亚硝酸盐的测定

中文名: 熔点： 别称： 化学式：
亚硝酸钠 270℃ 亚钠；亚硝酸钠 （食品级） NaNO2
英文名： 溶解度： 密度： 外观：
Sodium nitrite 82g/100ml(20℃) 2.2g/cm3(固) 白色或微带淡黄 色斜方晶系结晶 或粉末 密封阴凉干燥保 存 69.00g/mol
分子量： CAS登录号：
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化工01班 20136278 陈雁琳
1.1物理性质

白色至浅黄色粒状、棒状或粉末。有吸湿性。加热至320℃以上分解。在空气中慢慢 氧化为硝酸钠。遇弱酸分解放出棕色三氧化二氮气体。溶于1.5份冷水、0.6份沸水，微溶 于乙醇。水溶液呈碱性， pH 约9 。与有机物接触能燃烧和爆炸，并放出有毒和刺激性的 过氧化氮和氧化氮的气体。中等毒，半数致死量(大鼠，经口)180mg/kg。
方法2：超声提取法（已通过正交试验确定最佳 提取参数）：称取剪块样（精 确至0.01 g），加入80 mL提取液（72 mL去离子水，8 mL乙腈），50 ℃超声 4 min，过滤，离心，分光光度法测定含量。


方法3：微波提取法（已通过正交试验确定最佳提取参数）：称取剪块样品1 g （精确至0.01 g），加入50 mL蒸馏水（45 mL去离子水，5 mL乙腈），600 W提取4 min，过滤，离心，分光光度法测定含量。
3.3.2气相色谱法
原理：
气相色谱法的原理是在硫酸介质中，亚硝酸盐与环己基氨基磺酸钠 反应生成环己醇亚硝酸酯，环己醇亚硝酸酯在常温下成气态，非常适合 用气相色谱仪进行定量测定，从而得到亚硝酸盐的含量。张添佛等利用 气象色谱法建立了一种测定海水中硝酸盐和亚硝酸盐的方法。
3.3.3高效液相色谱法（HPLC）


亚硝酸钠标准曲线

火腿肠中亚硝酸钠提取方法比较
提取方法 方法 1 方法 2 方法 3 平均含量 /mg·kg-1 9.26 9.32 9.35
RSD /% 0.92 1.03 1.12

不同食物中亚硝酸钠含量（单位：mg/kg n=3 ）
食品名 称 火腿肠 麻辣三 丝 辐照荞 头 辐照生 姜 辐照凤 爪 辐照腊 肠 豇豆 纯牛奶 奶粉 腊肉 GB 方法提取 分光光 度法 10.360 2.680 0.190 1.630 0.070 2.670 1.160 0.12 0.73 2.88 RSD/% 1.86 2.14 2.63 2.13 12.21 2.62 2.28 5.43 2.35 2.04 方法 2 提取 HPLC 检测 9.15 2.22 0.15 1.32 0.07 2.46 0.92 0.098 0.64 2.56 RSD/% 1.43 1.96 1.76 2 4.29 1.47 2.88 4.54 2.07 1.68 方法 3 提取 HPLC 检测 9.15 2.23 0.16 1.32 0.07 2.5 0.94 0.101 0.62 2.54 RSD/% 1.47 1.96 1.65 1.31 3.78 1.44 2.13 5.02 2.38 1.89


E.火腿肠样品前处理的改进 比较采用3种不同方法对样品进行提取处理。
方法1：参考GB 5009.33-2010 分光光度法：称取1 g（精确至0.01 g）样品制 成匀浆，加入2.5 mL饱和 硼砂溶液，搅匀，以70 ℃左右的水约60 mL将试样 洗 入100 mL容量瓶中，沸水浴15 min后，冷却至室温。 加入1 mL亚铁氰化 钾溶液，摇匀，再加入1 mL乙酸锌 溶液，加水至刻度，摇匀，放置30 min， 过滤，分光 光度法测定含量。

F.HPLC条件的优化 硝酸根和亚硝酸根在紫外区（195 nm~225 nm） 都有比较强的吸收，硝酸根 的最大吸收波长为203 nm，亚硝酸根为210 nm，甲醇的最大吸收波长为210 nm，乙腈最大吸收波长为190 nm，因此检测波长设 置为210 nm。以乙腈和 水为流动相时，硝酸根与亚硝 酸根的色谱峰不能完全分离。以0.03 mol/L 的 KH2PO4-H3PO4缓冲液作为流动相可以使硝酸根与亚硝酸根得 到较好的分离， 分离度R=7.21，但亚硝酸根峰形有 拖尾现象。在流动相中加入0.1 mL三乙胺 （分析纯） 后，三乙胺在流动相中的浓度为0.01%，亚硝酸根峰 形的拖尾现象 有了明显改善。三乙胺与色谱柱固定相 中残留的硅醇基作用，从而抑制了亚硝 基离子与残留 硅醇基作用形成拖尾峰，有助于改善峰形，提高亚硝 酸钠峰形 的对称性。结果见图1、图2。

C.样品前处理
（1）参考国标5009.33-2010 分光光度法中样品 前处理方法[12]。
（2）样品直接剪块，加入10%乙腈去离子水溶 液超声提取，过滤，离心。
（3）样品直接剪块，加入10%乙腈去离子水溶 液微波提取，过滤，离心。

D.高效液相色谱测定条件 色谱柱：Acclaim120 硅胶基质反相色谱柱（5 μ m，4.6×150 mm） 柱温：30 ℃， 流动相： pH 3.0 的 0.03 mol/L 的 KH2PO4-H3PO4 缓冲液 + 乙腈（体积比 90∶10）， 检测波长210 nm； 流速：1 mL/min； 进样 体积：10 μ L。

具体操作 例如格里斯试剂比色法（盐酸萘乙二胺法） α -苯酚分光光度法 柱式浓缩分光光度法 褪色光度法 ······
3.3色谱法
3.3.1离子色谱法 原理：
离子色谱法的原理是利用纯水萃取食品中的硝酸盐、亚硝酸盐，经 过煮沸、冷冻、过滤后对其进样测定。本方法适用于菠菜原料、冷冻菠 菜、菠菜罐头、胡萝卜、罐头青豆等样品分析。 徐霞等根据离子色谱法建立了一种同时测定蔬菜中的亚硝酸盐和硝 酸盐的方法。

表1 火腿肠中亚硝酸钠提取方法比较
提取 方法 方法 1 方法 2 方法 3

平均含量 /mg·kg-1 9.45 9.64 9.75
RSD /% 1.04 0.99 0.94
由表1可以，火腿肠经过超声和微波提取4 min后 其亚硝酸钠含量达到了与国标 提取相同的效果。由于 超声波在提取溶媒中产生的“空化效应”和机械作 用， 不仅使有效成分呈游离状态并溶入提取溶媒中， 还可加速提取溶媒的分子运动， 使得提取溶媒和食品 中的亚硝酸钠快速接触[13]，提高提取效率。微波萃取 是 利用电磁场的作用使固体或半固体物质中的某些 成分与基体有效的分离，并能 保持分析对象的原本化 合物状态[14]。在提取液中加入10%的乙腈，能降低溶 液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引 力，导致溶解度的降低； 另外，乙腈与水的作用，能 破坏蛋白质的水化，可以起到沉淀分离蛋白的作用， 避免由于蛋白质的存在使得吸光度值偏高。

亚硝酸钠、硝酸钠混标的HPLC色谱图

加标样品色谱图

G.标准曲线及检出限 配制浓度为 0.4 μ g/mL ，1 μ g/mL ，2 μ g/mL ，4 μ g/mL ，8 μ g/mL，16 μ g/mL的亚硝酸钠标准溶液[15]，分别进样10 μ L进样，每个浓度梯度重复3次。 以峰面 积为纵坐标，以亚硝酸钠的浓度为横坐标制作标准曲 线（见图3）。以 仪器噪音的3倍，即仪器能辨认的最 小物质的信号时的溶液浓度为检出限 [16]， 计算出待测 液中亚硝酸钠的最低检测浓度为0.006 μ g/mL，换算到 实际食品 样品中方法检测限为0.05 mg/kg，远低于食 品添加剂使用标准中亚硝酸钠残 留量30 mg/kg。 将按照方法1.3中3种不同提取方法提取的火腿肠 试样液进行过滤，然后经10 000 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μ m滤膜过滤，按优化的色谱条件方法 测定。
68.995 76 32-00-0
存储方式： 摩尔质量：
1.2化学性质
属强氧化剂又有还原性。 在空气中会逐渐氧化，表面则变为硝酸钠，也能被氧化剂所氧化；遇弱酸分解放出棕 色二氧化氮气体；与有机物、还原剂接触能引起爆炸或燃烧，并放出有毒的刺激性的氧化 氮气体；遇强氧化剂也能被氧化，特别是铵盐，如与硝酸铵、过硫酸铵等在常温下，即能

3.1原子吸收光谱法
原子吸收光谱法又称原子吸收分光光度分析，是基于物质所产生的原子蒸气对特定谱 线（通常是特测元素的特征曲线）的吸收作用来进行定量分析的一种方法。
①
百度文库
预处理：在PH=3的酸性条件下，用高锰酸钾将食物中的亚硝酸盐转化为二氧化锰沉淀，用硫酸溶 解沉淀； 实验条件：波长279.5nm； 狭缝宽度0.2nm； 灯电流10mA； 火焰高度7nm； 燃气流速33.3mL/s。
互相作用产生高热，引起可燃物燃烧。
1.3危害
过量的亚硝酸钠会致癌。传统食品中也存在亚硝胺，例如腌肉和咸鱼干。亚硝酸盐被
吃到胃里后，在胃酸作用下与蛋白质分解产物二级胺反应生成亚硝胺。胃内还有一类细菌
叫硝酸还原菌，也能使亚硝酸盐与胺类结合成亚硝胺。胃酸缺乏时，此类细菌生长旺盛。 故不论胃酸多少均有利于亚硝胺的产生。亚硝胺具有强烈的致癌作用，主要引起食管癌、 胃癌、肝癌和大肠癌等。
3.4电化学分析法

原理：
电化学方法是利用物质及其溶液的电学和电化学性质进行分析的一种方法。一 般地，它是使待测成分的试样溶液构成一个化学电池，然后测得这类电池的某些 物理量，如两极间的电位差或电流强度、电量、电阻等来确定被测物质的量。在 测定亚硝酸盐的方法中，有应用伏安法和示波极谱法测定食品中亚硝酸盐含量的。 在电化学分析法中，以测量电解过程中电流-电压曲线（或称伏安曲线）为基础的 分析方法称为伏安分析法。极谱法属于伏安分析法的特例，它专指以滴汞电极作 为指示电极的伏安法。

皮肤接触：脱去被污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。 眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停 止，立即进行人工呼吸。就医。 食入：饮足量温水，催吐。就医。 亚硝酸钠



亚硝酸钠
呼吸系统防护：空气中浓度较高时，应该佩戴自吸过滤式防尘口罩。必要时，佩戴自给 式呼吸器。 眼睛防护：戴化学安全防护眼镜。 身体防护：穿胶布防毒衣。 手防护：戴橡胶手套。 其他防护：工作毕，淋浴更衣。保持良好的卫生习惯。
②
①
实验处理：用AA6800 原子吸收风光光度计测定锰的吸光度，通过锰的标准工作曲线方程，从而计 算出亚硝酸盐的含量。
3.2分光光度法

原理：
分光光度法的原理是利用溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸 收效应，且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有各自的吸收 光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被自动而减弱，光能量减弱的程 度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合比耳定律。所以，利用分光光度计可 以测定亚硝酸钠的含量。
A. 试剂
亚硝酸钠、硝酸钠、磷酸、磷酸二氢钾、三乙胺、亚铁氰化钾、乙酸锌、硼 酸钠、盐酸、对氨基苯 磺酸、盐酸萘乙二胺、实验用水为18.25 MΏ ·cm的高 纯 水。
B. 仪器 U3000 高效液相色谱仪：美国DIONEX 公司； UV-1700（E）230CE 分光 光度计：日本岛津；BSW224S-CW 电子天平：赛多利斯科学仪器（北 京）有限 公司；超纯水仪：重庆艾科浦；Centrifuge 5810R 冷冻型台式高速离心机：德 国eppendorf公司.