实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
细菌鞭毛染色及运动性观察
细菌鞭毛染色及活菌运动性观察【摘要】本实验以铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌为实验菌种，先使用压滴法制片，之后用光学显微镜的油镜观察细菌的活体运动。
然后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；虽然最后并没有在显微镜下观察到染色后的鞭毛，但在实验中已大致掌握相关实验操作。
【关键词】铜绿假单胞菌；枯草芽孢杆菌；鞭毛染色法；压滴法【前言】鞭毛是生长在某些细菌体表的长丝状，波曲型的蛋白质附属物，具有运动功能。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~20nm，只有用电子显微镜才能观察到。
但可以使用鞭毛染色法，使之能用普通光学显微镜观察到。
因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。
本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B液。
而观察细菌的运动性时要使用压滴法。
本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的枯草芽孢杆菌和具端生鞭毛的的铜绿假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。
本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。
1.实验目的1.1学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征1.2巩固显微镜操作技术及无菌操作技术1.3学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）2实验原理2．1细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson 氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
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暗视野显微镜或相差显微镜观察
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
水产微生物实验—细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察(教案).docx
实验六细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察一、基础知识荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而口町溶于水，易在用水冲洗时被除去。
所以通常用衬托染色法染色，使菌体和苗景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。
由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。
实验中介绍3种荚膜染色法，其屮湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细菌。
芽抱又叫内生抱了，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽抱以及芽抱的形状、芽砲在芽抱囊内的位置、芽砲囊是否膨人等特征是鉴定细菌的依据之一。
由于芽抱壁厚、透性低、不易着色，当用石炭酸复红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽他囊着色，而芽施囊內的芽他不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽他呈淡红或淡蓝紫色的圆或椭圆形的圈。
为了使芽紀着色便于观察，可用芽沦染色法。
芽沦染色法的基本原理是：用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽他内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽沦一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽他仍保留初染剂的颜色，1佃菌体和芽沦囊被染成复染剂的颜色，使芽他和菌体更易于区分。
鞭毛是细菌的运动“器官”细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。
细菌的鞭毛很纤细，其宜径通常为().()1—().021 xm,所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相并显微镜肓接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，1何只能用电子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的Leifson氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。
细菌鞭毛染色及运动性鉴定
细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。
鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。
故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。
2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。
4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。
2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。
2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。
4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。
在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。
主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
实验三__鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
三、实验器材
1. 活材料：培养 活材料：培养12-16h小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌）。 小时的普通变形杆菌 2. 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（伤寒 标本片：单鞭毛（绿脓杆菌），周鞭毛（ ），周鞭毛 杆菌）） 杆菌）） 3. 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 试剂：生理盐水、香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、 水纸、接种环，显微镜等。 水纸、接种环，显微镜等
五、实验作业： 实验作业：
1. 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图 绘出鞭毛菌（绿脓和伤寒杆菌）的形态图. 2. 用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌菌是否具 有鞭毛，要注意哪些环节？ 有鞭毛，要注意哪些环节？ 3. 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？如 悬滴法中，为什么加的菌液不能大多？ 果发现显微镜视野内大量细菌向一个方向 流动，你认为是什么原因造成的？ 流动，你认为是什么原因造成的？
A染液（媒染剂）染色4-6分钟→蒸馏水洗→ 再 染液（媒染剂）染色 分钟→ 染液 分钟 蒸馏水洗→ 染液（ 用B染液（硝酸银）冲洗残水→ 然后使 液充满 染液 硝酸银）冲洗残水→ 然后使B液充满 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热） 载片→ 酒精灯加热至冒气（微热），30-60秒 秒 加热时应随时补充蒸发掉的染料， （ 加热时应随时补充蒸发掉的染料 ， 不可使玻 片出现干涸区） 蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检. 片出现干涸区）→蒸馏水洗、自然干燥→ 镜检
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开； 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 易脱落，造成染色失败。 鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干， ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 影响观察。 染液染完后用蒸馏水（ ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 、 染液染完后用蒸馏水 自来水效果差） 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到， 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 效果。 染液后， ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 染液后 将玻片稍加热（但不能太热， 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
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对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
一、实验目的 ➢学习并掌握细菌的鞭毛染色法 ➢观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式 ➢观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛 ➢了解细菌鞭毛染色的应用
3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
四、实验方法
（一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作）
1、试管壁上标明BS及学号，用直的接种针 火焰灼烧柄及针挑取一点枯草芽孢杆菌 沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深 34厘米37℃培养2448小时（1周）后观 察生长情况（下次课补记结果）。
3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补 记）。
4、讨论实验成败的原因。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
开放设计性实验的准备
1. 分组 （每一排为一组，5-6人，推选1人为组长，负责本组协调，每个 人都要参与，在完成的实验设计报告中列出所有组员的学号，姓名）
2. 选题 （选感兴趣的小实验，查资料，讨论可行性） 3. 写实验设计（要求详细具体）
光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径 变粗，然后再进行染色。
暗视野显微镜或相差显微镜观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 周生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
五、注意事项
1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。 2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时
动作要柔和，因为鞭毛易脱落。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
六、视频
细菌鞭毛染色法
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
七、作业与讨论
1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形 态。
2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应 掌握哪些环节？注意些什么问题？
实验目的（可简单） 实验原理 实验材料（包括菌种、试剂、仪器设备） 方法与步骤 可能的结果 可能存在的问题 4. 两星期后交实验设计报告，并讨论实验可能性。该实验设计内容将计算 为一次平时成绩。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
设计性实验的格式
实验题目
成员的姓名，学号，组长及联系方式
实验目的 实验原理 实验材料（应当是小组成员自己能够采集或制备的） 实验设备 试剂的配制 操作步骤（步骤要详细） 讨论（包括可能的结果和可能存在的问题） 参考文献
实验七、细菌的鞭毛染色和运动ห้องสมุดไป่ตู้观察
二、实验原理
细菌的鞭毛极细，直径一般为 10～20nm；长度为15～20μm。
长度15～20μm。
直径10～20nm
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
观察和判断细菌鞭毛的方法
电子显微镜直接观察
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长）
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验前准备工作
1.菌株的连续活化 2.染色液当天配制 3.无菌液（试管或三角瓶中）
的准备
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
部分同学的实验结果实例
钾细菌的荚膜
水洗
不水洗
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
部分同学的实验结果实例
枯草杆菌的芽孢
番红染色
孔雀绿+番红染色
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活化34代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡 染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH） 染液B（AgNO3）
2、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄 色葡萄球菌，并标明SA。
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加热， 用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。