药物分析芳酸类非甾体抗炎药物的分析
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《药物分析》杭太俊第8版 第6章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 2）红外分光光度法 • 阿司匹林IR特征吸
收峰
COOH OCOCH3
峰位
3300 ～ 3200
1760,1690
1610,1570, 1480,1460
1310,1230, 1180, 775
归属 νO-H (羧基) νC-O(羧酸酯和羧基) νC=C(苯环)
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 2）高效液相色谱法： • 方法：供试验品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰
的保留是将相同。 • 适用于：阿司匹林、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、布洛芬、
萘普生等药物。
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
药物名称 阿司匹林 双水杨酯
甲芬那酸
第三节 特殊杂质及检查方法
表6-3 典型非甾体抗炎药物的主要有关物质
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第三节 特殊杂质及检查方法 三、 二氟尼柳中有关物质的检查
(一) 合成工艺 多种苯或联苯类中间体及副产物
F
F
NH2 +
2,4-二氟苯胺,Ⅰ
偶联 Cu
F F
2,4-二氟联苯, Ⅱ
乙酰化 (CH3CO)2O,AlCl3
F
氧化
F
COCH3 H2O2
4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮, Ⅲ
遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀，如美洛昔康。
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
• 7、光谱法 • 1）紫外可见光光度法： • ①最大吸收波长法：如规定双氯芬酸钠水溶液在276nm有
最大吸收；吡罗昔康的水溶液在276nm波长处有最大吸收。
• ②最大与最小吸收波长法：如布洛芬0.4%的氢氧化钠溶液， 最大吸收：265nm和273nm的波长处；最小吸收： 245nm和 271nm的波长处。
第六章芳酸类非甾体抗炎药物分析
羟苯乙酯
OH
COOH
丙磺舒
SO2 N(C H2C H2C H3)2
6
（二）主要性质
➢ 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的 羧基 ，可用NaOH直接滴定测定其含量。
➢ 具有苯环和特征官能团,有UV和IR特征吸收。 ➢ 化学性质：苯甲酸（钠）的中性溶液与FeCl3
反应可生成赭色沉淀；丙磺舒受热可分解为 Na2SO3或SO2。
10
三、其他芳酸类药物
（一）典型药物
CH3
Cl
O C COOC2H5
氯贝丁酯
CH3
CH3 CHCH2
CH3
CH COOH 布洛芬
CH3
11
（二）主要性质
氯贝丁酯：油状液体，遇光不稳定；具有酯结构， 易水解。 布洛芬：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用NaOH滴定。 都有苯环和特征基团,具有UV和IR特征吸收光谱
14
▪芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱， 所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。
▪芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别； 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物 可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查 因水解而引入的特殊杂质。
15
▪取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测 定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基 的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含 量。 ▪UV ▪IR ▪色谱法—制剂分析
丙磺舒
C O O F e 3
米黄色↓
20
直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水 杨酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚
水杨酸
ChP（2000）
OH
COOH
丙磺舒
SO2 N(C H2C H2C H3)2
6
（二）主要性质
➢ 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的 羧基 ，可用NaOH直接滴定测定其含量。
➢ 具有苯环和特征官能团,有UV和IR特征吸收。 ➢ 化学性质：苯甲酸（钠）的中性溶液与FeCl3
反应可生成赭色沉淀；丙磺舒受热可分解为 Na2SO3或SO2。
10
三、其他芳酸类药物
（一）典型药物
CH3
Cl
O C COOC2H5
氯贝丁酯
CH3
CH3 CHCH2
CH3
CH COOH 布洛芬
CH3
11
（二）主要性质
氯贝丁酯：油状液体，遇光不稳定；具有酯结构， 易水解。 布洛芬：酸性较弱；可用中性乙醇溶解，用NaOH滴定。 都有苯环和特征基团,具有UV和IR特征吸收光谱
14
▪芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱， 所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。
▪芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别； 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物 可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查 因水解而引入的特殊杂质。
15
▪取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测 定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基 的药物可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含 量。 ▪UV ▪IR ▪色谱法—制剂分析
丙磺舒
C O O F e 3
米黄色↓
20
直接：水杨酸、对氨基水杨酸钠、双水杨酯、水 杨酸二乙胺、酚磺乙胺、对乙酰氨基酚
水杨酸
ChP（2000）
芳酸类非甾体抗炎药物的分析 PPT
① 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中与法所用的指 示剂而言 ② 优点:简便、快速 缺点:酯键水解干扰(不断搅拌、快速滴定) 酸性杂质干扰(如水杨酸) ③ 适用范围:不能用于含水杨酸过高或制剂分析,只能用于合格原料药的含量 测定
【阿司匹林】 ChP( 2010) 取本品约0、4g,周密称定,加中性乙醇(对酚酞指示 液显中性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化 钠滴定液(0、1mo1/L)滴定。每l ml的氢氧化钠滴 定液(0、1mo1/L)相当于18、02mg的C9H8O4。
例:阿司匹林
COOH
COONa
OCOCH3 + NaOH
OCOCH3
阿司匹林 ChP 取本品约0、4g,周密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中 性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用0、1mo1/L氢氧化钠滴定 液滴定。每l ml的氢氧化钠滴定液(0、1mo1/L)相当于18、 02mg的C9H8O4。
一、阿司匹林的特别杂质检查
1、游离水杨酸
生产工艺:
ONa
CO2。 加压，
ONa COONa H+
OH
COOH (CH3CO)2O
。
O OCOCH3 CH3
COOH
贮藏水解:
O
OCNOa C HO3 NCaH3
O2
COONHa HCHO2O+2
，
加压，
OOHNa CCOOOOHNa [HO+]
OH COOH [O]
HCl
HO
NHCOCH3
HO
对乙酰氨基酚鉴别(Ch、P 2010)
NaNO2
NH2.HCl
HO
N+ N.HC l
【阿司匹林】 ChP( 2010) 取本品约0、4g,周密称定,加中性乙醇(对酚酞指示 液显中性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化 钠滴定液(0、1mo1/L)滴定。每l ml的氢氧化钠滴 定液(0、1mo1/L)相当于18、02mg的C9H8O4。
例:阿司匹林
COOH
COONa
OCOCH3 + NaOH
OCOCH3
阿司匹林 ChP 取本品约0、4g,周密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中 性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用0、1mo1/L氢氧化钠滴定 液滴定。每l ml的氢氧化钠滴定液(0、1mo1/L)相当于18、 02mg的C9H8O4。
一、阿司匹林的特别杂质检查
1、游离水杨酸
生产工艺:
ONa
CO2。 加压，
ONa COONa H+
OH
COOH (CH3CO)2O
。
O OCOCH3 CH3
COOH
贮藏水解:
O
OCNOa C HO3 NCaH3
O2
COONHa HCHO2O+2
，
加压，
OOHNa CCOOOOHNa [HO+]
OH COOH [O]
HCl
HO
NHCOCH3
HO
对乙酰氨基酚鉴别(Ch、P 2010)
NaNO2
NH2.HCl
HO
N+ N.HC l
芳酸类非甾体抗炎药物的分析
Ka=2.0x107
Ka=1.3x106 强
Ka=1.0x103 Ka=22
注: 四种酸不能被均化到相同的强度水平
➢ 区分效应：能区分酸碱强弱的效应 ➢ 区分溶剂：能区分酸碱强弱的效应的溶剂
△※ 非水溶液滴定法
酸性溶剂
溶剂的选择 （P229）
碱性溶剂 两性溶剂 惰性溶剂
❖ 酸性溶剂：具有较强的给出质子能力的溶剂 ✓ 例如：甲酸，醋酸，丙酸
• 溶剂的酸碱性 • 溶剂的离解性 • 均化效应 • 区分效应
弱碱吡啶 Kb<10 -7，在水溶液中无法进行滴定
溶剂：冰乙酸 滴定剂：高氯酸的冰乙酸溶液
B + HAc
BH+ + Ac-
HClO4+HAc
H2Ac++ClO4-
滴定时：H2Ac+＋Ac-
2 HAc
实际总反应：
HClO4 + B
BH+ + ClO4-
CH2COONa
HO CH—COONa HO CH—COONa + 2H2O
芳酸类药物的分析
含量测定
第2步——水解和测定
操作： 中和后试液
氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml 定量, 过量
水浴加热15min 水解
室温 硫酸滴定液(0.05mol/L) 滴定
终点：溶液粉红色 无色
COOH OCOCH3 + NaOH
讨论
适用范围 酸根的影响 滴定剂的稳定性 指示方法 其他干扰
2.溴量法
原理： 0.1mol/LBr2标准液 3gKBrO3+15gKBr+H2O→1000ml KBrO3+5KBr+6HCl→3Br2+6KCl+3H2O
芳酸类非甾体抗炎药物
生成淡黄,红
棕至深棕色
醌型化合物
HO + OH O COOH COOH COOH O HO
O COOH
[O]
HO
COOH
[O]
OH
O HO O COOH
-
OH O
COOH
O
O
或 O+ COOH COOH
1. 游离水杨酸:
ChP 用水杨酸与 Fe3+ 生成紫堇色配离子的
原理, 用稀硫酸铁铵溶液显色法检查
一、阿司匹林与双水杨酯
(一) 阿司匹林与双水杨酯的合成
COOH ONa CO2 ONa H
+
COOH OH
COOH (CH3CO)2O OH COOH O HOOC OH O OH OCOCH3
CH3COOH
COOH
HOH
一、阿司匹林与双水杨酯
(二) 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质
1. 游离水杨酸: 酚羟基易被空气(氧)逐渐氧化
中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行, 强酸性 溶液中配位化合物分解
一、与三氯化铁反应
2. 酚羟基反应
NHCOCH3 NHCOCH3
3
+ FeCl3 O-
Fe + 3HCl
OH
3
对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色
二、缩合反应
O2N CH3 HO + O NO2 O NH-NH2 NO2 H2 SO4 -H2 O HO O CH3 N N H NO2
对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚, 游离芳 伯氨基与亚硝酸钠试液重氮化, 重氮盐再与碱 性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物
四、氧化反应
棕至深棕色
醌型化合物
HO + OH O COOH COOH COOH O HO
O COOH
[O]
HO
COOH
[O]
OH
O HO O COOH
-
OH O
COOH
O
O
或 O+ COOH COOH
1. 游离水杨酸:
ChP 用水杨酸与 Fe3+ 生成紫堇色配离子的
原理, 用稀硫酸铁铵溶液显色法检查
一、阿司匹林与双水杨酯
(一) 阿司匹林与双水杨酯的合成
COOH ONa CO2 ONa H
+
COOH OH
COOH (CH3CO)2O OH COOH O HOOC OH O OH OCOCH3
CH3COOH
COOH
HOH
一、阿司匹林与双水杨酯
(二) 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质
1. 游离水杨酸: 酚羟基易被空气(氧)逐渐氧化
中性或弱酸性(pH值4~6)条件下进行, 强酸性 溶液中配位化合物分解
一、与三氯化铁反应
2. 酚羟基反应
NHCOCH3 NHCOCH3
3
+ FeCl3 O-
Fe + 3HCl
OH
3
对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色
二、缩合反应
O2N CH3 HO + O NO2 O NH-NH2 NO2 H2 SO4 -H2 O HO O CH3 N N H NO2
对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚, 游离芳 伯氨基与亚硝酸钠试液重氮化, 重氮盐再与碱 性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物
四、氧化反应
药物分析芳酸类非甾体抗炎药物的分析
对照溶液的主斑点（或荧光强度）
39
优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不 需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成 几种限量的对照溶液；
缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度
差、直观性差。
40
2.有关物质B HPLC法 固定相：C18 流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸 检测波长：254nm 要求：杂质峰面积和小于对照液主 峰面积
α β OH
21
直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺
间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋 氨苯砜、贝诺酯
22
四、氧化反应 甲芬那酸+硫酸+重铬酸钾→深蓝色
→棕绿色 吲哚美辛+硫酸+重铬酸钾→紫色 吲哚美辛+盐酸+亚硝酸钠→绿色
→黄色
23
五、水解反应
阿司匹林 Na2CO3 水杨酸钠 醋酸钠 硫酸水杨酸（白色 ） 醋酸臭气
水杨酸苯酯
OCOCH3
COOH
OCOCH3
+
COO
乙酰水杨酸 苯酯
31
检查方法——HPLC法
固定相：ODS 流动相：A 乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水
B 乙腈 对照液：0.5%供试品溶液 要求：供试品溶液杂质峰面积和不得大 于对照液峰面积
32
（三）双水杨酸酯中游离水杨酸的检查 水杨酸+Fe3+→显色
5
水杨酸类
COOH
O R
R'
6
典型药物：
7
邻氨基苯甲酸类
COOH H N R
COOH H N
CH3 CH3
典型药物：甲芬那酸
8
邻氨基苯乙酸类
O R'
39
优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不 需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成 几种限量的对照溶液；
缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度
差、直观性差。
40
2.有关物质B HPLC法 固定相：C18 流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸 检测波长：254nm 要求：杂质峰面积和小于对照液主 峰面积
α β OH
21
直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺
间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋 氨苯砜、贝诺酯
22
四、氧化反应 甲芬那酸+硫酸+重铬酸钾→深蓝色
→棕绿色 吲哚美辛+硫酸+重铬酸钾→紫色 吲哚美辛+盐酸+亚硝酸钠→绿色
→黄色
23
五、水解反应
阿司匹林 Na2CO3 水杨酸钠 醋酸钠 硫酸水杨酸（白色 ） 醋酸臭气
水杨酸苯酯
OCOCH3
COOH
OCOCH3
+
COO
乙酰水杨酸 苯酯
31
检查方法——HPLC法
固定相：ODS 流动相：A 乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水
B 乙腈 对照液：0.5%供试品溶液 要求：供试品溶液杂质峰面积和不得大 于对照液峰面积
32
（三）双水杨酸酯中游离水杨酸的检查 水杨酸+Fe3+→显色
5
水杨酸类
COOH
O R
R'
6
典型药物：
7
邻氨基苯甲酸类
COOH H N R
COOH H N
CH3 CH3
典型药物：甲芬那酸
8
邻氨基苯乙酸类
O R'
芳酸类非甾体抗炎药物的分析
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
本类药物多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧 酸结构。根据芳基和羧酸的取代位置及芳基上的 取代基的不同，可分为水杨酸类、邻氨基苯甲酸、 邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪 甲酸等六类。
结构特点：游离羧基和苯环、酯基等。
第一节、典型芳酸类非甾体抗炎药物结构与性质
ChP2015收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制 剂大多采用离子抑制-反相HPLC法测定，外标法计 算含量。
一、典型药物与结构特点
COOH OH
COOH OCOCH3
Cl H N
O ONa
水杨酸
布洛芬
阿司匹林
M eO
Cl
Cl
双氯芬酸钠
OH
O CH 3 N O
NHCOCH3
吲哚美辛
OH
对乙酰氨基酚
二、主要性质 1、酸性：游离羧基pka=3～6，芳酸酸性强；脂
肪酸较弱 2、水解性：酯基、酰胺基 3、吸收光谱特性：含共轭体系 4、基团或元素特性
（二）、紫外-可见紫外分光光度法 1.直接紫外-可见紫外分光光度法 部分本类药物制剂采用此法。溶解过滤后对照法测
定。 2.柱分配－紫外分光光度法
适用：片剂、胶囊、栓剂 特点：能分离杂质，同时测定ASA、SA 固定相：碳酸氢钠；洗脱液：氯仿
λmax=280nm测定吸收度，计算含量
3、高效液相色谱法
NH-NH2
NO2
+
NO2
三、重氮化-偶合反应 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚 硝酸钠液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚 偶合产生橙红色沉淀。
OH
Ar-NH2 NaNO2+HCl Ar-N2+Cl-
本类药物多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧 酸结构。根据芳基和羧酸的取代位置及芳基上的 取代基的不同，可分为水杨酸类、邻氨基苯甲酸、 邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪 甲酸等六类。
结构特点：游离羧基和苯环、酯基等。
第一节、典型芳酸类非甾体抗炎药物结构与性质
ChP2015收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制 剂大多采用离子抑制-反相HPLC法测定，外标法计 算含量。
一、典型药物与结构特点
COOH OH
COOH OCOCH3
Cl H N
O ONa
水杨酸
布洛芬
阿司匹林
M eO
Cl
Cl
双氯芬酸钠
OH
O CH 3 N O
NHCOCH3
吲哚美辛
OH
对乙酰氨基酚
二、主要性质 1、酸性：游离羧基pka=3～6，芳酸酸性强；脂
肪酸较弱 2、水解性：酯基、酰胺基 3、吸收光谱特性：含共轭体系 4、基团或元素特性
（二）、紫外-可见紫外分光光度法 1.直接紫外-可见紫外分光光度法 部分本类药物制剂采用此法。溶解过滤后对照法测
定。 2.柱分配－紫外分光光度法
适用：片剂、胶囊、栓剂 特点：能分离杂质，同时测定ASA、SA 固定相：碳酸氢钠；洗脱液：氯仿
λmax=280nm测定吸收度，计算含量
3、高效液相色谱法
NH-NH2
NO2
+
NO2
三、重氮化-偶合反应 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚 硝酸钠液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚 偶合产生橙红色沉淀。
OH
Ar-NH2 NaNO2+HCl Ar-N2+Cl-
第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
Ar-N=N-Ar
对乙酰氨基酚 贝诺酯
重氮盐 偶合 红色
贝诺酯
水解 重氮化
偶合
四、氧化反应
甲芬那酸 H2SO4
黄色(绿色荧光)(JP13)
K2Cr2O7 深蓝色→棕绿色
吲哚美辛重铬酸钾 硫酸紫色 亚硝酸钠 盐酸绿色 黄色
五、水解反应
－－酯结构水解
1.阿司匹林
2.双水杨酯
双水杨酯 NaOH
煮沸
此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时 成为钠盐。
水解和测定:
在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化 钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热 15min并时时振摇，迅速放冷置室温，用硫 酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，结果用空白试 验校正。每 1ml氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于18.02 mg的C9H8O4 。
讨论：（1）为何做空白试验？如何操作？
氢氧化钠在加热时易吸收CO2，生成碳酸盐。 使测定结果偏高。 不加入样品，其余操作步骤和加样一致。
（2）滴定度如何计算？
阿司匹林：氢氧化钠=1:2
T=0.5×180.16×1/2=45.04(mg/ml)
含量% （V0 V） F T× 100% W
F：硫酸滴定液的校正因子
美洛昔康
【含量测定】取本品约0.4g，精密称定，精 密加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)25ml，微 温溶解，放冷，加中性乙醇（对溴麝香草 酚蓝指示液显中性）100ml ，加溴麝香草酚 蓝指示液10滴，用盐酸滴定液（0.lmol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 每lml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)相当于 35.14mg的 C14H13N3O4S2。
3. 水解后剩余滴定法－－阿司匹林
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相同药物,不同浓度, 相互比较,主点限量
三、二氟尼柳中有关物质的检查
所谓物质A和物质B的检查是 采用自身对照法进行检查的
TLC
HPLC
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第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析 萘普生的有关物质检查 色谱条件
杂质限量
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第三节: 特殊杂质及其检查法 二、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺
F
OH
OH
(二氟尼柳)
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第一节: 结构与性质
酸性
O OH
光谱特性
H N
R
邻氨基苯甲酸类
酸性
Mefenamic Acid
O OH
H
CH3
N
CH3
甲芬那酸
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酸性
O R'
O
光谱特性
H N
R
邻氨基苯乙酸类
第一节: 结构与性质
酸性
基团特性
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H2 (SCO4H,37C0~O7)25OC
双水杨酯
O O C CH3
COOH
ASA
OH
副产物 Company Logo
第三节: 特殊杂质及其检查法
COOH [O]
OH
淡黄、红棕、深棕色
O
HO
COOH
[O]
OH O
COOH
HPLC法
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第三节: 特殊杂质及其检查法
其它有关物质
测定：280nm 空白：CHCl3
①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上 用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质
②冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被 CHCl3洗脱
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第四节 含量测定
例子
对照品浓度
供试品吸光度
对照品吸光度
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第四节 含量测定
五、HPLC
匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中
性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液
(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置
水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4 液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml
HPLC
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第四节 含量测定
一、酸碱滴定法(Acid-base titration method) 苯甲酸 pKa 4.20 水杨酸 pKa 2.98 酸性较强
C OH
O ✓羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加； OH ✓分子内氢键，更增加了其极性
直接滴定
Aspirin、丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸(Ch.P等)均 采用本法
产生芳伯 胺
芳伯胺重氮化
HO
N2Cl +
偶合反应
OH + NaOH
NN
OH
OH
红色偶氮化合物 Company Logo
第二节 鉴 别
重氮化-偶合反应
OCOCH3 COO
贝诺酯
NHCOCH3
HO
+3H2O HCl
+
NH2 HCl
OH COOH
HO
NaNO2,2HCl
OH
N2+Cl-
NaOH
OH
NN
OH
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烯醇式结 构:酸性
第四节 含量测定
为什么氢氧 化钠能溶解
之？
本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几 乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使 用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后， 再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。
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第四节 含量测定
2.水解后剩余滴定法(Residual titration after hydrolysis)
片剂 规格
滴定 度
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第四节 含量测定
优点 缺点
直接滴定 水解后剩余滴定
法
法
两步滴定法
操作简便
水杨酸干扰少
结果准确，避免游 离SA及片剂中稳定
游离SA偏高 时结果偏高
不能完全排出干扰
二、非水溶液滴定法
吡罗昔康
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第四节 含量测定
四、UV
1.直接UV法
2.离子交换-UV法 氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚 等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝 丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸 性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采 用UV法测定。
对照 品浓
度
供试 品浓
度
对照 品浓
度
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水解
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第二节: 鉴别试验
❖ 依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方
一、法与三氯化铁反应显色
水杨醛反 应
阿司匹林：紫堇色 双水杨酯：紫色
二氟尼柳：深紫色 均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色
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❖ 对乙酰胺基酚与三氯化铁 显蓝紫色
第二节: 鉴别试验
酚羟基反 应
主讲: 秦大伟
药物分析
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
❖ 非甾体抗炎药（Nosteroidal Antiinflammatory Drugs，NSAIDs）是 一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基 本结构。
❖ 本章主要讲芳酸类NSAIDs，同时讲一下尼美利 舒和对乙酰氨基酚。
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(CH3CO)2O
OH
+
OH COOH
OCOCH3
醋酸苯酯
OH COO
HPLC法
水杨酸苯酯
OCOCH3 COOH
水杨酸 苯酯
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第三节: 特殊杂质及其检查法 二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的检查
GC法
甲芬那酸
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第三节: 特殊杂质及其检查法
橙红色
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第二节 鉴 别
(三)氧化反应
甲芬那酸＋H2SO4
(O) K2Cr2O7
深蓝色
随即变为棕绿色
△
(四)水解反应
COOH
OCOCH3 Na2CO3
阿司匹林
黄色并产生绿色荧光
COONa
OH H2SO4
COOH OH
+
CH3COONa +CO2
H2SO4
白色水杨酸
CH3COOH
显玫瑰红色
显淡紫色
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二、缩合反应显色
二苯甲酮结构
第二节: 鉴别试验
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第二节: 鉴别试验
❖ 三、重氮化-偶合反应 ❖ 对乙酰氨基酚具有伯氨基，在酸性条件下反应可生
成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后 再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。水解反应
第二节 鉴 别
N-H O-H
N-H Ph:C=C 芳胺 酚
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❖ 八、色谱法
供试品保留时间
第二节: 鉴别试验
对照品保留时间
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第三节: 特殊杂质及其检查法 一、阿司匹林和双水杨酯
ONa
CO2 加压，
生产工艺
ONa COONa H+
水杨酸
OH COOH
。
-CO2
COOH
COONa
OCOCH3
OH
2NaOH
CH3COONa H2O
2NaOH H2SO4
Na2SO4 2H2O
USP32-NF27
取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓 缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L) 滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的 NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4
酸性
CH3
HO
R'
O R
芳基丙酸类
第一节: 结构与性质
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光谱特性
第一节: 结构与性质
酸性
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第一节: 结构与性质
光谱特性
水解
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OO S
HN CH3 O
光谱特性
NO2 尼美利舒 Nimesulide
第一节: 结构与性质
其它非甾体类抗炎药
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第四节 含量测定
1.直接滴定法
COOH OCOCH3
NaOH
中性乙醇 20℃以下
COONa H2O
OCOCH3
乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶
液中滴定过程易水解
中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，
可消除滴定误差
➢ pKa 3~6 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 ➢ pKa 6~9 的药物要用非水溶液滴定法 ➢若SA不合格，不宜采用本法
的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4
COONa
COONa
NaOH OCOCH3
NaAc H2O OH
2NaOH H2SO4
Na2SO4 2H2O
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第四节 含量测定
空白 消耗
样测 消耗
校正 因数
标示量%=
(V0-V) ×F ×T ×W ×100% W ×标示量
三、二氟尼柳中有关物质的检查
所谓物质A和物质B的检查是 采用自身对照法进行检查的
TLC
HPLC
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第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析 萘普生的有关物质检查 色谱条件
杂质限量
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第三节: 特殊杂质及其检查法 二、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺
F
OH
OH
(二氟尼柳)
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第一节: 结构与性质
酸性
O OH
光谱特性
H N
R
邻氨基苯甲酸类
酸性
Mefenamic Acid
O OH
H
CH3
N
CH3
甲芬那酸
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酸性
O R'
O
光谱特性
H N
R
邻氨基苯乙酸类
第一节: 结构与性质
酸性
基团特性
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H2 (SCO4H,37C0~O7)25OC
双水杨酯
O O C CH3
COOH
ASA
OH
副产物 Company Logo
第三节: 特殊杂质及其检查法
COOH [O]
OH
淡黄、红棕、深棕色
O
HO
COOH
[O]
OH O
COOH
HPLC法
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第三节: 特殊杂质及其检查法
其它有关物质
测定：280nm 空白：CHCl3
①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上 用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质
②冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被 CHCl3洗脱
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第四节 含量测定
例子
对照品浓度
供试品吸光度
对照品吸光度
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第四节 含量测定
五、HPLC
匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中
性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液
(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置
水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4 液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml
HPLC
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第四节 含量测定
一、酸碱滴定法(Acid-base titration method) 苯甲酸 pKa 4.20 水杨酸 pKa 2.98 酸性较强
C OH
O ✓羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加； OH ✓分子内氢键，更增加了其极性
直接滴定
Aspirin、丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸(Ch.P等)均 采用本法
产生芳伯 胺
芳伯胺重氮化
HO
N2Cl +
偶合反应
OH + NaOH
NN
OH
OH
红色偶氮化合物 Company Logo
第二节 鉴 别
重氮化-偶合反应
OCOCH3 COO
贝诺酯
NHCOCH3
HO
+3H2O HCl
+
NH2 HCl
OH COOH
HO
NaNO2,2HCl
OH
N2+Cl-
NaOH
OH
NN
OH
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烯醇式结 构:酸性
第四节 含量测定
为什么氢氧 化钠能溶解
之？
本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几 乎不溶，在丙酮中微溶。所以CHP使 用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后， 再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。
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第四节 含量测定
2.水解后剩余滴定法(Residual titration after hydrolysis)
片剂 规格
滴定 度
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第四节 含量测定
优点 缺点
直接滴定 水解后剩余滴定
法
法
两步滴定法
操作简便
水杨酸干扰少
结果准确，避免游 离SA及片剂中稳定
游离SA偏高 时结果偏高
不能完全排出干扰
二、非水溶液滴定法
吡罗昔康
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第四节 含量测定
四、UV
1.直接UV法
2.离子交换-UV法 氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚 等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝 丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸 性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采 用UV法测定。
对照 品浓
度
供试 品浓
度
对照 品浓
度
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水解
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第二节: 鉴别试验
❖ 依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方
一、法与三氯化铁反应显色
水杨醛反 应
阿司匹林：紫堇色 双水杨酯：紫色
二氟尼柳：深紫色 均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色
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❖ 对乙酰胺基酚与三氯化铁 显蓝紫色
第二节: 鉴别试验
酚羟基反 应
主讲: 秦大伟
药物分析
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
❖ 非甾体抗炎药（Nosteroidal Antiinflammatory Drugs，NSAIDs）是 一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基 本结构。
❖ 本章主要讲芳酸类NSAIDs，同时讲一下尼美利 舒和对乙酰氨基酚。
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(CH3CO)2O
OH
+
OH COOH
OCOCH3
醋酸苯酯
OH COO
HPLC法
水杨酸苯酯
OCOCH3 COOH
水杨酸 苯酯
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第三节: 特殊杂质及其检查法 二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的检查
GC法
甲芬那酸
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第三节: 特殊杂质及其检查法
橙红色
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第二节 鉴 别
(三)氧化反应
甲芬那酸＋H2SO4
(O) K2Cr2O7
深蓝色
随即变为棕绿色
△
(四)水解反应
COOH
OCOCH3 Na2CO3
阿司匹林
黄色并产生绿色荧光
COONa
OH H2SO4
COOH OH
+
CH3COONa +CO2
H2SO4
白色水杨酸
CH3COOH
显玫瑰红色
显淡紫色
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二、缩合反应显色
二苯甲酮结构
第二节: 鉴别试验
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第二节: 鉴别试验
❖ 三、重氮化-偶合反应 ❖ 对乙酰氨基酚具有伯氨基，在酸性条件下反应可生
成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后 再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。水解反应
第二节 鉴 别
N-H O-H
N-H Ph:C=C 芳胺 酚
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❖ 八、色谱法
供试品保留时间
第二节: 鉴别试验
对照品保留时间
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第三节: 特殊杂质及其检查法 一、阿司匹林和双水杨酯
ONa
CO2 加压，
生产工艺
ONa COONa H+
水杨酸
OH COOH
。
-CO2
COOH
COONa
OCOCH3
OH
2NaOH
CH3COONa H2O
2NaOH H2SO4
Na2SO4 2H2O
USP32-NF27
取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓 缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L) 滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的 NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4
酸性
CH3
HO
R'
O R
芳基丙酸类
第一节: 结构与性质
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光谱特性
第一节: 结构与性质
酸性
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第一节: 结构与性质
光谱特性
水解
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OO S
HN CH3 O
光谱特性
NO2 尼美利舒 Nimesulide
第一节: 结构与性质
其它非甾体类抗炎药
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第四节 含量测定
1.直接滴定法
COOH OCOCH3
NaOH
中性乙醇 20℃以下
COONa H2O
OCOCH3
乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶
液中滴定过程易水解
中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，
可消除滴定误差
➢ pKa 3~6 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 ➢ pKa 6~9 的药物要用非水溶液滴定法 ➢若SA不合格，不宜采用本法
的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4
COONa
COONa
NaOH OCOCH3
NaAc H2O OH
2NaOH H2SO4
Na2SO4 2H2O
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第四节 含量测定
空白 消耗
样测 消耗
校正 因数
标示量%=
(V0-V) ×F ×T ×W ×100% W ×标示量