定性试验性能验证报告
定性免疫学检验的性能验证与质量控制
25
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
ISO15189实验室认可系列培训讲座
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。
临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
ISO15189实验室认可系列培训讲座
二、检验结果质量的保证-----室内质控 质控品的来源
第三方质控品 检测系统配套质控品 自制质控品
32
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
ISO15189实验室认可系列培训讲座
质控物的选择
基质：应尽量选择人血清基质，动物源性的基质由 于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起假失控。稀 释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水。
阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算
待评价试剂的检测结果 +
已验证方法
+
-
a
b
共计
c
d
a+c
b+d
阳性符合率= a/(a+c) ×100%。 阴性符合率= d/(b+d) ×100%。 总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%。
31
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
22
辽宁中医药大学附属医院临床检验中心
ISO15189实验室认可系列培训讲座
（二）检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
免疫定性项目性能验证报告-正本
免疫定性工程性能验证报告单位名称：XX省儿童医院科室名称：检验科实验室：免疫实验室仪器名称：STAR-FAME全自动酶免分析系统型号规格：STAR LET8CH-FAME 24/30仪器编号：173000-7552 146003-3441验证人员：闫红X雪超审核人员：郭映辉批准人：李贵霞验证日期：2016年4月19日-2016年4月24日目录性能验证结果11、根本信息32、正确度验证43、精细度验证54、检出线验证95、阴阳性符合率161 根本信息1.1 仪器名称：STAR-FAME全自动酶免分析系统1.2试剂：1.3质控品：2正确度验证以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。
附件：卫生部临检中心室间质量评价成绩表标本来源：卫生部临检中心批号：工程名称：HBsAg工程名称：HBsAb工程名称：抗-HCV3 精细度验3.1 批内精细度：3.1.1 实验方案：选择低值、中值质控品，连续检测20次，记录并保存原始检测数据，计算SD、CV值。
3.1.2 检测要求：批内精细度<15%。
3.1.3 结果HBsAg批内精细度中值样本X= 0.798 s= 0.029 cv=3.6%HBsAb批内精细度中值样本X= 1.278 s= 0.061 cv=4.8%HCV批内精细度中值样本X= 0.794 s= 0.048 cv=6.1%3.2 批间精细度：3.2.1 实验方案：选择低值、中值质控品，每天重复测定5次，连续进展4 天，记录并保存原始检测数据，计算SD、CV值。
3.2.2 检测要求：批间精细度20％3.2.3 结果HBsAg批间精细度中值样本X=0.68 s=0.08cv=11.16HBsAb批间精细度中值样本X=1.58 s=0.20 cv=12.55HCV批间精细度中值样本X=0.77 s=0.07cv=8.804 检出限验证4.1实验方案：根据康彻斯坦定值标准物浓度〔见下表〕的实际情况进展1:1，1:4，1:8，1:16稀释检测，各浓度一次做3个孔，然后计算出预测临界点(C50)，并重复检测20次进展验证C50；在此根底上，制备高于临界浓度20％和低于临界浓度20％的样本分别测定20次，记录阴性及阳性结果数。
临床免疫学检验的定性项目性能验证方案
临床免疫学检验的定性项目性能验证方案检验程序性能验证是临床实验室质量管理的关键技术要求，是保证实验室检测结果准确的前提。
根据中国合格评定国家认可委员会（CNAS）发布的《CNAS-GL038：临床免疫学定性检验程序性能验证指南》，要求申请认可或已获认可的医学实验室对临床免疫学（定性）检验程序，在新检验程序常规应用前、检验程序分析性能受影响后（如仪器主部件故障、仪器搬迁、环境失控等）、检验程序的任一要素（仪器、试剂、校准品等）变更等，都要对检验程序的性能进行验证或重新验证，通过验证结果来分析评估该检验程序是否符合实验室的质量管理要求并满足临床的诊断需要。
性能验证指标的选择应满足该项目检测的预期用途，临床免疫学定性检验程序的分析性能参数一般包括：符合率、精密度（重复性）、检出限、临界值、抗干扰能力、血清与血浆结果一致性等。
下面将对临床免疫学定性检验程序的符合率、精密度（重复性）、检出限和临界值这4个性能指标的验证方案进行介绍解释。
1符合率验证符合率验证的目的是评估该检验程序所检测结果的正确度，有两种验证方案，一是诊断符合率，采用国家标准血清盘或临床明确诊断的阴阳性样品进行比对；二是方法符合率，即与其他分析方法进行比对，包括用候选方法评估已知能力验证或室间质评的样本以及不同方法学或/和相同方法学在不同实验室之间的比对。
1.1诊断符合率验证选取国家标准血清盘或临床明确诊断的阴性样本20份（包含至少10份其他标志物阳性的样本）、阳性样本20份（包含至少10份浓度在cut-off值和2-4倍cut-off值之间的弱阳性样本，1份极高值阳性样本），随机分组分批检测样本，以国家标准血清盘或临床明确诊断的样本结果为金标准，计算候选检验程序所检测结果的诊断符合率，如表1，表1诊断符合率验证金标准合计+-候选检验程序+a b a+b -c d c+d合计n1n2n 诊断符合率计算：诊断灵敏度=[a/n1]×100%诊断特异性=[d/n2]×100%诊断符合率=[（a+d）/n]×100%验证通过标准：要求计算得出的诊断灵敏度、诊断特异性和诊断符合率不低于厂商检验方法声明。
ISO15189实验室认可性能验证方案报告
医学实验室ISO 15189认可性能验证实验方案为了满足目前医学实验室认可的需求保证实验室检测结果的准确性，特制定本方案。
适用于强生VITROS产品的试验项目的性能验证，包括V250/V350/V950/FS5.1//V3600/V5600上所能开展的所有定性检测项目。
本方案从准确度、精密度、参考围、线性围以及方法学比对5个方面对各个试验项目进行评价。
一、精密度（Precision）：精密度是指在规定条件下所获得的检测结果的接近程度，表示测定结果中随机误差大小程度的指标。
精密度通常用不精密度表示。
可以分别评价连续精密度（批精密度）、重复性不精密度（中间精密度，包括批间、日间精密度等）和再现性精密度。
本方案采用批和天间两种方法对各个试验项目的精密度进行评价。
全部实验过程使用同批号试剂和质控品，并且保证检测当日质控在控。
1、批精密度（连续精密度）：方法：在检测患者标本过程中，连续运行高低水平质控品各20次，记录检测结果。
计算批精密度的CV值和SD值。
结果评价（1）厂家评价标准：计算精密度指数=验证SD/厂商SD，精密度指数要求小于等于1，或者实测CV小于等于厂家要求的CV，两者符合其一即可。
具体见《精密度评价》表格。
（2）按照国际推荐标准：批精密度应在CLIA88允许误差的1/4以，见美国CLIA’88能力比对检验的分析质量要求。
2、天间精密度（中间精密度）：方法：同样使用两个水平的质控品，若需复溶冻干质控品做实验，要注意选择产品的稳定性和瓶间差。
要严格控制每次复溶冻干品时的操作手法。
连续测试20天，每天检测1次。
在次过程中不能更换试剂批号及质控品批号，是否需要重新定标则取决于实验室。
测试完成后记录检测结果。
结果评价（1）厂家评价标准: 计算天间的SD及CV值，并计算精密度指数=验证SD/厂商SD。
精密度指数要求小于等于1，或者实测CV小于等于厂家要求的CV，两者符合其一即可。
具体见《精密度评价》表格。
定性免疫学检验的性能验证与质量控制
检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如 检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国 家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品 ，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质， 或与国际标准物质溯源的样本。 验证方法：处于测定下限浓度（ C95 ）的样本，重 复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。
精密度评估的基本原则（2）
评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精 密度。 所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少 有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为 接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内 重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
（三）准确度验证
验证方法及指标： 以与临床诊断、金标准方法和标准血清盘的检 测比较来评价，常以敏感性（包括临床敏感性）/ 特异性（包括临床特异性）和阳性符合率/阴性符 合率来表示。
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检 测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现 阳性结果和确定患者患病）。 临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检 测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检 测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性 检测方法的不精密度。 量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法
NEXGEN FOUR 全自动酶标仪性能验证报告
性能验证报告单位名称：AAA医院科室名称：检验科实验室：临床微生物室仪器名称：全自动酶标仪型号规格：NEXGEN FOUR仪器编号：WS028验证人员：审核人：批准人：验证日期：2012年8月1日—2012年9月10日AAA医院检验科性能验证报告1. 验证系统基本信息2.1定性实验的符合率、特异性和敏感度的验证：本实验室计算了2010-2011年间参加卫生部临检中心室间质评的对比结果，将两方结果输入表格中通过公式计算各项性能指标。
样本来源：参加卫生部室间质评材料（2010-2011年）果合计 6 24 302.2精密度验证2.2.1批内精密度验证2.2.1.1 验证方法选择丽珠生物技术有限公司的HIV室内质控品和北京康彻思坦生物技术有限公司TP室内质控品在同一批试验内，按规定的操作方法，一天内平行做20个测试相同的样本，计算其x、S与CV。
验证日期：HIV 2012.9.6 TP 2012.8.31验证人员：李继霞、薛炼试剂厂商及批号：HIV上海科华201204021 TP上海科华201112021质控品厂商及批号：HIV丽珠20110801 TP康彻思坦201110005HIV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10测定结果0.569 0.567 0.595 0.602 0.563 0.571 0.5710.5560.551 0.576 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20HIV、TP定性实验（ELISA）的批内变异CV%均小于10%，符合要求。
2.2.2 批间精密度2.2.2.1 验证方法选择丽珠生物技术有限公司的HIV室内质控品和北京康彻思坦生物技术有限公司TP室内质控品，每天按照常规标本的方法一样测定，连续测定至少20天，计算其x、S与CV。
验证日期：2012.8.1—2012.8.31验证人员：李继霞、薛炼试剂厂商及批号：HIV上海科华201204021 TP上海科华201112021质控品厂商及批号：HIV丽珠20110801 TP康彻思坦201110005HIV、TP定性实验（ELISA）的批间变异CV%均小于15%，符合要求。
血液筛查实验室定性检测方法的性能验证
World Latest Medicne Information (Electronic Version) 2018 Vo1.18 No.3018投稿邮箱：sjzxyx88@·论著·血液筛查实验室定性检测方法的性能验证曾付芳，田方，项渊，吴丹，彭冬菊（十堰市中心血站，湖北 十堰 442000）0 引言血站血液筛查实验室对经血传播疾病的筛查试验酶联免疫吸附试验（ELISA ）是一种可产生量值结果的定性试验，其检测结果的准确性直接关系到临床患者的用血安全。
我们结合CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》[1]和《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》[2]及《血站技术操作规程》（2012版）[3]的要求，对本实验室用于检测HBsAg 、抗-HCV 、抗-HIV 、抗-TP 的8种定性试验方法性能指标进行验证，以判断方法是否满足特定的技术标准和预期目的。
1 材料与方法1.1 仪器。
STAR 全自动酶免前加样、后处理系统FAME24/20（瑞士哈美顿公司）。
1.2 质控品。
血筛四项质控品，浓度：HBsAg 0.2 IU/ml 、抗-HCV 0.5 NCU/ml 、抗-HIV 0.5 NCU/ml 、抗-TP 6 mIU/ml （批号：201503007，北京康彻斯坦生物有限公司）。
1.3 血清盘。
（1）HBsAg 血清盘：批号：201211004。
标本43份（1-39，LI-L4），阴性20份，阳性23份。
（2）抗-HCV 血清盘：批号：201404005。
标本46份（1-40，LI-L5，1份精密度样本），阴性21份，阳性25份。
（3）抗-HIV 血清盘：批号：201410005标本45份（1-40，LI-L5），阴性21份，阳性24份。
（4）抗-TP 血清盘：批号：201410005。
标本46份（1-40，LI-L5，1份精密度样本），阴性21份，阳性25份。
定性测定的性能验证
定义
确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。
批间重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在10 天以上时间内单次（孔或管）重复 进行20批检测，计算所得S/CO值的 均值和SD，计算批间CV%。
判断结论：应≤试剂说明书所标明的 批间变异。 ELISA的批间变异CV% 应≤15%。
测定下限的验证
处于测定下限浓度（如临界点 浓度+20%）的样本，重复检测 20次，应至少有18次以上为阳 性反应。
100 50 50%
30%-70% 35%-65% 40%-60%
C30-C70
候选方法的-20%～+20%浓度范 围是否包含了C5-C95区间？
1 +20% -20%
阳性结果=<35/40(87.5%) -20% ～ +20% 浓 度 范 围 在 用该方法检测浓度超过C50+20%的
C5-C95区间之内
样本检测结果不一致
阴性结果=<35/40(87.5%)
2 +20% 阳性结果>=36/40(90%) -20% 阴性结果>=36/40(90%)
-20%～+20%浓度范围包含 用该方法检测，C50+20%的样本检
了C5-C95区间
测结果一致
3 +20% -20%
4 +20% -20%
阳性结果>=36/40(90%) 阴性结果=<35/40(87.5%)
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
AAA医院性能验证报告
性能验证报告
（定性类）
单位名称：AAA医院
科室名称：检验科
实验室：临床微生物与病原学实验室
验证人员：
审核人：
批准人：
验证日期：2012年8月10日—2012年9月10日
检测方法分析性能验证报告
1.方法名称：细菌鉴定
1.1.仪器名称：VITEK 2全自动微生物鉴定/药敏分析系统
1.2.试剂名称： GN鉴定卡、GP鉴定卡、YST鉴定卡
1.4.1 在进行实验前，根据作业指导书由仪器责任人和仪器工程师共同对仪器进行全面的保养、维护和核查，以使仪器达到一个良好的工作状态。
1.4.2 试剂耗材准备
无菌比浊管、无菌棉签、比浊仪、定量加样器、载卡架等。
1.4.3标本的准备
菌种的复苏：根据鉴定卡要求结合实验室现有菌种储备，选用菌株如下：
1.4.4 菌悬液制备
1.4.4.1 比浊仪校准：采用标准比浊管0.5麦氏进行测定，连续测定三次，要求每次结果在控。
1.4.4.2 选取洁净比浊管，加入适量的无菌盐水，挑取新鲜菌落2-3个，充分研磨，混匀。
1.4.4.3 比浊：按照标准操作规程。
配制浓度0.5～0.63麦氏的菌悬液。
1.4.4.4上机操作。
1.4.4.5 上机完成时将剩余细菌悬液转种至血平板，过夜培养，检查其纯度。
1.5.结果
1.5.1 正确度验证结果：2010年，参加全国卫生部质控共3次，参加山东省临检中心质控共2次。
共鉴定细菌26例，其中革兰阳性细菌占7例，鉴定正确7例，正确度为100%；革兰阴性细菌占15例，鉴定正确15例，正确度为100%；未检出致病菌占1例，正确度为100%。
真菌4例，正确度为100%。
1.5.2 符合率验证结果：
对标准菌株上机鉴定，比较细菌鉴定的百分率及其生化反应的符合率，见表1。
1.5.2 重复性验证结果：
留取部分标准菌株及临床分离株，隔日重新上机，比较两次鉴定结果，见表2。
1.6结果判读
符合率试验：最好试验结果和预期结果完全符合；要求鉴定菌种正确，生化反应不符合项数不超过一项。
重复性试验：要求两次鉴定完全相同；差异生化反应项数不多于一项。
表1 VITEK-2 COMPACT全自动细菌分析系统细菌鉴定符合率实验结果
表2 VITEK-2COMPACT全自动细菌分析系统细菌鉴定重复性实验结果
1.7.1 本仪器参评质控全部合格，正确率为100%。
1.7.1采用标准菌株对GP、GN、YST分别测定，结果与预期值结果完全符合，符合率100%。
1.7.2分别采用标准菌株与卫生部质控菌株对GP、GN、YST卡在两个不同工作日重复上机测定，结果显示生化结果在质控株完全一致，仪器重复性好。
2.方法名称：药敏试验（KB法）
2.1 试剂名称：MH琼脂培养基(济南百博)、MH羊血琼脂培养基(济南百博)、HTM琼脂培养基(济南百博)、抗生素（英国OXOID）
39种次，其中正确分析39次，正确度100%。
2.2 性能验证计划
菌种的复苏：根据鉴定卡要求结合实验室现有菌种储备，选用菌株如下：
2.3.1 菌悬液的制备
2.3.1.1 比浊仪校准：采用标准比浊管0.5麦氏进行测定，连续测定三次，要求每次结果在控。
2.3.1.2选取洁净比浊管，加入适量的无菌盐水，挑取新鲜菌落2-3个，充分研磨，混匀。
2.3.1.3 比浊：按照标准操作规程。
配制浓度0.5～0.63麦氏的菌悬液。
2.3.1.4将菌液均匀涂布平板，静止10分钟，待平板将菌液吸收后，贴药敏纸片。
2.4 结果
2.4.1 符合率试验结果
表3 MH平板药敏试验验证结果
表4 MH羊血琼脂平板药敏试验验证结果
表5 HTM平板药敏试验验证结果
2.4.2 重复性试验结果
表6 ATCC25922细菌药敏符合率实验结果
表7 ATCC49616细菌药敏符合率实验结果
表8 ATCC49247细菌药敏符合率实验结果
表9 三种平板药敏结果统计表
2.5.1 采用标准菌株对MH、MH羊血琼脂平板、HTM平板分别进行药敏测定，结果与预期值结果完全符合，符合率100%。
2.5.2 分别采用临床菌株与标准菌株对三种平板在两个不同工作日重复上机测定，结果显示测定结果均一致重复性好。
AAA医院性能验证报告
3.方法名称：血培养（仪器法）
3.1 全自动血培养分析系统性能验证分析方法：季度回顾分析全自动血培养分析系统的假阴性率和假阳性率。
表10 BacT Alert 3D全自动血培养分析系统的假阴性和假阳性结果分析
表11 BACTEC9120全自动血培养分析系统的假阴性和假阳性结果分析
3.2 全自动血培养分析系统报阳时间分析
对105、104 ~101等5个不同浓度菌悬液模拟常规操作上机测定，观察血培养瓶报阳时间是否适当（<72小时).
表12 BACT/ALERT 3D血培养质控瓶报阳时间记录
表13 BACTEC9120血培养质控瓶报阳时间记录
3.3.1对2011年7~12月临床微生物实验室血培养结果假阳性，假阴性率进行统计分析，Bact/Alert 3D假阳性率0.09%，假阴性率0%；BACTEC9120仪器假阳性率0.%，假阴性率0%，结果可靠有效。
3.3.2对Bact/Alert 3D和BACTEC9120血培养仪，采用配制101~105 cfu/m等5个浓度菌悬液，模拟临床标本（儿童3ml,成人需氧10ml、厌氧10ml,儿童瓶3ml、真菌瓶10ml)上机测试，所有培养瓶在<1d(24h)内均报阳性，仪器报阳时间均小于72h,符合预期要求。