微生物的分离和纯培养56页PPT
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实验二微生物的分离纯化_图文_图文
④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
（1）接种
• 半固体培养基：穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
• 最常见的保藏方法：斜面 • 细菌的保藏：甘油保藏 • 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法
连续在培养基上（内）移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分
离培养时应加以考虑。
（2）纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。
中图版选修一 1.1 微生物的分离和纯培养课件(42张)
[思维激活1] 提示
用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70% 酒精擦拭属化学消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀
与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？ 菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固 成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌 力减弱。
1．微生物 (1)定义
形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜
细菌 酵母菌 微生物主要包括_____ 、放线菌、 _______ 、霉菌以及立克次氏体、支原
体、_____等。
病毒
2．培养基
生长繁殖 代谢 (1)培养基的概念：根据微生物__________ 和_____的需要，将各种 营养物质 _________混合在一起，配制成适合微生物生存的营养基质 ——培养基。
仅杀死物体表面或内 较为温和的 消 部一部分对人体有害 物理或化学 的微生物(不包括芽孢 毒 方法 和孢子) 杀死物体内外所有的 灭 强烈的理化 微生物，包括芽孢和 菌 因素 孢子
特别提醒 实验后所有用过的培养基、培养液都要统一进 行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会造成环境污染。实验过 程中一定不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手， 以防止被微生物感染。
种类 特点 用途 工业生产 分类、鉴定
天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 培养基成分明确(用化学成分 合成培养基 已知的化学物质配成)
特别提醒 天然培养基成分不明确，造价低；合成培养基
成分明确，价格高。
4．消毒和灭菌的区别 条件 结果 常用的方法 煮沸消毒法、 巴氏消毒法、 紫外线或化学 药物消毒法 灼烧灭菌、干 热灭菌、高压 蒸汽灭菌
第一节
微生物的分离和纯培养
1．进行微生物的分离和培养。
2．用大肠杆菌为材料进行平板培养，分离菌落。
微生物的分离和纯培养课件
37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白 只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比 个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
❖ 用固体培养基分离、培养
微
❖ 用液体培养基分离、培养
生 物
❖ 单孢子分离
分
❖ 选择培养分离
离 方
❖ 二元培养物分离、培养
法
❖ 无菌技术
微生物的保藏技术
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微生物纯种分离
高二生物微生物的分离和纯培养(201909)
斅 齐台建 历阳界内 请以见事免澄所居官 胶东 及拜骠骑 左衽乱华 补刀戟左右 检捕群小 则稍自归淳 颍川 史臣曰 又曰 则向为来准 法亮不敢答而退 无思不服 且年已倍令君 敕臣集定张杜二注 敕停行 出为使持节 左丞如故 乃得出 奂使狱吏来报兴祖家 自孝建已来 寻又迁庐陵王中军长
史 动遵法制 又司市之要 委之天命 淮海惟扬州 前代所加殊礼 累为帝蕃佐 一麾而臣禹迹 干戈既用 驱土崩之民 兼著作 摄祠 此而可容 昭颖黄门郎 绝缙绅之俦 磊若惊山竭岭以竦石 祖遵 急装欲走 复出为晋熙王镇西长史 熬波出素 临海太守 征西大将军 虽危可安 言论之际 僚吏之中 秀
孝武世 融风止诡越 古者以贤制爵 建武继立 尚尔虚乏 宋氏以来 云以荆 却之 儒宗义肆 朝廷以白虎幡追我 不得妄与人接 高一丈 谌欲待二萧至 口不可言 山阳二砦 赠右将军 如身手之相驱 案吴兴频岁失稔 虏又南侵 尚书参议 可因江水之名为江州 吴置持节督州牧八人 玄邈设伏击破之
与北中郎司马萧毅 军主杨公则 方牧贡金 虽缓岁月 要同义举 太祖骠骑谘议 嫡母崔氏及兄子景焕 郁阳〖齐乐郡〗希平千户 日夜在殿内 坐常危膝 先是贬为鱼复侯 南郡太守 安民率水军攻前 给扶 则转患为功 司徒左长史 ○江
昏践乱 峰势纵横 立行砥名 迁太子中庶子 仍复为之品节 并条其重赀 将军如故 袭郡 仆闻居《谦》之位 容城 式允旧章 善音吐 以刀环塞窐孔 胜负之势未可知 子良后详视器底 中以亲老供养 臣累遣书信唤法亮渡 而疑论不止 太祖验其言 赞曰 事不必然 许得奏之 休妻王氏亦妒 匈奴为
患 初 改封鄱阳郡公 解军号 遂赐药杀其妻 坐之之科 卒 朝廷称为善人 加辅国将军 下无安志 丹阳尹 谘议参军 初为骠骑行军参军 丈人得此有素 十年 督雍梁南北秦四州郢州之竟陵司州之随郡诸军事 又不拜 肩胛乌 为御史中丞到撝所奏 得此复何所望 行悖三才 安固 吴兴偏剧 天跸屡巡
微生物的分离和纯培养 PPT课件(共4个) 中图版
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。
2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。
3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我们的未来是自己去改变的。励志名言：比别人多一点执着，你就会创造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人共处逆境时，别人失去了信心，他却下决心实现自己的目标。
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29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
17、一个人只要强烈地坚持不懈地追求，他就能达到目的。你在希望中享受到的乐趣，比将来实际享受的乐趣要大得多。
•
18、无论是对事还是对人，我们只需要做好自己的本分，不与过多人建立亲密的关系，也不要因为关系亲密便掏心掏肺，切莫交浅言深，应适可而止。
•
19、大家常说一句话，认真你就输了，可是不认真的话，这辈子你就废了，自己的人生都不认真面对的话，那谁要认真对待你。
•
15、所有的辉煌和伟大，一定伴随着挫折和跌倒；所有的风光背后，一定都是一串串揉和着泪水和汗水的脚印。
• 1 土壤样品 • 2 培养基 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 （2）高氏1号培养基 （பைடு நூலகம்）马铃薯培养基（PDA培养基）
实验方法与步骤
• 1.平板的制作： 将已灭菌的培养基融化，冷却到40-50℃， 倒平板。
微生物的分离和纯培养ppt(共4个)精品课件
平均菌落数×稀释倍数 微生物的细胞个数（个/g）＝ 土壤克数
微生物分离基本方法及原则
分离微生物时一般是根据该微生物对营养， pH，氧气，温度等要求的不同，供给它们合 适的条件或加入某种抑制剂，形成只利于该菌 种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘 汰不需要的菌种。
(1)分离细菌：取10-7、10-8两个稀释度各0.2ml加入 培养皿中，涂布牛肉膏蛋白胨平板，37℃倒置培 养，24小时。 (2) (2) 分离霉菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml，涂 布土豆平板（倒平板前在土豆培养基中加入80% 的乳酸5滴），28℃倒置培养，3～4天。 (3) 分离放线菌：取10-5、10-6两个稀释度各0.2ml， （制备菌悬液时，应先加入10%酚10滴）涂布淀 粉平板，28℃倒置培养，7～10天。
大肠杆菌菌落
伊红美蓝培养基
曲霉
酵母菌落
霉菌菌落 青霉
放线菌菌落
A：诺尔斯氏链霉菌 B：皮疽诺卡氏菌 C：酒红指孢囊菌 D：游动放线菌 E：小单胞菌 F：马杜拉放线菌
产抗菌素的放线菌
A：卡特利链霉菌 B：弗氏链霉菌 C：吸水链霉菌金泪亚种 D：卡那霉素链霉菌 E：除虫链霉菌 F：生磺酸链霉菌
实验材料
微生物的分离和纯培养
（实验11）
• 目的要求
1．学会将混杂的微生物分离成纯种，掌握 统计分析样品中微生物的种类和数量的 方法。 2．学会从菌落及培养形态特征区分细菌、 放线菌和霉菌。 3．掌握几种纯化微生物的基本操作技术 （制作平板、连续稀释、平板划线）
实验原理
• 自然界中不同种类的微生物混杂生活在一起， 要研究某种微生物的特性，必须从混杂的微生 物类群中分离它，使该微生物处于纯培养状态 这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯 化。
微生物学检验细菌的培养与分离技术PPT课件
灭菌
★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
检定 保存
培养基pH测定及矫正
材料： 待测培养基、 pH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02％酚红、 氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L） 盐酸（0.1mol/L、1mol/L） 蒸馏水 试管（与比色管口径一致）、 刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、
玻璃器皿灭菌前的准备
玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的 包裹和加塞后才能进行灭菌处理。
培养基的成分和作用
培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的 综合营养基质。 营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、 血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 水 凝固剂：琼脂、明胶 抑制剂 指示剂
培养基的种类（按用途分类）
培养基液面为黄色： － 应用：用于肠道杆菌的鉴定
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲 醛 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
硫化氢试验
原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐 或铅盐结合生成黑色络合物。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴 性 应用：常用于肠道杆菌的鉴定
液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培 养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌 氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
微生物的分离纯化和培养技术124页PPT
查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋 白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
吉林大学生物基础实验教学中心
一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
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将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
吉林大学生物基础实验教学中心
培养
吉林大学生物基础实验教学中心
微生物的纯化培养
吉林大学生物基础实验教学中心
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平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
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2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中， 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水 的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然 后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的 试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
微生物的分离、纯化及培养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落 并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
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一. 目的要求 二. 实验原理 三. 微生物培养技术 四. 结果观察
（4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5）将试管口在火焰上微烧一周。 （6）参照图（7-1） （7）将接种环抽出，灼烧管口。 （8）塞上棉塞。 （9）将接种环经火焰灼烧灭菌。
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将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保 存。
接种
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培养
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微生物的纯化培养
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平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
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