细菌鞭毛染色
实验六 细菌的鞭毛染色及其运动性观察
实验六细菌的鞭毛染色及其运动性观察生物112 周泓兆1102040226一、目的1.学习并掌握细菌的鞭毛染色法；2.学习并掌握悬挂法观察细菌运动。
二、原理鞭毛只有通过特殊染色方法时，才可在普通光学显微镜下看到。
本实验采用银染法，即先利用媒染剂（本实验使用的媒染剂为鞣酸）促进银离子在鞭毛上的沉积，加粗其直径，这样就能在显微镜下看到深褐色的菌体及褐色的鞭毛。
采用鞭毛染色法可以观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，而如果只需要了解供试菌株是否具有鞭毛，则才用悬滴法较简便。
该法可直接在显微镜下通过观察细菌的运动状况来推断鞭毛是否存在。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较，强的运动力，而衰老的细菌鞭毛易脱落，因此观察时应选用幼龄细菌。
三、材料1.菌种：普通变形杆菌（Proteus vulgaris）2.染料：鞭毛染液A液，鞭毛染液B液3.其它：干净载玻片，凹玻片，盖玻片，无菌水,洗瓶，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，酒精棉球，接种环，酒精灯，镊子。
四、实验步骤1.制备菌悬液：用无菌长滴管取3-5ml无菌水，沿试管壁轻轻加入普通变形杆菌斜面上，将该试管置于28℃温箱中静置10min左右。
2.鞭毛染色（1）制片：取一经洗液浸泡过的干净玻片，滴一滴菌液于玻片的一端，然后轻抬此端，使菌液缓慢流向另一端，并在空气中自然干燥固定。
（2）染色：①在涂片处滴加鞭毛染液A液染色5min②用蒸馏水充分洗净A液③用鞭毛染液B液冲去残水，再加B液于涂片处，静置1min④用蒸馏水洗净B液，自然风干（3）镜检：在涂片上滴加适量香柏油，在油镜下观察鞭毛的形态。
3.悬滴法观察细菌的运动（1）涂凡士林：取一片干净无油的盖玻片，在其四周分别用牙签涂抹少许凡士林。
（2）滴菌悬液：用经过灭菌的接种环取少量菌悬液置于盖玻片中央。
（3）盖凹玻片：将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌悬液，并轻轻盖在盖玻片上，使两者粘合在一起，然后反转凹玻片，使菌悬液恰好悬在凹槽中央。
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
鞭毛染色液(石碳酸复红法)
版本：A5 修改日期：2024.03.27 鞭毛染色液(石碳酸复红法)产品简介： 细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证，通过鞭毛染色可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
Leagene 鞭毛染色液采用石碳酸复红法，该染色法的优点是采用石碳酸复红作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 载玻片、显微镜、接种环、恒温箱操作步骤(仅供参考)：1、 配制鞭毛染色工作液：使用前按试剂(A):试剂(B)=10:1混合，即为鞭毛染色工作液，室温保存待用。
2、 在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。
3、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点2次。
4、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀；切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。
5、 置室温或35℃恒温箱内干燥固定。
6、 滴加鞭毛染色工作液染色。
7、 轻轻水洗，自然晾干。
8、 镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心；细菌分布少的地方，鞭毛容易观察；细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
编号 名称 DM0031 50ml DM0031 100ml Storage 试剂(A): 染色稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): 碱性品红染色液 5ml 10ml RT使用说明书 1份染色结果：菌体和鞭毛皆为红色，菌体染色较鞭毛为深。
注意事项：1、固定时不宜用火焰固定。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：12个月有效。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法目前，细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同，可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法6类，前5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸，染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂，并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀（tarandfeather）”，鞭毛直径加粗，进一步染色后即可在油镜下观察。
1.碱性复红法和副品红法1926年由Gray首创，其媒染液成分包括20%丹宁酸水溶液2.0ml，硫酸钾铝饱和水溶液5ml，饱和氯化汞水溶液2ml，3%碱性复红乙醇（95%）溶液0.4ml，临用前混合，且需过滤后方可使用。
染片时，媒染剂染色约6min，具体时间尚需在试验中摸索确定，染色液是抗酸染色Ziehl-Neelsen石碳酸复红染液，染片时需要1小片吸水纸盖在涂片上，染色3min。
由于该方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。
Leifson于1930年建立了副品红法，并于1938年和1951年两次对该方法进行了改良，称为Leifson方法。
染色试剂由3种溶液组成：A为1.5%NaCl水溶液，B为3%单宁酸水溶液，C为乙酸副品红0.9g，碱性副品红0.3g溶解于100ml95%乙醇溶液中。
使用时把等体积A和B混合，然后再加2体积C与之相混。
该试剂冷藏可保存1～2个月。
2.结晶紫法，又称Ryu法1937年由Ryu建立，1982年由Kodaka等进行了改良。
媒染剂：5%石碳酸10ml，2g单宁酸和10ml饱和硫酸钾铝。
染色剂：饱和结晶紫乙醇溶液，即12g结晶紫溶于100ml无水乙醇中。
使用时把10份媒染剂与1份染色剂混合，染色5min。
1989年，Heimbrook等使用改良的Ryu染色试剂，采用湿片技术进行鞭毛染色，虽然可以观察到细菌鞭毛，但效果不好。
Ryu染色方法优点是试剂比较稳定，目前Difco公司已经研制出该方法的商品试剂盒，但染色效果亦不甚理想.3.维多利亚蓝B法1990年由Inoue等报道日本制药株式会社ShionogiSeiyaku 研制出一种细菌鞭毛染色商品试剂盒。
3鞭毛染色和蓝细菌
（一）细菌的鞭毛染色 （枯草芽胞杆菌 ） 1、于一洁净载玻片上等分三个区域（用专用载玻片）。 2、在载玻片一端滴１滴菌悬液，倾斜载玻片，使菌悬液缓慢从一端流至另一端。 3、空气中自然干燥。 4、加染色液于第一区，3分钟后再加染色液于第二区，依次类推。 5、载玻片平置，加蒸馏水充盈，然后用洗瓶小心洗去染料，自然干燥。 镜检（100X） （二）细菌的运动性观察 （枯草芽胞杆菌 ） 直接制备枯草芽胞杆菌水浸片加盖玻片观察， 10X，40X（注意镜检时适当 缩小光圈或降低聚光器） （三）蓝细菌形态观察 制备水浸片：于一洁净载玻片上滴加蒸馏水1滴，取红萍少许，加盖玻片压 片。镜检10X，40X（光线适当减弱，注意异形胞的形态）。 四、作业 ： 1、绘制鞭毛形态图 （100X）； 2、绘制蓝细菌（ 40x）形态图
鞭毛
Bt三 细菌的鞭毛染色、运动性观察和蓝细菌的形态观察
一、实验内容与菌种 1、细菌的鞭毛染色：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis） 2、细菌的运动性观察：枯草芽胞杆菌 （Bacillus subtilis ） 3、蓝细菌形态观察： 满江红鱼腥蓝细菌（Anabaena azollae） 二、实验原理 三、实验步骤 ：
细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察
细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察摘要本实验采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。
并采用压滴法，用美蓝染色后观察细菌的运动性。
关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。
细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。
根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。
细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu氏法等多种鞭毛染色的方法。
鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛，同时可以观察细菌的运动性特征。
1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）1.1.2染色液和试剂香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。
1.1.3仪器及其他普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管，镊子，滴管，盖玻片，吸水纸等。
1.2方法及步骤1.2.1硝酸银染色法1.2.1.1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗含衣粉过的水中煮沸20min。
取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。
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细菌鞭毛染色
一、实验目的
学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。
二、实验原理
细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
（本次实验用硝酸银当染色剂）
三、实验器材及试剂
1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。
2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。
3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊
子、电热炉、大烧杯、洗衣粉
四、实验步骤
鞭毛染色——硝酸银染色法
1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。
3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录
枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图
铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图
五、实验结果分析
1.理论结果：
菌种名称鞭毛形态鞭毛数量鞭毛着生位置枯草芽孢杆菌纤细波浪状丝状多根周生
铜绿假单胞菌一根一端生2.实验结果：
3.铜绿假单胞菌鞭毛实验，观察结果与理论结果差异分析：油镜视野中，铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根，与理论结果的一根有所差异，其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动，导致鞭毛脱落，脱落的鞭毛附着在了菌体表面，造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。
油镜视野中鞭毛着生位置不是严格的端生而是近端生，可能是光线的折射，菌体形状的变化或菌体的平面观察无法真实反映其真实的立体形状等原因，导致实验结果与理论结果有所偏差。
六、思考题
1．除鞭毛染色法外，还有什么方法能观察到鞭毛？
答：可直接在电子显微镜下观察，电子显微镜放大倍数高，分辨率高，可以观察到鞭毛。
2．你对你所做的鞭毛染色法满意吗？如果不满意，有哪些方面需要改进？如果满意，你的成功经验是什么？
答：不完全满意，在染色时间的控制上还不够，A液、B液接触过久，使玻片上有沉淀，不利于观察；染色时间过长，鞭毛脱落现象严重，鞭毛着生观察不明显。
3．如果你发现鞭毛已与菌落脱离，请解释原因？
答：（1）可能是菌龄过大，自然脱落；
（2）操作时玻片受到较强烈的震荡；
（3）接种时接种环在玻片上反复涂抹时使之脱落；
（4）染色过久使之脱落。