、6h、12h、24h、72h4.建模方法1.选取体重250g-300g大鼠，行术前12 h禁食，自由饮水。
2. 15%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后将大鼠平躺在手术台上胶带固定四肢，将大鼠腹部至剑突术区剃毛，用10％碘酒和75％乙醇术区消毒。
3.取腹正中切口1cm，打开腹腔，小心分离出肝脏左、中叶之肝蒂（左、中叶肝脏供血的门静脉和肝动脉）。
4. 用无创血管夹夹闭中叶和左叶的门静脉和肝动脉,使约70%的肝脏缺血,以防止发生严重肠系膜静脉淤血。
0.5min后,与非阻断的右叶相比，肉眼可见阻断叶明显变白，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将大鼠放在37℃恒温加热垫上保温。
5. 完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，0.5min左右可见缺血区肝脏由白色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功，逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔，完成手术。
实验性肝损伤模型的建立和评价
半 乳 糖 胺 是 一 种 肝 细 胞 毒性 药 物 ， 在 短 时 间 内引 起 严 重 可 肝 损 害 ， 作 用 机 制 是 ： 通过 抑 制 肝 细 胞 的 Ｒ 其 ① ＮＡ 和浆 膜 蛋 白 合 成 造 成肝 细胞 坏 死 一 ② 肝 细 胞 坏 死 与 细 胞 外 ｃ ＋大 量 进 ； ａ ２ 人 细胞 内有 关 ； 一 些 研 究 指 出 ． 外 因 素 ， 括 胃肠 通 透 性 ③ 肠 包
隔 ４ ｄ皮 下 注 射 ０ ３ｍｌ１ ０ｋ ． ／ ０ ｇ体 重 ， ｌ 共 Ｏ次 ；Ｓ 大 鼠 （ 重 Ｄ 体
增 加 ． 菌 的 移 位 和 内 毒 素 等 都 增 加 了 半 乳 糖 胺 的 肝 脏 毒 细
忡 。
急 性肝 功 能 衰 竭 模 型 ： 白 猪 颈 外 静 脉 置 管 注 射 半 乳 糖 胺 大 （ ． ５ｇ ｋ ０ ７ ／ ｇ体重 ） 给 药 １ ． 功 能 损 害 开 始 明 显 ． ４ ， ８ｈ 肝 至 ８ｈ达 高 峰． 疗肝功能 衰竭 的各种措 施可 在这 段 时间 内进 行试验 ， 治
该 模 型适 合 进 行 人 工 肝 脏 支 持 治 疗 的 研 究 ｌ ； 猪 经 门 静 脉 注 ｌ 家
射 半乳 糖 胺 ０ ５ ｇ ｋ ． ／ ｇ和 脂 多 糖 １ｇ ／ ｇ１ ， 单 用 半 乳 糖 胺 ｇ ｋ ； 与 ６ （ ／ ｇ 外 周 静 脉 注 射 诱 导 大 动 物 急 性 肝 功 能 衰 竭 模 型 相 比 ， １ ｋ） ｇ 半 乳 糖 胺 用 量 减 少 了 一 半 ， 合 应 用 脂 多 糖 ， 药 有 明 显 协 同 联 两 作用 。 长 期 小 剂 量 可 导 致 肝 纤 维 化 和 肝 癌 。半 乳 糖 胺 诱 发 的 急 性 肝 功 能 衰 竭 模 型 症 状 、 化 、 织 学 表 现 接 近 人 ， 复 性 生 组 重
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肝损伤模型:5O只小鼠随机分为5组，每组l0只，分空白对照组：常规饲养，自由饮水；模型组：常规饲养，自由饮水，每天用0．2mL 生理盐水灌胃一次；山药多糖保护组分高、中、低三组，常规饲料，自由饮水，每天按体重50 mg／kg、100 mg／kg、150 mg／kg山药多糖胃一次】，连续饲养8 d，末次灌胃2 h，正常对照组腹腔注射调和油溶液，其余各组腹腔0．15％ ccL4调和油溶液(10 mL／Kg 体重) J，12 h后禁食不禁水，24 h眼球取血，分离血清，用赖氏法测ALT、 AST.
测量指标:采用CCl 诱导小鼠肝损伤模型，药物预防性实验，通过测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) 和肝组织丙二醛(MDA)含量、黄嘌呤氧化酶(XOD)、谷胱甘肽还原酶活性(GSH)以及肝组织形态学变化为指标，观察提取物对肝损伤的保护作用。