微生物的分离培养
微生物的分离方法
微生物的分离方法
微生物的分离方法是指将混合的微生物菌落分离出来，单独培养，以便进行鉴定和研究。
常见的分离方法有以下几种：
1.平板分离法：将微生物接种在含有固体培养基的平板上，使微生物随机分布并生长形成菌落，然后使用无菌的环针将单个菌落挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
2.液体分离法：将微生物接种在含有液体培养基的试管中，经过适当的震荡或搅拌，使细菌均匀分散在培养基中，再逐步地将其中的微生物转移到新的培养基上进行单独培养。
3.滤膜分离法：将微生物培养在含有滤膜的培养基中，待微生物穿过滤膜并在其表面生长形成菌落后，用无菌的镊子将单个菌落挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
4.扩散分离法：将微生物接种在含有半固态培养基的试管中，将试管在水平面上移动，使微生物扩散生长，最终形成一个斑点，再使用无菌的环针将单个斑点挑出，转移到新的培养基上进行单独培养。
以上是常见的微生物分离方法，不同的方法适用于不同类型的微生物，选择合适的方法对于微生物研究和鉴定具有重要意义。
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实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
微生物的分离和纯培养无菌技术无菌技术
连续培养：在微生物培养的过程中，不 断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌 体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物 长时间地处于对数生长期，以利于微生物 的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 连续培养理论基础：由于对典型生长曲 线中稳定期到来原因的认识，采取相应有 效措施推迟其来临，从而发展出现在的连 续培养技术。
连续培养原理 当微生物在单批培养方式下生长达到对 数期后期时，一方面以一定的速度流进新 鲜培养基并搅拌，另一方面以溢流方式流 出培养液，使培养物达到动态平衡，其中 的微生物就能长期保持对数期的平衡生长 状态和稳定的生长速率。
连续培养和单批培养的比较
连续流入 新鲜培养液 单批培养 恒浊法
lg细胞数（个/ml）
4、选择性培养分离法 为了从混杂的微生物群体中分离出某种 微生物，可以根据该微生物的特点，包括 营养、生理、生长条件等，采用选择培养 的方法进行分离。 利用选择培养基进行直接分离 富集培养
三、微生物的培养
1、好氧培养和厌氧培养 好氧培养以空气为氧的来源。实验室 的培养方法用平皿培养和斜面培养；工业 生产时用自然对流和机械通风法来供氧； 液体培养时微生物利用培养液中的溶解氧； 液体三角瓶培养时利用摇床机达到供氧的 目的；发酵罐培养时用通入无菌压缩空气 达到供氧的目的。
微生物的分离和纯培养
一、无菌技术
无菌技术：是将微生物分离、转接及培 养时防止被其它微生物污染的技术。 1、对使用的器皿及用具的灭菌 2、对培养基的灭菌 通常使用的方法有高温蒸汽灭菌和高 温干热灭菌，效果达到无菌（不含任何微 生物)。
3、无菌的环境 （1）在操作过程中的无菌要求：接种、 分离过程的无菌效果（在火焰上部进行操 作）。 （2）在超净工作台、无菌室和无菌箱中 进行操作。使用甲醛、紫外线、75%的乙 醇等进行预处理及其他的必要措施。 （3）如进行好氧培养需对空气进行处理， 实验室用多层纱布、棉塞和硅胶塞过滤空 气，工业中使用空气过滤器过滤空气。
微生物纯种分离的5种方法
微生物纯种分离有5种方法，分别是：1.倾注平板法：首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。
单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。
2.涂布平板法：首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。
3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法。
用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。
4.富集培养法：富集培养法的方法和原理非常简单。
我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。
如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。
通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
5.厌氧法：在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。
然后快速冷却，并进行接种。
接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。
另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。
有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。
2.微生物的分离培养
一、微生物接种
1．琼脂斜面接种法
主要用于菌落的移种，以获得纯种进 行鉴定和保存菌种等。用接种环（针）挑 取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部 向上划一条直线，然后再从底部沿直线向 上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。
2．穿刺接种法
此法多用于半固体培养基或双糖铁、明 胶等具有高层的培养基接种，半固体培养基 的穿刺接种可用于观察细菌的动力。接种时 用接种针挑取菌落，由培养基中央垂直刺入 至距管底0.4cm处，再沿穿刺线退出接种针。
4．衰亡期
稳定期后如再继续培养，细菌死亡率逐渐 增加，以致死亡数大大超过新生数，群体中活 菌数目急剧下降，出现了“负生长”--叫衰亡 期。其中有一段时间，活菌数按几何级数下降， 故有人称之为“对数死亡阶段”，这一阶段的 细胞，有的开始自溶，产生或释放出一些产物， 菌体细胞也呈现多种形态，大小悬殊，有的细 胞内多液泡，革兰氏染色反应的阳性菌变成阴 性反应等 。
（5）比浊法
原理是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，
与透光度成反比。细菌越多，透光量越低。 此法比较简便。 但样品颜色不宜太深；样品中不要混杂其 他物质；同时菌悬液浓度必须在107／毫升以上 才能显示可信的混浊度。
2．间接计数法
是基于每个分散的有机体在适宜的培 养基中具有生长繁殖的能力，并且一个活 细胞能形成一个菌落。菌落数就是待测样 品所含的活菌数。
3．稳定期
又称恒定期或最高生长期。长短与菌种和
外界环境条件有关。
处于稳定期的微生物，新增殖的细胞数与 老细胞的死亡数几乎相等，培养物中细胞总数 达到最高水平，此时生长速度逐渐趋向零。接
着死亡细胞数大大超过新增殖细胞数，曲线出
现下降趋势。
3．稳定期
稳定期产生的原因：由于对数期细菌活跃
【精品】微生物的分离、培养与计数
【精品】微生物的分离、培养与计数微生物是一类非常微小的生物体，它们在自然界中广泛分布。
它们既能在有机物中繁殖生长，又能利用无机物产生生物化学反应。
因此，微生物对于生态系统的生物转化和元素缓冲都有重要的作用。
对于微生物的分离与培养，目前有许多方法，本文将介绍其中比较常用的几种方法。
一、分离方法1. 稀释法稀释法是微生物分离中最基本的方法之一。
它的原理是将微生物溶液稀释到一定程度，然后在培养基表面或培养液中进行培养，使微生物单独分散生长。
稀释法分为限量和非限量两种。
限量稀释方法一般用于微生物数量较少时，非限量稀释方法用于微生物数量较多时。
稀释法的优点是简单易行，适用于各种微生物。
2. 均质法均质法是利用机械或化学方法将微生物样品分散均匀，再用无菌铁筒将分散液加压强制穿过小孔的方法从而达到单菌分离的方法。
此方法适用于样品微生物量极少，且可用于多种不同菌种的分离。
3. 筛选法筛选法是通过不同的生理特性采用选择性培养基进行筛选，将目标微生物与其他微生物分开的方法。
常用的选择性培养基有青霉素和红值耐药素互补剂选择性培养基、大肠菌属选择性培养基等。
二、培养方法1. 常规培养法常规培养法是指最常见的培养方法，即将单菌接种于培养基上，使其在适宜的温度、ph值和营养成分下繁殖生长。
常用温度为30℃-37℃，ph值为7.0-7.5，营养成分包括碳源、氮源、微量元素和水等。
常规培养法简单易行，易于操作，适用于多数菌种。
原位培养法是将微生物直接培养在其生长环境中的方法，常常用于难培养的微生物，如土壤和水样中的微生物。
原位培养法优点是能够筛选到多种不同菌种，但需要时间较长且操作难度较高。
3. 微生物选育基培养法微生物选育基培养法是利用各种选育基，促进菌落分化，从而达到不同菌株、菌类或产物的选育的方法。
微生物选育基培养法的优点是快速、准确、可靠，但其缺点是培养基较复杂，操作相对费时。
三、计数方法1. 直接计数法直接计数法是指在一定容积中直接计数目标微生物的数量。
微生物的分离与培养
微生物的分离与培养实验原理：一、培养基的制备培养基通过人工加入微生物的生长所必需的各种成分，包括水，碳源，单元，无机盐和生长因子各种营养物质配置而成的养料。
二、微生物的接种微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的，培养基种类及容器等不同，所以接种方法不同。
用不同的接种方法以获得生长良好的纯种微生物。
三、微生物的培养不同的微生物对营养需求不同，根据这点可以通过培养基对微生物的做初步分离。
四、质粒的提取碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA和质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的。
在PH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断链，双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的大部分氢键也断链，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以PH4.8D的NaAc高盐缓冲液冲击去调节其PH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA 与不稳定的大分子RNA，蛋白质—SDS的复合物等一起沉淀下来而被除去。
五、PCR技术DNA的半保留复制时生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋或单链。
在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制或同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶，dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
六、琼脂糖凝胶电泳许多重要的生物，如蛋白质，核酸等都具有可电离的基因，在某一特定的PH下他们可以电离正电荷或负电荷，当加上电均后，这些带点分子就会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
而电泳技术就是利用在电均的作用下，由于待分离样品中各种分子带点性质，分子大小形状等的差异，从而产生不同的迁就率，对样品进行分离，鉴定或纯化的技术。
PCR产物的回收将含有质粒DNA的荧光色带切下，溶解后填充到硅胶柱中，利用硅胶在高盐低PH下吸附DNA，在低盐和高PH条件下DNA可在被洗脱的原理，进行DNA的回收和纯化。
微生物分离的方法
微生物分离的方法
微生物分离的主要方法包括传统培养法、筛选培养法和分离富集法。
1. 传统培养法：将微生物样品分散在富含营养物的培养基上，将其培养在适宜的温度和pH条件下。
通过不同培养基的选择、不同的温度、pH等条件的调节，可以促进特定微生物的生长和繁殖，从而分离出目标微生物。
2. 筛选培养法：筛选培养法是根据目标微生物的特殊生理特性和营养需求，设计特定的培养条件，以促进目标微生物的生长和繁殖。
例如，通过特定的培养基、温度、pH、气氛条件等，选择性地分离出某些特定类型的微生物，如厌氧菌、耐高盐菌等。
3. 分离富集法：分离富集法是根据微生物在自然环境中的特定生理特性和生境适应性，通过特定的分离富集技术，富集出目标微生物。
常用的富集方法包括传统的液体培养富集法、固体培养富集法和连续扩增培养富集法等。
这些方法通过提供适宜的环境条件，使目标微生物在其他微生物中相对优势，从而实现分离。
以上是常用的微生物分离方法，不同的方法适用于不同的微生物分离目的和环境条件。
在实际操作中，还可以根据具体情况，结合不同的方法进行综合分离。
微生物的纯种分离培养
微生物纯种分离培养的重要性
微生物纯种分离培养是研究微生物的基础
通过纯种分离培养，可以获得单一的微生物菌株，对其进行深入研究，了解其生 物学特性、生长繁殖条件、代谢机制等，为后续的应用和研究奠定基础。
划线分离法
总结词
通过在固体培养基上划线培养，使微生物在各划线间生长繁殖，从而获得纯种的方法。
详细描述
划线分离法是最早使用的微生物分离纯化的方法，也是最简单的方法。它通过在固体培养基表面用接种环或接种 针划线，使微生物在各划线间生长繁殖，从而获得纯种。划线分离法适用于细菌、霉菌等微生物的分离纯化。
稀释分离法
微生物纯种分离培养的历史可以追溯到19世纪末期， 当时的研究者开始尝试将混合的微生物群体分离成单 一的菌株。
目前，微生物纯种分离培养已经广泛应用于各个领域 的研究和应用中，成为现代生物技术的重要组成部分 。未来，随着技术的不断进步和应用需求的增加，微 生物纯种分离培养将继续发挥重要作用。
02
微生物的纯种分离培养技术
微生物纯种分离培养有助于解决实际问题
在工业、农业、医学等领域中，许多问题都需要借助微生物来解决。通过微生物 纯种分离培养，可以获得具有特定功能的菌株，用于生产、治理和医疗等方面， 解决实际问题。
微生物纯种分离培养的历史与发展
随着科技的发展，微生物纯种分离培养的技术和方法 不断得到改进和创新。例如，利用选择性培养基、采 用不同的分离方法和策略、应用自动化和智能化技术 等，提高了分离效率和成功率。
食品工业
在食品工业中，微生物的纯种分离培养可用于生 产各种食品添加剂、调味品和发酵制品。
第2章微生物的分离与纯培养
培养物：在一定条件下培养、繁殖得到的微生物群体 ① 混合培养物：含有多种微生物的培养物 ② 纯培养物： 只有一种微生物的培养物 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果
纯培养技术是进行微生物学研究的基础！
一、无菌技术
从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研 究和利用微生物的第一步。
用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
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二、用固体培养基分离纯培养
使微生物在固体培养基平板上形成单个菌 落的基本方法：
稀释！
1、涂布平板法（spread plate method)
使用较多的常规方法， 但有时涂布不均匀！
2、稀释倒平板法（pour plate method)
培养基类型
凝固剂含量 （以琼脂计）
主要用途
固体培养基
1.5%-2.0% 微生物分离、鉴定、计数
半固体培养基 0.5%-0.8% 观察微生物运动特征、鉴定菌种
液体培养基
大规模工业生产及在实验室进行
无
微生物的基础理论和应用方面的
研究
二、用固体培养基分离纯培养
菌落（colony）：
单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面 或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形 态结构的子细胞生长群体
注意：
在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要
结合显微镜检测个体形态特征后才能确定 有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过
程和多种特征鉴定才能得到
二、用固体培养基分离纯培养
4、厌氧微生物的分离
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纤维素能被土壤中某些微生物分解 利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。
棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。
一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶
2.纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它 至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX 酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤 维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二 糖分解成葡萄糖。
1. 培养流感病毒时，应选用( C
)
A．固体培养基
C．活的鸡胚
B．含有多种无机盐的培养液
D．无菌的牛肉汤
2．微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质并通过
代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说 法正确的是( D ) A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的 B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长 因子 C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利 D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合
4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 ⑴制备鉴别培养基:
配方见书本29页。操作过程见课题1
（2）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬 液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置 培养。
ห้องสมุดไป่ตู้
5.刚果红染色法
方法一：先 培养微生物 ，再加入刚果红进 行颜色反应。
倒平板 方法二：在 时就加入刚果红。
某化工厂的污水池中，含有一 种有害的、难于降解的有机化 合物A。研究人员用化合物A、 磷酸盐、镁盐以及微量元素配 制的培养基，成功地筛选到能 高效降解化合物A的细菌(目的 菌)。实验的主要步骤如图所 示。请分析回答问题：（北京 卷）
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培 化合物A ，实验需要振荡培养，由此 养基中的 异养需氧 推测“目的菌”的代谢类型是 。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选：
3.优点： 该方法可以通过颜色反应直接筛选。
二.实验设计与操作 ㈠.实验设计：
土壤取样 选择培养 梯度稀释
将样品涂布到鉴别 纤维素分解菌的培 养基上
挑选产生透明圈 的菌落
操作步骤
1、土壤取样：
①分布环境 富含纤维素的环境中 ②原因 由于生物适应一定的环境，环境对生物有选 择作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分 解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获 得目的微生物的几率要高于普通环境。
成这些生长因子的能力往往不足
3．在接种操作的过程中，不正确的是( C ) A．要将接种环灼烧灭菌 B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌
C．将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位 D．接种后还要将管口灭菌加塞 4．高压蒸气灭菌的原理是( B ) A．高压使细菌DNA变性
B．高压使细菌蛋白质凝固变性
C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性
A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？
答：有选择作用，本配方中以纤维素作为 答：用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照。或 答：是液体培养基，原因是配方中无凝固剂 唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物可以 者将纤维素改为葡萄糖。 （琼脂） 大量繁殖。
2、选择培养 ③操作：
称取土样20 g，在无菌条件下加入装 有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于 摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d， 至培养基变混浊。吸取一定的培养液 （约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择 培养基中，以同样的方法培养到培养液 变浑浊。
〖旁栏思考题〗本实验的流程与课题2中的 实验流程有哪些异同？
提示：课题2是将土样制成的菌悬液直 接涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培 养基上，直接分离得到菌落。 本课题先通过选择培养，使纤维素分解 菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培 养基上。其他步骤基本一致。
㈡.操作过程：
1.土壤取样：
采集土样时，应选择富含纤维素的环境。若找不 到合适环境，可将滤纸埋在土壤中一个月左右，也会 有能分解纤维素的微生物生长。 〖旁栏思考题〗为什么要在富含纤维素的环境中寻找 纤维素分解菌？ 答：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用， 只有在纤维素含量丰富的环境中纤维素分解菌的含量 才会高于其它普通环境，从而提高获得目的微生物的 几率。 〖旁栏思考题〗将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认 为滤纸应该埋进土壤多深？ 答：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。 将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。
③实例：树林中多年落叶形成的腐殖 土，多年积累的枯枝败叶等。 ④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤 纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么 作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？
答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分 解菌相对集中，实际上是人工设置纤 维素分解菌生存的适宜环境。一般应 将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。
某化工厂的污水池中，含有一 种有害的、难于降解的有机化 合物A。研究人员用化合物A、 磷酸盐、镁盐以及微量元素配 制的培养基，成功地筛选到能 高效降解化合物A的细菌(目的 菌)。实验的主要步骤如图所 示。请分析回答问题：
(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化 合物A含量 减少 的培养液，接入新 的培养液中连续培养，使“目的菌”的 数量 增加 。
2、选择培养 ①目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够 从样品中分离所需要的微生物。 阅读书本P29 纤维素分解菌的选择培养基 配方，回答问题。
2、选择培养 ②制备选择培养基：
B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有， 是如何进行选择的？ C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用
5．在105稀释度下，平板上生长的平均菌落数为50则每克 样品中的菌落数是………( )A A．5×107 B．50 C．5×108 D．50×3 6．下列属于菌落特征的是…………( B ) ①菌落的形状 ②菌落的大小 ③菌落的多少 ④隆起程度 ⑤颜色 ⑥有无荚膜 A．①②③④ B．①②④⑤ C．②③④⑥ D．①②③④⑤⑥ 7．能排除培养基是否有杂菌污染的方法是……( C ) A．将未接种的培养基放在实验桌上培养 B．将未接种的培养基放在窗台上培养 C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养
〖旁栏思考题〗这两种方法各有哪些优点 与不足？
染色法 优点 缺点
颜色反应基本 操作繁琐 方法一 上是纤维素分 刚果红会使菌落之间发生 解菌的作用 混杂 1.产生淀粉酶的微生物也 操作简便不 产生模糊透明圈 存在菌落混 2.有些微生物能降解色素， 杂问题 形成明显的透明圈。
方法二
6、纯化培养
在产生明显的透明圈的菌落，挑取 并接种到纤维素分解菌的选择培养 基上，在300C－ 370C培养，可获得 纯化培养。
纤维素 C1酶、Cx酶
纤维二糖
葡萄糖苷酶
葡萄糖
一.基础知识
㈠.纤维素与纤维素酶 3.纤维素的分解：
能分解纤维素的微生物，有各种细 菌、真菌和少数放线菌。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选：
1.方法： 刚果红染色法。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 2.原理：
刚果红可以与纤维素形成红色复合物， 当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合 物无法形成，出现以纤维素分解菌为中 心的透明圈，我们可以通过是否产生透 明圈来筛选纤维素分解菌。
〖旁栏思考题〗为什么选择培养能够“浓缩” 所需的微生物？
提示：在选择培养的条件下，可以使那 些能够适应这种营养条件的微生物得到 迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件 的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到 “浓缩”的作用。
3.梯度稀释
按照课题1的稀释操作方法，将 选择培养后的培养基进行等比稀 释101～107倍。
2.选择培养
⑴.选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中 分离到所需要的微生物。
⑶选择培养： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶 中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震 荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复 选择培养。
课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是 否筛选出菌落： 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说 明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落， 则说明可能获得了分解纤维素的微生物 （二）分离的结果是否一致： 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌 的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所 取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌 等不同的分离结果。
(5)若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌 落进行液体培养，可采用的方法进行计数， 细菌数目的对数 为纵 以时间为横坐标，以 坐标，绘制生长曲线。
某化工厂的污水池中，含有一 种有害的、难于降解的有机化 合物A。研究人员用化合物A、 磷酸盐、镁盐以及微量元素配 制的培养基，成功地筛选到能 高效降解化合物A的细菌(目的 菌)。实验的主要步骤如图所 示。请分析回答问题：
8、(20分)某化工厂的污水池中， 含有一种有害的、难于降解的 有机化合物A。研究人员用化 合物A、磷酸盐、镁盐以及微 量元素配制的培养基，成功地 筛选到能高效降解化合物A的 细菌(目的菌)。实验的主要步 骤如图所示。请分析回答问题：
(1)培养基中加入化合物A的目的是筛 选 目的菌，这种培养基属于 选择性 培养基。
专题二
课题3
微生物的培养与应用
分解纤维素的微生物 的分离
一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 1.纤维素
纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成 的高分子化合物，是含量最丰富的多糖 类物质。
思考：纤维素是地球上含量最丰富的 多糖类物质，植物每年产生的纤维素 超过70亿吨，但却不会在地球上大量 的积累，为什么？
某化工厂的污水池中，含有 一种有害的、难于降解的有 机化合物A。研究人员用化 合物A、磷酸盐、镁盐以及 微量元素配制的培养基，成 功地筛选到能高效降解化合 物A的细菌(目的菌)。实验的 主要步骤如图所示。请分析 回答问题：
(4)转为固体培养时，常采用 划线 方 法接种，获得单菌落后继续筛选。