冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片的要求
冰冻切片的要求
冰冻切片的要求主要包括以下几个方面：
1. 温度控制：冰冻切片的温度控制十分重要，需要将温度设置在适当的范围，一般为-20℃至-30℃。
温度过高或过低都会影响切片的品质。
2. 刀具选择：切片刀需要锋利，以一次性刀片为佳，一般一个刀口切5-6个组织后即应更换，以免影响切片的平整度和光滑度。
3. 切片厚度：冰冻切片的厚度一般需要控制在2-3mm，过厚或过薄都会影响病理医生的诊断结果。
4. 切片技巧：切片时用力要均匀，避免转速不稳，防止组织产生卷曲或皱褶。
切片后应及时观察切片的质量，如有问题应及时调整。
5. 组织处理：进行冰冻切片前，需要对组织进行处理，如清洗、固定等。
处理后的组织应平整、无气泡、无杂质，以保证切片的准确性和可靠性。
6. 注意事项：在进行冰冻切片时，需要注意防止组织过硬或过软，避免损坏刀刃或影响切片质量。
如发现组织变脆，可将冷冻的组织取出，于室温中停留片刻，再行切片。
此外，切片时还需注意防卷板的位置和角度，以保证切片的平整度。
总之，冰冻切片是一项技术性较强的工作，需要严格控制温度、选择适当的刀具、掌握正确的切片技巧和注意事项，才能获得高质量的切片，为病理诊断提供可靠的依据。
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片步骤
脂肪组织冰冻切片的步骤如下：
1. 取材：在合适的环境下获取脂肪组织，一般大小为1.5×1.5×0.5cm，注意应尽量剔除脂肪组织、钙化、骨质等影响切片质量的成分。
2. 速冻：使用液氮或干冰-丙酮（乙醇）法将组织速冻。
液氮法是将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内，然后将其放入盛有液氮的小杯内，注意小盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，10~20s组织即迅速冰结成块。
干冰-丙酮（乙醇）法是将150~200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，然后使用异戊烧进行速冻。
3. 切片：将速冻后的组织块固定在切片机上，调整切片的厚度为4~6μm，然后进行切片。
4. 贴片：将切好的组织切片立即放入冰冻固定液中固定10~20秒，然后取出贴片。
5. 染色：使用苏木精染液进行染色，室温下染色1分钟，如果室温较低，则需要适当延长染色时间。
6. 水洗：染色后进行水洗，洗去多余的染液。
7. 封片：将切片晾干后，使用合适的封片剂进行封片。
注意，在整个过程中，都需要保持组织的冷冻状态，以防止组织内的冰晶形成和细胞结构的破坏。
同时，切片和染色的过程中，也需
要注意避免切片过厚或过薄，以及染色过深或过浅，以保证切片的质量。
以上信息仅供参考，具体操作可能会因实际情况和设备的不同而有所差异。
组织切片制作步骤
如何做出一张合格的组织切片？一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。
本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。
包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。
.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。
冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。
冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。
凝固后就可以直接切片。
如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。
.石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。
厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。
下面是石蜡包埋和切片的具体步骤：一、实验材料动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。
二、实验步骤1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。
2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。
PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。
冰冻切片可以直接用丙酮固定。
其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。
固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。
固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。
关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。
3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。
4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下脱水：30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。
冰冻切片免疫组化染色步骤
冰冻切片免疫组化染色步骤引言冰冻切片免疫组化染色是一种常用的实验方法，用于研究细胞和组织的分子表达。
它结合了冷冻样本的切片技术和免疫组织化学染色的原理，能够可视化特定分子在组织中的位置，从而帮助我们理解生物过程和疾病机制。
本文将介绍冰冻切片免疫组化染色的步骤和注意事项。
步骤一：样本制备1.收集组织样本，根据需要进行切割和处理。
2.快速冷冻组织样本，可用液氮或乙醚等方法冷冻，并保存在低温环境中。
步骤二：切片制备1.取出冷冻样本，将其置于切片机或切片冷冻器中。
2.进行组织切片，通常厚度为5-10微米，利用切片刀或者切片冷冻器的微调装置。
3.将切片收集在清洁的载玻片上，可以使用专门的载玻片来增强切片与载玻片间的附着力。
步骤三：固定和脱水1.将载玻片上的切片放入4%的中性缓冲福尔马林缓冲液中固定细胞和蛋白质。
2.固定15-30分钟后，用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将福尔马林去除。
3.将切片脱水，使用逐渐浓度的乙醇和脱水溶液，如70%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。
步骤四：抗原修复1.对于有些抗原，如细胞核抗原，需要进行抗原修复。
这可以通过热、酸或酶消化等方法进行。
2.一种常用的抗原修复方法是将切片置于高温或高压下进行热诱导抗原修复。
步骤五：阻断和孵育1.使用蛋白质阻断剂，如牛血清蛋白、BSA等，在切片上进行孵育，以防止非特异性结合。
2.孵育时间通常为30分钟至1小时。
步骤六：一抗孵育1.加入一抗，即特异性抗体，与切片上的靶分子结合。
2.一抗浓度和孵育时间根据实验需要和抗体质量进行优化。
步骤七：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的一抗去除。
2.洗涤时间和次数根据实验要求和抗体特性进行优化。
步骤八：二抗孵育1.加入荧光标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
2.二抗可以识别一抗的种类，常见的二抗有荧光标记的抗鼠IgG、抗兔IgG等。
步骤九：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的二抗去除。
冰冻切片注意事项
冰冻切片注意事项冰冻切片是一种常用的实验技术，在科学研究、医学诊断和药物开发中起着关键作用。
这种技术可以将组织样本以无损坏的方式保存，并用于后续的显微镜观察和分析。
然而，要获得高质量的冰冻切片需要注意一些重要的事项。
以下是一些关键的注意事项。
1.选择合适的切片仪器和材料：要获得最佳的切片效果，应选择高质量的切片仪器和材料。
切片仪器应具备高速度和高精度的切割能力，并且能够保持适宜的温度和湿度。
切片材料应选择具有较好的冷冻保护性能和切割性能的材料。
2.适当的标本处理：在进行冰冻切片前，标本应进行适当的处理。
首先，标本应被固定以保持其形态和结构的稳定性。
常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和生理盐水固定等。
其次，在进行冷冻切片前，标本应进行充分的去水处理，以使切片的质量更好。
3.适宜的切片温度：切片温度是决定切片质量的重要因素。
一般情况下，切片温度应尽量低，以减小标本的结构变形和切割的损伤。
通常，切片温度应控制在-20℃至-30℃之间。
4.适当的切片速度：切片速度是决定切片厚度和切片质量的关键因素。
切片速度过快会导致切片厚度不均匀，切片速度过慢则容易引起标本的变形和损伤。
一般情况下，切片速度应适中，并且应根据不同的标本类型进行调整。
5.切片后的处理：切片后，切片应立即进行处理，以防止切片的结构变形和氧化。
处理方法包括立即放入冷冻保存或石蜡包埋等。
6.切片的储存和保存：冰冻切片在使用前需要进行储存和保存。
一般情况下，切片应保存在低温环境中，以保持其形态和结构的稳定性。
冷冻切片的保存时间一般较短，通常为几天至几周。
7.切片质量的评估：为了确保冰冻切片的质量，应对切片进行适当的评估。
评估的方法包括显微镜观察和组织学染色等。
通过评估，可以发现切片中存在的问题，并采取相应的措施进行改进。
总之，冰冻切片技术在科学研究和医学诊断中具有重要的应用价值。
遵循上述的注意事项，可以获得高质量的冰冻切片，从而提高实验和诊断的准确性和可靠性。
肺冰冻切片制作流程
肺冰冻切片制作流程
肺冰冻切片的制作流程主要包括以下几个步骤：
1、取材与准备：首先需要取出组织样本，并切割组织块使其符合冰冻切片用包埋模型。
这一步骤是为了确保切片的准确性和完整性。
2、骤冷：通常采用骤冷、速冻的方法进行，冷冻速度为1~10°C/s，以减少冰晶形成。
具体方法有干冰-丙酮（乙醇）法或液氮法。
3、冷冻保护：加入冷冻保护液，如甲醇或乙醇等，以防止组织解冻时发生变化。
4、包埋：使用低温包埋剂（OCT）包埋冰冻组织。
如果组织块小，可以适量加OCT包埋剂浸没组织。
5、切片：将组织放置于恒冷箱中进行切片。
在制成冻块后，置入恒冷箱切片机冰冻切片。
6、固定：样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，在4℃冰箱预冷5-10分钟让OCT胶浸透组织。
7、保存：若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
此外，肺组织的最佳切片温度约-20℃，在此温度区间可以制作较满意的切片。
然而，肺组织冰冻切片的质量一般不如常规石蜡切片，且冰冻准确率大多低于90%。
因此，在制作过程中需要特别注意操作的准确性和技巧。
术中快速冰冻切片的规范及程序
术中快速冰冻切片的规范及程序１.冰冻切片的制备１.１打开照明开关，打开冰冻切片机的玻璃箱盖。
１.2选择冻头，在冻头滴上冰冻切片机包埋剂适当。
１.3 待组织完全冷冻后，将冻头移到切片刀口的冻口内，扭紧冻头，进行切片，切片时有节奏的来回推动摇手柄，切得完整且较薄的切片（厚度8-9um），即可贴在玻璃片上。
１.4 将切好的片子用95%的乙醇固定，然后进行染色、封片、镜检（同石蜡切片H-E染色步骤）。
１.5工作完毕后将冻头上组织取出，放回送检的标本袋内，用10%的中性甲醛固定液固定。
１.6清扫切冰冻切片机箱，将冻头擦干后放回冰冻切片机内。
１.7关好冰冻切片机的玻璃箱盖，关闭照明电源。
２.冰冻切片机须24h开机，长假或节假日前检查切片机箱内的结冻情况，必要时关机，化霜，清洁冰冻切片机。
３.注意事项３.1 制作冷冻切片所需的试剂和设备等应处于随时可供使用状态。
３.2 切取的组织块大小适宜（厚度<2mm），并尽快置于冷冻组织切片机上制备切片。
３.3 调节冷冻程度，试切合合适时便迅速切片。
冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎。
３.4 冷冻切片固定液95%乙醇50ml４.单体标本的冰冻制片应在１５min内完成。
术中快速冰冻诊断的规范及程序１.临床医师在术前向患者或近亲属告知术中快速病理诊断的局限性，签署术中快速病理诊断知情同意书。
２.从标本接收到发出报告的时间，应在病理申请单上注明。
３.有条件的由两位中／高级称职的病理医师共同签署快速活检的病理诊断意见。
对于病变疑难、手术切除范围广泛和会严重致残的手术中快速活检，应由两位高级称职的病理医师共同签署会诊意见。
主检病理医师签名的字迹应能辨认。
４.快速活检诊断意见一般在收到送检标本后３０min内发出；同一时间段内相继收到的多例患者标本或是同一例患者的多次标本，其发出报告的时间依次类推。
对于疑难病变，可酌情延时报告。
５.对于难以即时快速诊断的病变（例如病变不典型、交界性肿瘤病变或送检组织不足以明确诊断等），主检病理医师应向手术医师说明情况，恰如其分地签发病理诊断意见或告知需要等待常规石蜡切片进一步明确病理诊断。
冰冻切片机的使用指南及注意事项
冰冻切片机的使用指南及注意事项引言：冰冻切片机是一种常见的食品处理设备，广泛应用于餐饮业、食品加工厂和家庭厨房等场所。
它能够快速将食材切成均匀的薄片，提高烹饪效率和食品的美观度。
然而，使用冰冻切片机时需谨慎操作，以确保安全和提高工作效率。
本文将为您介绍冰冻切片机的使用指南及注意事项，以帮助您正确使用和保养该设备。
一、冰冻切片机的使用指南1. 准备工作在使用冰冻切片机之前，需要做好以下准备工作：- 清洁切片机：确保切片机表面和刀片都是干净的。
使用温水和少量洗洁精清洗，然后彻底冲洗干净，并用干净的布擦干。
- 准备食材：根据需要，选择合适的食材进行切割。
确保食材新鲜、干燥且无破损。
- 调整切片机设置：根据需要调整切片机的厚度和速度设置。
注意在操作过程中，确保切片厚度合适，以免造成浪费或食材过于薄片，影响食品质量。
2. 正确使用冰冻切片机下面是使用冰冻切片机的正确步骤：- 将食材放置在切片机上的进料口位置，并通过压力杆将其固定。
- 开启切片机的电源开关，并设置合适的切片机厚度和速度。
- 将手握在固定手柄上，并将切片机的刀片沿着食材轻轻移动，实现切片的过程。
- 使用完成后，关闭切片机电源开关，并等待刀片停止旋转后再进行下一步操作。
3. 清洁与维护冰冻切片机使用后需要进行清洁和维护，以延长其使用寿命和确保卫生。
- 关闭冰冻切片机电源，并拔掉电源插头，确保刀片停止旋转。
- 使用温水和少量洗洁精清洗切片机的外部表面和刀片。
避免使用金属刷或刮板，以免损坏切片机表面。
- 清洁完成后，用干净的布擦拭干燥。
- 定期检查和保养冰冻切片机的各个零部件，确保其正常运行。
如发现有磨损或松动的部件，及时修复或更换。
二、冰冻切片机的注意事项1. 注意安全使用冰冻切片机时，务必注意安全，避免发生意外伤害。
- 确保刀片停止旋转后再进行任何操作，以免被刀片切伤。
- 使用切片机时，避免将手指或其他物体靠近刀片，以免发生意外。
- 在清洁和维护切片机时，务必切断电源并拔掉电源插头。
冰冻切片制作及质量控制
冰冻切片制作及质量控制冰冻切片是一种常用的组织学研究方法，广泛应用于生物医学研究领域。
它可以保持组织的原始形态和结构，适用于光镜、电镜和免疫组化等多种研究方法。
在进行冰冻切片制作时，需要注意一些关键步骤和质量控制措施，以确保获得高质量的切片材料。
1.样品准备样品准备是冰冻切片制作的第一步。
样品可以是动物组织或细胞，也可以是植物组织。
在样品准备过程中，需要注意以下几点：-样品的自然纹理：对于动物组织，应将样品固定在适当的溶液中，以保持其自然纹理。
对于植物组织，应注意保持组织的形态和结构。
-样品的尺寸：样品的大小应适合冰冻切片仪的切片室大小。
过大的样品可能无法完全冻结，导致切片质量降低。
2.样品冷冻将样品冷冻是冰冻切片制作的关键步骤之一、样品冷冻的目的是在不损坏样品的情况下将其冷冻成脆性，以便后续切片。
以下是几种常用的样品冷冻方法：-空气冷冻：样品通过将其放置在冷冻剂中（如液氮或酒精等）迅速冷冻，使其变得脆性。
这种方法适用于较小的样品。
-次凝胶冷冻：将样品浸入液体凝胶中，使其均匀冷冻。
这种方法适用于较大的样品。
-快速冷冻机冷冻：使用快速冷冻机将样品超快速冷冻。
这种方法可以快速冷冻样品，并保持其形态和结构。
3.样品切片样品冷冻后，可以使用冰冻切片机将其切成薄片。
以下是一些注意事项：-选择合适的切片机：合适的切片机应具有良好的冷冻性能和切割能力。
切片机的刀片应尖锐，以便切割样品。
-控制切片厚度：切片厚度直接影响到后续研究结果的准确性。
根据实验需求选择合适的切片厚度，并保持在一定范围内的一致性。
-控制切片速度：切片速度应适中，过快可能导致切片不均匀，过慢可能导致切片丢失或拉长。
-冷藏切片：在切片过程中，应将切好的切片放入冷冻盒中，以防止其变形或融化。
冷藏过程中应注意避免切片受压。
4.质量控制为了确保冰冻切片的质量，需要进行一定的质量控制措施：-内外标准：在切片中加入内外标准物质，以确保切片的准确性和可比性。
冰冻切片技术各流程常用方法和试剂
冰冻切片技术各流程常用方法和试剂下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组
织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：
1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用
组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰
冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至
-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组
织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固
定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：
1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷
冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的
选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀
片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片
太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切
割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干
燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
HE染色是最常用的染
色方法，可以同时显示组织的细胞核和细胞质，但并不适用于所有类型的
组织。
7.设备清洁：切片设备和工作台要保持清洁，每次使用后及时清洗，
避免交叉污染。
冰冻切片是一种常用的制备生物组织切片的方法，其能够保持组织的
形态结构和细胞学特征，广泛应用于生命科学研究中。
在进行冰冻切片过
程中需要注意技术细节，掌握良好的切片技巧，以获取高质量的切片样品，并根据需要进行合适的染色处理。