各种蛋白标签汇总修订稿
GB7718-XXXX预包装食品标签通则

的各种配料应按4.1.2要求标示具体名称。 配料:在制造或加工食品时使用的,并存在(包括
以改性的形式存在)于产品中的任何物质,包括食 品添加剂。
(改性的形式存在:是指在制作食品时使用的原辅材 料经过加工后,形成的产品改变了原来的性质。)
GB7718-2011
配料 在制造或加工食品时使用的,并存在(包括以改
性的形式存在)于产品中的任何物质,包括食品添 加剂。
1、食品标签上的配料表是一个产品的原料构 成,包括名称和量化的信息。 。
2、“以改性形式存在”是指制作食品时使用 的原料、辅料经过加工后,形成的产品改变 了原来的性质。
1.2.1 当“新创名称”、“奇特名称”、“音译名称”、“ 牌号名称”、“地区俚语名称”或“商标名称”含有易使 人误解食品属性的文字或术语(词语)时,应在所示名称的 邻近部位使用同一字号标示食品真实属性的专用名称。
“新创名称”是指历史上从未出现而又令人费解的名称,如 果茶、果珍等。
“奇特名称”是指脱离食品范畴、希奇古怪的名称 。
食品加工助剂特点:(与食品添加剂的区别)
一般应在食品中除去而不应成为最终食品的成分,或仅
有残留;
在最终产品中没有任何工艺功能;
不需在产品成分中标明。
GB7718-2011
主要展示版面 预包装食品包装物或包装容器上容易被观察到的
版面。
“最容易被消费者观察到的版面”是指包装物 或包装容器最明显,无需特意寻找的部位。
8.1 可以同时使用拼音或少数民族文字,但不得大于相应的汉 字。
8.2 可以同时使用外文,但应与中文有对应关系(商标、进口食 品的制造者和地址,国外经销者的名称和地址、网址除外)。 所有外文不得大于相应的汉字(商标除外) 。
蛋白cif格式

蛋白cif格式全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:蛋白CIF格式是一种用于描述晶体结构信息的文件格式,它是基于CIF(Crystallographic Information File)格式的一种衍生形式。
蛋白CIF格式主要用于存储蛋白质的三维结构,包括氨基酸序列、二级结构、原子坐标等信息。
蛋白CIF格式的发展历史可以追溯到上个世纪七十年代,当时晶体学领域开始使用CIF格式来存储晶体结构信息。
随着蛋白质晶体学研究的发展,对蛋白质结构信息进行存储和共享的需求也日益增加,于是蛋白CIF格式应运而生。
蛋白CIF格式是一种文本形式的文件格式,以ASCII码表示,以便于人们阅读和编辑。
它采用关键字-值对的形式来描述蛋白质结构信息,其中关键字表示属性或信息的类型,值则为对应属性或信息的具体数值。
通过这种形式,可以清晰地描述蛋白质的各种结构特征,方便研究人员进行数据的存储、处理和交流。
蛋白CIF格式的文件通常以“.cif”为扩展名,其中包含了大量的数据字段和相关的元数据。
这些数据字段包括氨基酸序列、螺旋、折叠、副结构、原子坐标、结合位点等多方面的信息。
通过这些信息,可以还原出蛋白质的三维结构,为研究人员提供了极为重要的参考和便利。
蛋白CIF格式的优点之一在于其灵活性和可扩展性。
由于蛋白质具有多样的结构特征,蛋白CIF格式可以根据不同的需求和应用场景进行定制化的扩展,从而满足各种不同的研究和应用需求。
蛋白CIF格式也支持多语言的描述,可以方便地传递和共享蛋白质结构信息。
蛋白CIF格式还具有良好的兼容性和互操作性。
多个蛋白CIF格式的文件可以进行组合和比较,也可以与其他晶体学数据文件格式进行转换和交互,实现不同数据源之间的无缝对接。
这为研究人员提供了更大的数据交流和利用的空间,促进了蛋白质结构研究的发展。
蛋白CIF格式作为蛋白质结构信息存储的标准化格式,为蛋白质晶体学研究提供了重要的支持和便利。
它的出现不仅推动了蛋白质结构研究领域的发展,也为蛋白质结构信息的共享和利用提供了有力的保障。
产品标签文字规范--产品研发中心2016.5.19修订稿

产品标签文字规范产品研发中心 2016年5月19日一、保健食品1、保健食品标签相关内容应当按照以下顺序书写(一)产品名称(二)引言(三)主要原料(四)功效成分及含量或功效成份及含量或标志性成分及含量(五)保健功能(六)适宜人群(七)不适宜人群(八)食用方法及食用量(九)规格或产品规格(十)保质期(十一)贮藏方法(十二)注意事项(十三)批准文号(十四)执行标准(十五)生产企业名称:(十六)生产许可证编号:(十七)生产企业注册地址:(十七)生产企业生产地址:(十八)产地:(十九)电话:(二十)网址:(二十一)邮箱:(二十二)邮政编码:(二十三)生产日期(二十四)生产批号(二十五)保质期至非单独销售的包装至少应标注保健食品名称、规格、生产日期、生产批号。
2、保健食品名称字体、字号、颜色应当一致规定:保健食品名称应当完整、显著、突出,其字体、字号、颜色应当一致,大于其它内容的文字,不得擅自添加其它商标或者商品名,应当在横版标签的上方或者竖版标签右方的显著位置标出。
--《关于征求《保健食品说明书标签管理规定(征求意见稿)》意见的函食药监食监三便函〔2013〕98号》3、蓝帽子最宽处宽度不得小于2厘米规定:保健食品标志应当标注在主要展示版面的左上方,颜色为蓝色,当版面的表面积大于100平方厘米时,保健食品标志最宽处的宽度不得小于2厘米。
--《关于征求《保健食品说明书标签管理规定(征求意见稿)》意见的函食药监食监三便函〔2013〕98号》4、商标需印刷在标签的右上角规定:保健食品标签使用除产品名称外商标的,应当印刷在保健食品标签的右上角,含文字的,其字体以单字面积计不得大于产品名称字体的二分之一。
--《关于征求《保健食品说明书标签管理规定(征求意见稿)》意见的函食药监食监三便函〔2013〕98号》5、保健食品标签图形规范规定:虚假、夸大、使消费者误解或者欺骗性的文字或者图形;不得以直接或者暗示性的语言、图形、符号,误导消费者将购买的保健食品或者保健食品的某一性质与另一产品混淆,不得以字号大小和色差误导消费者。
蛋白标准品(Marker)知识汇总

蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。
在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。
这个Western Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。
总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。
以下是关于蛋白分子量标准的小叙:一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。
现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。
预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。
所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。
不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。
在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。
如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间,选别的Marker吧。
预混的Marker 使用上不如预染Marker(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”,无法对实验起预示参照作用。
完全属于“后知后觉”型的,当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。
①宽分子量蛋白标准如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的危险。
香港食品营养标签修订规例浅析

香港食品营养标签修订规例浅析
近年来,食品营养标签发挥着越来越重要的作用,因此,香港特别行政区政府
推出了有关食品营养标签修订规例。
该规例对消费者把握营养成分有着关键的意义。
香港食品营养标签修订规例包括香港食品标签登记条例(第132条)、宣传报
告有关法例(第204条)以及食物(标签和宣传材料)(宣传)条例(第276条),规定了食品品牌商应该清楚列明食品的营养成分,宣传报告也应当满足有关的要求。
消费者在购买食品时,可以根据标签上的营养成分选择最合适的食品。
此外,香港食品营养标签修订规例还要求食品的品牌商提供明确的营养信息,
包括101个标准食物组别的热量值、蛋白质、脂肪、碳水化合物及多重维生素,使消费者可以明确地了解购买食品的营养含量。
此外,相关部门还宣布成立膳食委员会,从政府专家、卫生界专家等方面出台指导原则,指导消费者的饮食摄入建议,确保消费者可以根据食物的营养成分妥善安排饮食。
总之,香港食品营养标签修订规例旨在让消费者更清楚地了解食物的营养成分,从而根据自己的营养状况妥善选择饮食,促进健康。
蛋白标签技术简介及常用蛋白标签

蛋白标签技术简介及常用蛋白标签蛋白质作为生命活动的主要执行者,人们对其功能和生物学机能的研究逐步深入。
那么如何分离和研究某一特定蛋白呢?蛋白标签技术的广泛应用可以有效的解决这令许多研究者颇为头疼的问题。
目前,一些肽类和蛋白质被广泛的用于大量生产重组蛋白,它们与目的蛋白融合表达,以便于目的蛋白表达、检测、示踪和纯化。
这类多肽或蛋白,被称为蛋白标签(Protein Tag)。
例如MyC、His、GST、HA等。
而标签抗体可以高特异地结合对应的标签融合多肽或蛋白,籍以分离纯化和分析检测目的蛋白。
目前,云克隆推出了一系列蛋白标签抗体,让您从容面对蛋白实验。
先简单介绍一下系列蛋白标签。
HA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。
易于被Anti-HA抗体检测和ELISA检测。
MYC标签蛋白,MYC标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。
Myc tag已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中,可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
FLAG,Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK),同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
GST,谷胱甘肽巯基转移酶在解毒过程中起到重要作用,它的天然大小为26KD。
由于GST高度可溶,可增加外源蛋白的可溶性,另外GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可提高表达量。
GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。
而且,GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。
关于蛋白标签的那些事

关于蛋⽩标签的那些事蛋⽩标签(protein tag)是指利⽤DNA体外重组技术,与⽬的蛋⽩⼀起融合表达的⼀种多肽或者蛋⽩,以便于⽬的蛋⽩的表达、检测、⽰踪和纯化等。
随着技术的不断发展,研究⼈员相继开发出了具有各种不同功能的蛋⽩标签。
由于蛋⽩标签的不同特性,⼈们在质粒构建时常常遇到多种问题,那么今天⼩编就来谈谈蛋⽩标签的那些事。
01在质粒构建的时候,该选⽤什么蛋⽩标签呢?⼩编建议根据实验的⽬的选择不同的性质蛋⽩标签,常⽤的蛋⽩标签有6xHIS、Flag、GST、c-Myc、eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP、HA、SUMO等。
1)6xHis6xHis可插⼊在⽬的蛋⽩的C末端或N末端,⽤于对重组蛋⽩进⾏分离纯化。
His标签融合蛋⽩可以在⾮离⼦型表⾯活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏⽔性强的蛋⽩得到应⽤,后者在纯化包涵体蛋⽩时特别有⽤。
常见的带6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等2)Flag标签蛋⽩Flag标签蛋⽩应⽤于蛋⽩表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋⽩相互作⽤等相关领域。
常见的带有Flag标签的载体有pESC-His、pFLAG-CMV2、pENTR4-FLAG等。
3)c-MycC-Myc 标签蛋⽩,是⼀个含11个氨基酸的⼩标签,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋⽩质框架中仍可识别其相应抗体。
C-Myc tag已成功应⽤在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可⽤于检测重组蛋⽩质在靶细胞中的表达。
常见的载体有pCMV-MYC、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pCMV-RFP-C-Myc、pCMV-Myc等。
4)eGFP/eCFP/eYFP/mCherryeGFP分别是增强型绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/增强型黄绿⾊荧光蛋⽩/单体红⾊荧光蛋⽩,具有不同的激发波长发射波长,均由野⽣型荧光蛋⽩通过氨基酸突变和密码⼦优化⽽来。
常见蛋白质标签

常见蛋白质标签总结2008-12-08 22:06Prote in tags are peptide seque nces gen etically grafted onto a recomb inant prote in.Often these tags are removable by chemical age nts or by en zymatic means, such as proteolysis or intein splic ing. Tags are attached to prote ins for various purposes.一、氨基酸标签(含小肽标签)A stretch of ami no acids is added to the protein and enables the recovery of thelabelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add the tag to either endof the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding.组氨酸标签(His tag )一般为6个组氨酸,用Ni2+ (Cu2+ )亲和层析纯化FLAG tag : N-DYKDDDDK-C ,recovered with specific antibodyHA tag : an epitope derived from the In flue nza protein haemaggluti nin (HA ,禽流感病毒血凝素),e.g. N-YPYDVP-C ,recovery with an HA antibodyMYC tag : an epitope derived from the huma n proto-on coprote in MYC ,e.g.N-ILKKATAYIL-C, N-EQKLISEEDL-C ,recovery with an MYC antibodySBP tag : Streptavidin Bi ndi ng Peptide ,链霉亲合素结合肽,38 ami no acid tag (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP),更多参考在SigmaCBP tag :钙调蛋白结合肽(CBP; 26aa )钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖的,这种结合不受标签所处的位置影响(N端和C端均可),在中性pH条件下使用2mM EGTA 可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。
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各种蛋白标签汇总内部编号:(YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128)各种蛋白标签汇总蛋白标签蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。
随着技术的不断发展,研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。
目前,这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。
TrxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签,可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
当某一个标签的使用,一是能构成表位利于纯化和检测;二是构成独特的结构特征(结合配体)利于纯化。
组氨酸残基侧链与固态的镍有强烈的吸引力,可用于固定化金属螯合层析(IMAC),对重组蛋白进行分离纯化。
使用His-tag有下面优点:标签的分子量小,只有~0.84KD,而GST和蛋白A分别为~26KD和~30KD,一般不影响目标蛋白的功能;His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋白的干扰,或进行金属螯和亲和层析复性;His标签融合蛋白也被用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用研究;His标签免疫原性相对较低,可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制备抗体。
可应用于多种表达系统,纯化的条件温和;可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽(DYKDDDDK),同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
FLAG作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:FLAG作为融合表达标签,其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质,这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
融合FLAG的目的蛋白,可以直接通过FLAG进行亲和层析,此层析为非变性纯化,可以纯化有活性的融合蛋白,并且纯化效率高。
FLAG作为标签蛋白,其可以被抗FLAG的抗体识别,这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
融合在N端的FLAG,其可以被肠激酶切除(DDDK),从而得到特异的目的蛋白。
因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。
MBP(麦芽糖结合蛋白)MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。
MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。
MBP 标签可通过免疫分析很方便地检测。
有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。
如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。
纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。
结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。
结合亲和力在微摩尔范围。
一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效结合,而其他融合蛋白则不受影响。
缓冲条件为pH7.0到8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。
如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。
检测:可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
GST(谷胱甘肽巯基转移酶)GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶,它的天然大小为26KD。
将它应用在原核表达的原因大致有两个,一个是因为它是一个高度可溶的蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性;另一个是它可以在大肠杆菌中大量表达,起到提高表达量的作用。
GST融合表达系统广泛应用于各种融合蛋白的表达,可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。
结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱。
在大多数情况下,融合蛋白在水溶液中是可溶的,并形成二体。
GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。
标签有助于保护重组蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。
在大多数情况下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。
纯化:该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione sepharose)亲和树脂进行纯化。
GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱,因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。
GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力,因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂如:盐酸胍或尿素等。
如果要去除GST融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。
检测:可用GST 抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。
HAHA标签蛋白,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,9个氨基酸,对外源靶蛋白的空间结构影响小, 容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。
易于用Anti-HA抗体检测和ELISA检测。
c-MycC-Myc 标签蛋白,是一个含11个氨基酸的小标签,标签序列Glu-Gln-Lys-Leu-Ile- Ser-Glu-Glu-Asp-Leu,这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。
C-Myc tag已成功应用在 Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中, 可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
eGFPeGFP标签蛋白,是增强型绿色荧光蛋白eGFP,激发波长为488nm,发射波长为507nm,其是由野生型绿色荧光蛋白GFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。
相对于GFP,eGFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。
同时载体中构建的Kozak序列使得含有eGFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
eGFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:不用破碎组织细胞和不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。
其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。
同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。
其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选。
因此现eGFP 表达标签被广泛地应用于基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eGFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研究。
eYFPeYFP标签蛋白为增强型黄绿色荧光蛋白eYFP,激发波长为513nm,发射波长为527nm,其是由野生型黄绿色荧光蛋白YFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。
相对于YFP,eYFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。
同时载体中构建的Kozak序列使得含有eYFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
eYFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:不用破碎组织细胞和不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。
其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。
同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。
其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选。
因此现eYFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
此外由我公司提供的IRES双顺反子载体,可同目的基因共表达eYFP,用于目的基因的体内蛋白示踪研究。
eCFPeCFP标签蛋白为增强型青色荧光蛋白eCFP,激发波长为433nm或453nm,发射波长为475nm或501nm,其是由野生型青色荧光蛋白CFP通过氨基酸突变和密码子优化而来的。
相对于CFP,eCFP荧光强度更强、荧光性质更稳定。
同时载体中构建的Kozak序列使得含有eCFP的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。
eCFP作为标签蛋白,其融合表达目的蛋白后具有以下优点:不用破碎组织细胞和不加任何底物,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中发出绿色荧光,实时显示目的基因的表达情况,而且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针。
其自发荧光,不需用目的基因的抗体或原位杂交技术就可推知目的基因在细胞中的定位等情况。
同时细胞内的其它产物不会干扰标签蛋白检测,从而使其检测更显得快速、简便、灵敏度高而且重现性。
其低消耗、高灵敏度检测,十分适用于高通量的药物筛选。
因此现eCFP 表达标签被广泛的应用与基团表达调控、转基因功能研究、蛋白在细胞中的功能定位、迁移变化及药物筛选等方面。
Avi TagAviTag标签蛋白是一个15 个氨基酸的短肽,具有一个单生物素化赖氨酸位点,与已知天然可生物素化序列完全不同,可以加在目标蛋白的N端和C端。
融合表达后,可被生物素连接酶生物素化,为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物,除了用于蛋白质分离纯化,还用于蛋白质相互作用研究。
Avi Tag标签系统具有以下几大优点:无论在体外或者体内,几乎所有的蛋白都可以在一个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化;生物素化是通过酶和底物的反应来实现,反应条件相当温和而且标记的专一性极高;生物素Avi Tag只有15个氨基酸,对蛋白空间结构的影响非常小。
SNAP-TagSNAP-Tag是新一代的蛋白标签技术,不仅专一性极高而且稳定,最大的优点是适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化,如活细胞内、溶液中、或固态相(如SDS-PAGE gels)等。
SNAP-Tag是从人的O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移(O6-alkylguanine-DNA- alkyltransferase)获得。
无论体内还是体外,SNAP-Tag都能与底物高特异性地共价结合,使蛋白标记上生物素或荧光基团(如荧光素和若丹明)。
SNAP所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团,释放出了鸟嘌呤。
这种新的硫醚键共价结合使SNAP所带的目的蛋白携带上了苯甲基基团所带的标记物。
苯甲基鸟嘌呤在生化条件下稳定,并且没有其他蛋白会和这类物质作用,所以SNAP标签反应是高特异的。
检测:生物素或各种颜色荧光的底物(如荧光素、若丹明)可渗透进入细胞,方便快捷地进行活细胞内SNAP-Tag融合蛋白的标记与检测。
它们也可特异性地标记大肠杆菌,酵母和哺乳动物等细胞抽提液或已经纯化的蛋白液中的SNAP-tag融合蛋白。
将纯化的或未纯化的SNAP-Tag融合蛋白与表面固定了苯甲基鸟嘌呤的基质混合,蛋白即可特异与底物作用,形成共价键,融合蛋白间接被固定在了基质表面上,可以达到更方便快捷地研究蛋白功能或纯化蛋白的目的。