1.1微生物的分离和培养解析
微生物的分离和纯培养
在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。
由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
一、无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。
因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。
1、微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不合任何生物。
培养微生物的营养物质[称为培养基(culture medium)]可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。
为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。
2、接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。
由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。
微生物的分离与培养
微生物的分离与培养一．考纲要求：班级姓名1.微生物的分离和培养（A级）二．知识梳理考点一培养基1．培养基的营养构成(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、、和无机盐。
(2)不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。
易错警示①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。
②对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。
③有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。
3.制备固体培养基的流程计算→称量→溶化→→倒平板操作的注意事项：①倒平板的适宜温度是℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。
②培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开；整个操作过程要在旁进行，避免杂菌的污染。
③平板冷凝后需，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
④若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应该。
考点二微生物培养的无菌操作和接种方法1、进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点是消毒和灭菌。
3、纯化大肠杆菌的方法（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
例1．下列无菌操作中，错误的是 ( )A．无菌操作的目的是防止杂菌污染 B．用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭例2．如右图是微生物平板划线示意图。
划线的顺序为1、2、3、4、5。
下列操作方法正确的是( )A．操作前要将接种环放在火焰旁灭菌 B．划线操作须在火焰上进行C．在5区域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌例3．（2015江苏）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上例4(1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、和无机盐。
微生物的分离与培养
微生物的分离与培养实验原理：一、培养基的制备培养基通过人工加入微生物的生长所必需的各种成分，包括水，碳源，单元，无机盐和生长因子各种营养物质配置而成的养料。
二、微生物的接种微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的，培养基种类及容器等不同，所以接种方法不同。
用不同的接种方法以获得生长良好的纯种微生物。
三、微生物的培养不同的微生物对营养需求不同，根据这点可以通过培养基对微生物的做初步分离。
四、质粒的提取碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA和质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的。
在PH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断链，双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的大部分氢键也断链，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以PH4.8D的NaAc高盐缓冲液冲击去调节其PH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA 与不稳定的大分子RNA，蛋白质—SDS的复合物等一起沉淀下来而被除去。
五、PCR技术DNA的半保留复制时生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋或单链。
在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制或同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶，dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
六、琼脂糖凝胶电泳许多重要的生物，如蛋白质，核酸等都具有可电离的基因，在某一特定的PH下他们可以电离正电荷或负电荷，当加上电均后，这些带点分子就会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
而电泳技术就是利用在电均的作用下，由于待分离样品中各种分子带点性质，分子大小形状等的差异，从而产生不同的迁就率，对样品进行分离，鉴定或纯化的技术。
PCR产物的回收将含有质粒DNA的荧光色带切下，溶解后填充到硅胶柱中，利用硅胶在高盐低PH下吸附DNA，在低盐和高PH条件下DNA可在被洗脱的原理，进行DNA的回收和纯化。
生物自我小测：第一章第一节微生物的分离和培养
自我小测1．将配制好的培养基进行灭菌，应用（）A．灼烧灭菌B．高压蒸汽灭菌C．干热灭菌D．煮沸灭菌2．获得纯净培养物的关键是（）A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵3．在光亮处用同一种培养液分别培养单细胞绿藻和单细胞的酵母菌，其结果如下图所示（甲为绿藻，乙为酵母菌)。
造成这种结果的原因是培养液中（）A．缺少无机盐B．氧气含量太高C．缺少有机养分D．不含二氧化碳4．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。
但一般都需要水、碳源、氮源和无机盐。
下列有关微生物所需营养物质的描述中,正确的是（)A．氮源物质只能为该微生物提供必要的氮元素B．有些碳源也可以给微生物的生长提供能源C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，所以无机盐越多越好D．固体培养基中不含水分5．外科医生对病人进行手术时，对自己的手和使用的手术器械分别进行（)A．消毒、消毒B．灭菌、灭菌C．消毒、灭菌D．灭菌、消毒6．下表是一种培养基的配方,请回答下列问题.(1养物质有__________、__________、__________等，琼脂的作用是_______________________________________。
（2）在各种成分溶化分装前，必须进行的重要步骤是__________。
（3）该培养基从物理性质看属于______培养基,能培养的细菌从同化作用看其代谢类型是__________。
（4)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是__________、涂布平板法，最终，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个__________,从而获得纯菌株.参考答案1．解析:为保证各种成分的比例不受影响，配制好的培养基应用高压蒸汽灭菌。
答案：B2．解析：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,也是研究和应用微生物的前提，无菌技术除了防止培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染.答案：D3．解析：在光亮处用同一种培养液分别培养单细胞绿藻和单细胞的酵母菌，由题图可知培养结果：绿藻大量繁殖，而酵母菌最终都死亡。
实验二微生物的分离、纯化和接种
实验二微生物的分离、纯化和接种微生物的分离、纯化1、目的要求1.1了解微生物分离和纯化的原理1.2掌握常用的纯化分离微生物的方法2、基本原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、pH值、温度和溶解氧等要求，或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成。
而纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
本实验将在混合有几种微生物菌液中分离纯化出两种微生物来。
3、实验材料3.1培养基肉汤培养基（固体）。
3.2溶液或试剂盛4.5ml无菌水的试管，其中有一只盛有玻璃珠。
3.3仪器或其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，涂布器等。
4流程倒平板制备梯度稀释液涂布（或划线法）培养挑单菌落保存。
5、步骤5.1平板划线分离法5.1.1倒平板倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后置于桌面上，待凝固后即成平板(教材p367图13-14)。
并用记号笔标明培养基名称、菌液编号和试验日期。
5.1.2划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取菌悬液一环在平板上划线(教材p367图13-15)。
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
微生物培养与分离方法
微生物培养与分离方法大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。
只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。
一、接种与分离方法根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类，采用不同的接种方法。
1．平板划线分离培养法对混有多种细菌的临床标本，采用划线分离和培养，使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得纯种。
临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。
平板划线分离法通常有两种方法：（1）分区划线分离法：此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。
先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区（占培养基总面积的1/4）并作数条划线，再于2、3、4区依次划线。
每划完一个区域，均将接种环烧灼灭菌1次，冷后再划下一区域，每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。
一个成功分区划线的平板，培养后分别观察1区形成菌苔，2区菌落连成线，3区和4区可分离到单个菌落。
（2）连续划线分离法：此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。
方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹，然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种，直至划满琼脂平板表面。
琼脂斜面接种法主要用于菌落的移种，以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。
用接种环（针）挑取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后再从底部沿直线向上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。
生化鉴定培养基斜面接种，用接种针挑取待鉴定细菌的菌落，从斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。
3．穿刺接种法此法多用于半固体培养基或双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种，半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。
接种时用接种针挑取菌落，由培养基中央垂直刺入至距管底0.4cm处，再沿穿刺线退出接种针。
微生物的分离与培养技术
微生物的分离与培养技术微生物是指肉眼无法看到的微小生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
研究微生物的分离与培养技术对于了解微生物的特性、功能以及应用具有重要意义。
本文将介绍微生物的分离与培养技术的基本原理和步骤。
一、分离微生物的基本原理和方法分离微生物是指从混合微生物群落中将特定微生物种类单独分离出来。
这对于研究微生物种类的多样性和个体差异性非常重要。
下面将介绍两种常用的分离微生物的方法。
1. 肉眼分选法肉眼分选法适用于鉴定和培养易于在富含营养物质的培养基上生长的微生物。
该方法通常用于分离细菌和真菌。
具体步骤如下：a. 首先，将混合微生物群落接种于富含营养物质的琼脂平板上（如营养琼脂平板）。
b. 然后，通过观察生长在琼脂平板上的细菌或真菌的形态、大小、颜色等特征，选择目标微生物。
c. 最后，用无菌的接种环将目标微生物划取到新的培养基上进行单独培养。
2. 稀释涂布法稀释涂布法可用于分离微生物样本中的单个细胞。
该方法适用于细菌和真菌的分离。
具体步骤如下：a. 首先，将微生物样本逐渐稀释至一定浓度。
b. 然后，取少量稀释后的样本使用平板计数法（将稀释后的样本涂布在琼脂平板上，并按照一定比例稀释），以得到适宜的菌落数。
c. 最后，通过观察琼脂平板上的菌落形态，选择目标微生物，并用无菌的接种环将目标微生物划取到新的培养基上进行单独培养。
二、微生物的培养技术培养微生物是为了让细菌、真菌等微生物在富含营养物质的环境中生长和繁殖。
培养技术有助于了解微生物的生长特性和生理特点。
下面将介绍两种常用的微生物培养技术。
1. 液体培养法液体培养法是将微生物接种于富含营养物质的液体培养基中，通过培养瓶或试管中的液体环境，利用微生物对营养物的吸收和转化来进行培养。
具体步骤如下：a. 首先，准备好富含营养物质的液体培养基。
b. 然后，用无菌技术将微生物接种到培养基中。
c. 最后，将培养瓶或试管密封好，放入恒温摇床中，控制培养温度和培养时间，观察微生物的生长情况。
高中生物 第1章 第1节 微生物的分离和纯培养检测(含解析)中图版高中选修1生物试题
第一节微生物的分离和纯培养一、培养基1．含义由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。
根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。
2．平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。
二、无菌技术1．目的和要求在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。
因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。
2．灭菌和消毒(1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭菌法。
(2)消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。
三、接种技术1．含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。
2．分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点 1．概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。
2．特点微生物⎩⎨⎧小个体微小⎩⎪⎨⎪⎧ μm 微米级：光学显微镜下可见细胞nm 纳米级：电子显微镜下可见细胞器、病毒微生物⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧ 简构造简单⎩⎪⎨⎪⎧单细胞简单多细胞非细胞即“分子生物”低进化地位低⎩⎪⎨⎪⎧原核类：细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、蓝细菌真核类：真菌酵母菌、霉菌、原生生物非细胞类：病毒、类病毒、朊病毒二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C 、H 、O 、N 、P 、S 等元素组成，其中C 、H 、O 、N 占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。
这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。
营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO 2、NaHCO 3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
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3.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
⑴碳源
无机碳源：CO2、CO32-、 HCO3-
自养微生物
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等 异养微生物
⑵氮源 无机氮源：NH4＋、NO3有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
巴氏消毒 70 ～75℃,30min；牛 Nhomakorabea等不宜高温
75℃,15min
消毒灭菌的
化学药剂消毒 酒精、氯气、石炭 实验者的手臂、 酸、煤酚皂溶液 实验台等
紫外线消毒 用紫外线照射 30min
接种室内空气、接 种箱、超净工作台
（2）灭菌
灭菌方法
适用对象
所需条件
灭菌时间
灼烧灭菌
接种的工具、 酒精灯火焰充 试管口、瓶口 分燃烧层灼烧
第一章 :无菌操作技术实践
微生物基础知识
病毒
细菌
微生物包括哪五类： 放线菌
病毒界 原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通 常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有 的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿 素.不能进行光合作用.
细菌的构造
图1-3 细菌的结构
气压100Kpa、温度 121℃、维持20—30分钟。 5、出锅
压力表指针将至“0”点，温度下降。
微生物实验室培养的基本 操作程序
●器具的灭菌 ●培养基的配制 ●培养基的灭菌 ●倒平板 ●微生物接种 ●恒温箱中培养 ●菌种的保存
（二）培养基
1.概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，
配制出供其生长繁殖的营养基质。
半固体培养基
用于动力检测、 保种
无动力 有动力(弥散)
液体培养基（用于增菌） 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
（3）按功能划分：
基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。 选择培养基：培养基加入某种物质或缺少某种营养 物质而抑制不需要的微生物生长促进需要的微生物 生长。
如：加链霉素培养基或者加青霉素培养基抑制 细菌和放线菌的生长，筛选真菌。
常用方法
①煮沸消毒法 ②巴氏消毒法 ③化学药剂消毒法 ④紫外线消毒法
强烈的理化因素 杀死所有的微生物
包括芽孢和孢子
①灼烧消毒法 ②干热灭菌 ③高压蒸汽灭菌
适用对象 操作空间、液体、 接种环、接种针、玻
双手等
璃器皿，培养基等
（1）消毒
方法
条件
适用范围
煮沸消毒法 100℃,5～6min 日常食物、罐装 食品
烧红
干热灭菌 高压蒸汽灭菌
耐高温需干燥 干热灭菌箱
的物品（玻璃 （160℃～170
器皿等）
℃）
培养基、实 验器材
100kPa，121 ℃
1～2h
15～ 30min
灼烧灭菌
干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅
湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 过程：
1、加水 2、装锅 3、加热排气 维持2—3min,排出冷空气 4、保温保压
菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
菌落
细菌的菌落特征因种 而异
放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
应用:
链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素
无氮培养基抑制非固氮菌生长，筛选固氮菌 鉴别培养基：区别微生物
伊红——美蓝培养基 产气杆菌菌落大、灰棕色 大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽
培养基 加入青霉素
加入高浓度食盐 不加氮源 不加含碳有机物的无碳 培养基 加入青霉素等抗生素
加入氨基喋呤、次黄嘌 呤和胸腺嘧啶核苷
应用 分离酵母菌、霉菌等真 菌 分离金黄色葡萄球菌 分离固氮菌 分离自养型微生物
2.类型：
按化学成分划分：
按物理性质划分：
按功能划分：
（1）按化学成分划分：
天然培养基
化学成分不恒定的天然有机物
如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基
合成培养基
化学成分完全了解的物质配制而成的培养基
如：高氏1号培养基、葡萄糖铵盐培养基。用于分类 和鉴定
（2）按物理性质划分：
固体培养基： 用于纯化、增菌。
※蛋白胨:动物蛋白初步消化的产物，富含有机氮化合物， 也含有一些维生素和糖类。主要提供氮源和维生素。
（一）制备培养基
计算称量溶化调节pH灭菌倒平板
12
1.将培养皿放在火焰旁的桌面上， 右手拿装有培养基的锥形瓶，左手 拨出棉塞。
34
2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过 火焰。
3.用左手将培养皿打开一条稍大于 瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培 养基(约10～20mL)倒入培养皿，左 手立即盖上皿盖。
边做边学：大肠杆菌的接种与分离培养
(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g
将上述物质溶解后，添加自来水，定容至 1000mL
※牛肉膏：新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而 成，含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物 质类及维生素类的水溶性物质。提供碳源、氮源、能源、 磷酸盐和维生素。
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、菌 （纤）毛、荚膜 、细胞壁、细胞 膜、细胞质，细 胞质中又有液泡 、储存性颗粒、 核质等。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休 眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶 劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小 时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜 （如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个 细菌.
微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是 由放线菌产生的
病毒
2、病毒的增殖：
真菌
酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
细菌的营养类型
根据细菌所利用的能源和碳源的不同 ，将细菌分为两大营养类型。
自养菌（autotroph）
异养菌（heterotroph）
腐生菌
寄生菌
大部分病原菌
课题研究背景：
微生物研究和应用的前提： 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物 如何获得纯净培养物？ ①合适的营养和环境条件 ②确保其他微生物无法混入
一 无菌技术
无菌的意义：防止外来杂菌的污染
思考： 1.操作中哪些地方需要无菌？ 2.怎样控制无菌？
1.无菌的方法
（1）消毒
（2）灭菌
概念
较为温和理化方法 杀死部分有害微生物 (不包括芽孢和孢子)