常用蛋白标签
常见tag蛋白标签介绍讲课讲稿
常见t a g蛋白标签介绍蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。
随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。
目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。
美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag™、Halo Tag™、AviTag™、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。
•标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；•His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
•可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
•融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
蛋白标签技术简介及常用蛋白标签
蛋白标签技术简介及常用蛋白标签蛋白质作为生命活动的主要执行者，人们对其功能和生物学机能的研究逐步深入。
那么如何分离和研究某一特定蛋白呢？蛋白标签技术的广泛应用可以有效的解决这令许多研究者颇为头疼的问题。
目前，一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。
这类多肽或蛋白，被称为蛋白标签（Protein Tag）。
例如MyC、His、GST、HA等。
而标签抗体可以高特异地结合对应的标签融合多肽或蛋白，籍以分离纯化和分析检测目的蛋白。
目前，云克隆推出了一系列蛋白标签抗体，让您从容面对蛋白实验。
先简单介绍一下系列蛋白标签。
HA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。
易于被Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
MYC标签蛋白，MYC标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。
Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
FLAG，Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
GST，谷胱甘肽巯基转移酶在解毒过程中起到重要作用，它的天然大小为26KD。
由于GST高度可溶，可增加外源蛋白的可溶性，另外GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可提高表达量。
GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。
而且，GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。
常见tag蛋白标签介绍
卵白标签之阿布丰王创作卵白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术,与目的卵白一起融合表达的一种多肽或者卵白,以便于目的卵白的表达、检测、示踪和纯化等.随着技术的不竭发展,研究人员相继开发出了具有各种分歧功能的卵白标签.目前,这些卵白标签已在基础研究和商业化产物生产等方面获得了广泛的应用.美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种卵白标签,可以满足客户的分歧需求,包括各种最新型的标签,如：SNAP-Tag™、Halo Tag™、AviTag™、Sumo等；也提供齐全的各种经常使用标签,如eGFP、His、Flag等等标签.以下是部份卵白标签的特性介绍,更加详细的介绍可在查询克隆产物的结果列内外面看到各种推荐的卵白标签和载体.TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签,可拔出在目的卵白的C 末端或N末端.当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成共同的结构特征（结合配体）利于纯化.组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组卵白进行分离纯化. 使用His-tag有下面优点：•标签的分子量小,只有~0.84KD,而GST和卵白A分别为~26KD 和~30KD,一般不影响目标卵白的功能；•His标签融合卵白可以在非离子型概况活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的卵白获得应用,后者在纯化包容体卵白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂卵白,使复性不受其它卵白的干扰,或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合卵白也被用于卵白质-卵白质、卵白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低,可将纯化的卵白直接注射植物进行免疫并制备抗体.•可应用于多种表达系统,纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签.Flag标签卵白Flag标签卵白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK）,同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. FLAG作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：•FLAG作为融合表达标签,其通常不会与目的卵白相互作用而且通常不会影响目的卵白的功能、性质,这样就有利用研究人员对融合卵白进行下游研究.•融合FLAG的目的卵白,可以直接通过FLAG进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合卵白,而且纯化效率高.•FLAG作为标签卵白,其可以被抗FLAG的抗体识别,这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合卵白进行检测、鉴定.•融合在N真个FLAG,其可以被肠激酶切除（DDDK）,从而获得特异的目的卵白.因此现FLAG标签已广泛的应用于卵白表达、纯化、鉴定、功能研究及其卵白相互作用等相关领域. MBP（麦芽糖结合卵白）MBP（麦芽糖结合卵白）标签卵白年夜小为40kDa,由年夜肠杆菌K12的malE基因编码.MBP可增加在细菌中过量表达的融合卵白的溶解性,尤其是真核卵白.MBP标签可通过免疫分析很方便地检测.有需要用位点专一的卵白酶切割标签.如果卵白在细菌中表达,MBP 可以融合在卵白的N端或C端. 纯化：融合卵白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化.结合的融合卵白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱.结合亲和力在微摩尔范围.一些融合卵白在0.2%Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合卵白则不受影响. 缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂.如果要去除MBP融合部份,可用位点特异性卵白酶切除.检测：可用MBP抗体或表达的目的卵白特异性抗体检测.GST(谷胱甘肽巯基转移酶)GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签卵白自己是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然年夜小为26KD.将它应用在原核表达的原因年夜致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的卵白,希望可以利用它增加外源卵白的可溶性；另一个是它可以在年夜肠杆菌中年夜量表达,起到提高表达量的作用.GST融合表达系统广泛应用于各种融合卵白的表达,可以在年夜肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达.结合的融合卵白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱.在年夜大都情况下,融合卵白在水溶液中是可溶的,并形成二体.GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测.标签有助于呵护重组卵白免受胞外卵白酶的降解并提高其稳定性. 在年夜大都情况下GST融合卵白是完全或部份可溶的.纯化：该表达系统表达的GST标签卵白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化.GST标签卵白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保管了卵白的抗原性和生物活性.GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等.如果要去除GST融合部份,可用位点特异性卵白酶切除.检测：可用GST抗体或表达的目的卵白特异性抗体检测.HAHA标签卵白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素概况抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶卵白的空间结构影响小, 容易构建成标签卵白融合到N端或者C端.易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测.c-MycC-Myc 标签卵白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile- Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在分歧的卵白质框架中仍可识别其相应抗体.C-Myc tag已胜利应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组卵白质在靶细胞中的表达.eGFPeGFP标签卵白,是增强型绿色荧光卵白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光卵白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eGFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eGFP 表达标签被广泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面.另外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eGFP,用于目的基因的体内卵白示踪研究.eYFPeYFP标签卵白为增强型黄绿色荧光卵白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光卵白YFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对YFP,eYFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eYFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eYFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eYFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面.另外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eYFP,用于目的基因的体内卵白示踪研究.eCFPeCFP标签卵白为增强型青色荧光卵白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色荧光卵白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的.相对CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定.同时载体中构建的Kozak序列使得含有eCFP的融合卵白在真核表达系统中表达效率更高. eCFP作为标签卵白,其融合表达目的卵白后具有以下优点：能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针.•其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况.•同时细胞内的其它产物不会干扰标签卵白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性.•其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选.因此现eCFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、卵白在细胞中的功能定位、迁移变动及药物筛选等方面. Avi TagAviTag标签卵白是一个15 个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素化序列完全分歧,可以加在目标卵白的N端和C端.融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组卵白选用低亲和性的单体抗生物素卵白或抗生物素卵白衍生物,除用于卵白质分离纯化,还用于卵白质相互作用研究.Avi Tag标签系统具有以下几年夜优点:•无论在体外或者体内,几乎所有的卵白都可以在一个共同的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化；•生物素化是通过酶和底物的反应来实现,反应条件相当温和而且标识表记标帜的专一性极高；•生物素Avi Tag只有15个氨基酸,对卵白空间结构的影响非常小.SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的卵白标签技术,不单专一性极高而且稳定,最年夜的优点是适用于多种环境下的卵白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等.SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移（O6-alkylguanine-DNA- alkyltransferase）获得.无论体内还是体外,SNAP-Tag都能与底物高特异性地共价结合,使卵白标识表记标帜上生物素或荧光基团（如荧光素和若丹明）.SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤.这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的卵白携带上了苯甲基基团所带的标识表记标帜物.苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定,而且没有其他卵白会和这类物质作用,所以SNAP标签反应是高特异的. 检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合卵白的标识表记标帜与检测.它们也可特异性地标识表记标帜年夜肠杆菌,酵母和哺乳植物等细胞抽提液或已经纯化的卵白液中的SNAP-tag融合卵白.将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合卵白与概况固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合,卵白即可特异与底物作用,形成共价键,融合卵白间接被固定在了基质概况上,可以到达更方便快捷地研究卵白功能或纯化卵白的目的.Halo TagHaloTag™标签卵白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,可与多种合成的HaloTag™配基有效地共价结合.这个分子量为33KDa的单体卵白能融合在重组卵白的N端或C 端,并在原核和真核系统中表达.HaloTag™配基是小分子化学物,能够在体外或体内与HaloTag™卵白共价结合.这些配基由两个关键组分组成：(1)一个通用的HaloTag™反应联结子,结合HaloTag™卵白；(2)一个功能基团,例如荧光染料或亲和媒介.能够共价和特异性结合多种合成的陈说基团和亲和配基的特性,使得HaloTag™卵白能够用于检测和亲和结合或固相化固定目的卵白. SUMOSUMO标签卵白是一种小分子泛素样修饰卵白（Small ubiquitin-like modifier）,是泛素(ubiquitin)类多肽链超家族的重要成员之一.在一级结构上,SUMO与泛素只有18%的同源性,然而两者的三级结构及其生物学功能却十分相似.研究发现SUMO可以作为重组卵白表达的融合标签和分子伴侣,不单可以进一步提高融合卵白的表达量,且具有抗卵白酶水解以及增进靶卵白正确折叠,提高重组卵白可溶性等功能.另外SUMO还有一项重要的应用,就是可用于完整地切除标签卵白,时间：二O二一年七月二十九日时间：二O二一年七月二十九日。
常见蛋白质标签
常见蛋白质标签总结2008-12-08 22:06Protein tags are peptide sequences genetically grafted onto a recombinant protein. Often these tags are removable by chemical agents or by enzymatic means, such as proteolysis or intein splicing. Tags are attached to proteins for various purposes.一、氨基酸标签（含小肽标签）A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of the labelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either end of the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding.组氨酸标签（His tag）一般为6个组氨酸，用Ni2+ （Cu2+）亲和层析纯化FLAG tag ：N-DYKDDDDK-C ，recovered with specific antibodyHA tag：an epitope derived from the Influenza protein haemagglutinin (HA，禽流感病毒血凝素)，e.g. N-YPYDVP-C，recovery with an HA antibodyMYC tag：an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC，e.g.N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C，recovery with an MYC antibodySBP tag：Streptavidin Binding Peptide，链霉亲合素结合肽，38 amino acid tag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)，更多参考在SigmaCBP tag：钙调蛋白结合肽（CBP; 26aa）钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖的，这种结合不受标签所处的位置影响（N端和C端均可），在中性pH条件下使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。
关于蛋白标签的那些事
关于蛋⽩标签的那些事蛋⽩标签（protein tag）是指利⽤DNA体外重组技术，与⽬的蛋⽩⼀起融合表达的⼀种多肽或者蛋⽩，以便于⽬的蛋⽩的表达、检测、⽰踪和纯化等。
随着技术的不断发展，研究⼈员相继开发出了具有各种不同功能的蛋⽩标签。
由于蛋⽩标签的不同特性，⼈们在质粒构建时常常遇到多种问题，那么今天⼩编就来谈谈蛋⽩标签的那些事。
01在质粒构建的时候，该选⽤什么蛋⽩标签呢？⼩编建议根据实验的⽬的选择不同的性质蛋⽩标签，常⽤的蛋⽩标签有6xHIS、Flag、GST、c-Myc、eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP、HA、SUMO等。
1）6xHis6xHis可插⼊在⽬的蛋⽩的C末端或N末端，⽤于对重组蛋⽩进⾏分离纯化。
His标签融合蛋⽩可以在⾮离⼦型表⾯活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏⽔性强的蛋⽩得到应⽤，后者在纯化包涵体蛋⽩时特别有⽤。
常见的带6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等2）Flag标签蛋⽩Flag标签蛋⽩应⽤于蛋⽩表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋⽩相互作⽤等相关领域。
常见的带有Flag标签的载体有pESC-His、pFLAG-CMV2、pENTR4-FLAG等。
3）c-MycC-Myc 标签蛋⽩，是⼀个含11个氨基酸的⼩标签，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋⽩质框架中仍可识别其相应抗体。
C-Myc tag已成功应⽤在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可⽤于检测重组蛋⽩质在靶细胞中的表达。
常见的载体有pCMV-MYC、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pCMV-RFP-C-Myc、pCMV-Myc等。
4）eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP分别是增强型绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/单体红⾊荧光蛋⽩,具有不同的激发波长发射波长，均由野⽣型荧光蛋⽩通过氨基酸突变和密码⼦优化⽽来。
常用蛋白标签、序列及特性
常用蛋白标签、序列及特性常见表位标签和序列常用表位标签的生物化学特性总结如下：氯霉素乙酰转移酶（CAT）这个 24kDa 大小的标签也用作报道基因，与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。
这意味着它可以用来直接测量表达水平，而不需要 PAGE 或免疫检测。
二氢叶酸还原酶（DHFR）这个 25kDa 蛋白质参与胸苷生物合成途径。
带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。
FLAG带电的八肽序列（DYKDDDDK），可用于蛋白检测，特别是在串联为3xFLAG™表位（DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK）时。
这有助于研究低丰度蛋白质和优化难以表达的蛋白质项目。
它也是一个很好的纯化标签。
FLAG 序列还含有肠激酶切割位点，如果标签位于N 端，切除后不留多余的残基。
谷胱甘肽 S - 转移酶（GST）GST 是最早被使用的表位标签之一；它可以置于 N 或 C 端并可以蛋白质的可溶表达。
用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。
绿色荧光蛋白（GFP）在表位标签中独一无二，GFP 是一种自发荧光的27 kDa 标签，可通过荧光显微镜直接在活细胞中检测到。
血凝素 A（HA）HA 来自流感血凝素蛋白的结合结构域，含有高比例的带电残基（YPYDVPDYA），因此可能形成强烈的抗体识别位点。
组氨酸（His）这是目前使用最广泛的纯化标签；它允许用镍亲和树脂进行纯化。
这些树脂可耐受变性条件（可用于从包涵体中纯化变性溶解的蛋白质）并可重复使用。
结合特异性低于抗体树脂，因此通常需要额外的纯化步骤。
酸性洗脱已被用作咪唑的低盐替代物，钴可用于代替镍以提高特异性。
金属蛋白和富含组氨酸的蛋白质（例如氯霉素乙酰转移酶）也与这些树脂结合，所以建议使用合适的对照。
单纯疱疹病毒（HSV）HSV 来源于糖蛋白 D 前体包膜蛋白并且短（QPELAPEDPED），所以它不太可能干扰蛋白质结构或功能。
荧光素酶常用于检测蛋白表达的报道基因。
可以通过免疫学方法验证结果。
几种常用的蛋白标签的功能和优点
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。
特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：His6：His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。
组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签
基因克隆载体上的各种常用蛋白标签蛋白标签（proteintag）是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。
随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。
目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。
美国GeneCopoeia（复能基因）为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客户的不同需求，包括各种最新型的标签，如：SNAP-Tag™、Halo Tag™、AviTag™、Sumo等；也提供齐全的各种常用标签，如eGFP、His、Flag等等标签。
以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询克隆产品的结果列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。
TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。
组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：•标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；•His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；•His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；•His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
•可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；•可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
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重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。
特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。
美国GeneCopoeia的蛋白表达载体按照表达宿主的不同新推出3类，分别为表达宿主为大肠杆菌，哺乳动物细胞的，以及慢病毒载体，宿主可以为哺乳动物细胞和原代细胞。
除了必要的复制和筛选的元件，协助表达和翻译的元件外，本文将各类载体分别按照功能标签的不同确定种类并将个标签的功能初步介绍如下：His6：His6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征（结合配体）利于纯化。
组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力，可用于固定化金属螯合层析(IMAC)，对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点：1.标签的分子量小，只有~0.84KD，而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD，一般不影响目标蛋白的功能；2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用，用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；3.His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究；4.His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫制备抗体；5.可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；6.可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag:Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA 等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。
因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
MBP:MBP（麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。
MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。
MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。
有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。
如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。
纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。
结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。
结合亲和力在微摩尔范围。
一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。
缓冲条件为pH7.0到8.5，盐浓度可高达1M，但不能使用变性剂。
如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。
检测：可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
GST:GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。
将它应用在原核表达的原因大致有两个，一个是因为它是一个高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。
GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。
结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。
在大多数情况下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二体。
GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。
标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。
在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。
纯化：该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathionesepharose)亲和树脂进行纯化。
GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。
GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如：盐酸胍或尿素等。
如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。
检测：可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
HAHA标签蛋白，标签序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，9个氨基酸，对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。
易于用Anti－HA抗体检测和ELISA检测。
c-MycC-Myc标签蛋白，是一个含11个氨基酸的小标签，标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。
C-Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
eGFP/eCFP/eYFP/mCherry分别是增强型绿色荧光蛋白/增强型黄绿色荧光蛋白/增强型黄绿色荧光蛋白/单体红色荧光蛋白,具有不同的激发波长发射波长为，均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。
就eGFP而言，相对于GFP，其荧光强度更强、荧光性质更稳定。
同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
mCherry是从DsRed 演化来的性能最好的一个单体红色荧光蛋白，可以和GFP系列荧光蛋白共用，实现多色标记体内、外实验表明，mCherry在N端和C端融合外源蛋白时，荧光蛋白活性和被融合的目标蛋白功能相互没有明显影响。
这些荧光标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.不用破碎组织细胞和不加任何底物，直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光，实时显示目的基因的表达情况，而且荧光性质稳定，被誉为活细胞探针。
2.其自发荧光，不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。
3.同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测，从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。
4.其低消耗、高灵敏度检测，十分适用于高通量的药物筛选。
因此现eGFP 表达标签被广泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
5.mCherry红色荧光蛋白在标记病毒颗粒，研究病毒和宿主细胞之间更有得天独厚的优势。
如用mRFP或mCherry标记HIV病毒颗粒，研究H1V和宿主细胞问的相互作用以及HIV侵染宿主细胞的过程．用mRFP标记慢病毒颗粒，研究慢病毒在小鼠体内的复制过程等。
荧光素酶来源于生物体内的荧光素，常见的有萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和Guassia荧光素酶。
这些荧光素酶作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中，这种技术被称为报告基因检测法或萤光素酶检测法（Luciferase Assay）。
跟普通融合蛋白标签不同，使用荧光素酶构建的报告基因可用作目的基因的定量分析。
因此常用于研究启动子、miRNA 3'UTR克隆的功能与调控，因为它们对目的基因的调控可以是渐变的，而不是简单的开和关两种状态。
优点：灵敏度高，检测幅度宽；不是哺乳动物细胞内源性基因；重复性好；与HTS兼容等。
萤火虫和海肾荧光素酶已经被广泛应用于协同报告并进行均一化研究。
由于它们都是快速，容易和高灵敏的监测方法。
而且萤火虫和海肾荧光素酶是理想的双基因报告系统，因为它们来源于不同的生物进化方向，蛋白结构和底物差异都很大，在实验中不会产生相互影响。
基于荧光素酶的特性，我司研发提供的Secrete-Pair? Dual Luminescence Assay Kit可用于分析双报告系统中Gaussia荧光素酶（GLuc）和分泌型碱性磷酸酶(SEAP)活性。
GLuc 和SEAP均为分泌型报告蛋白，无需裂解细胞即可便捷的从细胞培养液中取得样本，并对实验结果进行精准的实时分析。
Avi TagAviTag标签蛋白是一个15 个氨基酸的短肽，具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的N端和C端。
融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。
Avi Tag标签系统具有以下几大优点:1.无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化；2.生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高；3.生物素AviTag只有15个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小。
SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的蛋白标签技术，不仅专一性极高而且稳定，最大的优点是适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化，如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等。
SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase）获得。
无论体内还是体外，SNAP-Tag都能与底物高特异性地共价结合，使蛋白标记上生物素或荧光基团（如荧光素和若丹明）。
SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。
这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。
苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定，并且没有其他蛋白会和这类物质作用，所以SNAP标签反应是高特异的。
检测：生物素或各种颜色荧光的底物（如荧光素、若丹明）可渗透进入细胞，方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合蛋白的标记与检测。
它们也可特异性地标记大肠杆菌，酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。
将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合蛋白与表面固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合，蛋白即可特异与底物作用，形成共价键，融合蛋白间接被固定在了基质表面上，可以达到更方便快捷地研究蛋白功能或纯化蛋白的目的。
Halo TagHaloTag?标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物，可与多种合成的HaloTag?配基有效地共价结合。
这个分子量为33KDa的单体蛋白能融合在重组蛋白的N端或C 端，并在原核和真核系统中表达。