鞭毛染色液(改良Ryu法)
鞭毛染色液说明书
鞭毛染色液说明书【产品名称】鞭毛染色液【产品型号】改良Ryu 型，石碳酸复红型【包装规格】货号：DM0030单瓶包装规格分别为：改良Ryu 型: A 液Ryu 稀释液：20ml 、100ml ；B 液Ryu 染色液：2ml 、10ml 。
石碳酸复红型: A 液石碳酸稀释液：20ml 、100ml ；B 液复红染色液：2ml 、10ml 。
每套/盒包装规格分别为：改良Ryu 型:A 液Ryu 稀释液20ml+B 液Ryu 染色液2ml/盒；A 液Ryu 稀释液100ml+B 液Ryu 染色液10ml/盒；石碳酸复红型:A 液石碳酸稀释液20ml+B 液复红染色液2ml/盒；A 液石碳酸稀释液100ml+B 液复红染色液10ml/盒。
【预期用途】用于菌体鞭毛的染色。
【检验原理】鞭毛是细菌的运动器官，须用电子显微镜观察或经特殊染色法使鞭毛增粗并着色后在普通显微镜下可以看到，检查细菌鞭毛的有无、数量与位置，是鉴别细菌的常用方法之一，鞭毛成分的分析研究，对细菌鉴定有重要意义，该染色法采用结晶紫或品红作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。
【主要组成成分】【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】l 、玻片处理：洁净玻片浸泡于2～5%盐酸乙醇中2天以上，蒸馏水冲洗干净，干燥后使用。
2、细菌尽量新鲜。
【检验方法】l 、配制鞭毛染色液：使用前，按Ryu 稀释液:Ryu 染色液=10:1比例混合，即为鞭毛染色液(改良Ryu 型)；或按石碳酸稀释液:复红染色液=10:1比例混合，即为鞭毛染色液(石碳酸复红型)，均室温保存待用；2、在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水；3、用接种环蘸取蒸馏水，与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次；4、轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀，切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落；5、置室温或35℃恒温箱内干燥固定；6、滴加鞭毛染色液(改良Ryu 型)或鞭毛染色液(石碳酸复红型)染色若干分钟； 型号 试剂组成 主要成分 改良Ryu 型 1、 A 液Ryu 稀释液 B 液Ryu 染色液 明矾 结晶紫 石碳酸复红型 2、 A 液石碳酸稀释液 B 液复红染色液 石碳酸 品红7、将玻片微倾斜，用蒸馏轻轻冲洗干净；8、将玻片直立使水分流尽，自然晾干；9、镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心，细菌分布少的地方，鞭毛容易观察，细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
鞭毛染色法——精选推荐
【改良Ryu法】
一、配方：A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，饱和硫酸铝钾液10ml
B液：饱和结晶紫
应用液：A液10+B液1份混合后室温保存
二、方法：
1.玻片的处理：要求用新的。
用前在95%酒精中浸泡24h以上，用时取出以洁净纱布擦干。
2.在玻片上滴2d蒸馏水
3.取菌环挑取菌落少许，点在蒸馏水顶部；
4.玻片自然干燥
5.加染色液，染15min后自来水轻轻冲洗干净
6.自然干燥，镜检。
【本人经验】
1.蒸馏水不要加太多，否则干燥时间长（尤其是低温环境）；
2.一定要自然干燥
3.整个过程动作要温柔，冲洗时切不可直接对准染色部位，要小流水冲玻片一端。
4.取菌量要少，否则细菌重叠在一起，不易观察鞭毛；
5.要从菌落边缘取菌
6.细菌最好用对数生长期的，切不可用选择培养基培养！
7.观察时要从染色斑边缘开始，逐渐向里。
细菌多数集中在边缘。
8.一定用蒸馏水，不要用生理盐水！。
同株奇异变形杆菌存在不同生长状态
同株奇异变形杆菌存在不同生长状态刘蕾;刘艳霞;邓渝;刘俊康【摘要】揭示同株奇异变形杆菌存在多种不同的生长状态.通过环形接种、点种传代、革兰染色和鞭毛染色等方法观察同株奇异变形杆菌的形态学变化.同株奇异变形杆菌的生长速度、迁徙能力、生长形态及鞭毛形态发生变化.同株奇异变形杆菌存在不同的生长形态.%Proteus mirabUis (Pin) existed different growth states in the same strain by observation of its morphological changes through the annular inoculation, dibbling passage. Cram and flageilum staining and other methods. The Pm was changed in the growth rate, migration ability, growth forms and flageilum morphology. Therefore, it could be concluded that the same Pm strain existed different growth states.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2011(031)004【总页数】4页(P100-103)【关键词】奇异变形杆菌;细菌形态;鞭毛形态【作者】刘蕾;刘艳霞;邓渝;刘俊康【作者单位】中国人民解放军第三军医大学,重庆400038;中国人民解放军第三军医大学,重庆400038;中国人民解放军第三军医大学,重庆400038;中国人民解放军第三军医大学,重庆400038【正文语种】中文【中图分类】R37人类正面临着内、外环境的挑战,微生态环境作为一种重要的内环境对人体健康影响巨大。
生命活动的本质是生物与内外环境形成的生态系统的平衡过程,而疾病多由各种干扰宿主的因素过度作用导致生态失调引起。
现代微生物学检验基本技术
现代微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。
细菌的五种鞭毛染色方法比较研究
细菌的五种鞭毛染色方法比较研究
顾冠彬;房红莹;徐培君
【期刊名称】《中国血液流变学杂志》
【年(卷),期】2005(015)003
【摘要】目的比较细菌的五种鞭毛染色方法染色效果.方法用Ryu法、Ryu改良法、Blendon染色法、Fontana染色法、碱性复红法等五种不同鞭毛染色法对奇异变
形杆菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌、大肠埃希菌染色,参照West提出的评分
方法打分.结果五种染色方法中,Blendon染色法效果最佳.鞭毛清晰,形态良好,很少
脱落,背景杂质颗粒少见,背景底色浅,易于观察.其次为Ryu红法,最差为Fontana染色法.结论 Blendon鞭毛染色法效果最好,值得临床推广使用.
【总页数】3页(P483-485)
【作者】顾冠彬;房红莹;徐培君
【作者单位】苏州大学医学院微生物学教研室,江苏,苏州,215007;苏州大学医学院
微生物学教研室,江苏,苏州,215007;苏州大学医学院微生物学教研室,江苏,苏
州,215007
【正文语种】中文
【中图分类】R378
【相关文献】
1.促使细菌鞭毛增长及鞭毛染色方法的探索 [J], 张明伟
2.细菌鞭毛最佳染色方法的选择 [J], 关晓利;任建国
3.细菌鞭毛镀银染色方法在细菌原位观察中的应用 [J], 吴锡艳
4.细菌鞭毛染色方法的改良 [J], 徐娜娜;何静妹;汤仁仙
5.细菌鞭毛两种染色方法的比较研究 [J], 宋瑛琳;王芳;田明
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鞭毛染色实验报告
1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。
2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。
3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。
二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。
鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。
常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。
4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。
四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。
活化后菌种备用。
2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。
3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。
用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。
将残水沥干或用B液冲去残水。
滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。
待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。
4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。
菌体为深褐色，鞭毛为褐色。
注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。
1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。
2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。
3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。
六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。
2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。
医院微生物室细菌的形态检查操作规程
医院微生物室细菌的形态检查操作规程
一、不染色标本的检查
压滴法和悬滴法。
主要用于检查生活状态下的细菌的动力及运动状况。
将特制好的标本置于显微镜载物台中央，先以低倍镜观察，再用高倍镜观察。
结果：有鞭毛的细菌呈穿梭似流星状运动(有明显的方向性)：无鞭毛的细菌呈布朗运动(只在原地颤动而无位置的改变)。
二、细菌染色标本的检查
染色的第一步是制作涂片。
菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。
菌落涂片时，先取生理盐水l滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。
涂片时必须注意应轻轻操作。
猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。
制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。
将固定后的涂片进行染色。
2.1、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。
染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
2.1.1、试剂。
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鞭毛染色液(改良Ryu 法)
简介：
细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证。
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
Leagene 鞭毛染色液采用改良Ryu 染色法，该染色法的优点是采用结晶紫作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 蒸馏水
3、 接种环
4、 恒温箱
5、 显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制鞭毛染色工作液：使用前按试剂(A):试剂(B)=10:1混合，即为鞭毛染色工作液，室温保存待用。
2、 在洁净无油脂的载玻片上滴蒸馏水。
3、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点。
4、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀。
切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。
5、 置室温箱内干燥固定。
6、 滴加鞭毛染色工作液染色。
7、 轻轻水洗。
8、 自然晾干。
编号 名称 DM0030 50ml DM0030 100ml Storage 试剂(A): Ryu 稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): Ryu 染色液 5ml 10ml RT 避光
使用说明书 1份
9、镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心。
细菌分布少的地方，鞭毛容易观察。
细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
染色结果：菌体和鞭毛皆为紫色，菌体染色较鞭毛为深。
注意事项：
1、固定时不宜用火焰固定。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
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