PAS染色法
细胞pas糖原染色
细胞PAS糖原染色1. 简介细胞PAS糖原染色是一种常用的组织学技术，用于检测细胞内是否存在糖原。
PAS （Periodic Acid-Schiff）染色方法通过使用周期酸和Schiff试剂，能够将组织中的糖原染成紫红色。
2. 原理2.1 PAS染色方法PAS染色方法主要包括以下几个步骤： 1. 取细胞或组织标本，固定并包埋。
2. 制作切片，将切片脱脂去蜡。
3. 将切片置于周期酸溶液中，在适当的时间内进行氧化处理。
周期酸能够氧化多数糖类物质，使其产生亲合Schiff试剂的位点。
4. 清洗去除周期酸。
5. 加入Schiff试剂，与氧化后的糖原结合形成紫红色沉淀。
6. 清洗去除Schiff试剂。
7. 对切片进行脱水、透明化和封片。
2.2 PAS染色结果解读•阳性反应：呈紫红色至红色，表示细胞中存在糖原。
•阴性反应：无颜色或淡黄色，表示细胞中不存在糖原。
3. 实验步骤3.1 材料准备•周期酸溶液•Schiff试剂•脱蜡剂•脱水液（不同浓度乙醇）•透明剂（如山梨醇）•封片剂3.2 实验步骤1.取已经固定并包埋的组织标本，制作切片。
2.将切片放入去蜡剂中，去除蜡质。
3.进行脱水，逐渐将切片浸泡于不同浓度的乙醇中（如70%，80%，90%和100%），每次浸泡时间约为2-5分钟。
4.将切片放入周期酸溶液中，在室温下进行氧化处理。
氧化时间根据需要可在5-30分钟之间调整。
5.清洗去除周期酸，将切片置于流动自来水下冲洗数分钟。
6.加入Schiff试剂，将切片置于试剂中静置10-15分钟。
注意避免阳光直射。
7.清洗去除Schiff试剂，将切片置于流动自来水下冲洗数分钟。
8.进行脱水，逐渐将切片浸泡于不同浓度的乙醇中，每次浸泡时间约为2-5分钟。
9.将切片置于透明剂中，使其变得透明。
10.将切片放入封片剂中，并用玻璃盖片封装。
4. 结果分析通过PAS糖原染色方法，我们可以观察到细胞中的糖原含量及分布情况。
PAS染色法
PAS染色法—概况、原理PAS染色法概况PAS染色法（P eriodic A cid-S chiff stain）在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。
过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。
PAS染色法原理PAS染色又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。
一般用来显示糖元和其它多糖物质。
原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。
PAS染色法—应用、制作PAS染色法—应用随着医学实验技术的发展，近年来,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质，心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究，糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。
除用于糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。
临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据.PAS染色法-制作1. 固定液:用Carnoy液或75%酒精Carnoy固定液：纯酒精60 ml冰醋酸10ml氯仿30ml2. 染色液1）过碘酸酒清夜配法: 过碘酸(HIO .2H O）0.4g95％酒精35ml M/5醋酸钠(2。
72g+蒸馏水100ml）5ml蒸馏水10ml。
保存于冰箱内，用棕色瓶,可用两周.2）Schiff氏液：0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中，时时摇动三角瓶5分钟，使之充分溶解。
冷却至50℃后过滤，加入10毫升1N盐酸。
冷却至25℃,加入0.5—1克偏重硫酸钠，在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。
3）Schiff氏酒精液配置Schiff氏液11.5ml1N HCI 0。
5ml纯酒精23ml4) 亚硫酸水1％偏重亚硫酸钠10ml1N HCI 10ml蒸馏水180ml的树胶溶解。
PAS染色法-实验效果准备1、10g/L过碘酸液2、Schiff染液：碱性品红0.5g ，DH2O 100ml煮沸后，待片刻，加入碱性品红，振荡数分钟使品红溶解,冷至50℃加入1M的盐酸20ml，混匀。
PAS染色法
PAS（PeriodicAcidSchiff）染色方法PAS染色步骤结果：糖原，粘液和基底膜-红色/粉红色.,背景-蓝色。
未经淀粉酶消化的切片，糖原被PAS染成洋红色，经淀粉酶消化的切片消失。
试剂配制1.0.5%过碘酸水溶液过碘酸 2.5g蒸馏水500ml2.Schiff试剂Schiff试剂碱性复红（CI42500）6g蒸馏水1200ml1N盐酸60ml偏重亚硫酸氢钠12g用600ml蒸馏水溶解6g碱性复红，煮沸几分钟，冷却到50℃加入1N盐酸60ml，冷却到25℃加入12g偏重亚硫酸氢钠（高纯度化学试剂）。
液体放于暗处24小时。
加5～6g活性炭，摇动大约1分钟。
通过粗过滤纸过滤，液体应该清亮，如果液体有颜色重复加入活性炭。
蒸馏水加到液体到总量600ml，放入棕色瓶中冰箱内保存。
3.Mayer改良苏木精夜苏木精2g硫酸铝钾100g蒸馏水600ml碘酸钠0.4g冰醋酸20ml硫酸铝钾加入蒸馏水中稍加热，同时将苏木精溶于无水乙醇中，再将两种液混合，加入碘酸钠，充分溶解。
此液是一种进行性苏木精液，染色时一般不需要分化，但染色过深可以进行适当分化。
注意事项：关键是碘酸钠的使用量1)根据气候季节温度的改变，适当调整碘酸钠的使用量，配方中给出的量适合夏季（温度大约25℃）随着温度下降每降1℃碘酸钠的使用量增加0.01g，最多不能超过配方使用量的50%，过量的碘酸钠可是苏木精氧化，不仅有效时间短，还会出现核浆共染。
2)称量一定要准确，碘酸钠尽量使用精确度高的天平称量。
3)碘酸钠有有限期，除了注意有效期，还应注意有无潮解，质量不保险的碘酸钠最好不用，为了保险使用有效的碘酸钠。
糖原(PAS)染色
糖原(PAS)染色[原理]过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色反应，沉着含糖原的细胞结构上，标本上所能显红色的糖类主要为多糖包括糖原、糖蛋白、粘多糖和糖脂等。
[试剂](1)由上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司提供。
(2)试剂组成:固定液4.5ml；过碘酸溶液20ml；雪夫氏溶液20mg。
(3)苏木素。
[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内3-5分钟，水洗、晾干。
(2)滴加过碘酸于涂片上氧化10分钟，水洗、晾干。
(3)放入雪夫氏溶液中，置37度水浴箱5-10分钟。
(4)取出后流水冲洗10-20分钟，晾干、镜检。
(5)苏木素复染。
[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。
有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。
(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。
(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。
(+++)：胞浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。
(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。
淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。
(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。
(++)：10个以上红色颗粒。
编写：胡芙蓉制定日期：2009.01.01(+++)：胞浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。
(++++)：胞浆中含许多红色颗粒及小块紫红色物质。
[临床意义](1)用于营养性巨幼细胞贫血与红(白)血病的鉴别，前者的正常红细胞及有核红细胞常为阴性，而后者可呈强阳性反应。
(2)用于鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病，前者的原淋巴细胞和幼稚淋巴细胞可见大块红色物质。
后者的原始阶段细胞常为阴性。
(3)高雪氏细胞呈强阳性，而尼曼匹克氏细胞呈微弱阳性。
[附注](1)雪夫氏液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。
PAS染色
实验步骤
• 亚硫酸水III 2分钟 • 流水洗 10分钟 • 四、苏木素染色（淡染） 2-3分钟 • 氨水返蓝 30秒 • 自来水冲洗 1分钟
高碘酸—希夫反应 （PAS反应）
实验步骤
• • • • • • • 五、脱水 70%酒精 1分钟 80%酒精 1分钟 95%酒精I 5分钟 95%酒精II 5分钟 100%酒精I 5分钟 100%酒精II 5分钟
高碘酸—希夫反应 （PAS反应）
原理
• 糖原系由葡萄糖残基为唯一成分组成的纯多糖， 富含二醇基，故观察呈阳性反应。 • PAS反应还可显示中性糖蛋白，因为其糖链中 的许多己糖残基也含有二醇基。
• 虽然糖氨多糖中一些糖醛酸残基也有二醇 基．在一般情况下它们不易被高碘酸化，除非 提高反应温度并大大延长作用时间。
• 0.5克碱性复红溶于100毫升沸水使溶（震荡5分钟）
• 冷至50摄氏度时，加1N盐酸10毫升 • 冷至25摄氏度时，加偏重亚硫酸钠0.5克 • ---紧塞瓶口，室温避光放置12-24小时 • ---加入0.5克活性炭，摇动1分钟（若为草黄色，此 步可省略） • ---滤纸过滤，入有色西口平，冰箱保存
高碘酸—希夫反应 （PAS反应）
实验对照设置
实验结果分析
高碘酸—希夫反应 （PAS反应）
溶液配制
• • • • • • • • 1N盐酸 盐酸 蒸馏水
8.5毫升 91.5毫升 10毫升 10毫升 200毫升
亚硫酸水 10%偏重亚硫酸钠 1N盐酸 蒸馏水
高碘酸—希夫反应 （PAS反应）
实验步骤
• • • • • • • • 一、切片、粘片 二、脱蜡、水化 二甲苯I 15分钟 二甲苯II 20分钟 100%酒精I 5分钟 100%酒精II 5分钟 95%酒精I 3分钟 95%酒精II 3分钟
pas染色评分标准
pas染色评分标准
PAS（Papanicolaou染色）是一种常用于细胞学研究和诊断的染色方法，尤其是用于宫颈细胞学检查和乳腺细胞学检查。
PAS染色评分标准用于评估细胞或组织中糖原含量的变化。
以下是一种常见的PAS染色评分标准：
0分：完全无糖原。
1分：非常少的糖原，仅在细胞或组织的一小部分中可见。
2分：有少量糖原，但仍限制在一小部分细胞或组织中。
3分：糖原存在于较大的比例的细胞或组织中，但仍然不是普遍存在。
4分：糖原广泛分布于细胞或组织中，几乎每个细胞都有糖原的存在。
此外，有些研究还可能使用更详细的评分标准，例如0分表示完全无糖原，1分表示糖原在细胞中存在，但数量很少，2分表示糖原在细胞中中等数量，3分表示糖原在细胞中丰富但不普遍存在，4分表示糖原在细胞中广泛普遍存在。
这些评分标准可以根据具体研究的需要进行调整和改变，并且可能在不同的研究领域或实验室之间存在差异。
最终的评分标准应根据研究目的和具体实验条件进行确定。
pas染色实验流程
pas染色实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!1. 样本准备：组织样本：将组织固定在福尔马林或其他适当的固定剂中，然后进行石蜡包埋或冷冻切片。
PAS染色步骤
PAS染色步骤
1 石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水冲洗，70%酒精洗。
2 浸入高碘酸酒精溶液10min（此溶液温度以17－20度为好）
3 70%酒精洗后，入还原液中1min（此溶液温度以17－20度为好）
4 70%酒精洗后，入无色盐基性品红溶液1-1.5h，冬天室温较低时，可放入37度温箱
5 流水冲洗10min，用Mayer\'s苏木素复染液复染细胞核3-5min，再用1%盐酸酒精分化
6 流水冲洗后，脱水，透明，封固。
结果：糖原、粘液蛋白呈紫红色，细胞核呈蓝色。
注意事项:
1 高碘酸酒精溶液配制后放4度冰箱备用，如果变成棕色就不能再用
2 还原液：硫代硫酸钠-1g，95％酒精-30ml，蒸馏水-20ml。
加入0.5ml 2mol/L HCL，等待完全溶解后，再加1g碘化钾。
如有少量硫的沉淀，不影响染色，可贮存于4度冰箱内。
3 各试剂配制时按顺序倒入一个棕色瓶中，瓶内尽量盛曼溶液，使其仅存少量空气。
将试剂瓶摇动2h或更长时间，然后加2g活性碳，继续摇动片刻，放室温，次日晨过滤，溶液应为无色液体，如为红色，则不能再用。
PAS (Periodic Acid-Schiff stain)、糖原染色流程
PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）操作规程实验目的：PAS染色（P eriodic A cid-S chiff stain）又称过碘酸雪夫染色，糖原染色。
一般用来显示糖元和其它多糖物质。
糖原的鉴定和黏液的显示外，还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色实验原理：过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合，红色，定位于胞浆上。
试剂仪器：1） AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液，其配方：无水乙醇80 mL，冰醋酸5 mL、甲醛10 mL。
2） Carnoy固定液氯仿300 mL，冰醋酸100mL，95％酒精600 mL2. 染色液1) 过碘酸酒清夜配法: ：过碘酸0．8 g，95％乙醇70 mL，醋酸钠0．27 g，水20 mL。
待溶解后置于4~C冰箱避光保存。
保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.2)1N盐酸：量取10mL商品化盐酸加水稀释至120mL3）Schiff氏液冷配法: 0.5克碱性品红加1N盐酸15ml摇动使溶解（不加热），再加入0.6%偏重亚硫酸钠（钾）85ml，紧盖瓶塞，,在室温中避光处静置12-24小时（本人用12小时），溶液呈草黄色，未加活性炭。
然后密封冰箱保存. 置于棕色瓶内保存在冰箱备用，如变为红色，则不能使用。
检测方法：滴加一滴草黄色Schiff 氏液到水中，可以马上呈现紫红色或红色。
4) 0.5%偏重亚硫酸钠1N盐酸7．5 mL加10％偏重亚硫酸钠(钾)7．5 mL，再加130 mL蒸馏水混合而成。
实验操作程序：新鲜组织编号取材后，投入从AFF液、Camoy固定液或者放人冰箱内低温固定。
入无水酒精中脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋。
常规切片厚5 tsrn，脱蜡至水。
1、入0．5％一1％高碘酸氧化5—10min，环境温度以不高于20~C为宜，室温高时氧化时间适当缩短。
2、流水冲洗5 rain，再用蒸馏水浸洗2次；3、Schif氏液(Schif氏液从冰箱取出升至室温使用)避光染色l0—30 min；4、0．5％偏重亚硫酸钠(钾)浸洗2次，每次1—2 min，以达到分化的目的；5、流水冲洗5—10 min，蒸馏水洗；6、Harris苏木精染2—5min，自来水洗；7、l％盐酸酒精分化，再用自来水充分冲洗；8、温水(或者1％氨水)返蓝，核染色稍浅为好；9、流水冲洗，常规脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。
糖原(PAS)染色
糖原(PAS)染色[原理]含有乙二醇基的多糖类，被过碘酸氧化产生醛基，此醛基与雪夫氏试剂(Schiff’s液)作用，使无色的品红变成紫红色染料，而沉积于含有多糖类的细胞内。
[试剂]1．雪夫氏试剂：400m1蒸馏水煮沸除去C02，逐渐加碱性品红2．08溶解后，待冷却至60℃，加1mm01儿HCl40ml，再加偏重亚硫酸钠(NaHSO：)4g，次日加活性碳1．5g，放置半天后过滤。
配好后液体为无色透明，保存于4℃冰箱中。
2．过碘酸作用液：过碘酸1g溶于蒸馏水100ml中，或取过碘酸钾(1tI04)0。
698加蒸馏水100ml，微加热使溶解，再加浓硝酸0．3m1，置冰箱中保存。
3．固定液：95％乙醇90ml与甲醛10m1混匀。
4．20g/l甲基绿：甲基绿2g溶于100m1蒸馏水。
[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内10分钟。
(2)水洗数次后，对照片先用唾液消化30分钟，也可在同一片，在其中间用蜡笔划界，一半做对照，另一半做测定。
(3)水洗后，滴加过碘酸数滴于涂片上，作用10分钟后，再水洗数次。
(4)浸入Schiff's液30分钟。
(5)自来水冲洗约2分钟，然后用208儿甲基绿复染20分钟，再水洗晾干。
[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。
有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。
(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。
(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。
(+++)：脑浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。
(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。
编写：谢平制定日期：2011.12.1淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。
(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。
(++)：10个以上红色颗粒。
(+++)：脑浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。
过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。
本实验介绍了过碘酸-雪夫（PAS）染色的原理及操作步骤。
PAS染色实验原理
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodicacid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。
该反应称为过碘酸-雪夫(PAS)阳性反应，以前也称为糖原染色。
主要试剂
1. 高碘酸氧化液：
HIO4·2H2O1g,蒸馏水加至100ml。
此液溶解后保存于冰箱中待用。
2. Schiff试剂：
将1g碱性品红溶于200ml煮沸的蒸馏水中。
摇荡5分钟，冷却至60度左右，过滤，并向滤液中入1mol/LHCl20ml，混匀。
冷至250C时，加2g偏重亚硫酸钠（或钾）（Na2S2O5）。
将此液置带塞的棕色玻璃瓶中，放暗处24小时。
加1g活性碳，摇动1分钟，滤纸过滤。
保存于冰箱中。
3. 亚硫酸液
100g/L偏重亚硫酸钠6ml；1mol/L盐酸5ml；蒸馏水100ml；每次用前新鲜配置。
4. 20g/L甲绿
甲绿2g；蒸馏水加至100ml
5. 淀粉酶嚼石蜡刺激分泌唾液离心取上清液，内含淀粉酶，将麦芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH
6.0）100ml中。
PAS染色步骤
1. 固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干；
2. 如涂片需要消化，可加唾液或麦芽糖淀酶，置室温消化60min，然后用蒸馏水冲洗；
3. 10g/L高碘酸氧化15～20min,蒸馏水冲洗，待干；
4. 置雪夫染液中室温染色30～60min；
5. 用亚硫酸溶液冲洗3次后，再用自来水冲洗2～3min，待干；
6. 20g/L甲绿复染10～20min；
7. 水洗，待干，镜检。
8. 实验结果计算
1) 中性粒细胞糖原含量参考标准：
（-）胞质无颗粒
（）胞质呈淡红色，无颗粒
（）胞质呈红色，有少量颗粒
（）胞质呈暗红色，颗粒较密
（）胞质呈紫红色，颗粒极密
2) 淋巴细胞系：
大多数淋巴细胞呈阴性反应，少数为（）的阳性反应。
淋巴细胞糖原含量程度参考标准
（-）胞质内无颗粒
（）胞质内有颗粒
（）有较粗红色颗粒
（）有粗大红色颗粒
（）颗粒粗大并有红色块状
3) 红细胞系：
幼红细胞和红细胞呈阴性反应
红细胞系列糖原含量程度参考标准
（-）胞质无颗粒
（）有少数红色颗粒
（）有较粗红色颗粒或弥漫红色
（）有粗大红色颗粒或深红色
（）有粗大红色块状或紫红色
4) 巨核细胞：
巨核细胞和血小板染色反应均为阳性
巨核细胞糖原含量程度参考标准
（-）胞质无颗粒
（）少量糖原包涵体
（）中等量糖原包涵体，定位于核膜出或分散胞质中，占胞质1/3
（）大量糖原包涵体分散于胞质的1/2
（）糖原包涵体充满整个胞质
5) 单核细胞呈阴性或阳性，颗粒细小，往往位于胞质边缘：
浆细胞大多呈阴性，少数为红色颗粒阳性；
组织细胞为阴性反应；
巨噬细胞可呈阳性，为红色颗粒反应。
注意事项
1. 所用染色缸及器具应十分清洁、干燥；
2. 固定试剂不同，染色效果不同。
目前较常用的有95%乙醇、纯甲醇及甲醛蒸气，其中乙醇固定后糖原颗粒明显，各成熟粒细胞的反应有较明显的颜色差异，易于判断阳性反应的程度，且唾液消化后的对照标本没有假阳性，故通常选用乙醇为固定剂；
3. 10g/L高碘酸溶液质量要保证，变黄则不能用，氧化时间要准确，否则将导致假阳性或假阴性；
4. 碱性品红试剂对染色的影响不同品牌的碱性品红染色效果不一，碱性品红的质量是试验成败的关键因素之一。
希夫(Schiff)染液应避光保存，无色，变红则失效；
5. 染色后标本应及早观察和记录，染色后标本保存8天后，将逐渐褪色，保存时间延长，褪色更为明显。