第四章抗体制药123节解析
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第四章抗体制药123节解析
为使杂交瘤细胞稳定，免疫的动 物和骨髓瘤细胞供体是同一品系动 物。
常用的骨髓瘤细胞系多来自 BALB/c小鼠和 LOU大鼠，因此免 疫动物也采用相应的品系，最常用 的也是BALB/c小鼠。
第四章抗体制药123节解析
免疫的方法采用体内免疫法和体外 免疫法。
体内免疫法适用于免疫原性强、抗 原量较多时应用，一般用8～12周龄雌 性鼠。
浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病 人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin， Ig）。Ig是化学结构的概念，而抗体是 生物学功能的概念。所有的抗体均是Ig， 但并非所有Ig分子都具有抗体活性。
第四章抗体制药123节解析
多克隆抗体与单克隆抗体 多克隆抗体：病原微生物含有多
第四章抗体制药123节解析
细胞融合的骨髓瘤细胞应具备的条件: 应具有融合率高，自身不分泌抗体，所
产生的杂交瘤细胞分泌抗体能力强且长 期稳定。 PEG的要求： PEG相对分子量4000，浓度为50%， 二甲基亚砜（DMSO）增加融合率。
第四章抗体制药123节解析
第二节 单克隆抗体
是将抗体产生的细胞与具有无限增殖能力 的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆 化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产 生的抗体。
单克隆抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一 的B淋巴细胞克隆产生的；它的结构和特异性完全相同 的高纯度抗体。
第四章抗体制药123节解析
第四章 抗体制药
第四章抗体制药123节解析
第一节 概述
1890年Behring和北里柴三郎发现白 喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体 制药之先河。 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分 为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明 抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 γ 球蛋白制剂是紧急预防甲型肝炎等传染 病的有效药物。
一次抗原，目的是最大限度刺激B细胞 分裂为浆细胞，合成大量的抗体。
第四章抗体制药123节解析
有人主张采用脾内免疫法。 脾内免疫法即在麻醉下直接把 0.1～0.2mL抗原注入脾脏进 行免疫。细胞抗原需105个，可 溶性抗原需10µg，节省抗原量。
第四章抗体制药123节解析
体外免疫法用于不能采用体 内免疫的情况下，如制备人源性 单克隆抗体；免疫源性极弱，易 引起免疫抑制。 优点：需抗原量少（几个µg）， 免疫期短（４～５d），干扰因素 少。
一、抗原与动物免疫
制备特定抗原的单克隆抗体， 首先要制备用于免疫的适当抗原，再 用抗原进行动物免疫。
第四章抗体制药123节解析
有的抗原可以用化学合成：地高辛。 但在多数情况下抗原物质只能得到部分 纯化，如部分纯化的干扰素。在经过克 隆化选出最适当的单克隆抗体。在制备 恶性肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体时， 情况更为复杂，需要整个肿瘤细胞作为 免疫原，经过筛选、克隆化制备出仅存 于肿瘤细胞而不存在于正常细胞上的表 面标志分子的单克隆抗体。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体用于临床治疗，如针对于T 淋巴细胞共有的分化抗原CD3（Cluster of differentiation,CD3）的单克隆抗体作为因 对器官移植免疫排斥有抑制作用，用作免 疫抑制剂已经上市。
以单克隆抗体作为药物的载体对肿瘤 进行定向治疗。
第四章抗体制药123节解析
种抗原决定簇的抗原物质，因此 产生的抗体制剂也是多种抗体的 混合物，故称多克隆抗体。 病原诊断时易出现假阳性。
第四章抗体制药123节解析
1975年Kǒhler和Milstein首先 利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出 单克隆抗体（monoclonal antibody， McAb）。
单克隆抗体具有高度特异性、 均一性、来源稳定、可大量生产等 特点，为抗体制备和应用提供了全 新的手段，还促进了基础和临床医 学的发展。
第四章抗体制药123节解析
体外免疫法基本方法：
用4～8周龄BALB/c小鼠的脾 脏制成单个细胞悬液，再加入适 当抗原使其浓度达0.5～5µg/mL, 在5% CO2、37℃下培养4～5d,再 分离脾细胞,与骨髓瘤细胞进行杂 交。
第四章抗体制药123节解析
二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养
细胞融合的基本方法： 脾细胞（1×10８） 骨髓瘤细胞（2×10７）混合 聚乙二醇（PEG）诱导下融合，时间＜ 2min，然后用培养液将融合液缓慢稀 释。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体定义
是将抗体产生的细胞与具有无限增殖 能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有 限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成 为纯一的单克隆细胞系而产生的抗 体。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体的应用
单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上 主要用于疾病的诊断和治疗。
单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗 原，辅助临床诊断。用放射性核素标记 单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位 诊断。
颗粒性抗原（如细菌、细胞抗原） 的免疫原性强，可不加佐剂，直接注入 腹腔10７个细胞进行初次免疫，间隔 1～3周，再追加免疫1～2次。
第四章抗体制药123节解析
可溶性抗原按每只小鼠10～100µg 抗原与福氏完全佐剂等量混合后注 入腹腔内，进行初次免疫，间隔 2～4周，再用不加佐剂原抗原追加免疫
1～2次。 一般在采集脾细胞前3日由静脉注射最后
从1984年报道人—鼠嵌合抗体以来，已制备 出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识 别单位等诸多类型，基本上消除了鼠源性单 克隆抗体的免疫原性，相对分子质量只有完 整抗体分子的1／80—1／3，原来鼠源性单 克隆抗体的诸多生物学活性已消失，如激活 补体、促进吞噬功能(免疫调理)、抗体依赖细 胞介导的细胞毒副作用等，只保留同抗原特 异性结合的活性，即仅应用其导向作用，制 备导向药物用于肿瘤治疗。
第四章抗体制药123节解析
抗体（Antibodபைடு நூலகம்）是指能与 相应抗原特异性结合具有免疫 功能的球蛋白。
抗体的产生：机体免疫系统 受抗原刺激后，B淋巴细胞被活 化、增殖和分化为浆细胞，由 浆细胞合成和分泌的球蛋白。
第四章抗体制药123节解析
免疫球蛋白与抗体的关系 20世纪60年代初期，发现多发性骨髓瘤是
为使杂交瘤细胞稳定，免疫的动 物和骨髓瘤细胞供体是同一品系动 物。
常用的骨髓瘤细胞系多来自 BALB/c小鼠和 LOU大鼠，因此免 疫动物也采用相应的品系，最常用 的也是BALB/c小鼠。
第四章抗体制药123节解析
免疫的方法采用体内免疫法和体外 免疫法。
体内免疫法适用于免疫原性强、抗 原量较多时应用，一般用8～12周龄雌 性鼠。
浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病 人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin， Ig）。Ig是化学结构的概念，而抗体是 生物学功能的概念。所有的抗体均是Ig， 但并非所有Ig分子都具有抗体活性。
第四章抗体制药123节解析
多克隆抗体与单克隆抗体 多克隆抗体：病原微生物含有多
第四章抗体制药123节解析
细胞融合的骨髓瘤细胞应具备的条件: 应具有融合率高，自身不分泌抗体，所
产生的杂交瘤细胞分泌抗体能力强且长 期稳定。 PEG的要求： PEG相对分子量4000，浓度为50%， 二甲基亚砜（DMSO）增加融合率。
第四章抗体制药123节解析
第二节 单克隆抗体
是将抗体产生的细胞与具有无限增殖能力 的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆 化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产 生的抗体。
单克隆抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一 的B淋巴细胞克隆产生的；它的结构和特异性完全相同 的高纯度抗体。
第四章抗体制药123节解析
第四章 抗体制药
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第一节 概述
1890年Behring和北里柴三郎发现白 喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体 制药之先河。 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分 为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明 抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 γ 球蛋白制剂是紧急预防甲型肝炎等传染 病的有效药物。
一次抗原，目的是最大限度刺激B细胞 分裂为浆细胞，合成大量的抗体。
第四章抗体制药123节解析
有人主张采用脾内免疫法。 脾内免疫法即在麻醉下直接把 0.1～0.2mL抗原注入脾脏进 行免疫。细胞抗原需105个，可 溶性抗原需10µg，节省抗原量。
第四章抗体制药123节解析
体外免疫法用于不能采用体 内免疫的情况下，如制备人源性 单克隆抗体；免疫源性极弱，易 引起免疫抑制。 优点：需抗原量少（几个µg）， 免疫期短（４～５d），干扰因素 少。
一、抗原与动物免疫
制备特定抗原的单克隆抗体， 首先要制备用于免疫的适当抗原，再 用抗原进行动物免疫。
第四章抗体制药123节解析
有的抗原可以用化学合成：地高辛。 但在多数情况下抗原物质只能得到部分 纯化，如部分纯化的干扰素。在经过克 隆化选出最适当的单克隆抗体。在制备 恶性肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体时， 情况更为复杂，需要整个肿瘤细胞作为 免疫原，经过筛选、克隆化制备出仅存 于肿瘤细胞而不存在于正常细胞上的表 面标志分子的单克隆抗体。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体用于临床治疗，如针对于T 淋巴细胞共有的分化抗原CD3（Cluster of differentiation,CD3）的单克隆抗体作为因 对器官移植免疫排斥有抑制作用，用作免 疫抑制剂已经上市。
以单克隆抗体作为药物的载体对肿瘤 进行定向治疗。
第四章抗体制药123节解析
种抗原决定簇的抗原物质，因此 产生的抗体制剂也是多种抗体的 混合物，故称多克隆抗体。 病原诊断时易出现假阳性。
第四章抗体制药123节解析
1975年Kǒhler和Milstein首先 利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出 单克隆抗体（monoclonal antibody， McAb）。
单克隆抗体具有高度特异性、 均一性、来源稳定、可大量生产等 特点，为抗体制备和应用提供了全 新的手段，还促进了基础和临床医 学的发展。
第四章抗体制药123节解析
体外免疫法基本方法：
用4～8周龄BALB/c小鼠的脾 脏制成单个细胞悬液，再加入适 当抗原使其浓度达0.5～5µg/mL, 在5% CO2、37℃下培养4～5d,再 分离脾细胞,与骨髓瘤细胞进行杂 交。
第四章抗体制药123节解析
二、细胞融合与杂交瘤细胞的 选择性培养
细胞融合的基本方法： 脾细胞（1×10８） 骨髓瘤细胞（2×10７）混合 聚乙二醇（PEG）诱导下融合，时间＜ 2min，然后用培养液将融合液缓慢稀 释。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体定义
是将抗体产生的细胞与具有无限增殖 能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有 限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成 为纯一的单克隆细胞系而产生的抗 体。
第四章抗体制药123节解析
单克隆抗体的应用
单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上 主要用于疾病的诊断和治疗。
单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗 原，辅助临床诊断。用放射性核素标记 单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位 诊断。
颗粒性抗原（如细菌、细胞抗原） 的免疫原性强，可不加佐剂，直接注入 腹腔10７个细胞进行初次免疫，间隔 1～3周，再追加免疫1～2次。
第四章抗体制药123节解析
可溶性抗原按每只小鼠10～100µg 抗原与福氏完全佐剂等量混合后注 入腹腔内，进行初次免疫，间隔 2～4周，再用不加佐剂原抗原追加免疫
1～2次。 一般在采集脾细胞前3日由静脉注射最后
从1984年报道人—鼠嵌合抗体以来，已制备 出改形抗体、单链抗体、单域抗体、最小识 别单位等诸多类型，基本上消除了鼠源性单 克隆抗体的免疫原性，相对分子质量只有完 整抗体分子的1／80—1／3，原来鼠源性单 克隆抗体的诸多生物学活性已消失，如激活 补体、促进吞噬功能(免疫调理)、抗体依赖细 胞介导的细胞毒副作用等，只保留同抗原特 异性结合的活性，即仅应用其导向作用，制 备导向药物用于肿瘤治疗。
第四章抗体制药123节解析
抗体（Antibodபைடு நூலகம்）是指能与 相应抗原特异性结合具有免疫 功能的球蛋白。
抗体的产生：机体免疫系统 受抗原刺激后，B淋巴细胞被活 化、增殖和分化为浆细胞，由 浆细胞合成和分泌的球蛋白。
第四章抗体制药123节解析
免疫球蛋白与抗体的关系 20世纪60年代初期，发现多发性骨髓瘤是