组织切片制作步骤
石蜡包埋组织切片制作过程
石蜡包埋组织切片制作过程石蜡包埋组织切片制作过程是组织学研究中常用的一种技术，下面将对其进行详细的介绍。
一、取材首先需要取得需要制作切片的组织样本，这些样本可以是动物或植物的组织，也可以是人体组织。
取材时需要注意保持组织完整性，避免破坏或变形。
二、固定取得组织样本后，需要进行固定处理，以保持组织的形态和结构。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，其中福尔马林是最常用的固定剂之一。
固定时间一般为24小时左右。
三、脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以去除其中的水分。
脱水的过程中需要使用一系列浓度逐渐升高的乙醇溶液，一般从低浓度的乙醇开始逐渐升高，直至使用100%乙醇。
四、浸渍脱水后的组织需要进行浸渍处理，以使其与包埋剂充分接触。
常用的包埋剂有石蜡、聚乙二醇等，其中石蜡是最常用的包埋剂之一。
浸渍的时间一般为24小时左右。
五、包埋浸渍后的组织需要进行包埋处理，以使其固定在切片机上。
包埋的过程中需要使用熔化的包埋剂，将组织置于包埋剂中，使其充分浸泡。
包埋剂熔化的温度一般在60-70℃左右。
六、切片包埋后的组织需要进行切片处理，以获得所需的切片。
切片机是常用的切片工具，切片机通过旋转刀片将包埋的组织切成薄片。
切片厚度一般在5-10微米之间。
七、染色切片完成后，需要进行染色处理，以使组织结构更加清晰。
常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂等，其中最常用的是血液学染色剂，如伊红染色、苏木精染色等。
以上就是石蜡包埋组织切片制作过程的详细介绍，这个技术在组织学研究中具有重要的应用价值。
病理组织切片制作
实验四病理组织切片制作一、实验目的组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。
通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。
二、实验原理根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。
固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。
脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。
组织的透明是便于透蜡包埋。
包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。
最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。
三、主要仪器及试材已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。
四、实验方法与步骤。
（一）固定采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。
（二）脱水组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。
必须先把组织中的水分除去。
但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。
最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。
1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。
脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。
最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。
脱水的程序为70％一80％一95％一100％。
各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。
100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。
脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。
2．丙酮沸点为56℃。
脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。
脱水时间l一3小时左右。
（三）透明透明对组织有脱酒精及透明两种作用。
当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。
如何制作精良的淋巴组织切片
如何制作精良的淋巴组织切片淋巴组织疾病的诊断是外科诊断病理学的难点之一,而制作出精良的淋巴组织切片对于正确诊断至关重要。
在日常会诊工作中,有时所谓的“疑难病例”往往是因为制片不良而造成的。
由于淋巴组织富于细胞而间质较少,因此其制片过程与其他组织相比有自己的特点。
那么,如何制作出一张理想的淋巴组织切片呢? 根据我们的体会,有以下几个环节需要注意。
1 固定送检的新鲜组织应由初检医师剔除周围脂肪组织,切开并立即固定于新鲜的4 %的中性甲醛液中,固定时间取决于甲醛的穿透力、取材的大小和厚度等,常温下以8～24 h 为宜(图1) 。
固定时间短易造成脱水、切片着色不佳(图2) ;固定时间过久影响免疫组化显色。
淋巴结无论大小都要切开固定,因为淋巴结的包膜是较为致密的结缔组织,会阻碍固定液的渗透。
2 脱水固定好的淋巴组织,应从低浓度乙醇开始脱水,而在95 %乙醇中的时间应长一些,大约需4 h 左右,以便使淋巴组织及少许脂肪组织彻底脱水;在进入二甲苯之前,要在无水乙醇与二甲苯等量混合液中处理30 min ,这样效果更佳。
3 浸蜡和包埋浸蜡这一步最为重要,最好用56～58 ℃熔点的蜡,浸蜡温度为58 ℃,此时容器内的蜡是固体蜡与液体蜡的混合液, 这时的浸蜡条件为最佳。
蜡的熔点过高会导致组织内出现裂缝,或导致淋巴周围组织变硬,而中心浸蜡不佳。
浸蜡最好分3 步,每步1 h 即可,然后将浸好蜡的组织立即包埋于58 ～60 ℃的石蜡中,包埋时组织不要在空气中暴露过久。
4 切片切片时要注意以下几点: ①石蜡组织块不要冻得太硬,否则切片时易出现碎沫; ②粗削组织块时,不能切得太厚,否则易使组织块内部碎裂; ③切片刀要锋利,切片厚度为3～4μm为宜;切片太厚,不仅诊断困难,染色过程中还容易脱片; ④捞片时水温不能过热,否则易使组织破裂,结构不完整,水温一般以45～48 ℃为宜; ⑤烤片的温度为68 ℃,HE 染色烤片为10 min ,免疫组化染色烤片时间为45 min ;烤片温度过高会影响免疫组化的染色效果; ⑥冷冻淋巴结组织切片时,设操作室温度为- 20 ℃,一定要慢削组织块,然后快刀薄切,一般切6μm厚切片看细胞,再切8μm厚切片看结构。
制作肺组织切片的方法有
制作肺组织切片的方法有制作肺组织切片是进行组织学研究和病理诊断的重要步骤之一。
下面我将详细介绍常见的肺组织切片制作方法。
1. 采集样本：首先，需要采集一块含有肺组织的标本，可以通过手术、活检或尸检获得。
在采集之前，应该确保标本的质量和完整性，避免损坏。
2. 保存标本：为了保持组织的完整性和避免变形，标本在采集后应尽快固定。
常用的固定剂有10%中性缓冲福尔马林、2%戊醛或4%多聚甲醛，可以根据实验的需要选择适当的固定剂。
3. 预处理标本：将固定的标本进行去水化处理，目的是将水分逐步取代为蜡质，并使组织获取足够的刚性。
去水化一般是通过经过不同浓度的酒精梯度进行的。
4. 浸泡标本：将去水化的标本用蜡进行浸泡，使组织与蜡充分接触，蜡液逐渐取代组织中的酒精。
蜡浸渍的时间通常为4-6小时，以确保组织充分浸泡。
5. 包埋标本：在将标本浸泡于蜡液之后，需要将标本包埋在蜡中，以便进行切片。
首先，需要将标本置于包埋模具中，并用熔化的蜡填充模具，将组织完全包覆。
然后，待蜡凝固后，可以将标本取出。
6. 准备切片：使用旋转式切片机，将蜡固化的标本切割成薄片，通常厚度为4-6微米。
切片时，要注意刀片的选择和切割速度，以确保切片的质量和完整性。
7. 切片的去蜡：切片后，需要将切片进行去蜡处理，以将切片上的蜡去除。
去蜡可以使用戊醚或苯：醇（2:1）溶液进行，通常需将切片浸泡10-30分钟，直至蜡块完全溶解。
8. 去水处理：去蜡后，需要对切片进行去水处理，以将去蜡剂彻底去除。
去水可以使用浓度递增的乙醇进行，一般是从70%、80%、95%到绝对乙醇。
9. 染色处理：去水后，将切片进行染色处理。
常用的染色方法包括血液学染色法、免疫组织化学染色法和特殊染色法等，可以根据需要选择适当的染色方法。
10. 制作载玻片：完成染色后，将切片放在载玻片上，通过加热将切片与载玻片固定在一起。
加热后，可以用透明胶带固定切片和载玻片的边缘。
11. 封闭载玻片：最后，将固定在一起的切片和载玻片进行封闭处理，以确保切片的保存和长期使用。
组织切片制作步骤
植物组织石蜡切片技术是农学学生需要掌握的基本实验操作技术。
工具/原材料药物：石蜡，酒精，二甲苯，藏红花/快速绿色染色溶液，胶，明胶，甲醛等仪器：石蜡切片机，组织脱水器，载玻片台，培养箱，染料桶，载玻片，盖玻片，烧杯，量筒等方法/步骤1.取材确定材料的来源和位置，纵向还是横向；应尽快取走材料以防止进一步变化，并且材料量应适当。
下图显示了植物芽的实际采样。
石蜡切片的制备步骤（附图）石蜡切片的制备步骤（附图）2.固定（1）固定剂的选择最常用的固定剂是FAA。
该方法的优点是材料的固定时间不受限制。
固定时间可以短至几个小时，也可以长达几个月或几年。
（可用作材料保存溶液）配方：50％或70％酒精90ml冰醋酸5毫升福尔马林5毫升（含50％酒精的软质材料，含70％酒精的硬质材料）（2）固定后材料的处理洗涤或漂洗：固定后，应彻底清洗组织以去除固定溶液和残留在组织中的晶体沉淀，否则会影响染色效果。
（如果固定后该材料暂时无法进行下一步操作，则可以将其存储在70％的酒精溶液中或直接用FAA固定溶液在4℃的冰箱中存储。
）下图显示了浸泡在固定液中的组织切片。
石蜡切片的制备步骤（附图）3.脱水目的：水和透明剂不能互溶，只有除去水后，透明剂才能进入。
试剂：梯度酒精溶液工艺：70％--- 85％--- 95％-100％--- 100％。
每个步骤约为1h-2h。
注意：确保脱水梯度和脱水时间的每一步，都应将水彻底清除，但不要过度脱水（时间过长会使组织变脆和收缩，这时您可以根据自己的实验进行探索，不需要完全遵循此操作）。
下图显示了适用于大量样品脱水的自动组织脱水器。
如果物料体积和样品体积较小，则可以将小烧杯用作逐步脱水的容器。
石蜡切片的制备步骤（附图）4.透明度目的：纯酒精不能与石蜡溶解，但需要用能与酒精和石蜡溶解的溶剂代替组织中的酒精。
（二甲苯是最常用的透明剂，可以与石蜡很好地混溶）工艺：等体积的二甲苯和乙醇的混合物1H ---纯二甲苯1H ---纯二甲苯1H。
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
（二）脱水与透明1. 75%乙醇50分钟2. 85%乙醇50分钟3. 95%乙醇(I) 30分钟4. 95%乙醇(II) 30分钟5. 100%乙醇(I) 30分钟6. 100%乙醇(II) 30分钟7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟&二甲苯（I）20分钟9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。
2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。
（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓度的影响。
切片的制作过程(精)
石蜡切片制作过程1脱水：组织水洗后就可以加入酒精脱水，经过70％75％80％95％100％酒精脱水，其中95％100％的酒精重复两次。
可以保证组织中的水分脱出干净。
（各级酒精脱水时间约25min。
75％80％的酒精中可以分别加1-2滴甘油。
）然后进入1/2酒精+1/2二甲苯（纯）10min。
再转入到二甲苯约5min直到组织透明（一旦透明立即停止，以免破坏组织）2透蜡： 1 在透蜡之前做好准备工作，事先使腊熔化放入温箱内，室温箱温度保持55-60℃左右，注意不要使温度过高，以免使组织发脆。
2 将已经透明的组织放入二甲苯石蜡混合液内约20-30分钟，然后放入纯蜡1、2杯每杯透蜡45分钟1小时3折纸盒4包埋：小镊子，酒精灯，冷水，解刨针将石蜡注入纸盒，等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入石蜡中，继续倒满石蜡。
双手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成较厚的蜡层，然后急速进入冷水中3分钟。
第二天修正蜡块。
5修正蜡块：上下两面一定要平行且光滑6固着蜡块7切片（切片时，可以在刀片周围涂点甘油）8贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。
将切片放在载玻片（光亮面朝下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。
接着将载玻片放在33℃上烘烤。
9染色石蜡染色程序表二甲苯脱蜡1 10----15分钟二甲苯脱蜡2 10-----15分钟1/2二甲苯+1/2纯酒精3-----5分钟纯酒精10分钟95％酒精10分钟80％酒精10分钟70％酒精10分钟50％酒精10分钟蒸馏水洗1-----3分钟苏木精染色10-----15自来水冲洗3-------5分钟或更长伊红复染色5分钟左右70％酒精1------2分钟80％酒精1------2分钟95％酒精(1) 1------2分钟95％酒精(2) 1------2分钟100％酒精(1) 1------2分钟100％酒精(2) 1------2分钟二甲苯(1) 5分钟二甲苯(2) 5分钟封片。
病理组织切片制作技术PPT课件
• 病理组织切片制作技术概述 • 样本的收集与处理 • 组织切片的制备 • 病理组织切片的观察与诊断 • 病理组织切片制作技术的发展趋势
01
病理组织切片制作技术概述
切片制作的意义和目的
诊断疾病
教学质量
通过对病理组织进行切片制作，可以 观察组织结构和细胞形态，协助医生 诊断疾病。
环境控制
制作切片的实验室应保持清洁、干燥， 防止灰尘、温度等因素对切片质量造 成影响。
02
样本的收集与处理
样本的采集
手术切除
对于需要病理诊断的病例， 医生会进行手术切除病变 组织。
活检
通过穿刺或钳取的方式获 取少量病变组织用于病理 诊断。
尸检
对于死亡病例，通过尸检 获取病变组织。
样本的处理
清洗
利用人工智能技术对病理组织切片进行图像识别和分类，辅助医生 快速诊断。
辅助诊断系统
基于人工智能技术的辅助诊断系统，能够根据病理组织切片的特征， 提供初步诊断结果。
Hale Waihona Puke 预测模型利用人工智能技术构建预测模型，根据病理组织切片的特征预测疾病 发展趋势和预后情况。
THANKS
感谢观看
切片的染色
染色原理
染色是通过化学或物理方法使组织切 片着色，以突出或显现组织中的不同 结构。
常用染色方法
苏木精-伊红染色（HE染色）是病理 组织切片中最常用的染色方法，能较 好地显示细胞核和细胞质的结构。
切片的封固
封固剂选择
根据不同的染色方法选择合适的封固剂，如中性树胶、香柏 油等。
封固步骤
在染色和脱水完成后，用封固剂将切片固定在载玻片上，以 防止切片在观察和保存过程中发生脱落或损坏。
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组织切片制作步骤：
1.取材
确定所取材料的来源及部位，纵切还是横切；
取材要迅速，防止阻止发生进一步变化，材料体积要适宜。
下图为植物芽体取样实拍。
2.固定
（1）固定液的选择
最常用的固定液为FAA（万用固定液）。
它的优点是材料固定时间不受限制，固定时间短则数小时，长则
数月或数年。（可做材料保存液）
配方：50％或70％酒精90ml
冰醋酸5 ml
福尔马林5 ml
(柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制)
（2）材料固定后的处理
冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组织内的固定液
及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。
(材料固定后，若暂时不能进行下一步操作，可于70%的酒精溶
液或直接与FAA固定液中，于冰箱中4℃存放。)
下图为固定液浸泡的组织切块。
3.脱水
目的：水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透明剂进
入。
试剂：梯度酒精溶液
流程：70%---85%---95%--100%---100%每步1h-2h左右。
注意事项：保证脱水梯度和每一步脱水时间，水要完全脱净，但
也不能过度脱水（过久使组织变脆、收缩，这个时间大家可以根据自
己的实验来摸索一下，不必完全按照本操作来）。
下图为自动组织脱水机，适于大量样品组织脱水用。如果材料体
积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。
4.透明
目的：纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒
浸液，替换出组织内的酒精。
(二甲苯是最常用的透明剂，可以很好地与石蜡互溶)
流程：二甲苯与酒精的等体积混合液1h---纯二甲苯1h---纯二
甲苯1h。
5.浸蜡与包埋
目的：用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。
浸蜡程序:(恒温)
（1）低温浸蜡（36℃）：接上步，在有二甲苯和材料的烧杯中
逐步加碎蜡至过饱和（石蜡不能溶解），过夜12-24h。
（2）高温浸蜡（55-60℃，高于石蜡熔点3℃）：
将上步二甲苯与石蜡的混合液倒出，不要倒掉材料，将烧杯中加
入纯石蜡，共5-24h。纯石蜡需要更换三次。
关于石蜡的选择石蜡熔点：
对于较硬的材料，用熔点较高的石蜡进行包埋；
当切片较薄时（在8μm以下），选用熔点较高的石蜡包埋；
夏季宜采用熔点较高的石蜡（56,58℃）,冬季宜选用熔点较低的
石蜡（52,54℃）。
6.切片
传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形，粘于
小木块上，上机切片。
新型的切片方法是将包埋框（见下图）代替木块的支撑作用，上
机切片。
切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定，一般在
8μm-20μm范围内。
7.粘片与烤片
粘片：用粘片剂将蜡片牢附于载玻片上，防止在后续的操作中材
料脱落。
在载玻片上涂抹粘片剂（甲液），再滴蒸馏水（乙液），放上蜡片，
用滤纸吸取多余的水分。
烤片：将载玻片放于40℃展片台中烤干。
常用的粘片剂为郝伯特(Haupt)配方：
甲液：明胶1g乙液：甲醛4 ml
蒸馏水100ml蒸馏水100ml
甘油15 ml
苯酚2g
8.脱蜡与复水、染色
脱蜡目的：干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行
染色。
复水目的：脱蜡后的材料，如果不经过复水，直接进入染色剂中，
材料将会严重变形，甚至难以染色。
染色目的：使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的
差异以便于观察。
总体流程：二甲苯→1/2二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95％
酒精→85％酒精→番红（4h以上）→95％酒精→固绿（迅速）→95％
酒精（迅速）→100%酒精→1/2二甲苯+1/2纯酒精→二甲苯→二甲
苯，以上各级约需5～10分钟，已注明时间的除外。
染色剂：1%番红（85%酒精配制）
0.5%固绿（95%酒精配制）