抗生素效价的测定教学文案
电阻法测定抗生素效价的方法
电阻法测定抗生素效价的方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：电阻法测定抗生素效价是一种常用的方法，用于评估抗生素在不同条件下的活性。
这种方法通过测定抗生素与微生物的相互作用，来确定抗生素对微生物的杀菌效果。
在医学和药物研究领域，电阻法被广泛应用于评估抗生素的效价，以指导临床治疗和研发新的抗生素药物。
电阻法测定抗生素效价的原理是利用微生物在生长过程中对电阻的改变来反映细菌或真菌的数量，从而评估抗生素对微生物的活性。
通常情况下，实验过程中需要准备一定的培养基和试验物质，将微生物接种在含有不同浓度抗生素的培养基中，然后通过测定电阻值来监测微生物的增殖情况，并进一步评估抗生素的效价。
电阻法测定抗生素效价的步骤主要包括以下几个方面：首先是准备培养基和试验物质，确保实验条件的稳定性和可重复性；其次是将微生物接种进试验管中，加入不同浓度的抗生素，培养一定时间，使微生物在不同浓度抗生素的作用下生长繁殖；然后是测定电阻值，通过测定微生物在不同条件下的电阻变化，来评估抗生素的效价；最后是分析实验结果，得出结论和建议，指导临床治疗和药物研发。
电阻法测定抗生素效价的优点在于操作简便、结果可靠和快速，可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
电阻法还可以用于筛选出更有效的抗生素，并研究抗生素的作用机制，为药物研发和临床应用提供技术支持。
不过，电阻法测定抗生素效价也存在一些局限性，例如只能评估抗生素的杀菌效果，对于其他抗生素的效力可能无法准确评估；实验过程中可能会受到一些因素的影响，如培养条件、微生物菌株和抗生素的稳定性等。
在进行电阻法测定抗生素效价实验时需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
电阻法测定抗生素效价是一种简单有效的评估抗生素活性的方法，可以为临床治疗和药物研发提供重要的参考依据。
在今后的研究和实践中，我们可以进一步完善这种方法，提高其准确性和灵敏度，为抗生素的研究和应用贡献更多的技术和经验。
【结束】.第二篇示例：电阻法测定抗生素效价是一种常用的药物测定方法，通过测定抗生素对微生物的抑制作用，来确定抗生素的效力。
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。
此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。
除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。
试验过程短于渗透法。
轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。
《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。
渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。
中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。
通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。
管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。
一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。
该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
抗生素效价检测
抗生素效价检测
抗生素效价测定
⒈准备工作
①干热灭菌（150-160℃干热灭菌2小时）：带盖培养皿，陶瓦盖（定期清洗灭菌），钢管，刻度吸管（25ml，10ml，1ml各一根）
②湿热灭菌（121℃蒸汽灭菌30分钟）：水，缓冲液，培养基（根据要求设置灭菌温度和时间）
③试验用菌悬液活化
④效价操作间紫外灯消毒30分钟后开通风，室温控制在20-25℃
⑤实验前检查酒精灯，打火机，酒精棉球，洗耳球，温度计，移液枪，枪头等
⒉对照溶液和样品溶液的制备
①一步用灭菌水稀释至1000μ/ml（即称样量=稀释浓度×1000/标识效价），黏菌素稀释至10000μ/ml（即称样量=稀释浓度×10000/标识效价），称样量必须大于等于理论值，根据实际称样量补水
②二步以后用灭菌缓冲液稀释，根据兽药典稀释到要求的浓度范围
⒊双碟的制备（一批需6个以上）
①底层：用25ml刻度管吸取20ml培养基注入双碟内，静置待其凝固
②菌层：待培养基温度降至实验菌适应范围（一般细菌48-50℃，芽孢可至60℃），加入适量菌悬液摇匀，用10ml刻度管吸取带菌培养基5ml，使均匀分布在底层培养基上（一边放带菌培养基一边在平面上摇晃培养皿）
③放置钢管，做好标记，静置
④滴加对照溶液和样品溶液，移液枪调至245μL，注意枪头不能挂壁
⑤滴加完毕后盖上陶瓦盖，移入培养箱，于35-37℃培养至所需
时间
⒋抑菌圈的测量与计算
测量抑菌圈直径，根据公式P=log-1[(T2+T1-S2-S1)/ (T2+S2-T1-S1)×0.301]×100％计算。
管碟法抗生素微生物检定法讲座
得较清晰的抑菌圈。再如，泰乐菌素对藤黄微球菌杀灭作用较弱，形成的抑菌圈边缘清晰度 较差，对枯草芽孢杆菌杀灭作用较强，形成的抑菌圈边缘很清晰。
⑵解决办法有： ａ保持菌种新鲜，定期传代，及时更换，定时进行单菌落的分离、纯化。 ｂ增强抗生素的抗菌活性：可以从培养基的成分、pH 值和缓冲液的 PH 值和浓度来控制。 ｃ严格控制操作条件：如严格控制培养基、缓冲液的 pH 和培养温度的均匀性。
②小钢管底部二端面不平，此操作会导致形成卵圆或椭圆形抑菌圈。其原因是抗生素溶 液在琼脂培养基上扩散速度不一致。操作时使用加工相同的小钢管可防止此现象的发生。
③双碟、小钢管或其它器具被抗生素或其它杀菌剂污染。此操作会使抑菌圈破裂，有时 甚至使试验菌大部或全部被抑制，无法形成抑菌圈。因此，操作时一定要防止材料、器具、 环境被抗生素污染。
此为二剂量法效价计算公式，其中 S1、S2、T1、T2 分别为低浓度标准、高浓度标准、低
浓度样品、高浓度样品产生的抑菌圈半径。
实验证明：对数剂量与抑菌圈直径或面积在一定条件下呈直线关系，所以为工作方便在
实际工作中把半径的平方改为抑菌圈直径或面积，公式变为：
Logθ T2- S2+ T1- S1
─── ＝───────
Ⅱ
M1
9.21DT
1
Ⅰ+Ⅱ得： 2Logθ＝───〔(T22- S22)+( T12 - S12)〕
Ⅲ
9.21DT
(①+②)-(③+④)得：
(LogM 2+ LogM 2/)-( LogM 1 + LogM 1/)＝──── (S22+ T22- S12- T12)
抗生素效价测定操作规程
1.主题内容和适用范圉本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微主物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法釆用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明壳，操作间分&一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25°Co 注意抗生素的污染。
4. 2双蝶：内径90mm高16-17呗用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160°C干热灭菌2小时或高压灭菌121o C30min,备用。
4. 3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4. 4 钢管：内径 6. 0±0. 1mm 高7. 8±0. 1mm 或8. 0±0. 1mm, 10. 0±0. lmm.重量差异不超±0. 05g.用后置1:1000苯扎澳钱溶液内浸泡2h以上，再灭菌洗涤，先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160°C干热灭菌2小时备用.4. 5钢管放置器4. 6恒温培养箱：隔水式为宜35-37°C4. 7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸或1:1000 苯扎漠鞍溶液中消毒后再常规洗涤.150- 160°C干热灭菌2小时备用.4. 8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4. 9称量瓶:具塞，重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW 冲3次，置洁净的大平皿中.120°C干热3h,待冷到70-60°C时,取出置干燥器中备用.4. 10 毛细滴管：清洁液浸泡，水洗、PW冲3次.120°C干燥3h4.11 天平:分析天平，感量0. lmg4. 12 抑菌圈测量仪（多功能微主物自动测量分析仪）4.13 超净工作台5.菌悬液制备取短小芽泡杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水广2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35〜37°C 培养7天。
31 抗生素效价的测定
A=1u/ml
continue
A B
第一组 0.4u/ml
B
A C A
A B
A B
B
A C A
A
B
A B
B
A
A B
第二组 0.6u/ml
A C
A C
A C
A C
A CБайду номын сангаас
C A
A C
第三组 0.8u/ml
A D
D A
A D
A D
D A
A D
A D
D A
A D
共18个培养皿，分为6组:B、C、D、E、F、G
continue
第四组 1.0u/ml A E
E
A F A G A
A E
A E
E
A
A
E
A E
E
A F A
A E
第五组 1.2u/ml
A F
A F
A F
F A
A F
A F
A F
第六组 1.4u/ml
A G
A G
A G
G A
A G
A G
G A
A G
continue
加好，盖盖，37度培养16~18h，精确测量各个 抑菌圈的直径。 分别求出每组3个培养皿中1U/mL标准品抑菌圈直 径的平均值n1，n2，n3，n4，n5，n6，再求出 6组中1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值a，总平 均值与每组1U/mL标准品抑菌圈直径的平均值的 差，即为各组的校正值。即： a1=a-n1； a2=a-n2； a3=a-n3； a4=a-n4； a5=a-n5； a6=a-n6；
稀释法 比浊法 管碟琼脂扩散法（中国）
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中的干燥加入剂应保持经常注意更换。
• 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
• 双碟的制备：
•
•
取内径90mm、高16—17mm的平底双碟；
•
注入加热融化的培养基20ml，使在碟底内均
匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
•
另取培养基适量加热融化后，放冷至48－
50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液
效 价 （ ｐ otency ） ， 指 检 品 的 实 际 单位数与其标示量的比值。常表示为效价 的百分数。
单位（unit,u）单位是衡量抗生素有 效成分的具体尺度。
• １、重量单位 以抗生素的生物活性部分重量作单 位
• １微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单 位。
２、类似重量单位 以特定的纯粹抗生素盐类的重 量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐 酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克 （ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。 这是根据国际使用习惯而来的。
适量（能得清晰的抑菌圈为度。）
• 二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径 在 18－24 mm。
（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记
th
sl
• 将不锈钢小管(俗称为牛
uh
津杯)放置在含敏感试验
菌的琼脂培养基上。
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外
• 求出θ=D· log（IV/W）
• θ供试品和标准品的效价比 • D标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般
为1 • I 高低剂量之比的对数，即log2或log4 • Pr = Ar×θ • Pr供试品实际单位数
• Ar供试品标示量或估计单位
管碟法的材料
一，仪器 菌种 培养基 培养皿 牛角杯 陶瓦圆盖 二，试剂 无菌生理盐水 ph6.0的磷酸缓冲液 青霉素标准品储备液 青霉素标准品使用液
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌
的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
3、管碟法：是利用抗生 素在含敏感试验菌的 琼脂培养基中的球面 扩散渗透作用，从而 形成一定的抑菌圈。
通过琼脂培养基，可观 察并测量出抑菌圈的 大小。
管碟法测定抗生素效价 原理和方法
一 原理 在一定的抗生素浓
度范围内，对数剂量(浓 度)与抑菌圈的表面积或 直径成正比，可以得出 一条曲线。
抗生素浓度换算成对 数，则抑菌圈直径与抗 生素对数成直线关系
抗生素效价微生物检定法
赵永成 生工1001 4104100139
1.概述
一、抗生素的概念及抗生素的生物检定
抗生素是由微生物所产生的极微量便 具有选择性地杀死或抑制其他病原微生物 生长的一类天然有机化合物。
抗生素的生物检定是以抗生素对微生 物的抗菌效力作为效价的衡量标准。
一、抗生素的效价和单位
抗生素的含量用效价和单位表示。该 词有时不加区别统称为效价单位。
2 供试品及标准品的配制
• 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量
最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取， 取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。
•
标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，
样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平
３、质量折算单位 以特定的纯抗生素盐的质量为 单位而加以折算。青霉素0.6ug为1单位
４、特定单位 以特定的抗生素标准品的某一质量 定为一单位。
微生物发的分类
• 稀释法 • 浊培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
• 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关；
• 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
计算检品的效价
• 求出W和V • W=（SH+TH）-（SL+TL） • V=（TH+TL）-（SH+SL） • TH供试品高剂量的抑菌圈 • TL供试品低剂量的抑菌圈 • SH标准品高剂量的抑菌圈 • SL标准品低剂量的抑菌圈