人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
白细胞分离技术汇总
外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液）1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。
（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）2> 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。
3> 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp 管中。
4> 3000r/min离心20 min，弃上清。
即得白细胞可以试试红细胞裂解液提供我的配方：氯化铵82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成1升所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清3.细节：a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操作，切不可混匀d.所有操作都应在无菌环境进行e.把离心管放入离心机是也应小心，不要太大幅度的摇幌离心管，当然离心后拿出来也要小心就这么多了吧，这个操作是不是很难的，比较基本祝您好运了！.参考方法：人外周血, 肝素抗凝(100U öm l) , 等量无血清培养液（或者PBS等缓冲液）稀释。
按1∶2 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 ×g 离心30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。
于无血清培养液, 400×g 离心10 m in, 洗涤2次。
用培养液重新悬浮细胞并计数我也是最近要做所以查了一下，仅供分享，呵呵！一外周血白细胞的分离1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液（（33.9%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：2.4体积比混合））液面上，1500r/min离心20 min。
白细胞分离技术汇总
外周血白细胞的分离：（细胞分离液有市售，有各种型号：白细胞、单核细胞淋巴细胞等分离液）1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液液面上，1500r/min离心20 min。
（或先将抗凝血离心，然后吸取中间白细胞层，再混以等体积pbs然后小心加于等体积细胞分离液液面上，离心同上）2> 吸取中间云雾状白细胞，加3－4mlPBS后3000 r/min离心10 min。
3> 弃上清，加1ml PBS洗涤沉淀后，将细胞悬液转移至1.5mLEp 管中。
4> 3000r/min离心20 min，弃上清。
即得白细胞可以试试红细胞裂解液提供我的配方：氯化铵82.9克；重碳酸钾10.0克；EDTA0.37克；用三蒸水配成1升所有的细胞培养都应该坚守无菌操作原则2.分层后的确有3层，准确说来是4层，最下面是红细胞，上面的一层不应该是稍微混浊的白色，应该也比较透明，这一层上面就是我们需要的薄细胞层，最上面是血清3.细节：a.淋巴细胞分离液要避光保存b.就您的试验看来，淋巴细胞分离液的问题可能是最主要的c.首先再离心管中加入淋巴细胞分离液，然后把标本缓慢加在淋巴细胞分离液表面上，一定要缓慢小心操作，切不可混匀d.所有操作都应在无菌环境进行e.把离心管放入离心机是也应小心，不要太大幅度的摇幌离心管，当然离心后拿出来也要小心就这么多了吧，这个操作是不是很难的，比较基本祝您好运了！.参考方法：人外周血, 肝素抗凝(100U öm l) , 等量无血清培养液（或者PBS等缓冲液）稀释。
按1∶2 的体积比缓置于比重1. 077 g/m l 的淋巴细胞分离液, 1000 ×g 离心30 m in, 收集培养液2分离液界面上的单个核细胞。
于无血清培养液, 400×g 离心10 m in, 洗涤2次。
用培养液重新悬浮细胞并计数我也是最近要做所以查了一下，仅供分享，呵呵！一外周血白细胞的分离1> 取3ml正常人的外周血（枸橼酸钠抗凝）与等体积pbs混匀后小心的加于6ml白细胞分离液（（33.9%泛影葡胺和9%Ficoll液按1：2.4体积比混合））液面上，1500r/min离心20 min。
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理
ficoll分离液分离外周血单个核细胞操作原理一、前言外周血单个核细胞是指没有细胞核的血细胞，如红细胞、血小板等。
分离外周血单个核细胞是许多实验室和临床诊断中常用的一项操作。
而ficoll分离液则是分离外周血单个核细胞时常用的一种试剂。
本文将详细介绍ficoll分离液的原理及其在分离外周血单个核细胞中的应用。
二、ficoll分离液1. 概述ficoll分离液是由Ficoll（Ficoll-400）和盐水（PBS或Hanks平衡盐溶液）组成的一种密度梯度试剂。
它主要用于体外培养、淋巴细胞和其他白细胞的分离。
2. 原理ficoll分离液利用了不同密度的细胞在密度梯度中沉降速度不同的原理。
在密度梯度中，密度大的物质沉降速度快，而密度小的物质沉降速度慢。
当样品加入到ficoll分离液中时，样品中含有不同密度的各种成分，如红细胞、白细胞、淋巴细胞等。
这些成分会在密度梯度中沉降，最终形成一个由不同密度的层次组成的梯度。
在ficoll分离液中，Ficoll-400的密度大于外周血单个核细胞，但小于红细胞和粒细胞。
当样品经过离心后，外周血单个核细胞会沉降到ficoll分离液中的某一层次中，并被分离出来。
而其他成分则会沉降到不同的层次中。
3. 优点ficoll分离液具有以下优点：（1）样品处理方便：只需要将样品加入到ficoll分离液中进行离心即可。
（2）操作简单：只需要进行一次离心即可将外周血单个核细胞从其他成分中分离出来。
（3）高效：能够快速、高效地将外周血单个核细胞分离出来。
三、操作原理1. 实验材料（1）ficoll分离液；（2）外周血样本；（3）PBS或Hanks平衡盐溶液；（4）15ml或50ml的锥形试管；（5）离心机。
2. 操作步骤（1）将外周血样本加入到15ml或50ml的锥形试管中；（2）加入等体积的PBS或Hanks平衡盐溶液，轻轻混合；（3）将ficoll分离液缓慢加入到试管中，使其与样品充分混合；（4）将试管放入离心机中，以800~1000g的速度离心30分钟；（5）离心后，可以看到样品被分成了不同层次。
外周血中PBMC分离
外周血中PBMC分离
原理
外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
实验步骤：
1.采血，稀释（外周血：稀释液=1：2）
2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2）
3.18℃，1500r/min，离心30min
4.轻轻吸取PBMC层移入另一试管中
5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。
分离全血中的PBMC注意事项：
1 每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞
2 Ficoll应适量，外周血应充分稀释，温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果
3 在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面
4 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。
2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。
3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。
4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。
5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。
6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。
7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。
8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。
9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。
10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。
二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。
2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。
3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。
4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。
三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。
3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。
4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。
5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。
6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。
7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。
8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。
四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。
3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。
4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。
总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。
正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。
外周血单个核细胞的分离
外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。
通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。
本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。
方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。
3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。
4.以 400g 的速度离心 40 分钟。
在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。
5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。
6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。
磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。
3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。
4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。
5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。
密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。
这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。
确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。
2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。
将离心管中的血浆小心吸除。
3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。
这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。
4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。
分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。
5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。
此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。
6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。
7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。
再吸去上清液，保留沉淀。
8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。
需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。
因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。
此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。
总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。
准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人外周血白细胞分离液使用说明
货号:P8670
规格：200ml/kit
保存：18℃-25℃避光保存，有效期两年。
启封后置4℃保存，有效期一周。
一、分离方法说明及图例
A．取1ml新鲜抗凝血，与全血及组织稀释液1:1混匀后小心加于1份本分离液之液面上；
B.以500g（约1800转/分）离心25分钟(半径15cm水平转子)。
此时离心管中由上至下细胞分四层。
第一层；为血浆层。
第二层；为环状乳白色的白细胞层。
第三层；为略带混浊的分离液层（富集一定量的白细胞）。
第四层；为红细胞层。
弃去第一层血浆层，收集第二层细胞、第三层分离液层和第四层红细胞层，放入含细胞洗涤液10ml的试管中，充分混匀后，以500g 约（1800转/分）离心30分钟。
沉淀经1次洗涤后用红细胞裂解液裂解红细胞，再经3次洗涤去除红细胞内溶物和碎片后取沉淀细胞即为所需白细胞。
注：提取率约为80%。
二、红细胞裂解液使用说明
红细胞裂解液用于从血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
不适用于禽类等有细胞核红细胞的裂解。
本裂解液经过无菌处理，分离的细胞可以用于后续的原代培养、
细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
使用说明：
A.对于组织细胞样品：
a.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
b.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。
c.400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
e.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
B.对于血液样品：
a.取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
b.加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
c.400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
d.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
e.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
f.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注：对于微量或少量的血液样品，可以在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。
对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
后续步骤相同。
三、注意事项
A．本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4℃保存避免微生物污染。
另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃以下易出现白色结晶，影响分离效果。
B．待分离的样本要求新鲜，避免冷冻和冷藏。
分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果最好，且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C．由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数，调节离心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。
D．最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
E．最优抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素。
应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。
四、产品性能指标
pH7.0-7.5
渗透压280-340mOsmol/kg
内毒素≤0.5EU/mL
无菌直接接种培养14天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物每50mL溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下，含25μm以上的不溶性微粒5粒以下。