纳米流式应用手册 -NanoFCM
细胞外囊泡 外泌体 表征的标准化
细胞外囊泡外泌体表征的标准化1. 引言1.1 细胞外囊泡及外泌体的定义外泌体是一种由细胞分泌的细胞外囊泡，其直径一般在30-1000纳米之间。
外泌体主要由脂质双层包裹着，内含有蛋白质、核酸和其他生物分子。
外泌体中的生物分子可以通过体内或体外的方式传递至其他细胞，从而发挥特定的生物学功能。
外泌体作为细胞间通讯的重要媒介，在调节细胞信号传导、免疫应答、代谢调节等生理过程中扮演着关键的角色。
细胞外囊泡是一个更广泛的术语，包括外泌体在内的各种细胞分泌的囊泡。
除外泌体外，细胞外囊泡还包括外泌体以外的其他细胞分泌的囊泡，例如外泌体以外的胞质小泡、外泌体样颗粒等。
这些细胞外囊泡可以从各种细胞类型中产生，包括免疫细胞、肿瘤细胞、神经细胞等。
这些细胞外囊泡也可以携带各种生物分子，对细胞间通讯和信号传导起到重要作用。
通过对细胞外囊泡和外泌体的定义，我们可以更深入地理解这些细胞分泌物的特性和功能，为研究其表征方法、生物学功能和疾病作用提供基础。
1.2 研究背景细胞外囊泡及外泌体是一种重要的细胞间通讯介质，其内含有丰富的蛋白质、核酸和脂质成分，可以在细胞之间传递信息并影响受体细胞的生理状态。
研究表明，细胞外囊泡及外泌体在多种生理和病理过程中发挥着重要作用，如细胞增殖、免疫应答调控、炎症传递以及肿瘤发生和转移等。
随着对细胞外囊泡及外泌体的研究不断深入，人们对其表征方法的标准化也越来越重视。
目前对细胞外囊泡及外泌体的表征方法存在较大的差异性，导致研究结果的准确性和可重复性受到影响。
一些研究中使用的分析技术不够准确、灵敏，导致无法准确检测细胞外囊泡及外泌体的组成和功能。
缺乏统一的标准化标志物和检测方法，也增加了对细胞外囊泡及外泌体研究结果的解读难度。
为了进一步推动细胞外囊泡及外泌体研究的发展，有必要对其表征方法进行标准化，并提出相应的改进建议。
通过建立统一的标准化指导方针和检测标准，可以有效提高细胞外囊泡及外泌体研究的可比性和可信度，为相关研究提供更加准确和可靠的数据支持。
使用IBM PowerPC 750处理器和Tundra主桥攻克系统设计难题
初始存储器延迟是性能的一个衡量指标，但 衡量“平均”存储器延迟则更有意义。“流
CPU R1
W3 W2 W1 Memory
R1 W3 W2 W1
WR13 W3 W2 WR123 W3
Pipeline Penalty
WR131
图 2：流水线阻塞造成流水线损失
CPU
R1 W3 W2 W1 W3 W2 W1 WR131 W3 W2 W1
过长的迹线和接近 200MHz 的系统总线速度 本身就能造成电气上的困难。要确保成功的 设计，设计人员必须对各总线进行彻底的信 号完整性分析——在应用条件下使用 Hspice 或 IBIS 建模系统模拟总线的特性。
电源和接地阻抗对系统的信号质量也有很大 影响，可以关系到应用的成败。同样，强劲 可靠的电源线旁路在许多应用中也格外紧 要。Tundra 和 IBM 在其产品数据手册中提 供了旁路建议，并且在其客户支持网站上提 供了可免费下载的 IBIS 或 Hspice 模型。
EEMBC 标准测试
IBM®750CL- 800MHz
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DDR 存储器，这种存储器对于解决许多系统 问题无能为力。
Tundra 的主桥支持 DDR2 存储器。本文将 在各部分中突出讲述 DDR2 的某些优越性。
电磁干扰排放的影响：
电磁干扰排放是在多方面折磨系统的问题。 首先，电磁干扰将噪声引入周围的组件。对 于总体信号完整性来说，防止噪声进入系统 接口至关重要。其次，对外辐射的电磁干扰 也必须加以遏制。数十年来，计算器件一直 在承受电磁干扰排放法规的制约。随着时钟 频率和数据传输速率不断提高，电磁干扰管 理越来越困难，其成本越来越高。金属机箱 和法拉第笼等昂贵的电磁干扰遏制手段在目 前的许多成本敏感型应用中已经难以承受。 一种好得多的办法是尽量降低干扰源的电磁 干扰能量。一种有效方法是使用扩展频谱锁 定技术。生成扩展频谱时钟可以放慢时钟频 率的调制速度，从而降低峰值能量。通过将 窄带时钟信号扩展到较大带宽，可以衰减与 该时钟对应的尖峰信号及其谐波。这样可以 把与该时钟同步的所有时钟和信号的峰值辐 射降低约 8 分贝，从而形成噪声较低的系 统。通过加入扩展频率锁定功能，Tundra 的 主桥能够以从源头解决问题的方式降低电磁 干扰的遏制成本。
航天科工自主可控硬件产品手册
微型计算机-天玥TR1231/TR1235产品概述：基于国产飞腾FT1500A四核处理器平台，采用国产昆仑固件和银河麒麟桌面操作系统研制的通用型计算机，可支持主要国产品牌办公软件、数据库运行，可提供多种对外接口，可用于各办公场所和信息中心等固定环境中，支撑实现日常办公、网络管理等功能。
产品特点：微型计算机-天玥TR117*产品概述：基于国产龙芯3A3000四核处理器平台,采用国产昆仑固件和中标麒麟桌面操作系统研制的通用型计算机,可支持主要国产品牌办公软件、数据库运行，可提供多种对外接口，可用于各办公场所和信息中心等固定环境中，支撑实现日常办公、网络管理等功能。
微型计算机（一体式）-天玥TR3231产品概述天玥TR3231微型计算机（一体式）是以国产飞腾FT1500A处理器为核心，采用符合UEFI2.3标准的国产昆仑桌面版固件和麒麟桌面操作系统的通用型计算机。
台式计算机（一体式）主要由主板、内存、硬盘、独立显卡、光驱、风扇模组、电源模块、机箱组成，可支持主要国产品牌数据库（达梦、金仓、南通、神通等）连接工具的运行，支持可信硬件模块扩展，可提供多种对外接口，适用于我军各级固定指挥所、通信站台、网络控制室、值班室试验基地、办公场所和信息中心（节点）等固定环境中，支撑实现指挥作业、通信业务、安全控制、网络管理、值班交换等功能。
Mini 主机-天玥TR5171产品概述：天玥 TR5171 型 Mini 主机是专门针对“两个终端”问题研制的一款小型国产化终端产品，基于龙芯 3A3000 处理器，搭载中标麒麟操作系统，同时内置 KVM 功能，用最小的体积解决“两个终端”切换问题。
产品支持主流国产品牌办公软件，主要用于各办公场所，降低终端占地面积。
产品特点：Mini 主机-天玥TR5231产品概述：天玥 TR5231 型 Mini 主机是专门针对“两个终端”问题研制的一款小型国产化终端产品，基于飞腾处理器，搭载银河麒麟操作系统，同时内置 KVM 功能，用最小的体积解决“两个终端”切换问题。
那些著名的生物技术公司
一、分子生物学Promega:Promega公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的“老字号”。
该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。
应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检测；蛋白酶、蛋白激酶、核受体检测，以及描述药物先导物的吸收、分布、代谢、排泄等特征性参数的一系列检测方法。
Promega公司一直注重和终端客户的互动，今年推出的主题是 today could be the day.（）欢迎您的来访，并且和Promega一起分享您的梦想！Invitrogen：该公司成功地提供了PCR产物快速克隆试剂盒，及与之配套的系列产品，包括高效转染和转化试剂、高效感受态细胞、全面的原核及真核基因表达系统、酵母双杂交系统等多种特色产品。
大大便利了分子克隆的全过程操作。
其成功并购了Gibco/BRL，Novex，Research Genetics 等知名公司，产品覆盖更为广泛。
Clontech：现已成为.公司旗下分子生物学主力舰。
该公司的cDNA试剂盒、荧光蛋白报告基因系统、酵母双杂交系统、基因Array产品是独具特色的产品，其中一些试剂盒（GFP、Tet Off &On 等）获得过多次大奖。
Clontech公司聚集了一大批优秀的科学家，在分子研究的各个领域开发出了许多设计思路独特，快捷便利的试剂产品，紧跟科学前沿。
Strategene：该公司的特色产品包括：预制基因文库、定制文库、文库构建产品、感受态细胞、高效转染试剂、点突变试剂盒、PCR仪及多种专利产品，在分子生物学研究的多个方面有不凡表现，受到全球实验室的好评，成为迅速崛起的佼佼者。
Novagen：该公司在蛋白表达和纯化工具的研究上成绩卓著，发展了相对应的表达载体和纯化方法，使得用户可以很方便地将蛋白表达、纯化、检测在有协调性的Novagen技术系统内完成。
柴油车尾气过滤器(DPF)系统常见问题及答案：
Pirelli Eco Technology倍耐力爱科技术有限公司公司柴油柴油车尾气过滤器（DPF）系统常见问题及答案：1)请介绍一下倍耐力爱科技术（Pirelli Eco Technology）公司？倍耐力爱科技术有限公司（Pirelli Eco Technology）是一家总部位于意大利米兰的国际化公司，在环保燃料领域和柴油车尾气后处理系统的设计开发以及生产处于领导者的地位，隶属于倍耐力（Pirelli）集团。
2)在发动机排出的废气中存在哪些污染物？柴油发动机通过燃烧排放的主要污染物为以下几种：CO（一氧化碳），CO2 （二氧化碳），NO x（氮氧化物），HC（碳氢化合物），PM（可吸入污染颗粒物）。
3)为什么柴油发动机污染会更严重？因为柴油压燃式发动机与传统的点燃式发动机不同，它具有污染颗粒物和氮氢化物高排放的特点。
4)污染颗粒物指的是什么？PM（可吸入污染颗粒物）是由大量不同性质的小体积固体颗粒物组成的（包括沙子、灰尘和烟雾）。
在排放来自柴油发动机的情况下，主要的污染颗粒物是由燃料的不充分燃烧而产生的固体碳颗粒所组成；体积小于10微米的可吸入污染颗粒物对我们健康的危害是最大的。
5)为什么可吸入污染颗粒物对我们人类的健康存在危害？因为人体正常的防御系统无法抵抗小体积的污染颗粒物，这样以来，颗粒物就会堆积在我们的呼吸系统，并造成不同类型的疾病。
6)在城市中哪些是主要可吸入污染颗粒物的来源？在一个典型的高度工业化城市，污染颗粒物主要来自热电厂的排放（12%），车辆运行造成的不同材料摩擦（14%），汽车发动机（20%），轻型柴油发动机（6%）以及大量来自重型车辆的柴油发动机的排放（30%）。
7)减少来自柴油发动机可吸入污染颗粒物排放的可能性解决方案都有哪些？目前可以用于减少来自车辆污染颗粒物排放的技术主要有DOC（柴油氧化催化剂），能够实现平均15%排放物的减少；POC（颗粒物氧化催化剂），能够实现平均45%排放物的减少以及DPF（柴油污染颗粒物过滤器），能够保证90%污染颗粒物排放的减少。
血浆外泌体miR-1183在结直肠肿瘤中的表达及诊断价值研究
安徽医科大学学报Acta Universitatis MePicinalis Anhii2022Dcc；55(19)・677・网络出版时间：2222-12-29/I网络出版地址：https：//ki.oePCcms/dxWU34.1065.R.322212021525.419.htmi血浆外泌体miR2183在结直肠肿瘤中的表达及诊断价值研究张士龙，吴文涌摘要目的研究miRN113在结直肠肿瘤血浆外泌体中的表达和诊断价值。
方法采用电镜、流式分析、粒径分析等方法鉴定血浆样本中的外泌体。
qRT-PCR测定80例结直肠癌、75例结直肠腺瘤和75例健康对照样本外泌体中miR-1113的表达水平;统计分析外泌体miRD113的表达量与临床各病例资料的相关性。
结果电镜、流式分析、粒径分析鉴定到了典型的外泌体特性，认为成功提取到血浆外泌体。
miRN113的表达水平在结直肠肿瘤组血浆外泌体中高于对照者;而相比腺瘤组，其表达水平在结直肠癌组更高（P均<0.25）o结直肠癌组血浆外泌体miRD113表达与病理分期、N分期、M分期、血清癌胚抗原（CEA）水平正相关（P均<0.05）o结直肠腺瘤组血浆外泌体miRN113表达与血清CEA水平相关（P<0.05）o作为诊断标记，血浆外泌体miR-1113鉴别结直肠癌、结直肠腺瘤、结直肠肿瘤和结直肠良恶性肿瘤的曲线下面积（AUC、分别为0.8857、0.865、0.9555和0.7344（P均<0.401、。
结论外泌体miR-1113表达与结直肠肿瘤形成及进展紧密关联，其血浆表达量可能作为结直肠肿瘤辅助或分层诊断的标志物。
关键词miRD113;结直肠肿瘤;血浆;外泌体;诊断中图分类号R755.94文献标志码A文章编号600-692（2020）6-1877-05 doRlO.19405/p cnkS issclOOO-1495.2022.12.419我国结直肠癌综合发病率和病死率分别排第三和第五位，总体呈现持续上升趋势[1"2]o超过半数的临床首诊患者因出现了转移而错过最好诊疗时段，导致预后不佳。
【国家自然科学基金】_辅助诱导_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140803
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科研热词 辅助诱导 蛋白质组学 t淋巴细胞 蛋白表达 细胞凋亡 受体 原核表达 t淋巴细胞,辅助诱导 鼻炎 黑质 黄曲霉毒素b1 麻醉 鱼藤酮 骨髓基质细胞(mscs)分化 骨肉瘤 马传染性贫血病毒 顺铂 间接致癌物 金属蛋白酶 重庆主城区 酶联免疫斑点试验 适应性免疫 过继免疫治疗 辐射敏感性 趋化因子配体18 贝伐单抗 调节性 角质形成细胞 表位预测 衍射增强成像 血管生成抑制剂 血必净注射液 血小板聚集 血小板减少性 蝙蝠蛾被毛孢菌丝体 蛋白组学 蛋白纯化 虚拟筛选 蒸发诱导自组装 菌毛蛋白a 致病性 自身抗体 自身免疫性肝病 腺病毒载体 脓毒症 肿瘤坏死因子-α 肠易激综合征 肝纤维化 肝素酶 维甲酸 结肠肿瘤 结肠炎
结构控制 细胞转化 细胞生长 细胞毒 纹理分析 红色毛癣 紫癜 紫外线辐射 糖皮质激素类 精液质量 精子凋亡 白血病 白细胞介素类(interleukins) 白细胞介素12 白细胞介素-17 病毒激活(virus activation) 疫苗,dna 电泳 甲状腺激素 特发性 牙龈卟啉单胞菌 溶胶凝胶法 溃疡性 模式识别受体 树突状细胞 有机催化 有序中孔炭球 效果评价 放射疗法,计算机辅助 抗氧化作用 手术 手性辅助基 成骨分化 成纤维细胞 悬浮 微波辅助 常年性 帕金森病 尼美舒利 小鼠,裸 小鼠 小型猪 小分子蛋白 小分子抑制剂 对映选择性氟化 宫颈癌 实验教学 大豆异黄酮 多克隆抗体 复杂有序 基因调控网络 基因扫描 基因 病毒(genes viral) 固有免疫
一、项目名称基于临床分子诊断技术的基础研究及临床推广
一、项目名称：基于临床分子诊断技术的基础研究及临床推广应用二、推荐单位：四川省教育厅三、项目简介本项目属于实验诊断学领域，分子诊断技术因具有高敏感度和高特异度等优点，是临床检验领域的主要发展方向，但由于该技术所需的平台与人员条件相对较高，使得该技术在国内外临床实验室应用并不广泛。
基于此，课题组历时13年，在国家自然科学基金等资助下，进行了以下研究。
1.课题组率先创建了多种分子诊断新技术：①课题组首次建立了基于新型仿生通道的活细胞传感技术及用于核酸和抗体检测的蛋白纳米孔道技术，可定量探测离子、质子和生物大分子，具有高灵敏度、高特异性、实时分析的特性，为核酸和疾病标记物检测的应用提供了新的平台，为单细胞、单分子临床检验提供了理论和技术基础。
②创新性建立了多重PCR和荧光多重PCR为主要检测技术的STR分型检测手段，成功运用法医DNA鉴定和临床分子诊断。
2.创新开展了多种疾病的遗传易感基因研究：筛选出了多种疾病相关的分子诊断标记物，为疾病的临床分子诊断提供了重要的科学依据。
①首次发现rs28683050位点可能是COPD发生发展的易感基因；②首次报道了TLR信号通路的miRNAs相关的SNPs与活动性肺结核的相关性；③首次在结核病研究领域对Wnt信号通路SNPs遗传多态性进行了系统性的研究。
3.国内率先成立了多平台分子诊断中心：①采用实时荧光定量PCR和DNA测序技术建立了感染性疾病检测平台，可进行乙肝、丙肝、艾滋及结核等十余种病原体检测；②采用实时荧光定量PCR及双环探针技术，开展了融合基因、肿瘤靶向药物EGFR基因及Kras基因突变检测；采用二代测序技术开展了肿瘤易感基因筛查及白血病相关基因突变筛查；③采用多重连接探针扩增和片段分析技术，建立了遗传性疾病检测平台，研发了试剂盒并申请发明专利，开展了多项遗传病检查；④采用荧光杂交测序方法建立了精准药物基因检测平台，开展了药物基因检测；⑤采用Luminex流式荧光杂交分型技术建立了移植配型检测平台，为肾脏等器官移植进行抗原和抗体检测。
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纳米流式检测仪应用手册
纳米颗粒的散射检测灵敏度达到前所未有的 24 nm 世界上首台纳米颗粒（<100 nm）多参数表征的流式表征设备 覆盖了传统流式细胞仪 200 nm 以下粒径检测的盲区 市场上唯一检测范围可以完全包容细胞外囊泡（30-200 nm）的流式检测仪
Your Research Revolutionized
纳米流式检测仪-纳米生物单颗粒综合表征平台
High Sensitivity Flow Cytometry for Nanoparticle Analysis
侧向散射灵敏度 侧向散射分辨率
荧光灵敏度 荧光分辨率
颗粒尺寸 样品采样速率
< 30 nm 40/50 nm FITC <10 MESF 42/133 AF532 7-500 nm 10,000 events/min
荧光灵敏度
（212 nm 荧光二氧化分辨率
（40, 50, 64, 78 and 90 nm 二氧化硅微球混合样品）
Unmatched Performance with Superior Sensitivity for Nanoparticles
目录
囊泡 ........................................................................................................................................................................................................... 2 1. 脂质体囊泡的单颗粒水平多参数定量分析 ......................................................................................................................... 2 2. 单颗粒水平对细胞外囊泡的多参数表征 ............................................................................................................................. 3
进行绝对定量分析。
ACS Appl. Mater. Interfaces, 2017, 9, 13913-13919.
2
2. 单颗粒水平对细胞外囊泡的多参数表征
细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）是一种由细胞释放到细胞外基质的膜性小囊泡，其粒径分布范围为 30 nm~1 μm， 它们通过膜上的蛋白质、脂类等信号分子，以及膜内包裹的内容物（神经递质、酶、激素和核酸等）在细胞之间的通讯和机 体调控中发挥着至关重要的作用。根据分泌途径的不同，EVs 主要分为 exosomes（外泌体）和 microvesicles（微囊泡）两 大类。Exosomes 经由细胞内多泡体（multivesicular body, MVB）与细胞膜融合而释放，大小一般为 30~120 nm，而 microvesicles (100~1000 nm)则是通过细胞膜包裹信号分子而直接释放。研究发现 EVs 广泛存在于人体的血液、乳汁、尿液 以及唾液等体液中，其种类和数量与机体的生理状态息息相关。细胞外囊泡有望成为新型的疾病诊断标志物、纳米药物载体、 以及治疗试剂和药物作用靶标，从而在疾病的诊断和治疗领域具有巨大的应用前景。
纳米材料 ................................................................................................................................................................................................. 20 1. 纳米金颗粒的粒径分辨和绝对定量分析 ........................................................................................................................... 20
仪器与试剂
纳米流式检测装置，选用波长为 532 nm 的激光器，检测通道分别为散射通道和 PE 荧光通道。
实验结果
图 1. 标准阿霉素脂质体的粒径和药物含量表征。
图 2. 包裹阿霉素的脂质体样品的多参数定量分析。
结果分析
1. 纳米流式检测装置的灵敏度高，可以同时测定粒径低至 30 nm 的阿霉素脂质体的散射光和荧光信号。 2. 以自行合成的阿霉素脂质体作为模型，用纳米流式检测装置首次对其颗粒粒径，药物包裹量，药物包封率以及颗粒浓度
纳米药物 ................................................................................................................................................................................................... 5 1. 临床抗肿瘤药物阿霉素脂质体的快速表征 ......................................................................................................................... 5 2. 临床 II 期核酸纳米药物的表征——用于基因沉默的携载 siRNA 的脂质纳米粒.............................................................6
细菌 ......................................................................................................................................................................................................... 11 1. 单个细菌自发荧光的检测与定量 ....................................................................................................................................... 11 2. 单细菌低拷贝蛋白的高通量测定 ....................................................................................................................................... 12 3. 基于β-内酰胺酶活性的耐药菌快速筛查 ............................................................................................................................ 13 4. 细菌感染及细菌耐药的临床诊断 ....................................................................................................................................... 14 5. 饮用水、茶饮中细菌总数的检测 ....................................................................................................................................... 15 6. 致病菌和总菌的绝对定量检测 ........................................................................................................................................... 16