微生物的接种、分离和培养
实验六微生物的接种、分离和培养
一、目的要求
1．理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理及操作要领。
2．熟悉微生物接种、分离的无菌操作过程。
3．了解微生物需氧培养的方法。
4．学会观察和描述微生物的各种培养性状。
二、实验原理
1. 微生物接种
指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。根据不同的目的可采用的不同的接种方法，如平板划线法、斜面划线法、浸洗法、涂布法、倾注法、穿刺法、点植法和影印法。
2. 微生物分离
指依据微生物的特征，采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体（如单一菌体或孢子）或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。常用的分离方法有：平板划线法、稀释涂布平板分离法、稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。
平板分离法的基本原理包括两个方面：
（1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入
某
种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
（2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
3. 微生物培养
指微生物被接种到营养基质后，在一定条件下生长繁殖的过程，分需氧培养法和厌氧培养法。本实验所做的需氧培养法，是采用生化培养箱和恒温摇床进行的。
4. 微生物的培养形状
培养性状是微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。平板菌落特征、斜面和液体培养特征、半固体穿刺培养特征等培养性状，是鉴定微生物的重要形态学依据。
菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的眼可见的子细胞群体。菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用培养基、培养温度和时间等条件不同而存在
不同程度的差异。若所用培养基、培养温度和时间等条件相同，则同一种菌所形成的菌落形态具有相对的稳定性和专一性。
三、实验材料
1. 菌种大肠杆菌(Escherichia coli)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），热带假丝酵母（Candida tropicalis），毛霉(Mucor sp.)，根霉（Rhizopus sp.），黑曲霉(A.niger)，青霉(Penicillium sp.)，混合菌液。
2. 培养基营养琼脂斜面和平板，半固体营养琼脂直立柱，PDA 斜面和平板。
3. 接种工具接种环，接种针，涂布棒，无菌吸管等。
4. 其他酒精灯，生化培养箱等。
四、实验方法与步骤
（一）实验项目
接种前的准备：接种的试管、培养皿等应做好标记，注明菌种的名称，日期、接种者等。
表6-1实验项目
实验项目所用菌种
所用培养基
方法提示
名称用量
分
离
方
法
1.平板划
线分离
法
混合菌滴营养琼脂平板2皿
左手拿平板，并负责开启皿
盖，右手持接种环，取菌少许
后在平板上作分区划线。
分
离
方
法
2.稀释倾
注平板
分离法
大肠杆菌营养琼脂平板1皿
①取稀释好的菌液1mL加入
灭菌的空平皿
②加入15mL45℃的融化琼
脂，水平转动平皿
3.稀释涂
布平板
分离法
大肠杆菌营养琼脂平板1皿
取稀释好的菌液0.1mL加入到
平板上→用灭菌涂布棒涂开
涂匀
（二）各种接种方法的操作步骤
所有待接种的培养基在接种前都要先贴好标签，整个接种过程都必须在酒精灯旁进行。
1．斜面接种
斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：
（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后才能点燃酒精灯。
（2）用斜面进行接种时，将原菌种管和待转接斜面试管夹在左手的大拇指和其它四指之间，斜面朝上，并处于水平位置。（图6-1，1）
1 2 3
4 5 6
图6-1 斜面划线接种示意图
（3）先将原菌种管和待转接斜面试管的硅胶塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）右手拿接种环（与日常拿笔一样）在火焰上将环金属丝部分烧红灭菌，然后将其余要伸入试管部分的金属柄也反复通过火焰灭菌。（图6-1，2）
（5）用右手小指、无名指或手掌将原菌种管和待转接斜面试管的硅胶塞同时拔出并把硅胶塞握住，不得任意放在桌上或与其它物品相接触，再以火焰烧管口（图6-1，3）。
（6）将上述在火焰上灭菌过的接种环伸入菌种管，接种环在接触菌种前先在试管壁上或未长菌落的培养基面上接触一下，使接种环充分冷却，以免烫死菌种，然后用接种环轻轻沾取少量菌苔，接着将接种环自菌种管抽出。抽出时勿与管壁相碰，也勿通过火焰（图6-1，4）。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面试管中，自斜面培养基底部向上划线，使菌体沾附在培养基的斜面上，划线时环要平放，勿用力，否则会使培养基表面划破（图6-1，5）
（8）接种完毕后将接种环抽出，灼烧一下管口，塞上硅胶塞，塞棉塞时勿要用试管口去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。（图6-1，6）。
（9）接种环放回原处前要在火焰上彻底灭菌，接种致病菌时更要注意这点。将棉塞旋紧。注意：棉塞与火焰的距离要适当，以免棉塞燃烧。
2．穿刺接种
（1）操作方法见图6-2，可以水平穿刺，也可以垂直穿刺，所使用的接种针要笔直。
（2）将接种针自培养基中心刺入，直到接近管底，但勿穿透，然后沿原穿刺途径慢慢拔出。
图6-2 穿刺接种示意图
3．平板接种
（1）划线接种见分离划线法。
（2）涂布接种用无菌吸管吸却菌液注入平板后，用灭菌的玻璃在平板表面作均匀涂布
（图7-3）。
（3）三点接种法
①标明三点位置：欲使点接的三点分布均匀，可用记号笔先在平板底部以等边三角形
状标上三点。
②取接种针：拿接种针，先在火焰上烧红灭菌，并在平板培养基的边缘冷却且蘸湿。
③沾取孢子：将灭过菌并蘸湿的接种针伸入菌种管,用针尖沾取少量霉菌孢子。
④点接：操作方法基本同穿刺接种，以垂直法或水平法把接种针上沾着的孢子以垂直的方向轻轻的点接到平板培养基表面预先做好标记的部位。注意在点接时切勿刺破培养基。
4．分离方法
（1）涂布平板分离法
涂布平板分离法是样品经过适当稀释后，用无菌吸管吸取0.1mL于固体培养基平板中，用无菌玻璃涂棒将稀释液均匀地涂布，使样品中的菌体经过培养后能在平板表面上形成单个菌落。（图6-3）
（2）稀释倾注平板分离法
倾注平板分离法是最常用的纯种分离法,先将待分离的材料作一系列的稀释（如1:10,1:100,1:1000,1:10,000……),然后分别取不同稀释液少许（一般取0.1mL）,与已熔化并冷却至45℃的琼脂培养基相混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,保温培养一定时间即可出现菌落.如果稀释得当,平皿上就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细胞繁殖形成的.随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养。（图6-4）（3）平板划线分离法
划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。常用的划线方法有下列二种：
用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线1～2 条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。（图6-5）将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。
图6-3 稀释涂布平板分离法
图6-4 稀释倾注平板分离法
a（适用于浓度较低的菌液）b（适用于浓度较高的菌液）
图6-5 平板划线分离法
（三）培养
细菌于37℃恒温箱中培养，24 h 后开始观察生长情况。酵母菌、霉菌28℃恒温箱中培养，48h 后开始观察生长情况。
注意：平板应倒置培养。 （四）微生物培养形状观察
参照下表容，认真观察和记录接种的各种细菌、酵母菌、霉菌的培养性状。
表6-2微生物培养性状
观察容
常用描述述语
平板菌落特征
大小
微菌落（﹤1mm 〉、小菌落（1—2mm ）、中等大菌落 （2—4mm ）、大菌落（4—6mm ）、巨大菌落（﹥6mm ） 形态 圆形、假根状、不规则状、丝状、卷发状、菌丝状等
隆起度 扩展、稍起凸、隆起、凸面、乳头状等 边缘 整齐、缺刻状、圆锯齿形、波状、裂叶状等
透明度 透明、半透明、不透明
表面形状 平滑、粗糙、颗粒状、同心环状、放射状、丝状、树状
等
表面光泽 闪光、不闪光、金属光泽等 颜色 无色、灰白色、金黄色、红色、黑色等
质地
粘液状、蜡状、干燥、湿润等 （划直线接种
）
斜
面
培养性
状
生长程度 生长良好、微弱、不生长 菌苔形态 线状、串珠状、根状、扩展状、棘状
菌苔隆起度
扁平、凸起
观察容
常用描述述语 表面形态 平滑、粗糙、颗粒状等 透明度 透明、半透明、不透明 质地 粘液状、腊状、干燥、湿润 颜色
无色、灰白色、金黄色、红色、黑色 刺培养性状
半固体穿 生长程度
良好、较好、一般、微弱、不生长
沿穿刺线 生长形状 线状、棘状、珠状、绒毛状、根状、扩散生长
图6-6 菌落形态特征
菌落总体形状和边缘状况可由菌落上方俯视观察，而菌落高度则由平板边缘水平观察。
微生物的接种技术
1目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3实验器材 3.1器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2菌种和培养基 菌种： 大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）。 培养基： 普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5操作步骤
5.1斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基： 用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。
微生物的接种、分离和培养
实验六微生物的接种、分离和培养 一、目的要求 1．理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理及操作要领。 2．熟悉微生物接种、分离的无菌操作过程。 3．了解微生物需氧培养的方法。 4．学会观察和描述微生物的各种培养性状。 二、实验原理 1. 微生物接种 指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。根据不同的目的可采用的不同的接种方法，如平板划线法、斜面划线法、浸洗法、涂布法、倾注法、穿刺法、点植法和影印法。 2. 微生物分离 指依据微生物的特征，采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体（如单一菌体或孢子）或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。常用的分离方法有：平板划线法、稀释涂布平板分离法、稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。 平板分离法的基本原理包括两个方面： （1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入 某 种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 （2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。 因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。 值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。 3. 微生物培养 指微生物被接种到营养基质后，在一定条件下生长繁殖的过程，分需氧培养法和厌氧培养法。本实验所做的需氧培养法，是采用生化培养箱和恒温摇床进行的。 4. 微生物的培养形状 培养性状是微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。平板菌落特征、斜面和液体培养特征、半固体穿刺培养特征等培养性状，是鉴定微生物的重要形态学依据。 菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的眼可见的子细胞群体。菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用培养基、培养温度和时间等条件不同而存在
模板土壤微生物的分离培养技术实验报告.doc
重庆大学研究生专业实验教学 实验报告书 实验课程名称： 实验指导教师： 学院： 专业及类别： 学号： 姓名： 实验日期： 成绩： 重庆大学研究生院制
一、实验目的 1、了解分离与纯化微生物的基本原理及方法； 2、了解倒平板配制土豆培养基的方法与平板划线分离的基本操作技术；； 3、学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能； 4、初步观察来自土壤中的几类微生物的菌落形态特征，并能判断菌的类型。 二、实验原理 1、培养基的种类 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别、保存各种微生物或积累代谢产物。一般的培养基应包含适合微生物生长的6大营养素即水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子。培养基的种类很多，根据培养成分的不同可分为天然培养基、合成培养基与半合成培养基；根据物理状态的不同又可分为液体培养基和固体培养基。微生物的分离、纯化、记数等方面的研究常常使用的就是固体培养基。本实验就是使用的固体培养基。 已配制好的培养基必须立即灭菌，如来不及灭菌，应暂存冰箱，以防止其中微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养基酸碱度所带来不利影响。 培养基的原材料来源十分广泛，本实验采用的原材料为土豆。 2、接种方法与无菌接种 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。接种的关键是要严格的进行无菌操作。微生物的接种方法很多，划线接种、三点接种、穿刺接种、混浇接种与涂布接种是几种常用的接种方法。 划线接种是最常用的接种方法，即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可以达到接种的目的。常用的接种工具为接种环、针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。
(完整版)微生物的接种技术
微生物的接种技术 1 目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2 实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3 实验器材 3.1 器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2 菌种和培养基 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4 实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5 操作步骤 5.1 斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2 液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。 由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。 接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。 5.3 固体接种法 普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。按所用菌种或种子菌来源不同可分为： 用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。 用固体种子接种固体料。包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。
微生物的分离与培养
病原物的分离与培养 病原物的分离与培养在植物病害的研究中具有重要意义，分离、培养病原菌的方法是植物病理学研究工作中最常应用的实验技术。一方面，在一个新的病害研究中，通过分离与培养获得病原物的纯培养，完成柯氏法则，以明确该病病原；研究病原物的生物学特性和病害循环（侵染、病程等等）。所谓病原物的分离，即把该病原菌从发病组织上与其他微生物分开；所谓病原物的培养，即将分离的病原菌移到可以让这种病原菌正常生长的营养基质即培养基上，从而获得其纯培养。病原物的分离与培养，需经以以几个步骤: 1.有关器皿的灭菌和消毒； 2.制作培养基； 3.病原菌的分离 4.病原菌的培养。 －、灭菌与消毒 灭菌与消毒是两个不同的概念。灭菌则是指杀死一切微生物的营养体和孢子。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体，在植物病理学实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此对所用器材、培养基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。消毒与灭菌的方法很多，一般可分为加热、过滤、辐射和使用化学药品等方法。 (一) 热力灭菌 热力灭菌分干热灭菌和湿热灭菌两类。 1．干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质疑固性与其本身的含水量有关。在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高(160～170℃)，时间长1～2 h。但干热灭菌温度不能超过180 ℃，否则包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。干热灭菌使用的仪器是烘箱。 干热灭菌有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，无菌操作时酌试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。涂布平板用的三角玻棒也可在蘸有乙醇后进行灼烧灭菌。通常所说的干热灭菌是在烘箱内利用高温干燥空气(160～170℃)进行灭菌。此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌。 进行干热灭菌要注意以下问题：物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；灭菌物品不要接触烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火；
实验 微生物接种技术
实验微生物接种技术 一、目的： 学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。 二、原理： 所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。 三、实验材料： 斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。 四、操作步骤 （一）无菌操作 菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。 操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。 （二）接种方法 （1）斜面接种： 从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。此法用于好气性微生物 的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。用右手先将棉塞拧转松 动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在 火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底 部，沿斜面划曲线或直线。 图1. 斜面接种示意图
（2）液体接种： 由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。 （3）穿刺接种： 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。 （4）平板接种： 将菌种接至培养皿的方法，平板接种的目的是观察菌落形态、分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验时采用的一种接种方法，可分为下面几种： 1)斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细胞，轻轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）即可。 2)平板接斜面：一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保存之用。 五、思考题 1．何谓无菌操作？接种前应作哪些准备工作？ 2．总结几种接种方法的要点及应注意的事项？
微生物培养方法
微生物的培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
微生物的分离、接种及培养技术
实验微生物的分离、接种和培养技术 一、目的要求 1、了解微生物分离和纯化的原理，掌握常用的分离纯化微生物的方法 2、学习掌握微生物的接种技术，建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节。 二、实验原理 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 三、实验器材 培养基：营养琼脂培养基，伊红美蓝培养基 器皿：培养皿，接种环，酒精灯，玻璃涂棒，显微镜 四、操作方法 1、倒平板：将已经制备好的营养琼脂培养基加热溶化待冷至55～60℃时倒入灭过菌的培养皿中。 2、涂布：在上述培养基中用无菌吸管吸取湖水的稀释液0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置，用无菌玻璃涂棒，右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。室温下静置5～l0min，使菌液浸入培养基。 3、培养：上述培养基平板倒置于37℃温室中培养24h。 4、伊红美蓝培养基准备：在已经制备好的伊红美蓝培养基中加入乳糖，加热溶化琼脂，冷却至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板； 5、分离：将培养后长出的单个菌落挑取少许细胞，用无菌玻璃涂棒，右手拿无菌
微生物的分离与培养知识点
微生物的分离与培养知识小结与专题训练 一、微生物的培养和分离技术 1.微生物生长需要的营养物质一般都含有水、碳源、氮源、无机盐 牛肉膏又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。 蛋白胨，是有机化合物。蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。 对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。 2.培养基的制作合格与否通过未接种的培养基表面是否有菌落生长来验证 3.常用的无菌技术有 ⑴对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 ⑵将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ⑶为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ⑷实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 考点细化： ①灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒是指用较为温和的理化方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢、孢子。 ②灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌用于接种用的金属工具；干热灭菌用于能耐高温的，需要保持干燥的玻璃器皿等；高压蒸汽灭菌用于培养基等 ③消毒的方法有煮沸消毒法，用于液体消毒；巴氏消毒法，用于不耐高温的液体；化学药剂（如用体积分数70%-75%的酒精）或紫外线消毒，用于物体表面的消毒。 4.微生物的纯培养指的是防止外来杂菌入侵。 5.配制固体培养基的步骤：计算、称量、溶化、（调节pH、分装、包扎）灭菌、倒平板 6.微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是纯化的菌落。 ★平板划线法中的注意事项 ①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：
实验3-微生物接种技术
实验三微生物接种技术 一、实验目的 1、掌握无菌操作在微生物接种过程中的重要性。 2、掌握几种常用的微生物接种方法。 3、掌握微生物微生物扩大繁殖的基本方法。 4、认识微生物接种工具 二、实验原理 微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。为此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作；同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种针、接种环、移液管和玻璃刮铲等。 三、实验器材 主要仪器及设备无菌室、超净工作台、培养箱、振荡器、接种针、接种环、接种钩、接种铲，试管固体斜面培养基、培养基平板、三角瓶液体培养基，PDA平板及斜面，牛肉膏-蛋白胨-琼脂平板、斜面培养基、牛肉膏-蛋白胨液体培养基、试管半固体培养基。 菌种大肠杆菌（Escherichia coli)、青霉(Penicillium sp．)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Hansen)、细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)放线菌等。 四、操作步骤 (一)斜面接种技术具体操作如下： 1、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口径2-3厘米的位置。 2、点燃酒精灯。 3、接种用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。无菌操作程序简述如下： ⑴手持试管将菌种和用于接种的斜面两支试管用大拇指和其他四指握在左手中、使中指位于两试管之间。斜面向上，并使它们位于水平位置(图a)。 ⑵旋松棉塞先用右手将棉塞旋松，以便接种时易于拔出。 ⑶取接种环右手拿接种环在火焰将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分，均用火烧过灭菌。 ⑷拔棉塞用右手的无名指、小指和手掌边先后拔出试管的棉塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)，如图b、c所示。 ⑸环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。 ⑹取菌种待环冷却后轻轻沾取少量菌或孢子，然后将接种环移出接种管，如图d所示，注意不要使环的部分碰到管壁，取出后不可使环通过火焰。 ⑺接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的
微生物的接种、分离纯化与培养方法
微生物的接种、分离纯化与培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。实验内容： 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图３－３） 图３－３接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 ４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45° C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。
微生物的分离与纯化
一、实验目的：掌握无菌技术的操作，尝试用平板划线法和稀释涂布平板法分离纯化酵母菌。 二、实验步骤 （1）制备培养基（马铃薯琼脂培养基）：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板（已完成） （
三.巩固检测 1．获得纯净培养物的关键是( ) A．在无菌环境中培养B．接种纯种细菌 C．接种环灼烧灭菌D．防止外来杂菌的污染 2．巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，该消毒法就是加热到70～75 ℃、保持30 min，或加热到80 ℃、保持15 min，能杀死一般杂菌和病原菌。这与灭菌的要求相比，巴氏消毒法( ) A．不能杀灭芽孢和孢子B．只能杀灭芽孢等休眠状态的细菌 C．能杀灭各种细菌，包括芽孢D．能杀灭各种真菌，包括孢子 3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部分的微生物（） A．接种环、手、培养基 B. 高压锅、手、接种针 C. 培养基、手、接种环 D. 接种环、手、高压锅 4.下列操作与消毒或灭菌无关的是（） A. 接种前用酒精灯火焰灼烧接种环 B. 接种前用酒精擦试双手 C. 接种在酒精灯水焰旁完成 D. 培养基在冷却到50℃ 时倒平板 5．制备固体培养基的步骤是( ) A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板 6.平板冷却凝固后要将平板倒置，其意义是（） A. 防止菌种死亡B．利于培养基的冷却 C．利于大肠杆菌的接种D．防止皿盖上的冷却水倒流入培养基 7．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温箱培养的目的是（）A．为了检测温度是否最适宜B．检查培养基是否灭菌彻底 C．为了下次接种时再使用D．没必要放入未接种的培养基 8. 下列关于平板划线操作的叙述正确的是（） A．使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌 B．打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞10. 稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是（） A．操作中需要将菌液进行一系列的梯度稀释 B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 11. 下列关于平板划线法和稀释涂布平板法纯化大肠杆菌的叙述，正确的是（） ①可以获得单个的菌落②都需要使用接种环进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌． A．①② B. ③④ C.①③ D. ②④ 12. 下列有关实验室中微生物培养和分离的叙述，错误的是（） A. 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵 B. 高温灭菌的目的是杀死所有微生物 C. 划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落 D. 稀释涂布平板法可用于计数活菌数目 13. 平板划线法：通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是。 14. 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的，然后将不同稀释度的菌液分别 在琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成。 15．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109 个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题： （1）测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用稀释涂布平板法进行测定。 该方法首先配置LB 培养基，进行高压蒸汽灭菌后冷却至60℃，在 旁倒在培养皿中形成平板；对奶茶样品进行一定倍数的稀释，取0.1mL 奶茶稀释液，加在培养皿的固体培养基上，用涂布在培养基平面上，然后进行培养；观察统计培养皿中的数目；该数据比实际数值要(高、低)，原因是 C．将培养皿盖全部打开后，用沾有菌液的接种环进行划线接种 D. 接种时，接种环在培养基上迅速划线后盖上皿盖 9. 在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数，下图是利用平板划线法进行微生物接种过程中的部分操作，有关叙述不正确的是（） A．每次划线前都需要灼烧接种环 B．接种环冷却后从上一区划线的末端开始划线 C．最后一区和第一区要保证不重叠 D．只有在图中的5 区域才可以得到所需菌落 。实验完成后需要对培养基进行处理，然后才能倒掉。（2）若要对上述培养基中的菌种进行扩大培养，则需配置LB 培养基，灭菌后，将在酒精灯火焰上烧红后冷却，然后蘸取单菌落中的菌体接种到新的培养基中，在适宜环境中培养。
微生物的分离培养方法
微生物的接种、分离纯化与培养方法 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图３－３） 图３－３接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 ４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料
实验二 微生物接种技术
实验二微生物接种技术 一、目的 微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。 了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。 二、原理 接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。 我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。 三、材料、试剂与器具 1．材料苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋白 胨斜面培养基。 2．试剂 75%酒精或1：50的新法尔天水溶 液。 3．超净工作台，接种针（环），接种工具 （如图3-1）、酒精灯等。 图3-1 接种工具 A.接种环； B.接种针； C.接种钩； 四、操作步骤 （一）准备工作 1．接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用5%的石炭酸喷务灭菌；用紫外灯照射
20~30min。也可达到灭菌的目的。应注意，要把接种时要所需的用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入，以免死。超净工作要预先通风，紫外线照射30min方可使用。
实验二 微生物接种技术电子教案
实验二微生物接种技 术
实验二 微生物接种技术 一、目的 微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。 了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。 二、原理 接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。 我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但是它们的基本要求是相同的。通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。 三、材料、试剂与器具 1．材料 苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋 白胨斜面培养基。 2．试剂 75%酒精或1：50的新法尔天水 溶液。 3．超净工作台，接种针（环），接种工 具（如图3-1）、酒精灯等。 四、操作步骤 （一）准备工作 1．接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用5%的石炭酸喷务灭菌；用紫外灯照射20~30min 。也可达到灭菌的目的。应注意，要把接种时要所需的用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入，以免死。超净工作要预先通风，紫外线照射30min 方可使用。 2．进入接种室前先把手洗净，再用75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面同样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。 （二）接种技术 图3-1 接种工具 A. 接种环；B.接种针；C.接种钩； D.接种铲； E. F.玻璃涂布器
常用的微生物分离纯化方法
(一)常用的微生物分离纯化方法 菌种分离纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用,不需要特殊的仪器设备,分离纯化效果好,现分别简述如下 1.稀释混合倒平板法 平板是指经熔化的固体培养基倒入无菌培养皿中,冷却凝固而成的盛有固体培养基的平皿。该法是先将待分离的含菌样品,用无菌生理盐水作一系列的稀释(常用十倍稀释法,稀释倍数要适当),然后分别取不同稀释液少许(0.5-1.0ml)于无菌培养皿中,倾入已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基,迅速旋摇,充分混匀。待琼脂凝固后,即成为可能含菌的琼脂平板。 于恒温箱中倒置培养一定时间后,在琼脂平板表面或培养基中即可出现分散的单个菌落。每个菌落可能是由一个细胞繁殖形成的。
挑取单一个菌落,一般再重复该法1-2次,结合显微镜检测个体形态特征,便可得到真正的纯培养物。若样品稀释时能充分混匀,取样量和稀释倍数准确,则该法还可用于活菌数测定。 图4混合倒平板操作法示意图图5涂布平板操作法示意图 2.稀释涂布平板法 采用上述稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间,缺乏溶氧而生长受影响,形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高,易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固,不能充分混匀。
在微生物学研究中,更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基,先倒入无菌培养皿中,制成无菌平板。待充分冷却凝固后,将一定量(约0.1ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面,再用三角形无菌玻璃涂棒涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面,倒置温箱培养后挑取单个菌落。 另一种简单快速有效的涂布平板法,可省去含菌样品悬液的稀释,直接吸取经振荡分散的样品悬浮液l滴加入1号琼脂平板上,用一支三角形无菌玻璃涂棒均匀涂布,用此涂棒再连续涂布2号、3号、4号平板(连续涂布起逐渐稀释作用，涂布平板数视样品浓度而定),翻转此涂棒再涂布5号、6号平板,经适温倒置培养后挑取单个菌落。该法可称之为玻璃涂棒连续涂布分离法。 3.平板划线分离法 先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来。经培养后,可在平板表面形成分散的单
生物选修一微生物的培养与应用
专题2 微生物的培养与应用 课题3 分解纤维素的微生物的分离 一、基础知识回顾 1、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基种类：液体培养基和固体培养基，二者的区别是是否添加凝固剂，其中实验室中常用的凝固剂是琼脂。 3、培养基营养成分：（1）主要营养物质：碳源、氮源、水和无机盐。（2）其他条件：pH、特殊营养和氧气。 4、微生物的培养和分离过程中的无菌技术：(1)目的：获得纯净的培养物。 (2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)常用方法：灭菌（培养皿—干热灭菌；培养基—高压蒸汽灭菌；接种环—灼烧灭菌）和消毒（操作者灭双手—化学消毒；操作室—紫外线消毒）。 5、高压蒸汽灭菌法：压力为100 kPa，温度为121℃，灭菌时间为15~30min. 6、巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是由法国微生物学家巴斯德发明的低温杀菌法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法，常常被广义地用于定义需要杀死各种病原菌的热处理方法。 7、干热灭菌法是指在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法。适用于干燥粉末、凡士林、油脂等。 8、倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 9、菌落：由单个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 10、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 11、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。 12、微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。 13、平板划线操作中灼烧接种环的目的：第一次划线前：杀死接种环上原有的微生物，防止外来杂菌污染培养基；第二次及以后每次划线前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。 最后一次划线后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 14、菌种的保藏方法：（1）临时保藏法：（适合于频繁使用的菌种）先接种到试管的固体斜面培养基上培养，然后放入 4 ℃的冰箱中。（2）甘油管藏法（适合于长期保藏的菌种）转入灭菌后的甘油中，混匀后放在-20 ℃冷冻箱中保存。 15、培养基中营养物质的确定方法： ①自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。 ②异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 16、选择无菌技术的原则。①考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。 ②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能灭菌。 17、纯化大肠杆菌的两种方法的异同。①相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。②不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。 18、微生物的生长需要碳源、氮源等营养物质，培养基中的牛肉膏、蛋白胨为微生物的生长既提供了碳源，也提供了氮源。微生物培养通常采用的培养基是固体培养基，其中的琼脂，